Днк mycoplasma genitalium: Микоплазма, определение ДНК (Mycoplasma genitalium, DNA) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Содержание

Микоплазма (Mycoplasma hominis)(качественное определение ДНК)

Микоплазмы — это микроорганизмы, занимающие в медицинской классификации промежуточное положение между бактериями, грибами и вирусами. Микоплазмы имеют маленькие размеры (300 нм),  у них нет собственной клеточной оболочки, и это сближает их с вирусами. Точно так же, как вирусы, микоплазмы не могут существовать иначе, чем паразитируя на клетках хозяина, из которых микоплазмы получают основные питательные вещества. Однако, в отличие от вирусов, микоплазмы способны расти в бесклеточной среде.

Микоплазмы — это самые мелкие микроорганизмы, способные жить и размножаться автономно. Размножаются микоплазмы делением и почкованием. Поэтому иногда их рассматривают как переходную ступень от вирусов к одноклеточным микроорганизмам.
В организме человека встречается большое количество видов микоплазм, однако патогенными для человека, то есть при определенных условиях вызывающими болезнь, считаются всего три вида этих микроорганизмов:

Mycoplasma hominis
Mycoplasma genitalium
Mycoplasma pneumoniae
Все эти виды микоплазм паразитируют, как правило, на клетках эпителия — слизистой оболочки, выстилающей стенки кишечного, дыхательного и мочеполового трактов.

Болезнь может возникнуть либо при ослаблении иммунной системы хозяина, либо при сочетании патогенных типов микоплазмы с другими патогенными микроорганизмами. Mycoplasma hominis – входит в группу урогенитальных микоплазм и чаще выявляется у лиц с активным сексуальным поведением. Инфицирование происходит преимущественно половым путем, но далеко не всегда это приводит к развитию заболевания. Обычно M. hominis определяется в небольшом количестве в отделяемом влагалища у 50-60% практически здоровых женщин. Однако именно это и создает все условия для распространения микоплазм.

Нередко микоплазмы присоединяются к различным возбудителям ИППП (хламидиям, гонококкам, трихомонадам и др.) и развиваются сочетанные (ассоциированные) инфекции. Самым распространенным заболеванием, при котором почти всегда присутствуют M. hominis, является бактериальный вагиноз (БВ). При определенных условиях возможно внутриутробное инфицирование плода и заражение новорожденных при прохождении через инфицированные родовые пути матери.

Являясь условно-патогенным микроорганизмом, Mycoplasma hominis при иммунодефицитных состояниях может вызывать ВЗОМТ — воспалительные заболевания органов малого таза (вагиниты, сальпингиты, оофориты, эндометриты и др.). Именно распространение микоплазменной инфекции в верхние отделы урогенитального тракта с развитием ВЗОМТ часто приводит к нарушениям репродуктивной функции – невынашиванию беременности, бесплодию. Микоплазма  может являться причиной негонококкового уретрита и простатита, бесплодия у женщин и мужчин.

Показания:

  • Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
  • Стертая картина воспаления мочеполовой системы.
  • Беременность.
  • Внематочная беременность.
  • Бесплодие.
  • Ослабление иммунитета.
  • Контроль эффективности антибиотикотерапии (не ранее чем через месяц после приема антибактериальных препаратов).
  • Профилактические скрининговые исследования (для исключения вероятности бессимптомного и латентного течения инфекции).

Mycoplasma genitalium, ДНК [реал-тайм ПЦР]: исследования в лаборатории KDLmed

Выявление возбудителя урогенитального микоплазмоза (Mycoplasma genitalium), в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) микоплазм.

Синонимы русские

Возбудитель микоплазмоза, микоплазма.

Синонимы английские

M. genitalium, DNA.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), первую порцию утренней мочи, эякулят, ректальный мазок.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Женщинам рекомендуется сдавать биоматериал (урогенитальный мазок или мочу) до менструации или через 2 дня после её окончания.
  • Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Mycoplasma genitalium является наиболее патогенным представителем микоплазм – микроорганизмов, способных паразитировать на мембране сперматозоидов и эпителия слизистой оболочки мочеполовых органов. Основной путь заражения – половой, но возможен и вертикальный – от больной матери к ребёнку во время беременности или родов. Источник инфекции – больной микоплазмозом или бессимптомный носитель M. genitalium. Инкубационный период составляет 3-5 недель. После инфицирования M. genitalium симптомы инфекции чаще отсутствуют и появляются, как правило, только при снижении иммунитета или при инфицировании другими патогенными микроорганизмами (хламидиями, гонококками и т. д.).

У мужчин инфекция, вызванная M. genitalium, чаще протекает бессимптомно, при этом развивается уретрит. У женщин M. genitalium может быть причиной воспалительных заболеваний органов малого таза (уретрита, бартолинита, вульвовагинита, аднексита, эндометрита). Для беременных микоплазмоз опасен выкидышем, внутриутробными инфекциями, хромосомными мутациями у плода и кровотечениями при родах.

Кроме того, M. genitalium часто является причиной бесплодия и способствует развитию аутоиммунных реакций. Микоплазмозу часто сопутствуют трихомонады, уреаплазмы, гонококк, ВИЧ-инфекция, а также заболевания, вызванные условно-патогенной флорой.

Единственный метод диагностики M. genitalium – полимеразная цепная реакция, которая позволяет в течение суток выявить ДНК возбудителя в исследуемом биоматериале. Её принцип основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы установить причину хронических воспалительных заболеваний мочеполовой системы.
  • Для дифференциальной диагностики заболеваний со сходными симптомами: хламидиоза, гонореи, уреаплазменной инфекции (наряду с другими исследованиями).
  • Чтобы оценить эффективность антибактериальной терапии.
  • Для профилактического обследования.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на микоплазменную инфекцию, в том числе после случайных половых контактов и при вялотекущих воспалительных заболеваниях мочеполовой системы.
  • При планировании беременности (обоим супругам).
  • При бесплодии или невынашивании беременности.
  • При внематочной беременности.
  • Через 1 месяц после антибактериальной терапии.
  • При ВИЧ-инфекции.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат

  • Наличие микоплазменной инфекции.

Отрицательный результат

  • Наличие инфекции, вызванной M. genitalium, маловероятно.

Что может влиять на результат?

  • Предшествующая антибактериальная терапия.
  • Загрязнение пробы посторонними молекулами ДНК ведёт к ложноположительному результату, ингибирование полимеразной цепной реакции компонентами биопроб (гемоглобином, гепарином и т. д.) – к ложноотрицательному.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Гинеколог, уролог, венеролог.

Литература

  • Kenny G.E. Genital Mycoplasmas: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, and Ureaplasma Species. In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., Dolin R (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
  • Non-chlamydial non-specific genital infection. In: Oxford handbook of genitourinary medicine, HIV, and Aids / R. Pattman [et al.] (Eds) ; 1st edition. – USA : Oxford University Press, 2005. – 580 p.
  • Гомберг М.А. Лечение уретритов, вызванных mycoplasma genitalium / М.А. Гомберг, А.М. Соловьев, И.Н. Анискова // Лечащий врач. – 2007. – № 7. – С. 12-15. 
  • Хрянин А.А. Современные представления о Mycoplasma genitalium / А.А. Хрянин, О.В. Решетников // Рус. мед. журн. – 2008. – Т. 16, № 19. – С. 1236-1239.  

Mycoplasma genitalium, ДНК методом ПЦР со скидкой до 50% в Lab4U в Москве

Описание анализа

Показатель

Генитальная микоплазма (Mycoplasma genitalium) — мелкие микроорганизмы, которые вызывает заболевание микоплазмоз. Метод полимеразной цепной реакции позволяет обнаружить ДНК микоплазмы даже при бессимптомном протекании.

Назначения

Анализ назначается для диагностики инфекции, вызванной Mycoplasma genitalium, и мониторинга ее лечения.

Специалист

Назначается гинекологом, венерологом.

Важно

Биоматериал для анализа берется методом урогенитального соскоба, поэтому на забор обязательно дополнительно записаться по телефону.

Метод исследования — ПЦР Real Time

Материал для исследования — Урогенитальный соскоб

Срок исполнения

Анализ будет готов в течение 2 дней, исключая день забора. Срок может быть увеличен на 1 день в случае необходимости. Вы получите результаты на эл. почту сразу по готовности.

Срок исполнения: в течение 2 дней, исключая день забора, исключая субботу и воскресенье (кроме дня взятия биоматериала)

Как подготовиться

Заранее

Если вы беременны, перед сдачей мазков обязательно предупредите медицинский центр по телефону заранее.

Забор мазков на исследование осуществляется в кабинете гинеколога у женщин и уролога или венеролога у мужчин.

