Диагностика методом пцр: что это такое и что показывает, как делается и сколько стоит исследование?

что это такое, как проводится исследование, методы диагностики заболеваний

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

• ВИЧ;
• герпеса;
• различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
• кандидоза;
• гепатитов;
• мононуклеоза;
• листериоза;
• цитомегаловируса;
• туберкулеза;
• вируса папилломы человека;
• клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати
Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

сферы применения, подготовка к исследованию, анализы на инфекции

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).

Принцип ПЦР- исследования

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» — ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК.
Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) — уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз.

И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Как это все происходит в лаборатории

Выделение ДНК

Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата.
Амплификация (увеличение числа копий ДНК)
Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация.
Денатурация
Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C.
Отжиг
Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами — изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки.
Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

1. Электрофорез в вязкой среде. Суть в том, что ДНК/РНК заряжены электрически и движутся к одному из электродов. В среду (агар или полиакридный гель) добавляют краситель ДНК (например – бромистый этидий). В процессе сеанса электрофореза, молекулы нуклеиновых кислот движутся и формируют скопления, подкрашенные этидием. Под ультрафиолетом, это выглядит в виде полосок разной толщины и яркости.
2. Метод гибридизации. Используются праймеры, заранее помеченные люминофором (флуорофором). После нужного числа температурных циклов, применяют специальный прибор – детектор флюоресценции. За счет того, что в образец можно добавлять флуорофоры для разных мишеней (они будут и светиться под ультрафиолетом разным цветом), метод гибридизации подходит для диагностики сразу нескольких мишеней в одном образце.
3. ПЦР диагностика в реальном времени (real-time PCR). Отличается тем, что детекция проводится прямо в процессе амплификации. Для этого нужны зонды-люминофоры (из предыдущего пункта) и специальные приборы ДНК-амплификаторы. Эти устройства оценивают нарастание яркости люминофора после каждого температурного цикла и впоследствии, вычисляют исходное число искомых нуклеиновых кислот в образце.

Электрофорез и гибридизация подходят только для качественной оценки, то есть дают ответ на вопрос, есть ли в образце искомый материал. ПЦР в реальном времени – единственный доступный метод количественной оценки.
Если мишеней для праймеров в образце не окажется, то температурные циклы пройдут в холостую и при детекции будет получен отрицательный результат.

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).

Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

пцр диагностика на Инфекции:

Сколько стоит сдать ПЦР-анализ

Я пять лет работал в государственной медицинской лаборатории.

По опыту знаю, что пациентам бывает непросто разобраться с тем, какие тесты им нужно сдавать, да и нужно ли вообще. В этой статье расскажу, что такое ПЦР-анализы и можно ли на них сэкономить.

Даниил Давыдов

разобрался с анализами

Сходите к врачу

Наши статьи написаны с любовью к доказательной медицине. Мы ссылаемся на авторитетные источники и ходим за комментариями к докторам с хорошей репутацией. Но помните: ответственность за ваше здоровье лежит на вас и на лечащем враче. Мы не выписываем рецептов, мы даем рекомендации. Полагаться на нашу точку зрения или нет — решать вам.

Что такое ПЦР-тесты и зачем их сдавать

Полимеразная цепная реакция — метод, позволяющий обнаружить конкретный генетический материал в образце. В качестве образца можно взять почти что угодно: от анализа крови пациента до древних костей или окурков из пепельницы на лестничной площадке. Например, сотрудники криминалистических лабораторий применяют ПЦР-тест, чтобы по частичкам ДНК с места преступления установить личность преступника или его жертвы. Это почти как отпечатки пальцев, только не рук, а генетического материала.

Статья про ПЦР-анализы в криминалистике

В отличие от криминалистов, врачей обычно интересуют две вещи:

1. «Личность» микроскопических преступников — вирусов и бактерий, которые вызвали заболевание у пациента.
2. Особенности строения генома пациента — например, у людей с лейкозами при помощи ПЦР-тестов определяют мутации гена MPL.

Зачем врачам ПЦР: статья в Elsevier Public Health Emergency Collection

Но генетические анализы нужны не так уж часто, поэтому в статье мы будем говорить про ПЦР-анализы на инфекции.

Как работает ПЦР-анализ. У большинства живых существ на нашей планете, за исключением некоторых вирусов с РНК-геномами, генетический материал представляет собой длинную двухцепочечную молекулу ДНК.

Цепочка ДНК состоит из «звеньев» — нуклеотидов. Это четыре небольшие молекулы, строение которых универсально для всех живых существ. Из одного и того же набора нуклеотидов можно собрать геном вируса оспы, человека или синего кита. Вся разница — в порядке, в котором нуклеотиды идут в цепочке ДНК. Зная уникальный порядок нуклеотидов для участка ДНК какой-нибудь болезнетворной бактерии, мы можем засечь его присутствие в биологическом материале. А поскольку этот порядок уникален, мы не перепутаем его с человеческой ДНК.

Сколько стоит сдать генетический тест

Во время полимеразной цепной реакции кусочек чужеродного генетического материала из образца при помощи особого белка-фермента размножают много-много раз. В результате получается столько ДНК, что ее хватает для успешной идентификации.

Подробнее о том, как работает ПЦР — 12 биометодов в картинках: полимеразная цепная реакция

Для каждого микроорганизма набор реактивов нужен свой. Поэтому врачи назначают не ПЦР-анализ вообще, а исследование на конкретный микроорганизм. Так что ПЦР-тест на гепатит С не поможет найти в образце еще и хламидии.

ПЦР-анализы бывают качественные и количественные. Качественные позволяют понять, есть ли в образце генетический материал бактерии или вируса, который мы ищем. А количественные — сколько именно там этого материала. Если сделать несколько таких тестов во время лечения, станет ясно, действует ли на микробов назначенное лекарство.

Как подготовиться к ПЦР-анализу

Чтобы выяснить, какая инфекция поразила человека, у него обычно берут кровь, мочу, образцы клеток слизистой из ротоглотки или с шейки матки.

В России кровь по умолчанию рекомендуется сдавать натощак, не менее чем с интервалом в 8—12 часов после приема пищи. Однако за рубежом таких строгих правил нет: считается, что перед походом в лабораторию можно позавтракать без сладкого и жирного, например кашей без сахара и масла, куриной грудкой или яйцом. Так что если у вас был легкий завтрак, кровь сдавать можно. Пить тоже не запрещено, но лучше ограничиться чистой водой без газа.

Если врач назначил мазок из горла на ПЦР-анализ, за три часа до процедуры нельзя есть, чистить зубы, полоскать рот и рассасывать любые таблетки. Непосредственно перед взятием мазка не стоит жевать жевательную резинку. Если нос заложен, перед процедурой нужно как следует высморкаться.

Правила, по которым нужно сдавать мазок на ПЦР из половых органов, отличаются для мужчин и для женщин. Всем за 1—2 дня до исследования нужно отказаться от секса, а в течение 1,5—2 часов перед исследованием — воздерживаться от мочеиспускания. Женщинам за сутки до процедуры не следует проводить спринцевание, пользоваться свечами и антисептиками для подмывания. Во время менструации сдавать биологический материал нельзя.

Можно ли верить ПЦР-тесту

Ни один лабораторный тест не обеспечивает абсолютной точности, всегда есть вероятность ошибки. Причем ошибиться тест может в обе стороны: либо не найти искомую инфекцию у пациента, которой он на самом деле заражен, либо обнаружить ее у человека, болеющего чем-то другим или вовсе здорового.

При этом ПЦР-анализы зачастую точнее других методов поиска возбудителя инфекционных заболеваний. Например, возбудителей гонореи у женщин можно искать под микроскопом, можно выращивать в чашке Петри, а можно определять методом ПЦР. В первом случае чувствительность анализа в пределах 36,2%, во втором — 89,7%, а в третьем — 89,9—100%. Получается, что ПЦР-анализ — самый надежный, и доверять ему можно. Примерно так же дела обстоят и с другими половыми инфекциями.

Информативность ПЦР в диагностике инфекций, передаваемых половым путемPDF, 152 КБ

Но здесь многое зависит от времени взятия образца. Если мазок из горла взяли через 3—4 дня после появления симптомов, то вирус уже мог успеть спуститься из ротоглотки в легкие, и тогда вероятность найти его в мазке составляет всего 40%.

Хотя ПЦР-тесты на коронавирус работают хуже, чем ПЦР-тесты на половые инфекции, ничего точнее для диагностики коронавирусной болезни у нас пока нет. Врачи назначают повторный тест, если у них по результатам диагностики остаются сомнения.

Как сдать анализы на коронавирусную инфекцию

Как лечиться экономно

Или не платить за лечение вообще. Расскажем в нашей рассылке вместе с другими материалами о деньгах

О чем говорят результаты ПЦР-анализа

Проще всего разобраться с результатами качественных анализов: они могут быть либо положительными, либо отрицательными. Если результат положительный — значит, скорее всего, возбудитель в организме есть. Если отрицательный — скорее всего, его нет.

С результатами количественного ПЦР-анализа разобраться сложнее. Чтобы сказать, помогает ли лечение, нужно сделать несколько анализов — с интервалом от 2—3 дней до нескольких месяцев. Сравнивая старый и свежий результат, врач видит, что происходит с бактериями или вирусами в организме: становится ли их больше или, наоборот, меньше.

Если сделать всего один анализ, польза от количественного теста будет невелика: при положительном результате мы узнаем лишь то, что инфекция в организме действительно есть.

На этом бланке представлены результаты качественного и количественного теста на гепатит С — оба говорят, что вирус в организме есть. Через некоторое время после начала лечения нужно будет сделать повторный количественный анализ на гепатит С. Если концентрация вируса в биоматериале уменьшится, значит, лечение помогает. Фото: nuzdkp.ru

Чем заменить ПЦР-анализ — и можно ли так делать

Это зависит и от конкретного микроорганизма, и от типа анализа, который вам нужно сдать. Например, возбудителя урогенитального микоплазмоза — бактерию Mycoplasma genitalium — можно обнаружить только методом ПЦР. А возбудителя хламидиоза — Chlamydia trachomatis — удастся найти еще и методами иммуноферментного анализа (ИФА), прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) и культуральным посевом (КП). Иногда анализ, проведенный другим методом, обходится дешевле, но может либо занять больше времени, либо оказаться менее точным.

Если вам надо сдать качественный анализ на возбудителя какого-либо заболевания, можно обсудить замену метода с врачом. Самостоятельно менять ПЦР-тест на, скажем, ИФА-тест не стоит: точность разных лабораторных методик может сильно различаться. Не исключено, что в вашем случае анализ методом ПЦР даст наилучший результат.

Что закон говорит о врачах

Что касается количественных анализов, то в большинстве случаев имеет смысл сдать именно тот тест, который рекомендует врач. От точности количественного анализа зачастую зависит результат лечения.

Какие ПЦР-анализы можно сдать бесплатно

Если нужный вам анализ есть в стандарте лечения заболевания, а само заболевание входит в базовую — действующую по всей стране — или в территориальную программу ОМС, то этот анализ вам должны сделать бесплатно. Но на практике возможны нюансы.

Например, в лаборатории может не оказаться нужных реактивов — и тогда результатов придется ждать гораздо дольше, чем если бы вы сдавали анализы в частной лаборатории. Поэтому иногда, если время дорого, стоит сдать анализ платно.

Вы имеете право на бесплатные анализы по ОМС

Сколько стоит ПЦР-анализ

Цена ПЦР-анализа зависит от нескольких параметров.

Методики ПЦР, которую применяют в конкретной лаборатории. Например, в LabQuest для качественного определения вируса гепатита С применяют ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR) — это стоит 2780 Р. А в List Lab используют классический ПЦР-тест за 520 Р.

ПЦР в реальном времени предназначена для количественных тестов, но ее можно применять и для качественных анализов — правда, получится дороже, а разницы с более дешевым классическим вариантом ПЦР не будет.

Количества анализов, которые вы собираетесь сдавать. Например, в лаборатории «Инвитро» выявление возбудителей ИППП 7 типов методом ПЦР в мазке обойдется в 3100 Р, а определение одних только хламидий — в 835 Р.

Типа анализов. Реактивы для количественных ПЦР-тестов более дорогие, а методика сложнее, так что количественные тесты дороже качественных. Например, в лаборатории «Ситилаб» качественный ПЦР-анализ на гепатит С обойдется в 720 Р, а количественный — в 3100 Р.

3100 Р

стоит количественный анализ на гепатит С 

Вида микроорганизма, который нужно обнаружить. Например, в лаборатории LabQuest анализ на коронавирусную инфекцию обойдется в 2500 Р, а анализ на возбудителя гонореи — в 360 Р.

Чтобы сравнить цены в разных клиниках, мы выбрали один анализ — на гепатит С, для которого берут кровь из вены. Цены указаны с учетом взятия крови.

Где сдать платный ПЦР-анализ на гепатит С

Цена с учетом забора крови

3625 Р

Сроки

5 календарных дней

Цена с учетом забора крови

2975 Р

Сроки

8 календарных дней

Цена с учетом забора крови

3430 Р

Сроки

5 рабочих дней

Цена с учетом забора крови

700 Р

Сроки

4 рабочих дня

Цена с учетом забора крови

3300 Р

Сроки

5 рабочих дней

Цена с учетом забора крови

920 Р

Сроки

5 рабочих дней

Цена с учетом забора крови

3220 Р

Сроки

1 рабочий день

Цена с учетом забора крови

985 Р

Сроки

1 рабочий день

Запомнить

1. ПЦР-тесты помогают обнаружить фрагменты генетического материала бактерий, вирусов или других людей. Но для каждого микроорганизма реактив нужен свой, так что универсальных тестов ПЦР на все инфекции сразу не бывает.
2. Подготовка к анализу зависит от того, какой биологический материал вы сдаете. Если кровь, то особо готовиться не надо. Для других материалов есть несложные правила — если их соблюдать, анализ будет точнее.
3. Если вам назначили качественный ПЦР-анализ, имеет смысл сдавать его или в государственной лаборатории (если обследование положено по ОМС), или в частной, где окажутся подходящие цены.
4. Если вам назначили количественный ПЦР-анализ, врач напишет в направлении не только название исследования, но и предпочтительный метод, которым нужно провести ПЦР-анализ. Если указания на метод нет — выбирайте ту лабораторию, цены в которой вас устраивают.

ПЦР анализ

Название исследования	Клинический материал	Результат	Срок испол.	Цена
Хламидии
ДНК Chlamydia trachomatis	соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, синовиальная жидкость	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Chlamydia trachomatis	соскоб урогенит. тракта,  моча, мазок из влагалища	кол.	3 р.д.	560,00р.
Микоплазмы
ДНК Mycoplasma hominis	соскоб из урогенит. тракта секрет простаты, сперма, моча	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Mycoplasma hominis	соскоб из урогенитального тракта	кол.	3 р.д.	360,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium	соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium	соскоб урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища	кол.	3 р.д.	560,00р.
Уреаплазмы
ДНК U.urealyticum / U. parvum	соскоб из урогенит. тракта, моча, секр. простаты, сперма	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК U.urealyticum / U. parvum	соскоб урогенит. тракта	кол.	3 р.д.	420,00р.
Гарднереллы
ДНК Gardnerella vaginalis	соскоб из урогенит. тракта	кач.	2 р.д.	190,00р.
Трепонемы
ДНК Treponema pallidum	соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты	кач.	2 р.д.	190,00р.
Нейссерии
ДНК Neisseria gonorrhoeae	соскоб из урогенит. тракта, моча, секрет простаты, сперма	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Neisseria gonorrhoeae	соскоб из урогенитального тракта, моча, мазок из влагалища	кол.	3 р.д.	630,00р.
Микобактерии
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex	секрет простаты, сперма, моча, мокрота, СМЖ, БАЛ, ПЖ, синовиальная жидкость	кач.	2 р.д.	290,00р.
Стрептококки группы А
ДНК Streptococcus pyogenes (Стрептококки группы А)	мазок из ротоглотки	кач.	2 р.д.	290,00р.
Стрептококки группы В
ДНК Streptococcus agalactia (SGB)	соскоб из урогенитального тракта, моча	кол.	2-3 р.д.	260,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB)	кровь с ЭДТА	кол.	3 р.д.	630,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB)	мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ, СМЖ	кол.	3 р.д.	630,00р.
Листерии
ДНК Listeria monocytogenes	СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes	кал	кач.	3 р.д.	440,00р.
ДНК Bordetella pertussis/parapertussis/bronchiseptica	мазок из носа/зева, аспират, мокрота, БАЛ	кач.	3 р.д.	1260,00р.
ДНК Campylobacter species	кал	кач.	4 р.д.	440,00р.
ДНК Salmonella species	кал	кач.	4 р.д.	440,00р.
ДНК Shigella + E. coli (энтероинвазивные штаммы)	кал	кач.	4 р.д.	760,00р.
ДНК Salmonella/Shigella / Campylobacter / Adenovirus	кал	кач.	3 р.д.	830,00р.
РНК Rotavirus / Astrovirus / Norovirus / Enterovirus	кал	кач.	3 р.д.	950,00р.
Диарогенные эшерихиозы	кал	кач.	3 р.д.	730,00р.
Кандида
ДНК Candida albicans	соскоб из урогенит. тракта	кач.	2 р.д.	190,00р.
Токсоплазма
ДНК Toxoplasma gondii	СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	390,00р.
ДНК Toxoplasma gondii	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	390,00р.
Трихомонады
ДНК Trichomonas vaginalis	соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты, моча	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Trichomonas vaginalis	соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища	кол.	3 р.д.	390,00р.
Пневмоцисты
ДНК Pneumocystis jirovecii (carinni)	мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ	кач.	3 р.д.	320,00р.
Гепатит A
РНК HAV	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	440,00р.
Гепатит В
ДНК HBV	биоптат	кач.	7 р.д.	440,00р.
ДНК HBV	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	440,00р.
ДНК HBV	кровь с ЭДТА	кол.	7 р.д.	1420,00р.
ДНК HBV	кровь с ЭДТА	ген.	10 р.д	1160,00р.
ДНК вируса гепатита В (ДНК HBV), ультрачувствительный метод	кровь с ЭДТА	кач.	10 р.д	2100,00р.
Гепатит С
РНК HCV	биоптат	кач.	7 р.д.	440,00р.
РНК HCV	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	440,00р.
РНК HCV	кровь с ЭДТА	кол.	7 р.д.	1950,00р.
РНК HCV (типы 1,2,3)	кровь с ЭДТА	ген.	4 р.д	800,00р.
РНК HCV (типы 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5, 6)	кровь с ЭДТА	ген.	10 р.д	1800,00р.
РНК вируса гепатита С (РНК HCV), ультрачувствительный метод	кровь с ЭДТА	кач.	10 р.д	1950,00р.
Гепатит D
РНК HDV	биоптат	кач.	7 р.д.	440,00р.
РНК HDV	кровь с ЭДТА	кач.	3 р.д.	440,00р.
Гепатит E
РНК HEV	кровь с ЭДТА	кач.	3 р.д.	780,00р.
Гепатит G
РНК HGV	кровь с ЭДТА	кач.	3 р.д.	440,00р.
Цитомегаловирус
ДНК Cytomegalovirus	соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, АЖ , СМЖ	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Cytomegalovirus	кровь с ЭДТА	кол	4 р.д.	410,00р.
ДНК Cytomegalovirus	кровь с ЭДТА (плазма)	кол	10 р.д.	830,00р.
Вирус простого герпеса
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов	соскоб урогенит. тракта, мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	190,00р.
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	360,00р.
Вирус герпеса VI типа
ДНК Human herpes virus 6 типа	мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	320,00р.
ДНК Human herpes virus 6 типа	кровь с ЭДТА	кол	4 р.д.	340,00р.
Вирус Эпштейна-Барр
ДНК Epstein-Barr virus	мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	370,00р.
ДНК Epstein-Barr virus	кровь с ЭДТА	кол	4 р.д.	410,00р.
Вирус Варицелла — Зостер
ДНК Varicella-Zoster virus	мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ	кач.	2 р.д.	360,00р.
ДНК Varicella-Zoster virus	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	360,00р.
Папилломавирус
ДНК ВПЧ 16 и 18 типов	Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки — у женщин; уретра, крайняя плоть — у мужчин)	кач.	3 р.д.	190,00р.
ДНК ВПЧ 6 и 11 типов	Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки — у женщин; уретра, крайняя плоть — у мужчин)	кач.	3 р.д.	190,00р.
Количество ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы)	Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки)	кол.	5 р.д.	840,00р.
Количество ДНК ВПЧ 16 и 18 типов	Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки)	кол.	5 р.д.	440,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы)	Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки — у женщин; уретра, крайняя плоть — у мужчин)	кач.	3 р.д.	320,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 типы)	Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки — у женщин; уретра, крайняя плоть — у мужчин)	ген.	5 р.д.	710,00р.
ВПЧ-тест расширенный (с определением кол-ва и типа вируса)	Соскоб из цервикального канала	комп.	3-7 р.д.	1260,00р.
ВПЧ-ПАП-тест (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса)	Соскоб из цервикального канала (стекло + пробирка)	комп.	3-7 р.д.	2840,00р.
ВПЧ-ПАП-тест жидкостный (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса и ПАП-тест)	Соскоб из цервикального канала жидкостный	комп.	3-7 р.д.	3360,00р.
ВПЧ-тест расширенный жидкостный (с определением кол-ва и типа вируса)	Соскоб из цервикального канала жидкостный	комп.	3-7 р.д.	1680,00р.
ПАП-тест жидкостный	Соскоб из цервикального канала жидкостный		7 р.д.	2540,00р.
Энтеровирус
РНК Enterovirus	СМЖ, мазок из ротоглотки	кач.	3 р.д.	530,00р.
РНК Enterovirus	кровь с ЭДТА	кач.	4 р.д.	420,00р.
РНК Enterovirus	кал	кач.	4 р.д.	530,00р.
Аденовирус
РНК Adenovirus	мазок из носа/зева, мазки с конъюнктивы, СМЖ	кач.	3 р.д.	530,00р.
Вирусы гриппа А и В , парагриппа 1,2,3,4 типов
Вирус гриппа А и В (РНК Myxovirus influenza)	отделяемое носоглотки	кач.	2 р.д.	420,00р.
Вирус парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4)	отделяемое носоглотки	кач.	2 р.д.	480,00р.
РНК вирусов гриппа А и В, парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Myxovirus influenza, РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4)	отделяемое носоглотки	кач.	2 р.д.	790,00р.
«Вирус гриппа А, А/h2N1/СА/2009, В» (свиной грипп)	мазок из носа и зева	кач.	2 р.д.	1160,00р.
Парвовирус В19
ДНК Parvovirus B 19	мазок из ротоглотки, слюна, АЖ	кач.	3 р.д.	770,00р.
ДНК Parvovirus B 19	кровь с ЭДТА	кол.	3 р.д.	420,00р.
ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека)
ДНК HIV	кровь с ЭДТА	кач.	10 р.д.	1580,00р.
РНК HIV	кровь с ЭДТА	кол.	10 р.д.	4410,00р.
РНК/ДНК ВИЧ 1 типа, ультрачувствительный метод	Очищенные сперматозоиды		10 р.д.	9450,00р.
Вирус краснухи
РНК вируса краснухи (Rubella virus)	Кровь с ЭДТА	кач.	3 р.д.	730,00р.
РНК вируса краснухи (Rubella virus)	Мазок из ротоглотки, амниотическая жидкость (АЖ), спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор)	кач.	3 р.д.	800,00р.
Респираторно-синцитиальный вирус
РНК респираторно-синцитиального вируса человека (hRSV)	Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ	кач.	2 р.д.	1260,00р.
КОМПЛЕКСНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРВИ
Диагностика ОРВИ РНК hRSv —  Respiratory Syncytial virus (респираторно-синцитиальный вирус человека) РНК hMpv — Metapneumovirus (метапневмовирус человека) РНК hСv- Coronavirus (коронавирус человека) РНК hRv- Rhinovirus  (риновирус человека) ДНК hAdv — Adenovirus B, C, E (аденовирус человека групп B, C и E) ДНК hBv — Bocavirus (бокавирус человека) РНК hPiv — Parainfluenza virus (вирус парагриппа человека 1, 2, 3 и 4 типов)	Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ	кач.	2 р.д.	1680,00р.