Забор у женщин не проводится во время менструации (на фоне кровянистых выделений) и не рекомендуется за 5 дней до начала предполагаемой менструации.

Общие правила подготовки:

  • обсудите с врачом прием антибактериальных препаратов и препаратов, содержащих микроорганизмы, т. к. это может приводить к ложноотрицательным и ложноположительным результатам,
  • рекомендуется проводить забор мазков не ранее, чем через 2 недели после законченного курса лечения,
  • 72 часа не вступайте в половой контакт,
  • для женщин 48 часов не проводите кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ, не используйте местные хлорсодержащие и антибактериальные препараты.

В день сдачи

  • В день сдачи мазка не проводите гигиенические процедуры половых органов (для женщин также спринцевание влагалища, не используйте тампоны и влажные салфетки).
  • В течение 2-х часов до анализа воздержитесь от посещения туалета (при заборе мазка из уретры).

Процедура у мужчин
Для взятия мазка мужчина стоит, медработник убирает слизь и вводит в уретру одноразовый зонд на глубину до 3-4 см, осторожно двигая инструмент, извлекает его из уретры.

Процедура у женщин
Для взятия мазка женщина садится в гинекологическое кресло, медработник осматривает половые пути, вводит во влагалище зеркало — стерильный инструмент, убирает слизь.

Далее зондом берёт материал из наиболее поражённой области. Это может быть: задний свод влагалища, шейка матки, уретра.

Результат

Пример результата анализа.pdf

Расшифровка

Интерпретация результатов анализов носит информационный характер, не является диагнозом и не заменяет консультации врача. Референсные значения могут отличаться от указанных в зависимости от используемого оборудования, актуальные значения будут указаны на бланке результатов.

Положительный результат: в анализируемом образце обнаружена ДНК Mycoplasma genitalium: инфицирование Mycoplasma genitalium.

Отрицательный результат: в анализируемом образце не обнаружена ДНК Mycoplasma genitalium: нет инфицирования Mycoplasma genitalium. Отрицательный результат исследования может быть также и при нарушении правил взятия материала, когда в образце не содержится ДНК возбудителя в достаточном для проведения исследования количестве.

Единица измерения:

качественный тест, результат выдаётся в виде: положительный, отрицательный

Референсные значения: ДНК не обнаружена

Гарантия качества

Исследование выполняет Амплификатор CFX-96 Touch “Real Time” Bio-Rad, США

Многофункциональный высокоскоростной Real Time амплификатор, позволяющий проводить анализ ПЦР-исследований в 96 пробах одновременно

Mycoplasma genitalium, определение ДНК

Узнайте больше о анализах на инфекции:

Значение анализов на антитела IgG, IgM, IgA в диагностике инфекций

Анализ крови и мазок на ИППП

Особенности диагностики вирусных гепатитов

Микоплазмы выделяются в самостоятельный класс Mollicutes из-за своеобразия биологических свойств, отличающих их от бактерий. Это мельчайшие микроорганизмы не имеющие клеточной стенки. Из 15 видов микоплазм, вегетирующих на слизистых оболочках человека, 3 вида преимущественно населяют мочеполовые органы: Mycoplasma hominis, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma genitalium. Т2 вида микоплазм являются патогенными для человека: Mycoplasma genitalium и Mycoplasma pneumoniae. патогенность других видов микоплазм в настоящее время еще строго не установлена. Mycoplasma genitalium — патогенный микроорганизм, вызывает заболевания мочеполового тракта, такие как уретрит и цервицит у женщин. Mycoplasma hominis обнаруживается на в выделениях и слизистой мочеполовой системы у 40–80% практически здоровых лиц репродуктивного возраста, она является условно патогенным микроорганизмом, и становиться патогенной при определенных условиях.

Микоплазменные инфекции органов мочеполовой системы в настоящее время занимают ведущее место среди инфекций, передающихся половым путем. Они часто сочетаются с гонококками, трихомонадами и условно патогенными микроорганизмами. У 50-60% людей, страдающих хроническими заболеваниями органов мочеполового тракта, выявляется урогенитальный микоплазмоз. Чаще всего заражение микоплазмозом происходит половым путём и в некоторых исключениях– бытовым. Продолжительность инкубационного периода заболевания от 3 дней до 5 недель, в среднем он составляет 15-19 дней. У мужчин поражаются яички, придатки яичек, семенные пузырьки, уретра, парауретральные железы, предстательная железа, мочевой пузырь; у женщин – уретра, парауретральные железы, влагалище, шейка и тело матки, маточные трубы, яичники, брюшина малого таза. Урогенитальный микоплазмоз клинически не отличается от инфекционного поражения мочеполовых органов другой природы (хламидиоз, трихомониаз). Симптомы урогенитального микоплазмоза разнообразны: от выделений из половых путей до боли в области промежности, у мужчин — мошонки, прямой кишки, у женщин — боли внизу живота, в области поясницы. Иногда возникает болезненность, жжение при мочеиспускании или половом акте, покраснения и зуд у наружного отверстия мочеиспускательного канала. При микоплазменной инфекции может наблюдаться болезненность при половом акте как у мужчин, так и у женщин.

Микоплазмы выявляются у 5-15% здоровых лиц, что говорит о существовании бессимптомной формы инфекции. Реактивация микроорганизмов при бессимптомной формы микоплазмоза наблюдается при иммунодефицитных состояниях на фоне стрессов, переохлаждения и других факторах, а также, что самое важное — во время беременности. Поэтому сдать анализ на микоплазму обязательно необходимо, как и пройти обследование на все половые инфекции при подготовке женщины к беременности. Заболевание трудно диагностировать в связи с частым бессимптомным течением, обычно это происходит в более поздние сроки, поэтому достаточно часто развиваются такие осложнения, как хроническое воспаление мочевого пузыря, предстательной железы, придатков матки и т. д., что затрудняет лечение, делает его более длительным, ухудшает прогноз.

Диагностика урогенитального микоплазмоза производится с помощью сбора анамнеза пациента, клинических данных и результатах лабораторного исследования. Однако применение серологических методов исследования (определение специфических антител в сыворотке крови) имеет ограниченное, вспомогательное значение из-за низкой иммуногенности микоплазм. Более чувствительным и специфичным является метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) — определение ДНК Mycoplasma genitalium в соскобе из уретры, цервикального канала, влагалища.

Анализ на микоплазму Mycoplasma genitalium

Mycoplasma genitalium (микоплазма гениталиум) – возбудитель, способен вызывать уретриты у лиц обоего пола и цервициты у женщин. M.genitalium вызывает морфологические изменения в клетках реснитчатого эпителия фаллопиевых труб, а серологические исследования свидетельствуют о существовании четкой связи между перенесенной ранее инфекцией и трубным бесплодием.
Выявление ДНК M.genitalium свидетельствует о наличии инфекции и требует лечения половых партнеров. Данный тест рекомендуется при обследовании на ИППП, подозрении на инфицирование и для контроля результатов лечения.

Проявления микоплазменной инфекции

На сегодняшний день известно более 40 видов микоплазм. Mycoplasma genitalium относится к микоплазмам, которые представляют опасность для здоровья, поэтому обнаружение данного микроорганизма служит показанием для назначения лечения. Они способны стать причиной воспалительного процесса в органах мочеполовой системы, мужского и женского бесплодия, патологий беременности. Инфекция может в течение длительного времени протекать в бессимптомной форме и активироваться только при воздействии на организм определенных факторов (переохлаждения, стресса, снижения иммунитета). Также бессимптомная инфекция может перейти в активную форму во время беременности. Заражение происходит половым путем. Инфицирование при бытовых контактах маловероятно, но такая возможность существует. Инкубационный период, как правило, составляет 2,5-5 недель.

У мужчин этот возбудитель способен вызывать развитие уретрита, орхита, простатита и бесплодие. Уретрит проявляется такими симптомами, как зуд, ощущение жжения во время мочеиспускания и сексуального контакта. Для простатита характерно снижение сексуального влечения, боль в промежности. Орхит представляет собой воспаление яичек, которое сопровождается болевыми ощущениями в мошонке.

У женщин микоплазмы могут стать причиной уретрита, аднексита, кольпита и эндометрита. Заподозрить уретрит можно при наличии таких симптомов, как резь при мочеиспускании, зуд. При кольпите наблюдаются воспалительные процессы в слизистой влагалища. Если причиной заболевания являются микоплазмы, оно имеет слабо выраженную симптоматику. Аднексит и эндометрит также могут протекать без ярко выраженных клинических проявлений. Хроническая форма заболеваний часто приводит к бесплодию.