ИФА и ПЦР: просто о сложных лабораторных методах диагностики инфекций

В лабораторной диагностике существует множество  методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР. Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.

ИФА (иммуноферментный анализ) – это определение в крови пациента антител к инфекционным агентам. Антитела (иммуноглобулины, Ig) представляют собой белки, которые вырабатывает наша иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела. Антитела «помечают» микробов, и по наличию таких «меток» на поверхности микробных клеток организм узнает цель для уничтожения. Антитела к одному возбудителю могут отличаться между собой по срокам появления: 
IgM – в острый период
IgG – если процесс хронический, или в качестве постоянного иммунитета (в зависимости от вида возбудителя)
IgA – при обострении хронического процесса
Метод ИФА ищет «следы» реакции на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!
Из-за низкой цены и использования в качестве биоматериала крови, метод применяется в качестве скрининга. Например, при подозрении на паразитозы пациенты сдают кровь на определение антител к аскаридам, лямблиям и т.д. Если результат пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению паразитов – необходимо сопоставить клиническую картину, результаты ИФА и, возможно, результаты других методов обследования. Стоит помнить, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в нашем организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула наше тело, т.е. остается, так называемый, «серологический шрам». 
Приведем пример: в ночном небе тысячи звезд. Многие из этих звезд уже давно погибли, но до нас до сих пор, веками, идет их свет. По сути, мы видим только след звезды. Свет есть, а звезды уже давно нет. Но если света нет, это не говорит о том, что звезды там не было. 
То же самое и с антителами. Их наличие не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента. Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет. 
Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими и дорогостоящими методами — ПЦР, бактериологические посевы. Возможен ложноположительный результат в случае, если несколько микробов обладают схожей антигенной структурой, тогда к разным микробам будут вырабатываться «похожие» антитела.

ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:

Характеристика метода	ПЦР	ИФА
Биоматериал	Мазок / кровь	Кровь
Цена	Выше	Ниже
Чувствительность	Выше	Ниже
Специфичность	Выше	Ниже
Срок выполнения	Дольше	Короче
«Человеческий фактор»	Отсутствует	Отсутствует
Подготовка к сдаче анализа	Требуется	Не требуется
Локализация возбудителя в организме	Только в месте взятия биоматериала	Роли не играет
Возможность определения стадии инфекционного процесса	Нет	Да
Отмена антибиотикотерапии при выполнении анализа	Да	Нет
Выявление возбудителя на ранней стадии	Да	Нет

Внимание! Данные «классические» методы диагностики в КДЛ «ОЛИМП» модифицированы: ПЦР выполняется в Real-time режиме, вместо ИФА используют ЭХЛ, что повышает качество исследований и сводит к минимуму вероятность ложных результатов. 

 

что это, на какие инфекции сдают и как подготовиться.

Кровь методом ПЦР чаще всего проверяют на вирусные инфекции.

Значительно реже там определяются бактерии: стафилококки, стрептококки, туберкулезные палочки.

Анализ крови методом ПЦР позволяет установить, есть ли инфекция в организме.

Тест очень чувствительный.

Он выявляет инфекционные заболевания на ранней стадии, когда антитела к возбудителям ещё не образуются.

Основные болезни, которые выявляют в крови:

• ВИЧ
• гепатиты В и С
• различные типы герпеса (возбудители генитального, лабиального герпеса, опоясывающего лишая, цитомегаловируса и инфекционного мононуклеоза)

При необходимости возможна количественная молекулярная диагностика методом ПЦР кровь.

Она позволяет понять, требуется ли пациенту лечение, какие нужны дозы и длительность курса терапии, приносят ли результат проводимые терапевтические мероприятия.

ПЦР крови на инфекции используется для лабораторного контроля их излеченности.

Рассмотрим основные заболевания, при которых используется исследование крови ПЦР.

Анализ крови методом ПЦР на туберкулез

ПЦР – один из методов диагностики туберкулеза.

С помощью лабораторного теста возможно выявление любых форм заболевания.

В том числе ранних, некультивируемых, с нетипичной локализацией возбудителя.

Методика имеет более высокую чувствительность, чем бактериологическое исследование.

Она очень информативна, так как позволяет проводить дифференциальную диагностику, отличая туберкулезные и нетуберкулезные микобактерии.

ПЦР обеспечивает их видовую и штаммовую идентификацию.

Особую ценность методика имеет при выявлении внелегочных форм туберкулеза.

Благодаря определению вида микобактерий, она дает возможность подобрать эффективную терапию.

Использование ПЦР для диагностики туберкулеза рекомендовано Министерством здравоохранения РФ, приказом №64 от 21 февраля 2000 года.

Для диагностики туберкулеза может использоваться любой биоматериал.

Это мокрота, кровь, пунктат лимфоузла, моча и т.д.

Кровь из вены для ПЦР сдают для дифференциальной диагностики ограниченных и диссеминированных форм туберкулеза.

Проще говоря, метод позволяет понять, находятся бактерии в ограниченном очаге, или уже проникли в кровь и разносятся по всему организму.

Часто ПЦР крови на микобактерии применяют у детей.

В том числе при отрицательных результатах бактериологического исследования.

Тем не менее, ПЦР крови имеет не очень высокую чувствительность.

Поэтому в клинической практике используется нечасто.

Наибольшая вероятность обнаружения ДНК в крови – у пациентов с ВИЧ или на фоне приема иммуносупрессивных препаратов.

У многих ПЦР дает отрицательные результаты даже в случае диссеминированных форм.

У женщин ДНК микобактерий определяют в менструальной крови.

Исследование проводится для диагностики туберкулеза половых органов.

Анализ делают на такие виды бактерий:

• tuberculosis
• bovis
• bovis BCG
• microti
• africanum

ПЦР крови на герпес

Для диагностики герпетической инфекции ПЦР крови применяется нечасто.

Обычно берут материал с поверхности высыпаний.

Но иногда их нет.

В таком случае исследование крови остаётся информативным методом диагностики заболевания.

Показания к проведению теста:

• ультразвуковые признаки внутриутробной инфекции
• фетоплацентарная недостаточность
• обследование детей, родившихся от женщин-носителей герпеса
• увеличение печени, длительная лихорадка на фоне беременности
• иммунодефицитные состояния и ВИЧ
• подозрение на осложнения герпеса

Однажды заразившись, человек навсегда становится носителем герпеса.

Но ДНК определяется в крови только в активную фазу инфекции.

При бессимптомном течении ПЦР дает отрицательные результаты.

Анализ крови на ВИЧ методом ПЦР

ПЦР – в большей мере уточняющий метод при ВИЧ, нежели подтверждающий.

Для первичной диагностики обычно применяются серологические исследования.

В крови выявляют антитела и антигены к ВИЧ.

Иногда ПЦР применяют для установления диагноза.

Области применения метода:

1. Тестирование донорской крови.

Вполне вероятно, что она была сдана человеком в период, когда антитела ещё не образовались.

Поэтому выявление РНК может дать положительные результаты при отрицательных серологических исследованиях.

2. Диагностика новорожденных.

Если ребенок родился от матери, страдающей ВИЧ, его всегда обследуют.

В том числе если была проведена необходимая профилактика.

Но выявлять вирус серологическими методами нецелесообразно.

Потому что ребенок первых лет жизни содержит в крови материнские антитела.

Соответственно, они обязательно будут определены в ходе анализа, и не важно, болен ребенок или нет.

Серологические тесты всегда дадут положительный результат.

В такой ситуации на помощь приходит ПЦР.

Если РНК отсутствует, то ребёнок здоров.

3. Подозрение на острую ВИЧ инфекцию в ранний период после заражения.

На антитела кровь сдают только через 3 месяца после заражения.

Есть есть необходимость ранней диагностики, используют только ПЦР.

Такая необходимость возникает, если есть основания полагать, что человек инфицирован.

По симптомам этого обычно понять нельзя.

Потому что клинические проявления ВИЧ не специфичны: они такие же, как у множества респираторных вирусных инфекций.

Но бывает так, что симптомы появляются на фоне данных анамнеза, указывающих на высокий риск инфицирования.

Например, медицинский работник имел контакт с кровью ВИЧ-инфицированного.

Если через несколько недель у него появились симптомы инфекции, это повод для обследования крови на РНК ретровируса методом ПЦР.

4. Уточнение спорных результатов серологического исследования.

ПЦР может применяться только вместе с анализом крови на антитела, но не вместо него.

Проблема этого исследования состоит в том, что оно может дать ложноотрицательные результаты, пусть и в небольшом количестве случаев.

Причины их следующие:

• в большинстве случаев ПЦР делают только на ВИЧ 1 типа, но около 0,5% случаев болезни вызывает ВИЧ 2 типа
• не выявляются мутантные штаммы вируса, в то время как антитела к ним образуются и могут быть выявлены в крови
• около 1% людей способны силами собственного иммунитета сдерживать репликацию вируса, у них есть в крови антитела, но не определяется РНК

При этом ПЦР играет важнейшую роль в лечебном процессе.

Методика позволяет оценить вирусную нагрузку.

Она позволяет врачу понять, когда стоит назначать лечение, эффективно ли оно или нужно менять схему.

На фоне удачной терапии ПЦР крови на ВИЧ становится отрицательной.

При этом антитела по-прежнему сохраняются и могут выявляться в анализах.

Поэтому серологические методы малоинформативны в оценке эффективности терапии и не используются с этой целью.

Анализ крови на стафилококковую и стрептококковую инфекцию методом ПЦР

Исследование крови на бактерии методом ПЦР проводят при тяжелых инфекциях:

• пневмониях
• менингитах
• сепсисе

Этиологическая диагностика позволяет врачу не только подтвердить бактериальную этиологию процесса.

Она дает возможность подобрать наиболее эффективные препараты для лечения.

Потому что при разных патологиях назначаются разные антибиотики.

Если стрептококковая инфекция чувствительна к большинству препаратов, в том числе бета-лактамным антибиотикам, то стафилококк часто резистентный ко многим лекарственным средствам.

ПЦР обычно делают качественную.

Оценивается факт присутствия бактерий в крови, а не их количество.

Анализ крови на паразитов методом ПЦР

В крови определяют ДНК листерий и токсоплазм.

Это одноклеточные паразиты.

Листериозом чаще всего заражаются через еду.

Болезнь может давать осложнения, вызывать воспаление структур центральной нервной системы.

В группе риска – беременные, пожилые, лица с иммунодефицитом или онкозаболеваниями.

В большинстве же случаев листериоз протекает как кишечная инфекция.

Септическая его форма очень опасна и часто приводит к летальному исходу.

Токсоплазма – распространенная, не столь опасная инфекция.

Она представляет наибольшую угрозу для беременных.

Анализ назначается при:

• привычном невынашивании беременности
• длительной лихорадке неясного происхождения
• ВИЧ
• увеличении печени и селезенки

Все беременные сдают анализ на токсоплазму.

Хотя обследуют их обычно при помощи серологических методов.

Болезнь часто манифестирует на фоне иммунодефицита.

Анализ крови на ПЦР гепатит С количественный

ПЦР применяется с целью подтверждения диагноза.

При появлении клинических признаков или наличии анамнестических данных, указывающих на высокую вероятность этого заболевания, доктор назначает определение в крови РНК вируса.

Исследование очень чувствительно.

Поэтому может выявлять гепатит С в бессимптомной стадии.

Показания к назначению:

• выявление в крови HCV Ab
• негативные результаты HCV Ab на фоне иммунодефицита при имеющихся признаках поражения печени
• начало лечения гепатита С при подтвержденном диагнозе

Количественная ПЦР проводится при:

• принятии решения о необходимости противовирусной терапии
• перед началом противовирусного лечения, для определения исходной вирусной нагрузки
• в процессе лечения, для отслеживания эффективности проводимой терапии
• в конце курса, для подтверждения излеченности или определения показаний для повторной терапии

До начала лечения ПЦР делают всем пациентам.

Знать исходную вирусную нагрузку врачу необходимо, чтобы:

• определиться с дозами препаратов, длительностью лечения
• оценить ожидаемую эффективность
• в ходе дальнейших количественных исследований сравнить новые результаты с предыдущими, чтобы понять, есть ли положительная динамика

Раньше для первичной диагностики заболевания применялись качественные тесты.

Дополнительно использовались количественные, которые делали перед началом лечения и в процессе проведения терапии.

Но сегодня количественная ПЦР имеет столь же высокую чувствительность, что и качественная.

Она позволяет определять вирус гепатита С в крови с нижним порогом чувствительности 10-15 МЕ/мл.

Благодаря внедрению ПЦР в разы уменьшилось количество биопсий печени, проводимых с диагностической целью.

Методика позволяет врачу наблюдать за течением заболевания и эффективностью терапии.

Оценивать вирусологическую нагрузку в динамике ВОЗ рекомендует одним и тем же выбранным методом.

Как правило, врач направляет одного пациента в одну и ту же лабораторию для проведения одного и того же теста.

Такой подход обеспечивает точность результата.

В том числе при определении устойчивого вирусологического ответа, свидетельствующего об эффективности проводимой терапии.

Анализ крови ПЦР на гепатит В количественный

ПЦР позволяет выявить ДНК вируса гепатита В в различном биоматериале:

• крови
• лимфоцитах
• биоптате печени

В рутинной практике используется анализ крови ПЦР на гепатит В.

Этот метод обладает самой высокой чувствительностью.

Иногда он незаменим в первичной диагностике.

Для установления диагноза гепатита В достаточно определения в крови антигенов и антител.

Но иногда инфекция протекает в скрытой форме.

Традиционно проводимые для установления первичного диагноза исследования могут давать отрицательные результаты.

При этом с помощью ПЦР удается выявить вирус.

Кроме того, ДНК возбудителя гепатита В является самым ранним маркером этого заболевания.

Она начинает определяться в крови раньше, чем антитела и антигены.

Благодаря ПЦР можно выявить форму заболевания, вызванную мутантными штаммами вируса.

Определение ДНК позволяет не только констатировать инфекцию.

Метод также дает возможность определять репликативную активность HBV.

ПЦР становится положительной ещё в инкубационный период.

В острый период заболевания количественные показатели увеличиваются.

ПЦР становится негативной уже в период ранней реконвалесценции.

Это позволяет врачу подтвердить излеченность с помощью данного метода.

Таким образом, области применения этого исследования следующие:

• первичная диагностика заболевания в раннем периоде после заражения
• проверка донорской крови
• выявление форм заболевания, которые не обнаруживаются при помощи анализа крови на антигены и антитела к вирусу гепатита В (субклинические формы, мутантные штаммы вируса)
• принятие решение о необходимости назначения терапии (вирусологическая нагрузка)
• определение тактики лечения
• оценка его эффективности

Анализ могут назначить пациентам, которые ранее переболели вирусным гепатитом В, а сейчас получают иммуносупрессивную терапию.

Потому что это фактор риска повторного возникновения заболевания.