Диагностика и лечение микоплазмоза

Симптомы микоплазмоза являются неспецифичными, характерны для целого ряда заболеваний. Поэтому точная диагностика возможна только на основании данных лабораторных исследований. Они направлены на выявление микоплазм, антител к ним и сопутствующих инфекций. Точный перечень необходимых анализов порекомендует врач.

Для лечения инфекции используются антибактериальные препараты. Пациенту важно соблюдать схему лечения, подобранную врачом. Длительность терапии определяется в индивидуальном порядке. При наличии сопутствующих инфекций лечение будет более длительным. Терапия в обязательном порядке назначается обоим партнерам. До полного выздоровления, подтвержденного результатами повторных лабораторных тестов, при сексуальных контактах использование презервативов является обязательным. Помимо антибиотиков может назначаться дополнительная медикаментозная терапия для восстановления нормальной микрофлоры.

Профилактика микоплазменных инфекций

Чтобы снизить риск микоплазмоза, важно избегать случайных сексуальных контактов, использовать барьерные контрацептивы. Необходимо регулярно посещать врача (уролога или гинеколога) для прохождения профилактических осмотров и сдачи анализов. В случае подозрения на воспалительный процесс в органах мочеполовой системы нужно незамедлительно обращаться к врачу для прохождения обследования, установления точного диагноза и назначения эффективного лечения. Самолечение недопустимо, так как бесконтрольный прием антибиотиков не только не принесет необходимого эффекта, но и может нанести значительный вред здоровью.


Анализ на микоплазмоз, Mycoplasma genitalium, ДНК методом REAL TIME ПЦР — качественный

Общая характеристика

Mycoplasma genitalium это один из видов микоплазм, вызывающий урогенитальный микоплазмоз.
Микоплазмы — представители нормальной микрофлоры слизистой оболочки урогенитального тракта, которые могут присутствовать как симбиоты, не вызывая воспалительных процессов.
В некоторых случаях способны размножаться до значительной концентрации (выше порогового уровня), приводя к развитию заболеваний — уретриты и простатиты у мужчин, эндометриты, сальпингиты, неспецифические вагиниты у женщин, патологии плода, бесплодию.
Обнаружение данного возбудителя методом ПЦР(полимеразная цепная реакция)-диагностики говорит только о наличии, но не отражает количество микроорганизмов.

Показания для назначения

1. Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
2. Планирование беременности (исследование рекомендуется проводить при хронических заболеваниях половых органов и пиелонефрите).
3. Воспалительные заболевание мочевой системы, уретриты, циститы.

Маркер

Маркер наличия возбудителя инфекции M. genitalium в тестируемом БМ.

Клиническая значимость

Быстрый, чувствительный и специфический метод идентификации Mycoplasma genitalium.


Состав показателей:

Обнаружение ДНК Mycoplasma genitalium методом ПЦР — любой БМ
: Полимеразная цепная реакция в реальном времени
Диапазон измерений: 0-0

Референтные значения:

Возраст

Комментарии

Выполнение возможно на биоматериалах:

Биологический материал

Условия доставки

Контейнер

Объем

cоскоб из уретры, цервикса, вагины

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Эппендорф с транспортной средой

Объем:

1.5 Миллилитров

эякулят

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Стерильный контейнер с крышкой

Объем:

50 Миллилитров

соскоб из уретры

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Эппендорф с транспортной средой

Объем:

1.5 Миллилитров

другой тип материала

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Стерильный контейнер с крышкой

Объем:

50 Миллилитров

секрет простаты

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Стерильный контейнер с крышкой

Объем:

50 Миллилитров

моча суточная ПЦР

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Стерильный контейнер с крышкой

Объем:

50 Миллилитров

плазма ВК/ЭДТА/гель ПЦР

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Вакутейнер с разделительным гелем ЭДТА

Объем:

5.5 Миллилитров

Правила подготовки пациента

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): Воздерживаться от половых контактов 48 часов. Прекратить прием интравагинальных средств различного назначения (суппозитории, спермициды, спринцевания, тампоны, местные процедуры и др.). За 2 часа Воздерживаться от мочеиспускания. Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом).

Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом).

Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом). Примечания: Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов. Для исследования отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 15-25 мл в одноразовый стерильный контейнер на 50 мл с закручивающейся крышкой.Допускается исследования первой порции мочи, полученной через 3 и более часов после предыдущего мочеиспускания.Для женщин: не следует проводить сбор мочи во время менструации.

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): За 24 часа Прекратить прием местных антибактериальных препаратов (если это позволяет состояние пациента). Примечания: Сбор мокроты — утром натощак. Перед откашливанием почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой. Желательно исследовать биоматериал с первой утренней порции.

Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом).

Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом). Примечания: Перед сбором эякулята обязательно провести туалет наружных половых органов. Биоматериал собирать в стерильную емкость.

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): Воздерживаться от половых контактов 48 часов. Прекратить прием любых местных лекарственных препаратов и процедур в области взятия биоматериала. За 2 часа Воздерживаться от мочеиспускания. Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом).

Важно: Сдавать до лечения или через 21 день после окончания антибактериальной, антимикотической терапии (если иное не определено врачом).

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): За 24 часа Прекратить прием любых местных лекарственных препаратов и процедур в области взятия биоматериала.

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): За 4 часа Выдержать голодание, исключить жирную пищу. Можно пить воду.

Вы можете добавить данное исследование в корзину на этой странице

Интерференция:

  • Не обнаружена.
  • Прием антисептиков и/или других антибактериальных, противогрибковых, местных противозачаточных препаратов искажает результаты исследования.

Интерпретация:

  • Положительный результат – в биологическом материале обнаружена ДНК Mycoplasma genitalium.
  • Отрицательный результат – в биологическом материале ДНК Mycoplasma genitalium не обнаружена.

Микоплазмы и уреаплазмы как причины воспалительных заболеваний мочеполового тракта.

В настоящее время наблюдается рост микоплазменной и уреаплазменной инфекций урогенитального тракта. Из микоплазм, обнаруживаемых в мочеполовой системе, заслуживают внимания микоплазма хоминис, микоплазма гениталиум,  уреаплазма уреалитикум уреплазма парвум. Микоплазма хоминис была обнаружена в 1937 году. Уреаплазма уреалитикум была обнаружена в 1954 году из отделяемого больного негонококковым уретритом. Уреаплазмоз и микоплазмоз по клиническим проявлениям очень похожи.

По данным литературы, поражение органов мочеполовой системы микоплазменной инфекцией составляет 40% всех воспалительных заболеваний мочеполовой сферы.

ЭТИОЛОГИЯ И ЭПИДЕМИОЛОГИЯ

Mycoplasma hominis и Ureaplasma parvum– условно-патогенные микроорганизмы, которые при реализации своих патогенных свойств способны вызывать уретрит (U.parvum), цервицит, цистит, воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ), а также осложнения течения беременности, послеродовые и послеабортные осложнения.

Частота обнаружения Ureaplasma parvum  и Mycoplasma hominis широко варьирует в различных популяционных группах, составляя от 10% до 50% (по данным ряда авторов – до 80%). Уреаплазмы и M. hominis могут выявляться у клинически здоровых лиц (в 5-20% наблюдений). По данным различных исследований, M. genitalium обнаруживают у 11,5 -41,7% больных негонококковыми уретритами, у 3-54,5% больных негонококковыми нехламидийными уретритами и у 7-10% женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза. Обсуждается вопрос об этиологической роли M. genitalium в развитии эпидидимита и простатита, но убедительных доказательств по данному вопросу на настоящий момент не получено.

Экспертами Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2006 г.) U. urealyticum определена как потенциальный возбудитель неспецифических негонококковых уретритов у мужчин и, возможно, ВЗОМТ у женщин. В то же время, эксперты Центра по контролю и профилактике заболеваний США (CDC, 2010) не считают доказанной этиологическую роль генитальных микоплазм (за исключением M. genitalium) в развитии воспалительных процессов мочеполовой системы. В настоящее  время Mycoplasma genitalium  и Ureaplasma urealyticum занесены  в  группу  инфекций, передаваемых половым  путём  и подлежат безусловному  лечению.

     О длительности инкубационного периода у больных микоплазменными поражениями мочеполовых органов до сих пор нет единого мнения. Считается, что продолжительность инкубационного периода может колебаться от 3-х дней до трёх- пяти недель, а по некоторым данным, и до 50-60 дней. По данным литературы, средняя  продолжительность инкубационного периода при заболеваниях, вызванных микоплазмами, составляет в среднем 19 дней.