Расшифровка результатов:

• положительная ПЦР при любом количественном результате – устанавливается диагноз гепатита В
• уровень ДНК больше 10 в 5 степени копий ДНК в мл – требуется лечение
• уровень ДНК меньше 10 в 3 степени – лечение было эффективным, болезнь перешла в стадию ремиссии, прогноз благоприятный (хотя возможна реинфекция)

Если анализ отрицательный, это говорит о том, что человек здоров и не встречался с вирусом, либо излечен от гепатита В.

В результате успешной терапии ДНК полностью исчезает из крови и не определяется в ней при помощи ПЦР.

ПЦР на герпес зостер

Вирус варицелла зостер является возбудителем ветрянки и опоясывающего лишая.

Его ДНК появляется в крови только в острую фазу инфекции.

Ветрянка обычно диагностируется клиническим методом.

Потому что она имеет достаточно характерные симптомы.

В то время как при опоясывающем герпесе происхождение болезни не всегда очевидно.

Высыпания появляются не сразу.

А если появляются, то клиника может быть атипичной.

Для подтверждения диагноза может быть использована диагностика крови методом ПЦР.

Такая диагностика применяется нечасто.

Но иногда в ней возникает необходимость в спорных клинических ситуациях.

Где сдать кровь ПЦР?

Если вам нужно сдать анализ крови методом ПЦР, приходите в нашу клинику.

Здесь работают опытные врачи-венерологи.

Мы специализируемся в первую очередь на диагностике и лечении заболеваний с половым путем передачи.

У нас можно сдать кровь на:

• ВИЧ
• различные виды герпеса
• вирусные гепатиты В и С

При необходимости мы также можем обследовать вас на туберкулез, стафилококк и многие другие инфекции.

К нам стоит обращаться в таких ситуациях:

• планирование беременности
• 1 триместр беременности (профилактическое обследование)
• контакт (половой или любой другой) с источником инфекции – ВИЧ, гепатита и других опасных заболеваний
• появление подозрительных симптомов, указывающих на возможное заражение вирусными инфекциями (пузыри на коже, увеличение печени и селезенки, очень тяжелые гриппоподобные симптомы)
• положительный анализ других исследований (антитела, антигены)
• рождение детей от инфицированных матерей

Мы также обследуем пациентов с уже установленным диагнозом.

Это необходимо для контроля лечения.

Наши преимущества:

• работаем с лучшими лабораториями Москвы
• мы сотрудничаем сразу с несколькими лабораториями, поэтому предлагаем широчайший спектр различных анализов, в том числе тех, которые используются редко, например, для выявления генерализованных форм инфекций
• идеальное соблюдение правил забора биоматериала позволяет обеспечить точные результаты;
• возможность анонимного обследования
• доступные цены
• аккуратный, безболезненный забор крови из вены без боли, ран, синяков и воспалений

После диагностики в нашей клинике можно пройти лечение, если в нём возникнет необходимость.

Для сдачи анализов крови методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Диагностика методом ПЦР — Комплексы медицинских анализов и их цен в KDL

Алергология. ImmunoCAP. Индивидуальные аллергены, IgE

Аллергены деревьев, IgE

Аллергены животных и птиц, IgE

Аллергены пыли, IgE

Аллергены трав, IgE

Пищевые аллергены, IgE

Аллергокомпоненты ImmunoCAP

Аллергокомпоненты деревьев

Аллергокомпоненты животных и птиц

Аллергокомпоненты плесени

Аллергокомпоненты трав

Пищевые аллергокомпоненты

Аллергология. ImmunoCAP. Комплексные исследования IgE (результат по каждому аллергену)

Аллергология. ImmunoCAP. Панели аллергенов IgE, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергология. ImmunoCAP. Фадиатоп

Аллергология. Immulite. Индивидуальные аллергены

Аллергены гельминтов, IgE

Аллергены грибов (кандида и плесневых), IgE

Аллергены деревьев, IgE

Аллергены животных и птиц, IgE

Аллергены клещей домашней пыли, IgE

Аллергены лекарств и химических веществ, IgE

Аллергены насекомых, IgE

Аллергены пыли, IgE

Аллергены ткани, IgE

Аллергены трав, IgE

Бактериальные аллегены (стафилококк), IgE

Пищевые аллергены, IgE

Пищевые аллергены, IgG

Аллергология. Immulite. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)

Аллергология. Immulite. Панели аллергенов, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергены деревьев, IgE (панель)

Аллергены животных и птиц, IgE (панель)

Аллергены трав, IgE (панель)

Ингаляционные аллергены, IgE (панель)

Пищевые аллергены, IgE (панель)

Аллергология. Immulite. Панели пищевых аллергенов IgG (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE

Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)

Аллергология. Местные анестетики, IgE

Биохимические исследования крови

Диагностика анемий

Липидный обмен

Обмен белков

Обмен пигментов

Обмен углеводов

Специфические белки

Ферменты

Электролиты и микроэлементы

Биохимические исследования мочи

Разовая порция мочи

Суточная порция мочи

Витамины, аминокислоты, жирные кислоты

Гематология

Гемостаз (коагулограмма)

Генетические исследования

HLA-типирование

Исследование генетических полиморфизмов методом пиросеквенирования

Исследование генетических полиморфизмов методом ПЦР

Молекулярно-генетический анализ мужского бесплодия

Гистологические исследования

Гистологические исследования лаборатории UNIM

Гормоны биологических жидкостей

Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы

Гормоны крови

Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы

Маркеры остеопороза

Пренатальная диагностика

Ренин-альдостероновая система

Тесты репродукции

Функция органов пищеварения

Функция щитовидной железы

Гормоны мочи

Диагностика методом ПЦР

Андрофлор, иследование биоценоза (муж)

Вирус герпеса VI типа

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус простого герпеса I, II типа

Вирус Эпштейна-Барр

Вирусы группы герпеса

Возбудитель туберкулеза

ВПЧ (вирус папилломы человека)

Грибы рода кандида

Листерии

Парвовирус

Респираторные инфекции

Стрептококки (вкл. S.agalactie)

Токсоплазма

Урогенитальные инфекции, ИППП

Урогенитальные инфекции, комплексные исследования

Урогенитальные инфекции, условные патогены

Фемофлор, исследование биоценоза (жен)

Флороценоз, иследование биоценоза (жен)

Цитомегаловирус

Диагностика методом ПЦР, кал

Кишечные инфекции

Диагностика методом ПЦР, клещ

Клещевые инфекции

Диагностика методом ПЦР, кровь.

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус простого герпеса I, II типа

Вирус Эпштейна-Барр

ВИЧ

Возбудитель туберкулеза

Гепатит D

Гепатит G

Гепатит А

Гепатит В

Гепатит С

Листерии

Парвовирус

Токсоплазма

Цитомегаловирус

Жидкостная цитология

Изосерология

Иммуногистохимические исследования

Иммунологические исследования

Иммунограмма (клеточный иммунитет)

Интерфероновый статус, базовое исследование

Интерфероновый статус, чувствительность к препаратам

Оценка гуморального иммунитета

Специальные иммунологические исследования

Исследование абортуса

Исследование мочевого камня

Исследование парапротеинов. Скрининг и иммунофиксация

Исследования слюны

Исследования слюны

Комплексные исследования

Лекарственный мониторинг

Маркеры аутоиммунных заболеваний

Антифосфолипидный синдром (АФС)

Аутоиммунные заболевания легких и сердца

Аутоиммунные неврологические заболевания

Аутоиммунные поражения ЖКТ и целиакия

Аутоиммунные поражения печени

Аутоиммунные поражения почек и васкулиты

Аутоиммунные эндокринопатии и бесплодие

Диагностика артритов

Пузырные дерматозы

Системные ревматические заболевания

Эли-тесты

Микробиологические исследования (посевы)

Посев крови на стерильность

Посев на гемофильную палочку

Посев на грибы (Candida)

Посев на грибы (возбудители микозов кожи и ногтей)

Посев на дифтерию

Посев на микоплазмы и уреаплазмы

Посев на пиогенный стрептококк

Посев на стафилококк

Посевы кала

Посевы мочи

Посевы на микрофлору (конъюнктива)

Посевы на микрофлору (отделяемое)

Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт женщины)

Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт мужчины)

Посевы на микрофлору ЛОР-органы)

Ускоренные посевы с расширенной антибиотикограммой

Неинвазивная диагностика болезней печени

Программы неинвазивной диагностики болезней печени

Неинвазивный пренатальный ДНК-тест (НИПТ)

Неинвазивный пренатальный тест (пол/резус плода)

Общеклинические исследования

Исследование назального секрета

Исследование секрета простаты

Исследования кала

Исследования мочи

Исследования эякулята

Микроскопическое исследование биологических жидкостей

Микроскопия на наличие патогенных грибов и паразитов

Микроскопия отделяемого урогенитального тракта

Онкогематология

Иммунофенотипирование при лимфопролиферативных заболеваниях

Миелограмма

Молекулярная диагностика миелопролиферативных заболеваний

Цитохимические исследования клеток крови и костного мозга

Онкогенетика

Онкомаркеры

Пищевая непереносимость, IgG4

Полногеномные исследования и панели наследственных заболеваний

Пренатальный скрининг

Серологические маркеры инфекций

Аденовирус

Бруцеллез

Вирус HTLV

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус Коксаки

Вирус кори

Вирус краснухи

Вирус эпидемического паротита

Вирус Эпштейна-Барр

Вирусы простого герпеса I и II типа

ВИЧ

Гепатит D

Гепатит А

Гепатит В

Гепатит Е

Гепатит С

Грибковые инфекции

Дифтерия

Кишечные инфекции

Клещевые инфекции

Коклюш и паракоклюш

Коронавирус

Менингококк

Паразитарные инвазии

Парвовирус

Респираторные инфекции

Сифилис

Столбняк

Токсоплазма

Туберкулез

Урогенитальные инфекции

Хеликобактер

Цитомегаловирус

Специализированные лабораторные исследования.