Известно, что микоплазмоз и уреаплазмоз у женщин и мужчин протекают малосимптомно или, вообще, без каких- либо проявлений и субъективных ощущений. В таких случаях больные не подозревают о своём заболевании и не обращаются в лечебные учреждения. Большинство исследователей указывают, что единственным источником микоплазмоза и уреаплазмоза является больной человек. Заражение мужчин происходит исключительно половым путём.

Существует строгая зависимость между сексуальной активностью и заболеваемостью микоплазмозом и уреаплазмозом. Эти инфекции часто обнаруживаются в мочеполовых органах у мужчин и женщин. У женщин единичные экземпляры  уреаплазм и микоплазм могут присутствовать с рождения, ничем себя не проявляя до определённой  поры. Частота их обнаружения увеличивается по мере расширения круга половых контактов. Микоплазмы и уреаплазмы являются уникальными микроорганизмами. Они занимают промежуточное положение между вирусами, бактериями и простейшими и не имеют характерной клинической картины.

У мужчин микоплазмы и уреаплазмы способны поражать мочеиспускательный канал, предстательную железу, семенные пузырьки, придатки яичек, мочевой пузырь. Возможен переход на верхние мочевые пути и почки. Как правило, заболевание протекает вяло, малосимптомно. Характерны незначительные слизистые выделения из мочеиспускательного канала, ощущение слабого зуда, щекотания, жжения. Возможно развитие половых расстройств. Из осложнений, возникающих у мужчин, встречается эпидидимит (воспаление придатка яичка), орхит (воспаление яичка) и орхоэпидидимит (воспаление придатка и яичка сразу), бесплодие.

Микоплазмоз и уреаплазмоз у женщин имеет свои особенности. Инфекцию обнаруживают у женщин при хронических воспалениях женских половых органов (воспалении яичников, влагалища, цистите, пиелонефрите). Свежие острые урогенитальные поражения при микоплазмозе и уреаплазмозе у женщин наблюдаются редко. Обычно они проявляются кратковременными слабовыраженными ощущениями зуда в области половых органов и скудными скоропроходящими выделениями из влагалища и мочеиспускательного канала, которые не вызывают беспокойства у больных.

При появлении неблагоприятных факторов (снижение иммунитета, гормональные нарушения), влияющих на течение микоплазменной и уреаплазменной инфекции, могут возникать различные осложнения. Такие, как воспаление влагалища, шейки матки, придатков, бесплодие, осложнения во время вынашивания беременности и родах, самопроизвольные  выкидыши. Микоплазмами и уреаплазмами могут инфицироваться и новорожденные при прохождении через родовые пути.

Показанием к проведению лечения является наличие клинико-лабораторных признаков инфекционно-воспалительного процесса, при котором не выявлены другие, более вероятные возбудители: C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. genitalium.

При выявлении M. hominis и/или Ureaplasma  spp. в количестве < 104  КОЕ (ГЭ)/мл(г)  и при отсутствии клинических и/или лабораторных признаков воспалительного процесса мочеполовой системы лечение не проводится.

Показанием к проведению лечения при отсутствии клинических признаков воспалительного процесса является выявление Ureaplasma spp. и/или M. hominis у доноров спермы, лиц с диагнозом бесплодие и женщин с невынашиванием беременности и перинатальными потерями в анамнезе.

Половые партнёры лиц, инфицированных Ureaplasma spp. и/или M. hominis, подлежат лечению при наличии у них клинической симптоматики и лабораторных признаков воспалительного процесса мочеполовых органов (при исключении иной этиологии данного воспалительного процесса).

 Лечение микоплазмоза и уреаплазмоза комплексное. Включает в себя применение антибиотиков широкого спектра действия, иммуностимулирующую терапию, физиотерапию, местные процедуры и так далее. Необходимо придерживаться соответствующей диеты (исключение алкоголя, пряностей). Лечение необходимо осуществлять половым партнёрам одновременно. Особое значение имеет наблюдение за больными после завершения лечения в течение двух-трёх месяцев. Нередко врачам, чтобы добиться излечения, приходится применять несколько курсов, так как одного бывает недостаточно. Необходимо помнить, что микоплазмоз и уреаплазмоз редко существуют изолированно. Они часто сочетаются друг с другом и другими инфекциями.

     Следует внимательно следить за собой и своим здоровьем. Если вы заметили какие-то выделения, неприятные ощущения при мочеиспускании, болезненность при половом акте, нарушения месячных и кровотечения, вам обязательно следует обратиться к врачу. Главное, не попадайтесь на дешевую непроверенную рекламу.

Материал подготовил врач дерматовенеролог — уролог Иванчук А.П.

Использованная литература:
Федеральные  клинические  рекомендации по ведению  больных урогенитальными  заболеваниями, вызванными  Ureaplasma spp. ,Mycoplasma hominis. 2015 г

Интермедикал | Микоплазма (Micoplasma genitalium)

Качественное определение ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени». Исследование выполняется на оборудовании «Corbett Research» ( компании «Quagen», Германия) по стандартизованной технологии.

Mycoplasma genitalium – патогенный микроорганизм, вызывает заболевания мочеполового тракта. Микоплазмы передаются при половых контактах, могут являться причиной негонококкового уретрита и простатита, воспалительных заболеваний малого таза, патологии беременности и плода, бесплодия у женщин и мужчин.

Обследование женщин целесообразно проводить в период овуляции (при наличии выраженных симптомов воспаления — в день обращения). Накануне и в день обследования пациентке не рекомендуется выполнять спринцевание влагалища. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии или применения пробиотиков и эубиотиков. Если для исследования берут соскоб из уретры, сбор материала проводят до или не ранее 2 — 3 часов после мочеиспускания.

  • Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
  • Стёртая картина воспаления мочеполовой системы.
  • Беременность.
  • Внематочная беременность.
  • Бесплодие.
  • Ослабление иммунитета.
  • Контроль эффективности антибиотикотерапии (не ранее чем через месяц после приема антибактериальных препаратов).
  • Профилактические скрининговые исследования (для исключения вероятности бессимптомного и латентного течения инфекции).

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т. д.

Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «положительный» или «отрицательный».

  • «положительный»:в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Mycoplasma genitalium: инфицирование Mycoplasma genitalium;
  • «отрицательный»:в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных Mycoplasma genitalium или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов

значения для скрининга, тестирования и лечения

Инфицирование половым путем. 2006 г., август; 82(4): 269–271.

JDC Ross , клиника Whittall Street, Birmingham B4 6DH, UK

JS Jensen , Statens Serum Institut, Artillerivej 5, DK-2300 Copenhagen S, Дания

Уиттол-стрит, Бирмингем B4 6DH, Великобритания; jonathan.

[email protected]

JR и JJ совместно написали и отредактировали рукопись.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Доказательства того, что Mycoplasma genitalium является патогеном, передающимся половым путем, практически неопровержимы, основываясь как на уровне конкордантности среди партнеров, так и на типировании ДНК, показывающем один и тот же тип последовательности среди партнеров, в отличие от неродственных M genitalium положительных пациентов. Однако последствия, которые это имеет для скрининга, тестирования и лечения пациентов, менее очевидны.Какие тесты являются наиболее чувствительными и специфичными, какие образцы являются наиболее подходящими, кого следует протестировать, какое лечение лучше всего и как следует управлять партнерами?

Ключевые слова: Микоплазма , инфекции, передающиеся половым путем, уретрит, сальпингит

Бактерия Mycoplasma genitalium трудно поддается изучению. Организм прихотлив, а культура сложна, и даже в случае успеха для роста каждого изолята требуется несколько недель или даже месяцев.Серология в ее более сложных формах может иметь значение в эпидемиологических исследованиях, но не имеет ценности в диагностике. Таким образом, тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) являются единственными доступными диагностическими инструментами, но ни один коммерчески доступный тест не был выпущен для диагностических целей.