Дыхательный тест

Микробиоценоз по Осипову

Тяжелые металлы и микроэлементы

Тяжелые металлы и микроэлементы в волосах

Тяжелые металлы и микроэлементы в крови

Тяжелые металлы и микроэлементы в моче

Услуги

Выезд на дом

ЭКГ

Установление родства

Химико-токсикологические исследования

Хромосомный микроматричный анализ

Цитогенетические исследования

Цитологические исследования

Добро пожаловать на сайт PCR Diagnostics.eu от Ecoli — предлагает более 500 различных типов диагностических наборов для ПЦР для клинической, ветеринарной диагностики и ГМО

Ecoli Ltd. предлагает более 150 различных типов AmpliSens ^® Наборы для диагностики ПЦР для клинической диагностики. Наборы разработаны в соответствии с лабораторным оборудованием для обнаружения электрофореза, FEP и ПЦР в реальном времени.

Несколько наборов Real-Time / FEP позволяют за одну мультиплексную реакцию ПЦР установить присутствие нескольких инфекционных агентов, что увеличивает скорость обнаружения и снижает стоимость исследований.

Диагностические наборы

ПЦР обладают высокой чувствительностью, высокой специфичностью и очень доступной ценой. Большинство из них имеют сертификат CE. Комплекты разработаны и производятся ЦНИИ (РФ).

Декларация соответствия ЕС (сертификат №4122.58.01 / 0) для медицинских изделий для диагностики in vitro согласно Приложение III из Директива 98/79 / EC здесь Сертификат CE (номер 110040 QS / NB) для медицинских устройств для диагностики in vitro согласно Приложению II , Список B Директивы 98/79 / EC здесь Декларация соответствия ЕС для медицинских приборов для диагностики in vitro согласно Приложению II , Список B Директивы 98/79 / EC (Директива IVD) здесь Сертификат ISO производителя — EN ISO 13485 здесь Сертификат ISO компании Ecoli — EN ISO 13485 здесь Сертификат свободной продажи (FSC) для требований местной регистрации или для других целей, вы можете скачать по номеру здесь

29 мая 2018 г.

Широкий выбор наборов для ПЦР в реальном времени для диагностики респираторных инфекций.Смотрите этот материал.

подробнее

29 мая 2018 г.

Наборы для количественной ПЦР в реальном времени Unique CMV и EBV .

Новый HHV7 Доступен набор для количественной ПЦР в реальном времени.

См. Этот материал.

подробнее

11 мая 2018

Благодаря использованию наших наборов для мультиплексной ПЦР-диагностики ЗППП в реальном времени лаборатории могут значительно снизить затраты на обнаружение одного патогена, сэкономить время и обнаружить до 4 целей в одной пробирке.Интересно как? Смотрите этот материал.

подробнее

.

Будущее ПЦР-диагностики

Получившая Нобелевскую премию полимеразную цепную реакцию (ПЦР) ^{1 Метод} произвел революцию в молекулярной биологии своим изобретением в 1986 году, и он сделал то же самое в медицинской диагностике за последние 15 лет. Возможность копировать и размножать определенные молекулы ДНК-мишени открыла дверь для быстрой, точной диагностики заболеваний в различных областях и с меньшими затратами со временем.

ПЦР создает неограниченное количество копий ДНК только из одной исходной цепи с использованием ферментов полимеразы, праймеров (небольших последовательностей ДНК, которые определяют ДНК, подлежащую амплификации) и нескольких термических циклов.Достижения произошли в 1980-х годах с использованием бактериальных ферментов, которые могли выдерживать высокие температуры, а в 1991 году технология была приобретена фармацевтическим гигантом Roche, который начал совершенствовать науку для использования в медицинской диагностике.

Преимущества ПЦР

«Современные методы [культивирования] могут быть довольно трудоемкими и иногда могут занимать от нескольких дней до недель, тогда как количественные методы ПЦР могут дать вам ответы в течение нескольких часов. Это может быть намного быстрее и надежнее », — говорит Ребекка Сандерс, ученый-метролог из компании LGC, Теддингтон, Великобритания.ПЦР-диагностика выполняется быстрее и менее подвержена перекрестному заражению, поскольку этот метод обычно выполняется в автоматических термоциклах. Он также более чувствителен и специфичен, чем иммуноанализ на планшетах.

В некоторых случаях ПЦР становится предпочтительным методом диагностики. Например, этот метод был одобрен Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) для быстрой диагностики туберкулеза легких (ТБ) ² , чтобы заменить стандартный метод микроскопии мазка мокроты, разработанный более века назад.ПЦР или тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) дают быстрые результаты, и это позволяет использовать их в полевых условиях для ранней диагностики туберкулеза, что важно для предотвращения распространения болезни.

Возможности ПЦР-диагностики огромны. «Было бы проще определить, где ПЦР не будет использоваться — все на этой планете имеет геном ДНК или РНК, поэтому, если вы хотите обнаружить что-либо, вы переходите к ПЦР», — объясняет Джонатан О’Халлоран, главный научный сотрудник QuantumDx. стартап по ПЦР-диагностике, базирующийся в Ньюкасле, Великобритания.Он добавляет, что, помимо клинических применений, ПЦР-диагностика также может стать важной в таких отраслях, как пищевая и сельскохозяйственная. Еще одним преимуществом диагностики ПЦР является их использование в мультиплексных анализах — амплификация нескольких мишеней в одном эксперименте ПЦР путем простого использования нескольких пар праймеров. Это может быть полезно при диагностике инфекционных агентов, симптомы которых сложно охарактеризовать. В одном тесте можно охватить до 20 патогенов. ³

Арон Коэн, главный исполнительный директор лондонского отделения диагностики.ai, говорит, что в нынешней экосистеме ПЦР-диагностики в настоящее время преобладает лабораторное тестирование, «на данный момент очень мало тестов, одобренных FDA, возможно, 10 различных тестов имеют одобрение FDA (например, для ВИЧ) и полностью автоматизированы, но для подавляющего большинства люди полагаются на тесты, разработанные в лаборатории ».

КПЦР впереди

Большинство диагностик будет основано на количественной ПЦР в реальном времени или на количественной ПЦР. ⁴ Он работает за счет использования флуоресцентно меченных олигонуклеотидных зондов и мониторинга флуоресценции после каждого цикла — интенсивность сигнала отражает количество амплифицированной ДНК, а количество циклов, в которых флуоресценция обнаруживается впервые, используется для расчета начального числа молекул ДНК в образце после калибровки системы.

Признавая важность молекулярной диагностики для ранней диагностики опасных для жизни инфекций, Bruker недавно запустила ПЦР в реальном времени для инвазивных грибковых заболеваний. Fungiplex® Aspergillus и Fungiplex® Candida обнаруживают ДНК Aspergillus и Candida соответственно, прямо из образцов пациентов, что позволяет на ранней стадии диагностировать инвазивное заболевание, не дожидаясь посева грибкового патогена. Тогда для улучшения результатов лечения пациентов может быть назначена таргетная противогрибковая лекарственная терапия.

КПЦР также адаптирован для обнаружения РНК-вирусов, таких как ВИЧ и гепатит С, и анализа транскриптов РНК, связанных с некоторыми видами рака. В двухэтапной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-PCR) молекулы РНК преобразуются в их последовательности комплементарной ДНК (кДНК) ферментами обратной транскриптазы с последующей амплификацией кДНК с помощью стандартной ПЦР. Разрабатываемый новый сверхбыстрый метод может обещать более эффективный процесс, особенно при анализе большого количества проб.В этом методе используется термостабильная обратная транскриптаза, созданная с помощью генной инженерии, поэтому процесс ПЦР может происходить непосредственно с РНК. ⁵

Преодоление ограничений

Но есть и ограничения, связанные с ПЦР-диагностикой, «все дело в пробоподготовке с ПЦР, в отличие от иммунодиагностики, где вы можете по существу использовать образец сырой сыворотки крови, для ПЦР-диагностики вы требуете. провести сложную пробоподготовку », — говорит О’Халлоран. Многие органические и неорганические вещества будут ингибировать ПЦР, поэтому их необходимо удалить, и эти дополнительные стадии усложняют процедуру.

Ряд компаний и академических групп изучают технологии для улучшения диагностики ПЦР. Люк Ли, профессор биоинженерии Калифорнийского университета в Беркли, разрабатывает альтернативный метод циклического изменения температуры. Он изобрел способ более быстрого изменения температуры — с помощью плазмоники — взаимодействия света с электронами на поверхности металла, которые генерируют тепло. Светодиоды нагревают 120-нм золотую пленку в контакте с раствором ДНК в микрожидкостной лунке. Механизм позволял переключаться с 55 ° C на 95 ° C, 30 раз за 5 минут.

Компания O’Halloran’s QuantumDx представила портативное настольное устройство, которое может сократить время теста до 7 минут и имеет улучшенную чувствительность до менее 1 клетки на мл — огромное улучшение по сравнению со стандартными методами, которые составляют около 150 клеток на мл. Это было достигнуто с помощью интеллектуальной микрофлюидики и технологии полевых транзисторов с нанопроволокой. ⁷ «Мы решаем некоторые проблемы чувствительности с помощью действительно новой физики, называемой диэлектрофорезом», — объясняет О’Халлоран.Это явление вызывает силу, действующую на частицу в неоднородном электрическом поле, и позволяет точно определить интересующие клетки из необработанного образца: «Мы устанавливаем электрические поля с частотой и величиной, которые вызывают дипольные моменты, в частности, в представляющую интерес клетку, и мы используем микрожидкости для высвобождения этих концентрированных клеток в нашу ПЦР ».

В крупных диагностических лабораториях большая часть ПЦР проводится с помощью автоматизированных, роботизированных высокопроизводительных систем. Но стандартизация и контроль качества ПЦР по-прежнему требует кропотливого участия человека.Инновационный стартап Diagnostics.ai придумал решение, использующее искусственный интеллект. «Мы эффективно загружаем обучающую машину контролируемым набором данных, набором входных данных с кучей известных результатов, и обучающаяся машина автоматически проверяет себя и гарантирует, что она может давать те же результаты на регулярной основе — то, что невозможно сделать без ручного ввода в текущих систем из-за вариабельности ПЦР в реальном времени для разных платформ и анализов », — говорит Коэн. После того, как их система настроена, о результатах можно будет сообщить почти сразу, и это только отметит неожиданные результаты, требующие дальнейшего анализа.Система тестируется крупнейшим поставщиком услуг патологии Великобритании Viapath в одной из своих ведущих лабораторий.

Цифровая точность

Изобретенная в начале 1990-х, но вытесненная qPCR в 1996 году, цифровая PCR теперь вернулась в специализированные приложения. Этот метод не требует стандартной калибровки, но работает путем разделения исходного образца на большое количество отдельных лунок перед амплификацией, так что в каждой лунке будет либо 1, либо 0 молекул ДНК (отсюда цифровая).После амплификации простой расчет положительных или отрицательных лунок может определить абсолютное количественное определение. ⁸

«Цифровая технология позволяет достичь уровня точности, которого невозможно достичь с помощью количественной ПЦР», — говорит Сандерс, но О’Халлоран отмечает, что «это откровенно избыточно для большинства клинических приложений». Это полезно, когда вам нужно точно знать, сколько цели находится в вашем образце. «Например, есть некоторые виды рака, которые вызваны множеством копий одного и того же гена, поэтому изменение количества копий и знание количества копий может изменить режим лечения», — объясняет Сандерс.Она говорит, что в настоящее время большинство больниц не имеют доступа к подобным приборам; «стоимость должна снизиться, и это произойдет, если на рынке будет больше платформ».

Взгляд в будущее

ПЦР-диагностика также окажет большое влияние на будущий рост прецизионной медицины — индивидуальный подход к лечению индивидуального пациента. О’Халлоран говорит, что QuantumDx уже разработали тест на варфарин. Антикоагулянтный препарат выбора на протяжении десятилетий, недавно его заменили дорогостоящими альтернативами из-за риска тромбоза и других осложнений у некоторой части пациентов.«Расходы на [антикоагулянты] ежегодно растут на сотни тысяч фунтов, — говорит О’Халлоран, — но« мы разработали тест, который позволяет нам проводить быстрые тесты на пациентах, а затем сообщать врачу, кто может принимать варфарин (это 75% нашего населения) ».

В конечном итоге О’Халлоран рассматривает ПЦР-диагностику как нечто, что расширится до первичной медико-санитарной помощи:« вы собираетесь увидеть ее в кабинете врача и в аптеке, она поможет будет действительно захватывающим временем для ПЦР ». QuantumDx работает над переносным устройством для ПЦР, и он предполагает, что однажды оно может оказаться в нашей домашней аптечке рядом с термометром:« Я не вижу причин, по которым это невозможно. произойдет в ближайшие 10 лет.’

Ссылки

¹ Mullis KB и Faloona FA« Специфический синтез ДНК in vitro посредством цепной реакции, катализируемой полимеразой ». Методы в энзимологии vol. 155 (F) pp. 335–50 (1987)

² Boehme et al. 2010. Быстрая молекулярная диагностика туберкулеза и устойчивости к рифампину. N Engl J Med. 363: 1005-1015, DOI: 10.1056 / NEJMoa0907847

³ Пол К. Шрекенбергера и Александр Дж. МакАдамб. Точка-контрапункт: большие мультиплексные панели для ПЦР должны быть тестами первой линии для обнаружения респираторных и кишечных патогенов.J. Clin. Microbiol. Октябрь 2015 г. 53 нет. 10 3110-3115. DOI: 10.1128 / JCM.00382-15

⁴ Петр Кралик и Маттео Рикки. Базовое руководство по ПЦР в реальном времени в микробной диагностике: определения, параметры и все остальное. Front Microbiol. 2017; 8: 108. doi: 10.3389 / fmicb.2017.00108

⁵ Петра Хованцова, Верена Мерк, Андреас Маркс, Марсель Лейст, Рамон Кранастер; Количественная ПЦР с обратной транскрипцией непосредственно из клеток без экстракции РНК и без изотермической обратной транскрипции: протокол RT-qPCR с нулевым шагом, Биологические методы и протоколы, Том 2, Выпуск 1, 1 января 2017 г., bpx008, https: // doi.org / 10.1093 / biomethods / bpx008

⁶ Джун Хо Сон, Бьюнгрэ Чо, Сун Гвён Хонг, Сан Хун Ли, Ори Ходжа, Аманда Дж. Хаак и Люк П. Ли. Сверхбыстрая фотонная ПЦР. Свет: Наука и приложения, том 4, страница e280 (2015) doi: 10.1038 / lsa.2015.53

⁷ http://quantumdx.com/systems/q-poc

⁸ Джим Ф. Хаггетт, Александра Уэйл . Цифровая ПЦР как новая технология и ее потенциальное значение для молекулярной диагностики. Клиническая химия.2013, 59 (12) 1691–1693; DOI: 10.1373 / Clinchem.2013.214742

.

404–

:

. :

. -:

+7 (499) 519-32-46
+7 (812) 243-12-94

, г.:

.

Диагностическое тестирование и скрининг на SARS-CoV-2

Диагностические образцы

Образцы для диагностических тестов на SARS-CoV-2 могут быть взяты из верхних отделов (мазки из носоглотки / ротоглотки, носовой аспират, назальный смыв или слюна) или нижних дыхательных путей (мокрота или трахеальный аспират или бронхоальвеолярный лаваж — БАЛ). Данные, сравнивающие точность тестирования RT-PCR, показывают, что чувствительность теста может варьироваться в зависимости от типа образца.

Одно исследование показало, что уровни вирусной РНК выше и РНК чаще обнаруживается в образцах из носа по сравнению с образцами из полости рта, однако это открытие было основано на небольшом количестве протестированных мазков из носа [1].Группа исследователей COVID-19 в США, сравнив 117 пар образцов из носоглотки и ротоглотки одновременно от 12 пациентов, обнаружила, что 32 пары не согласуются с одним положительным тестом, а другой отрицательным: образец носоглотки дал положительный результат в 66% этих пар по сравнению с 34% для образца из ротоглотки [2]. Другое исследование не показало более высоких уровней вирусной РНК в носоглотке по сравнению с образцами из ротоглотки [3].

При сравнении различных типов образцов предварительные результаты предпечатной статьи, еще не прошедшей рецензирование, показали, что наиболее точным образцом для диагностики SARS-CoV-2 была мокрота, за которой следовали мазки из носа и горла [4].Метаанализ исследований слюны показал чувствительность 91% (95% ДИ = 80% -99%) чувствительность тестов слюны и 98% (95% ДИ 89% -100%) чувствительность тестов мазков из носоглотки при ранее подтвержденном COVID-19 инфицированные пациенты с умеренной неоднородностью исследований [5]. Другое исследование показало, что слюна является наиболее подходящим образцом для диагностики SARS-CoV-2 [6]. Слюна предлагает неинвазивный образец, который также можно рассмотреть для самостоятельного отбора. В ситуации, когда образец из носоглотки или другой вышеупомянутый образец неприемлем, слюна может рассматриваться как альтернативный образец.

Комбинация образцов мазков из носоглотки и ротоглотки оказалась более чувствительной для диагностики SARS-CoV-2 по сравнению с мазками из носоглотки только в трех различных исследованиях [7] [8,9].

Типы анализов

Существует три основных типа тестов для обнаружения, относящихся к диагностическому тестированию и скринингу COVID-19, в зависимости от обнаруживаемой цели:

• Тесты на нуклеиновую кислоту обнаруживают присутствие вирусной РНК. Как правило, они используют стадию амплификации, основанную на RT-PCR.
Тесты на антиген
• обнаруживают присутствие вирусного антигена, как правило, части поверхностного белка.
• Тесты на антитела обнаруживают наличие антител, выработанных против SARS-CoV-2. Три наиболее используемых анализа — это твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), хемолюминесцентный анализ (CLIA) и анализ латерального потока (LFA). Кроме того, используются тесты нейтрализации вирусов, которые могут специфически обнаруживать нейтрализующие антитела, но в основном они используются для проверки и исследования анализов. Предварительные отчеты об анализах ELISA показали хорошую корреляцию результатов титрования антител с вируснейтрализующими антителами [116, 160].

Помимо этих основных анализов обнаружения, можно также выполнить полногеномное секвенирование для определения последовательности вируса SARS-CoV-2 в образце с возможными квазивидовыми вариантами [10].

Внутренние тесты по сравнению с медицинскими приборами для диагностики in vitro

Внутренние тесты — это некоммерческие методы тестирования in vitro, выполняемые в лабораториях в соответствии с научно опубликованным протоколом после внутренней проверки эффективности в соответствии с их системой обеспечения качества, основанной на международных стандартах качества клинических лабораторий.Собственные методы тестирования полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в реальном времени, нацеленные на вирусную РНК SARS-CoV-2, являются золотым стандартом in vitro для диагностики предполагаемых случаев COVID-19. Эти тесты ПЦР можно автоматизировать с помощью роботизированных молекулярных платформ для высокопроизводительной пакетной обработки клинических образцов.