Доказательства

M genitalium как патогена с использованием моделей животных и тканей

Исследования на нечеловеческих приматах ясно продемонстрировали патогенность M genitalium как у самцов, так и у самок животных. M genitalium может быть выделен от инфицированного животного и может быть передан неинфицированному животному и вызывать заболевание, удовлетворяющее одному из постулатов Коха. 1

Исследования in vitro демонстрируют способность M genitalium прикрепляться к эпителиальным клеткам генитального тракта с помощью поверхностного адгезинного белка, а затем проникать в клетки, что приводит к активизации генов цитокинов с сопутствующим воспалительным ответом. 2 M genitalium также может прикрепляться к сперматозоидам, создавая потенциальный механизм распространения в верхние отделы женских половых путей. 3

Данные о роли

M genitalium в качестве возбудителя у мужчин

Большое количество статей о роли M genitalium при негонококковом уретрите (НГУ) было опубликовано с 1993 г. после первоначальной полимеразной цепной реакции основанные исследования. 4 ,5 ,6 Хотя для определения групп пациентов и контрольной группы использовались разные критерии, все исследования одинаково показали более высокую распространенность M genitalium в группах НГУ (обзор Jensen 7 ) .Более того, M genitalium , по-видимому, выявляется с наибольшей распространенностью у мужчин с Chlamydia trachomatis -негативным НГУ (NCNGU). Несколько исследований показали, что у мужчин с M genitalium положительным НГУ симптомы проявляются так же часто, как и у мужчин с хламидийным НГУ. 8 ,9 При классификации уретрита по количеству полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) в уретральном мазке у мужчин с M genitalium число ПМЯЛ было выше, чем у мужчин с M genitalium отрицательным NCNGU, что указывает на значительный воспалительный потенциал.Систематические исследования, связывающие M genitalium с такими осложнениями, как эпидидимит и простатит, отсутствуют, хотя ДНК M genitalium была обнаружена как в уретре мужчин с эпидидимитом, 10 , так и в тканях предстательной железы мужчин с простатитом. 11

Данные о

M genitalium как возбудителе у женщин инфицированный партнер-мужчина.Присутствие M genitalium связано с цервицитом и уретритом у женщин, 12 ,13 , а прививка M genitalium нечеловеческим приматам приводит как к заболеванию нижних отделов половых путей, так и к сальпингиту. 14 M. genitalium может быть обнаружена в эндометрии женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза 15 и в единичном случае была обнаружена в маточной трубе. 16 Кроме того, серологические исследования указывают на сильную связь между прошлой инфекцией M genitalium и трубным фактором бесплодия. 17

Таким образом, весьма вероятно, что M genitalium является возбудителем, передающимся половым путем у женщин 9 и ответственным по крайней мере за некоторые случаи уретрита, цервицита и воспалительных заболеваний органов малого таза.

Как диагностировать

M genitalium : текущая доступность тестирования и перспективы на будущее

В настоящее время МАНК являются единственным доступным инструментом для обнаружения M genitalium . Из-за очень низкой нагрузки микоплазмами у некоторых пациентов для достижения достаточной чувствительности анализа необходимы тесты 18 с очень низким пределом обнаружения.Одобренных коммерческих анализов не было, хотя были представлены многообещающие результаты с наборами для использования в исследованиях. 19 В ближайшие годы одобренные тесты, скорее всего, станут доступны, но до тех пор крайне важно, чтобы лаборатории активно участвовали во внешних программах обеспечения качества с использованием реальных клинических образцов, прежде чем они будут предлагать МАНК на регулярной основе. Оптимальный тип образца может варьироваться в зависимости от метода подготовки образца, используемого в лаборатории.В одном крупном исследовании было обнаружено, что при первом мочеиспускании у мужчин выявляется больше инфекций с помощью M genitalium , а также с Chlamydia trachomatis , чем с помощью уретральных мазков, хотя это может отражать количество образцов, использованных в методе подготовки образцов. У женщин использование более одного образца также может повысить диагностическую чувствительность, например, дополнение образца мочи мазком из шейки матки. 20

Антибиотикотерапия

инфекций, вызываемых M genitalium

Для лечения инфекций, вызванных M genitalium , с разной степенью успеха используется ряд различных антибиотиков.Первоначально тетрациклины выглядели многообещающе, но более поздние исследования показывают, что неспособность полностью искоренить инфекцию возникает в высокой доле случаев, получающих лечение этими агентами. Макролиды, в частности азитромицин, дают наилучшие шансы на излечение с клиренсом 84% в недавнем рандомизированном контролируемом исследовании, проведенном у мужчин с уретритом M genitalium . 21 Новые хинолоны, такие как моксифлоксацин, также обладают хорошей активностью в отношении M genitalium in vitro (хотя ципрофлоксацин и офлоксацин менее эффективны). 22

Поскольку M genitalium растет очень медленно, для его ликвидации может потребоваться длительный курс терапии. В предварительном открытом исследовании, проведенном в Скандинавии, наблюдалась тенденция к улучшению исхода при более длительном лечении: азитромицин в дозе 1 г немедленно ликвидировал 85% (11/13) инфекций, вызванных М. genitalium , тогда как доза 500 мг в 1-й день с последующим введением 250 мг в день в течение 4 дней ликвидировали 95% (19/20) инфекций. 23

Рекомендации

С учетом текущего уровня знаний о M genitalium какие временные рекомендации можно дать по скринингу, тестированию и лечению?

Скрининг

Преждевременно начинать скрининг населения на M genitalium . Для этого нам нужна точная информация о распространенности инфекции и проспективные данные о естественном течении болезни у инфицированных людей. Только с помощью этой информации можно рассчитать эффективность и экономическую эффективность скрининга для различных групп населения. Предлагаемое тестирование образцов мочи на M genitalium из исследования NATSAL 24 предоставит важную информацию о распространенности, которая поможет определить роль скрининга в будущем. Доказательства, связывающие M genitalium с воспалительным заболеванием органов малого таза, убедительны, но в значительной степени косвенны, и нам до сих пор не хватает исследований естественного течения, которые демонстрируют временную связь между инфекцией и заболеванием.По крайней мере, одно такое исследование проводится в Соединенных Штатах, а другое планируется провести в Соединенном Королевстве, что поможет количественно оценить риск инфекции органов малого таза, связанный с инфекцией M genitalium , и определить роль скрининга.

Тестирование

Несмотря на то, что было разработано множество «внутренних» ПЦР, существует явная и насущная потребность в точном, стандартизированном и гарантированном качестве тест-наборе для M genitalium . Если тест доступен, кого следует проверить на M genitalium ?

Обследование мужчин с симптоматическим НГУ целесообразно, особенно в тех условиях, где используется эмпирическое лечение доксициклином.У двух третей из инфицированных М. genitalium пациентов с уретритом будет персистирующая инфекция и часто возникают рецидивирующие симптомы после терапии доксициклином. Тот же аргумент можно использовать для обоснования тестирования пациентов с такими осложнениями, как эпидидимит, простатит и реактивный артрит, приобретенный половым путем.

Основные сообщения

  • Mycoplasma Genitalium 9002 в настоящее время устанавливаются в виде сексуально, передаваемой инфекцией

  • Роль скрининга для инфекции в настоящее время неизвестна

  • Тестирование и лечение симптоматических лиц, инфицированных м. рекомендуется, но ограничено отсутствием подходящих тестов

  • Текущие данные поддерживают использование азитромицина в качестве терапии первой линии для M genitalium

Тестирование на M genitalium у женщин с симптомами со стороны половых путей, такими как выделения из половых органов, межменструальные кровотечения или боли в области таза оправданы связью между M genitalium и цервицитом, эндометритом и клиническим воспалительным заболеванием органов малого таза.Прежде чем рекомендовать тестирование бессимптомных женщин, необходима дополнительная информация о естественном течении и распространенности инфекции.

Лечение

Специфическое лечение M genitalium целесообразно у пациентов с симптомами, у которых был обнаружен микроорганизм, и текущие данные свидетельствуют о том, что терапия первой линии с 5-дневным курсом азитромицина была бы наиболее подходящей. Однократные дозы азитромицина могут быть менее эффективными у мужчин с уретритом, и иногда встречается резистентность к макролидам. Пациентов с неэффективностью лечения после азитромицина успешно лечили моксифлоксацином в дозе 400 мг ежедневно в течение 10 дней 25 , но из-за риска развития резистентности это лечение следует рассматривать как терапию второй линии.

Отсутствие проспективных данных естественного анамнеза делает твердой рекомендацией отслеживать и лечить все половые контакты преждевременно в настоящее время, но такой подход разумен для отдельных пациентов после соответствующего обсуждения.

Резюме

На основании имеющихся данных обоснована рекомендация тестировать пациентов с генитальными симптомами на M genitalium , а лечение инфицированных должно проводиться азитромицином.Однако возможности тестирования будут ограничены до тех пор, пока не станут доступны валидированные и, желательно, коммерчески доступные тесты.

Сокращения

NAAT — Тесты на нуклеиновые кислоты

NGU — нендококковый уретрит

PMNLS — полиморфноядерные лейкоциты

STI — сексуально, передаваемые инфекции

Сновые сноски

Сноски

Декларация интересов: JR получил консультационные сборы от Bayer и Pfizer и является помощником редактора журнала инфекций, передающихся половым путем.

Ссылки

1. Taylor-Robinson D. Mycoplasma genitalium — обновление. Int J STD AIDS 200213145–151. [PubMed] [Google Scholar]2. Чжан С., Уир Д.Дж., Ло С-С. Микоплазменные инфекции изменяют экспрессию генов в культивируемых эпителиальных клетках предстательной железы и шейки матки человека. FEMS Immunol Med Microbiol 20002743–50. [PubMed] [Google Scholar]3. Svenstrup HF, Fedder J, Abraham-Peskir J. et al. Mycoplasma genitalium прикрепляется к сперматозоидам человека. Хум Репрод 2003182103–2109. [PubMed] [Google Scholar]5.Тейлор-Робинсон Д., Хорнер П. Дж. Роль Mycoplasma genitalium в негонококковом уретрите. Секс-трансформация заражает 200177229–231. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Horner P J, Gilroy C B, Thomas B J. et al Ассоциация Mycoplasma genitalium с острым негонококковым уретритом. Ланцет 19

582–585. [PubMed] [Google Scholar]7. Jensen J S. Mycoplasma genitalium: этиологический агент уретрита и других заболеваний, передающихся половым путем. J Eur Acad Dermatol Venereol 2004181–11.[PubMed] [Google Scholar]8. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. Симптоматический уретрит более распространен у мужчин, инфицированных Mycoplasma genitalium, чем Chlamydia trachomatis. Секс-трансформация заражает 200480289–293. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Anagrius C, Lore B, Jensen J S. Mycoplasma genitalium: распространенность, клиническое значение и передача. Секс-трансформация заражает 200581458–462. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10. Eickhoff JH, Frimodt-Moller N, Walter S. et al Двойное слепое рандомизированное контролируемое многоцентровое исследование по сравнению эффективности ципрофлоксацина и пивампициллина при пероральном лечении эпидидимита у мужчин старше 40 лет.Бр Дж. Урол, международный, 199984827–834. [PubMed] [Google Scholar] 11. Кригер Дж. Н., Райли Д. Е., Робертс М. С. и др. Последовательности прокариотической ДНК у пациентов с хроническим идиопатическим простатитом. J Clin Microbiol 1996343120–3128. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Манхарт Л.Э., Кричлоу К.В., Холмс К.К. и др. Слизисто-гнойный цервицит и Mycoplasma genitalium. J Infect Dis 2003187650–657. [PubMed] [Google Scholar] 13. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. et al Признаки и симптомы уретрита и цервицита у женщин с инфекцией Mycoplasma genitalium или Chlamydia trachomatis или без них.Секс-трансформация заражает 20058173–78. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Taylor-Robinson D, Furr PM, Tully J G. et al Животные модели урогенитальной инфекции Mycoplasma genitalium. Isr J Med Sci 198723561–564. [PubMed] [Google Scholar] 15. Cohen C R, Manhart L E, Bukusi E A. et al Связь между Mycoplasma genitalium и острым эндометритом. Ланцет 2002359765–766. [PubMed] [Google Scholar] 16. Cohen CR, Mugo NR, Astete SG. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium у женщин с лапароскопически диагностированным острым сальпингитом.Секс-трансформация заражает 200581463–466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Clausen HF, Fedder J, Drasbek M. et al Серологическое исследование Mycoplasma genitalium у бесплодных женщин. Хум Репрод 2001161866–1874. [PubMed] [Google Scholar] 18. Jensen J S, Bjornelius E, Dohn B. et al Использование TaqMan 5′-нуклеазы ПЦР в реальном времени для количественного определения ДНК Mycoplasma genitalium у мужчин с уретритом и без него, которые посещали клинику заболеваний, передающихся половым путем.J Clin Microbiol 200442683–692. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

19. Wroblewski J K, Manhart L E, Dickey K A. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium в образцах влагалища, шейки матки и мочи с помощью ТМА и ПЦР. 16-я двухгодичная встреча Международного общества по исследованию заболеваний, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г.

20. Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B. et al Сравнение образцов мочи из первой порции и урогенитального мазка для обнаружения Mycoplasma genitalium и Chlamydia trachomatis с помощью полимеразы цепная реакция у пациентов, посещающих венерологические клиники. Sex Transm Dis 200431499–507. [PubMed] [Google Scholar]

21. Mroczkowski TF, Mena L, Nsuami M. et al Рандомизированное сравнение азитромицина и доксициклина для лечения уретрита с положительным результатом на Mycoplasma genitalium у мужчин. ISSTDR Conference: Abstract WP-108, 2005

22. Хамасуна Р., Осада Й., Дженсен Дж. С. Тестирование чувствительности Mycoplasma genitalium к антибиотикам с помощью ПЦР в реальном времени с 5′-нуклеазой TaqMan. Противомикробные агенты Chemother 20054–4998. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23.Bjornelius E, Anagrius C, Bojs G. et al Mycoplasma genitalium: когда проверять и лечить. Текущий статус в Скандинавии. 15-я двухгодичная встреча Международного общества исследований заболеваний, передающихся половым путем, Оттава, 2003 г.

24. Джонсон А.М., Мерсер Ч.Х., Эренс Б. и др. Сексуальное поведение в Британии: партнерство, практика и поведение, связанное с риском заражения ВИЧ. Ланцет 20013581835–1842. [PubMed] [Google Scholar]

25. Брэдшоу К.С., Табризи С.М., Рид Т.Р. и др. Mycoplasma genitalium, вирусы простого герпеса и аденовирусы при негонококковом уретрите.16-я двухгодичная встреча Международного общества по изучению заболеваний, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г. 2006 г., август; 82(4): 269–271.

JDC Ross , клиника Whittall Street, Birmingham B4 6DH, UK

JS Jensen , Statens Serum Institut, Artillerivej 5, DK-2300 Copenhagen S, Дания

Уиттол-стрит, Бирмингем B4 6DH, Великобритания; Джонатан[email protected]

JR и JJ совместно написали и отредактировали рукопись.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Доказательства того, что Mycoplasma genitalium является патогеном, передающимся половым путем, практически неопровержимы, основываясь как на уровне конкордантности среди партнеров, так и на типировании ДНК, показывающем один и тот же тип последовательности среди партнеров, в отличие от неродственных M genitalium положительных пациентов. Однако последствия, которые это имеет для скрининга, тестирования и лечения пациентов, менее очевидны.Какие тесты являются наиболее чувствительными и специфичными, какие образцы являются наиболее подходящими, кого следует протестировать, какое лечение лучше всего и как следует управлять партнерами?

Ключевые слова: Микоплазма , инфекции, передающиеся половым путем, уретрит, сальпингит

Бактерия Mycoplasma genitalium трудно поддается изучению. Организм прихотлив, а культура сложна, и даже в случае успеха для роста каждого изолята требуется несколько недель или даже месяцев.Серология в ее более сложных формах может иметь значение в эпидемиологических исследованиях, но не имеет ценности в диагностике. Таким образом, тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) являются единственными доступными диагностическими инструментами, но ни один коммерчески доступный тест не был выпущен для диагностических целей.

Доказательства

M genitalium как патогена с использованием моделей животных и тканей

Исследования на нечеловеческих приматах ясно продемонстрировали патогенность M genitalium как у самцов, так и у самок животных. M genitalium может быть выделен от инфицированного животного и может быть передан неинфицированному животному и вызывать заболевание, удовлетворяющее одному из постулатов Коха. 1

Исследования in vitro демонстрируют способность M genitalium прикрепляться к эпителиальным клеткам генитального тракта с помощью поверхностного адгезинного белка, а затем проникать в клетки, что приводит к активизации генов цитокинов с сопутствующим воспалительным ответом. 2 M genitalium также может прикрепляться к сперматозоидам, создавая потенциальный механизм распространения в верхние отделы женских половых путей. 3

Данные о роли

M genitalium в качестве возбудителя у мужчин

Большое количество статей о роли M genitalium при негонококковом уретрите (НГУ) было опубликовано с 1993 г. после первоначальной полимеразной цепной реакции основанные исследования. 4 ,5 ,6 Хотя для определения групп пациентов и контрольной группы использовались разные критерии, все исследования одинаково показали более высокую распространенность M genitalium в группах НГУ (обзор Jensen 7 ) . Более того, M genitalium , по-видимому, выявляется с наибольшей распространенностью у мужчин с Chlamydia trachomatis -негативным НГУ (NCNGU). Несколько исследований показали, что у мужчин с M genitalium положительным НГУ симптомы проявляются так же часто, как и у мужчин с хламидийным НГУ. 8 ,9 При классификации уретрита по количеству полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) в уретральном мазке у мужчин с M genitalium число ПМЯЛ было выше, чем у мужчин с M genitalium отрицательным NCNGU, что указывает на значительный воспалительный потенциал.Систематические исследования, связывающие M genitalium с такими осложнениями, как эпидидимит и простатит, отсутствуют, хотя ДНК M genitalium была обнаружена как в уретре мужчин с эпидидимитом, 10 , так и в тканях предстательной железы мужчин с простатитом. 11

Данные о

M genitalium как возбудителе у женщин инфицированный партнер-мужчина. Присутствие M genitalium связано с цервицитом и уретритом у женщин, 12 ,13 , а прививка M genitalium нечеловеческим приматам приводит как к заболеванию нижних отделов половых путей, так и к сальпингиту. 14 M. genitalium может быть обнаружена в эндометрии женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза 15 и в единичном случае была обнаружена в маточной трубе. 16 Кроме того, серологические исследования указывают на сильную связь между прошлой инфекцией M genitalium и трубным фактором бесплодия. 17

Таким образом, весьма вероятно, что M genitalium является возбудителем, передающимся половым путем у женщин 9 и ответственным по крайней мере за некоторые случаи уретрита, цервицита и воспалительных заболеваний органов малого таза.