Медицинские устройства для диагностики in vitro (IVD) — это коммерческие наборы или системы, на которые должна быть нанесена этикетка CE-IVD для размещения на рынке ЕС. Директива IVD 98/79 / EC [11] определяет «медицинское устройство для диагностики in vitro» как любое медицинское устройство, которое является реагентом, продуктом реагента, калибратором, контрольным материалом, комплектом, инструментом, аппаратом, оборудованием или системой, независимо от того, используются ли они. отдельно или в комбинации, предназначенные производителем для использования in vitro для исследования образцов, включая кровь и донорские ткани, полученные из человеческого тела, исключительно или в основном с целью предоставления информации в контексте COVID-19, касающейся физиологическое или патологическое состояние, или контролировать терапевтические меры.«Назначение» IVD означает использование, для которого предназначено устройство, в соответствии с данными, указанными производителем на этикетке, в инструкциях по применению и / или в рекламных материалах. В соответствии со статьей 9 [11] Директивы IVD 98/79 / EC о процедурах оценки соответствия для диагностических устройств COVID-19, которые не предназначены для использования в качестве самопроверки, производитель должен, чтобы нанести маркировку CE, составить декларация соответствия ЕС, необходимая перед размещением устройств на рынке.Это процедура самодекларации, основанная на соблюдении основных требований безопасности и производительности, перечисленных в Директиве, и технических характеристик устройства, заявленных производителем. В случае проведения самотестирования необходимо участие стороннего органа по оценке соответствия. Производительность устройств для тестирования в местах оказания медицинской помощи и устройств для быстрой диагностики, представленных на рынке ЕС с маркировкой CE, может отличаться в лаборатории по сравнению с исследованием производительности, проведенным производителем для целей маркировки CE. Существует несколько сотен CE-маркированных IVD для обнаружения вируса COVID-19 или антител: независимая оценка их диагностической точности продолжается.

Использование по назначению

Диагностическое тестирование на COVID-19 путем обнаружения вирусной РНК или белка в респираторных образцах помогает принимать решения в области клинического, инфекционного контроля или управления общественным здравоохранением. Обнаружение SARS-CoV-2 для диагностики пациентов с симптомами, подобными COVID-19, имеет важное значение для ухода за пациентами, сортировки и изоляции в медицинских учреждениях.

Обнаружение SARS-CoV-2 также может использоваться для скрининга близких контактов на бессимптомную инфекцию и болезнь в рамках отслеживания контактов или расследований вспышек. Тестирование также используется для выявления инфекции в ключевых целевых группах, таких как медицинские и социальные работники, в рамках местных программ эпиднадзора. Это особенно важно для профилактики и раннего контроля передачи вируса уязвимым лицам, живущим в закрытых учреждениях, таких как учреждения длительного ухода.

Помимо использования в режиме реального времени для лечения случаев в медицине или общественном здравоохранении и контроля передачи, тесты на обнаружение вирусов используются в целях надзора, ориентированного на политику, для мониторинга эпидемиологической ситуации с точки зрения заболеваемости и распространенности инфекций и болезней.Это использование включает в себя обследования распространенности и программы дозорного эпиднадзора в группах пациентов, оказывающих первичную или стационарную помощь.

Тесты на антитела в настоящее время имеют ограниченное диагностическое применение. Их можно использовать в качестве дополнения к тестам на обнаружение вирусов для пациентов, поступивших поздно после появления симптомов в медицинские учреждения и у которых тесты на обнаружение вирусов дают отрицательный результат, несмотря на явные признаки инфекции. Кроме того, они потенциально могут быть использованы для информирования о решении о выписке пациентов, которые выздоровели от инфекции SARS-CoV-2, но остаются РНК-положительными с помощью ОТ-ПЦР в течение длительного времени после исчезновения симптомов.Степень защитного иммунитета, обеспечиваемого антителами, обнаруженными у субъектов, перенесших в прошлом инфекцию SARS-CoV-2, или коррелирующая с ними, все еще исследуется. Как только это будет прояснено, такие тесты на антитела могут стать, вместе с прямым обнаружением вируса, важным инструментом в стратегиях деэскалации. В настоящее время тесты на антитела используются для сероэпидемиологических обследований и исследований.

Скорость и точка тестирования

Двумя другими важными аспектами анализов обнаружения являются их быстрота и простота использования.Общие технические спецификации медицинских устройств для диагностики in vitro (IVD, Решение Комиссии 2002/364 / EC) [12] определяют быстрые тесты как качественные или полуколичественные IVD, используемые один раз или в небольшой серии, которые включают неавтоматизированные процедуры и были разработаны, чтобы дать быстрый результат. Как правило, экспресс-тесты можно выполнить менее чем за 30 минут.

Тесты, которые могут быть выполнены в месте оказания помощи менее специализированным персоналом, называются тестами в месте оказания медицинской помощи (POCT). POCT обычно также являются экспресс-тестами.

Когда экспресс-тесты на антигены хорошо подтверждены, их можно рассматривать для быстрой диагностики инфицированных пациентов. Однако эти тесты, как правило, имеют более низкую чувствительность, чем ОТ-ПЦР, и поэтому отрицательный экспресс-тест не может исключить инфекцию. Они могут быть полезны во время продолжающейся вспышки, когда своевременный доступ к чувствительным молекулярным тестам недоступен, но отрицательный результат должен интерпретироваться медицинским работником с осторожностью и на основании клинической оценки.

Точность диагностики и проверка

Комиссия опубликовала рабочий документ, в котором предлагается предварительное определение критериев эффективности диагностического теста COVID-19, а также проанализировала общедоступные данные о производительности коммерческих тестов IVD с маркировкой CE [13].Эти критерии включают аналитическую чувствительность, аналитическую специфичность, клиническую чувствительность и клиническую специфичность. Следуя этому документу, Европейская комиссия собирает в доступной для поиска базе данных данные производителей коммерческих тестов IVD с маркировкой CE и анализирует тесты, разработанные в собственной лаборатории, с данными о производительности в научных публикациях [14].

Большое количество коммерческих тестов для обнаружения РНК SARS-CoV-2 или антигена и серологических тестов на антитела, специфичные для SARS-CoV-2, размещаются на рынке или потенциально могут быть экспортированы в страны ЕС с маркировкой CE-IVD.Однако информация об их клинической эффективности все еще ограничена, и дальнейшее научное подтверждение их диагностической точности, то есть клинической чувствительности и специфичности, является приоритетом. Это должно быть выполнено в реальных проспективных когортных исследованиях пациента, собирающегося пройти тестирование, или населения в целом. Фонд инновационных новых диагностических средств (FIND), сотрудничающий центр ВОЗ по укреплению лабораторий и оценке диагностических технологий, получил более 600 заявок от производителей на IVD и провел независимые клинические оценки в нескольких больницах, сотрудничающих с FIND, в некоторых из них.ECDC собирает данные о клинических характеристиках коммерческих тестов с 1 апреля из лабораторий государств-членов, желающих поделиться такой информацией друг с другом.

Эксперты ВОЗ с помощью процедуры включения в список для использования в чрезвычайных ситуациях (EUL) составляют краткий список тестов для обнаружения молекул на основе данных производителей как подходящих для срочных закупок до полной клинической проверки и предварительной квалификации [15].

Биобезопасность

3 июня 2020 года Комиссия приняла Директиву (ЕС) 2020/739 [16], обновляющую Директиву о биологических агентах 2000/54 / EC с классификацией SARS-CoV-2 как группы риска 3 в списке биологических агентов Приложения III.В соответствии со Статьей 16 (1) (c) и в соответствии с временными рекомендациями ВОЗ по лабораторной биобезопасности для лабораторных процедур COVID-19, нераспространяющие диагностические лабораторные работы, связанные с SARS-CoV-2, должны проводиться на объекте с использованием эквивалентных процедур. как минимум до уровня сдерживания 2. Работа по размножению (культивирование вируса, анализы нейтрализации) с участием заразного SARS-CoV-2 должна проводиться в лаборатории уровня сдерживания 3 при отрицательном атмосферном давлении.

Возможности и методики тестирования

В рамках Совместной европейской дорожной карты по отмене мер сдерживания COVID-19 Европейская комиссия выпустила Руководство по диагностическим тестам COVID-19 in vitro и их эффективности [17].Эти руководящие принципы оценивают как информацию, которую различные типы тестов могут предоставить для принятия решений в медицине и общественном здравоохранении, так и то, как проверить соответствие результатов теста поставленной цели. Чтобы способствовать увеличению возможностей тестирования и обеспечить надлежащее качество тестов в ЕС, Комиссия предприняла ряд действий, в том числе:

• оценка общих подходов в национальных стратегиях тестирования;
• обсуждение передовой практики и разработка руководства по оценке эффективности и оценке соответствия испытаний;
• предоставление справочных материалов и общепринятых методов сравнения устройств;
• обмен информацией о выполнении тестов;
• дополнительный диалог с отраслью и национальными компетентными органами;
• поддержка в борьбе с контрафактными устройствами;
• согласование спроса и предложения;
• , обеспечивая справедливое распределение лабораторных принадлежностей между государствами-членами.

В этом контексте ECDC способствует наращиванию потенциала и усилиям по валидации тестов путем мобилизации знаний и опыта государств-членов в рамках европейских сетей экспертов в области общественного здравоохранения и справочных лабораторий. ECDC координирует сеть COVID-19 / SARS-CoV-2, которая включает лабораторных экспертов и регулярно обсуждает ключевые лабораторные аспекты в рамках сети. В тесном сотрудничестве с ВОЗ и справочными лабораториями ВОЗ ECDC организует мероприятия по внешней оценке качества и способствует обмену информацией о результатах тестирования между лабораториями общественного здравоохранения государств-членов из лабораторной сети COVID-19.

Несмотря на нехватку расходных материалов в прошлом, возможности тестирования для обнаружения вирусов в странах ЕС / ЕЭЗ быстро расширились за счет развертывания диагностики на основе ПЦР из центральных лабораторий общественного здравоохранения в региональные и местные диагностические лаборатории и использования высокопроизводительных платформы для автоматизированного молекулярного тестирования. Тем не менее, дополнительные возможности для гораздо более масштабного тестирования с помощью быстрых коммерческих тестов, после того как такие тесты будут проверены на адекватную производительность для обнаружения инфекции, скорее всего, будут необходимы для полного удовлетворения операционных потребностей в борьбе с COVID-19 в ближайшие месяцы.

Список литературы

.