Как диагностировать

M genitalium : текущая доступность тестирования и перспективы на будущее

В настоящее время МАНК являются единственным доступным инструментом для обнаружения M genitalium . Из-за очень низкой нагрузки микоплазмами у некоторых пациентов для достижения достаточной чувствительности анализа необходимы тесты 18 с очень низким пределом обнаружения.Одобренных коммерческих анализов не было, хотя были представлены многообещающие результаты с наборами для использования в исследованиях. 19 В ближайшие годы одобренные тесты, скорее всего, станут доступны, но до тех пор крайне важно, чтобы лаборатории активно участвовали во внешних программах обеспечения качества с использованием реальных клинических образцов, прежде чем они будут предлагать МАНК на регулярной основе. Оптимальный тип образца может варьироваться в зависимости от метода подготовки образца, используемого в лаборатории.В одном крупном исследовании было обнаружено, что при первом мочеиспускании у мужчин выявляется больше инфекций с помощью M genitalium , а также с Chlamydia trachomatis , чем с помощью уретральных мазков, хотя это может отражать количество образцов, использованных в методе подготовки образцов. У женщин использование более одного образца также может повысить диагностическую чувствительность, например, дополнение образца мочи мазком из шейки матки. 20

Антибиотикотерапия

инфекций, вызываемых M genitalium

Для лечения инфекций, вызванных M genitalium , с разной степенью успеха используется ряд различных антибиотиков.Первоначально тетрациклины выглядели многообещающе, но более поздние исследования показывают, что неспособность полностью искоренить инфекцию возникает в высокой доле случаев, получающих лечение этими агентами. Макролиды, в частности азитромицин, дают наилучшие шансы на излечение с клиренсом 84% в недавнем рандомизированном контролируемом исследовании, проведенном у мужчин с уретритом M genitalium . 21 Новые хинолоны, такие как моксифлоксацин, также обладают хорошей активностью в отношении M genitalium in vitro (хотя ципрофлоксацин и офлоксацин менее эффективны). 22

Поскольку M genitalium растет очень медленно, для его ликвидации может потребоваться длительный курс терапии. В предварительном открытом исследовании, проведенном в Скандинавии, наблюдалась тенденция к улучшению исхода при более длительном лечении: азитромицин в дозе 1 г немедленно ликвидировал 85% (11/13) инфекций, вызванных М. genitalium , тогда как доза 500 мг в 1-й день с последующим введением 250 мг в день в течение 4 дней ликвидировали 95% (19/20) инфекций. 23

Рекомендации

С учетом текущего уровня знаний о M genitalium какие временные рекомендации можно дать по скринингу, тестированию и лечению?

Скрининг

Преждевременно начинать скрининг населения на M genitalium .Для этого нам нужна точная информация о распространенности инфекции и проспективные данные о естественном течении болезни у инфицированных людей. Только с помощью этой информации можно рассчитать эффективность и экономическую эффективность скрининга для различных групп населения. Предлагаемое тестирование образцов мочи на M genitalium из исследования NATSAL 24 предоставит важную информацию о распространенности, которая поможет определить роль скрининга в будущем. Доказательства, связывающие M genitalium с воспалительным заболеванием органов малого таза, убедительны, но в значительной степени косвенны, и нам до сих пор не хватает исследований естественного течения, которые демонстрируют временную связь между инфекцией и заболеванием.По крайней мере, одно такое исследование проводится в Соединенных Штатах, а другое планируется провести в Соединенном Королевстве, что поможет количественно оценить риск инфекции органов малого таза, связанный с инфекцией M genitalium , и определить роль скрининга.

Тестирование

Несмотря на то, что было разработано множество «внутренних» ПЦР, существует явная и насущная потребность в точном, стандартизированном и гарантированном качестве тест-наборе для M genitalium . Если тест доступен, кого следует проверить на M genitalium ?

Обследование мужчин с симптоматическим НГУ целесообразно, особенно в тех условиях, где используется эмпирическое лечение доксициклином. У двух третей из инфицированных М. genitalium пациентов с уретритом будет персистирующая инфекция и часто возникают рецидивирующие симптомы после терапии доксициклином. Тот же аргумент можно использовать для обоснования тестирования пациентов с такими осложнениями, как эпидидимит, простатит и реактивный артрит, приобретенный половым путем.

Основные сообщения

  • Mycoplasma Genitalium 9002 в настоящее время устанавливаются в виде сексуально, передаваемой инфекцией

  • Роль скрининга для инфекции в настоящее время неизвестна

  • Тестирование и лечение симптоматических лиц, инфицированных м. рекомендуется, но ограничено отсутствием подходящих тестов

  • Текущие данные поддерживают использование азитромицина в качестве терапии первой линии для M genitalium

Тестирование на M genitalium у женщин с симптомами со стороны половых путей, такими как выделения из половых органов, межменструальные кровотечения или боли в области таза оправданы связью между M genitalium и цервицитом, эндометритом и клиническим воспалительным заболеванием органов малого таза. Прежде чем рекомендовать тестирование бессимптомных женщин, необходима дополнительная информация о естественном течении и распространенности инфекции.

Лечение

Специфическое лечение M genitalium целесообразно у пациентов с симптомами, у которых был обнаружен микроорганизм, и текущие данные свидетельствуют о том, что терапия первой линии с 5-дневным курсом азитромицина была бы наиболее подходящей. Однократные дозы азитромицина могут быть менее эффективными у мужчин с уретритом, и иногда встречается резистентность к макролидам.Пациентов с неэффективностью лечения после азитромицина успешно лечили моксифлоксацином в дозе 400 мг ежедневно в течение 10 дней 25 , но из-за риска развития резистентности это лечение следует рассматривать как терапию второй линии.

Отсутствие проспективных данных естественного анамнеза делает твердой рекомендацией отслеживать и лечить все половые контакты преждевременно в настоящее время, но такой подход разумен для отдельных пациентов после соответствующего обсуждения.

Резюме

На основании имеющихся данных обоснована рекомендация тестировать пациентов с генитальными симптомами на M genitalium , а лечение инфицированных должно проводиться азитромицином.Однако возможности тестирования будут ограничены до тех пор, пока не станут доступны валидированные и, желательно, коммерчески доступные тесты.

Сокращения

NAAT — Тесты на нуклеиновые кислоты

NGU — нендококковый уретрит

PMNLS — полиморфноядерные лейкоциты

STI — сексуально, передаваемые инфекции

Сновые сноски

Сноски

Декларация интересов: JR получил консультационные сборы от Bayer и Pfizer и является помощником редактора журнала инфекций, передающихся половым путем.

Ссылки

1. Taylor-Robinson D. Mycoplasma genitalium — обновление. Int J STD AIDS 200213145–151. [PubMed] [Google Scholar]2. Чжан С., Уир Д.Дж., Ло С-С. Микоплазменные инфекции изменяют экспрессию генов в культивируемых эпителиальных клетках предстательной железы и шейки матки человека. FEMS Immunol Med Microbiol 20002743–50. [PubMed] [Google Scholar]3. Svenstrup HF, Fedder J, Abraham-Peskir J. et al. Mycoplasma genitalium прикрепляется к сперматозоидам человека. Хум Репрод 2003182103–2109. [PubMed] [Google Scholar]5.Тейлор-Робинсон Д., Хорнер П. Дж. Роль Mycoplasma genitalium в негонококковом уретрите. Секс-трансформация заражает 200177229–231. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Horner P J, Gilroy C B, Thomas B J. et al Ассоциация Mycoplasma genitalium с острым негонококковым уретритом. Ланцет 19

582–585. [PubMed] [Google Scholar]7. Jensen J S. Mycoplasma genitalium: этиологический агент уретрита и других заболеваний, передающихся половым путем. J Eur Acad Dermatol Venereol 2004181–11.[PubMed] [Google Scholar]8. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. Симптоматический уретрит более распространен у мужчин, инфицированных Mycoplasma genitalium, чем Chlamydia trachomatis. Секс-трансформация заражает 200480289–293. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Anagrius C, Lore B, Jensen J S. Mycoplasma genitalium: распространенность, клиническое значение и передача. Секс-трансформация заражает 200581458–462. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10. Eickhoff JH, Frimodt-Moller N, Walter S. et al Двойное слепое рандомизированное контролируемое многоцентровое исследование по сравнению эффективности ципрофлоксацина и пивампициллина при пероральном лечении эпидидимита у мужчин старше 40 лет.Бр Дж. Урол, международный, 199984827–834. [PubMed] [Google Scholar] 11. Кригер Дж. Н., Райли Д. Е., Робертс М. С. и др. Последовательности прокариотической ДНК у пациентов с хроническим идиопатическим простатитом. J Clin Microbiol 1996343120–3128. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Манхарт Л.Э., Кричлоу К.В., Холмс К.К. и др. Слизисто-гнойный цервицит и Mycoplasma genitalium. J Infect Dis 2003187650–657. [PubMed] [Google Scholar] 13. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. et al Признаки и симптомы уретрита и цервицита у женщин с инфекцией Mycoplasma genitalium или Chlamydia trachomatis или без них. Секс-трансформация заражает 20058173–78. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Taylor-Robinson D, Furr PM, Tully J G. et al Животные модели урогенитальной инфекции Mycoplasma genitalium. Isr J Med Sci 198723561–564. [PubMed] [Google Scholar] 15. Cohen C R, Manhart L E, Bukusi E A. et al Связь между Mycoplasma genitalium и острым эндометритом. Ланцет 2002359765–766. [PubMed] [Google Scholar] 16. Cohen CR, Mugo NR, Astete SG. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium у женщин с лапароскопически диагностированным острым сальпингитом.Секс-трансформация заражает 200581463–466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Clausen HF, Fedder J, Drasbek M. et al Серологическое исследование Mycoplasma genitalium у бесплодных женщин. Хум Репрод 2001161866–1874. [PubMed] [Google Scholar] 18. Jensen J S, Bjornelius E, Dohn B. et al Использование TaqMan 5′-нуклеазы ПЦР в реальном времени для количественного определения ДНК Mycoplasma genitalium у мужчин с уретритом и без него, которые посещали клинику заболеваний, передающихся половым путем. J Clin Microbiol 200442683–692. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

19. Wroblewski J K, Manhart L E, Dickey K A. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium в образцах влагалища, шейки матки и мочи с помощью ТМА и ПЦР. 16-я двухгодичная встреча Международного общества по исследованию заболеваний, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г.

20. Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B. et al Сравнение образцов мочи из первой порции и урогенитального мазка для обнаружения Mycoplasma genitalium и Chlamydia trachomatis с помощью полимеразы цепная реакция у пациентов, посещающих венерологические клиники.Sex Transm Dis 200431499–507. [PubMed] [Google Scholar]

21. Mroczkowski TF, Mena L, Nsuami M. et al Рандомизированное сравнение азитромицина и доксициклина для лечения уретрита с положительным результатом на Mycoplasma genitalium у мужчин. ISSTDR Conference: Abstract WP-108, 2005

22. Хамасуна Р., Осада Й., Дженсен Дж. С. Тестирование чувствительности Mycoplasma genitalium к антибиотикам с помощью ПЦР в реальном времени с 5′-нуклеазой TaqMan. Противомикробные агенты Chemother 20054–4998. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23.Bjornelius E, Anagrius C, Bojs G. et al Mycoplasma genitalium: когда проверять и лечить. Текущий статус в Скандинавии. 15-я двухгодичная встреча Международного общества исследований заболеваний, передающихся половым путем, Оттава, 2003 г.

24. Джонсон А.М., Мерсер Ч.Х., Эренс Б. и др. Сексуальное поведение в Британии: партнерство, практика и поведение, связанное с риском заражения ВИЧ. Ланцет 20013581835–1842. [PubMed] [Google Scholar]

25. Брэдшоу К.С., Табризи С.М., Рид Т.Р. и др. Mycoplasma genitalium, вирусы простого герпеса и аденовирусы при негонококковом уретрите.16-я двухгодичная встреча Международного общества по изучению заболеваний, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г. 2006 г., август; 82(4): 269–271.

JDC Ross , клиника Whittall Street, Birmingham B4 6DH, UK

JS Jensen , Statens Serum Institut, Artillerivej 5, DK-2300 Copenhagen S, Дания

Уиттол-стрит, Бирмингем B4 6DH, Великобритания; Джонатан.

[email protected]

JR и JJ совместно написали и отредактировали рукопись.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Доказательства того, что Mycoplasma genitalium является патогеном, передающимся половым путем, практически неопровержимы, основываясь как на уровне конкордантности среди партнеров, так и на типировании ДНК, показывающем один и тот же тип последовательности среди партнеров, в отличие от неродственных M genitalium положительных пациентов. Однако последствия, которые это имеет для скрининга, тестирования и лечения пациентов, менее очевидны.Какие тесты являются наиболее чувствительными и специфичными, какие образцы являются наиболее подходящими, кого следует протестировать, какое лечение лучше всего и как следует управлять партнерами?

Ключевые слова: Микоплазма , инфекции, передающиеся половым путем, уретрит, сальпингит

Бактерия Mycoplasma genitalium трудно поддается изучению. Организм прихотлив, а культура сложна, и даже в случае успеха для роста каждого изолята требуется несколько недель или даже месяцев.Серология в ее более сложных формах может иметь значение в эпидемиологических исследованиях, но не имеет ценности в диагностике. Таким образом, тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) являются единственными доступными диагностическими инструментами, но ни один коммерчески доступный тест не был выпущен для диагностических целей.

Доказательства

M genitalium как патогена с использованием моделей животных и тканей

Исследования на нечеловеческих приматах ясно продемонстрировали патогенность M genitalium как у самцов, так и у самок животных. M genitalium может быть выделен от инфицированного животного и может быть передан неинфицированному животному и вызывать заболевание, удовлетворяющее одному из постулатов Коха. 1

Исследования in vitro демонстрируют способность M genitalium прикрепляться к эпителиальным клеткам генитального тракта с помощью поверхностного адгезинного белка, а затем проникать в клетки, что приводит к активизации генов цитокинов с сопутствующим воспалительным ответом. 2 M genitalium также может прикрепляться к сперматозоидам, создавая потенциальный механизм распространения в верхние отделы женских половых путей. 3

Данные о роли

M genitalium в качестве возбудителя у мужчин

Большое количество статей о роли M genitalium при негонококковом уретрите (НГУ) было опубликовано с 1993 г. после первоначальной полимеразной цепной реакции основанные исследования. 4 ,5 ,6 Хотя для определения групп пациентов и контрольной группы использовались разные критерии, все исследования одинаково показали более высокую распространенность M genitalium в группах НГУ (обзор Jensen 7 ) .Более того, M genitalium , по-видимому, выявляется с наибольшей распространенностью у мужчин с Chlamydia trachomatis -негативным НГУ (NCNGU). Несколько исследований показали, что у мужчин с M genitalium положительным НГУ симптомы проявляются так же часто, как и у мужчин с хламидийным НГУ. 8 ,9 При классификации уретрита по количеству полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) в уретральном мазке у мужчин с M genitalium число ПМЯЛ было выше, чем у мужчин с M genitalium отрицательным NCNGU, что указывает на значительный воспалительный потенциал.Систематические исследования, связывающие M genitalium с такими осложнениями, как эпидидимит и простатит, отсутствуют, хотя ДНК M genitalium была обнаружена как в уретре мужчин с эпидидимитом, 10 , так и в тканях предстательной железы мужчин с простатитом. 11

Данные о

M genitalium как возбудителе у женщин инфицированный партнер-мужчина.Присутствие M genitalium связано с цервицитом и уретритом у женщин, 12 ,13 , а прививка M genitalium нечеловеческим приматам приводит как к заболеванию нижних отделов половых путей, так и к сальпингиту. 14 M. genitalium может быть обнаружена в эндометрии женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза 15 и в единичном случае была обнаружена в маточной трубе. 16 Кроме того, серологические исследования указывают на сильную связь между прошлой инфекцией M genitalium и трубным фактором бесплодия. 17

Таким образом, весьма вероятно, что M genitalium является возбудителем, передающимся половым путем у женщин 9 и ответственным по крайней мере за некоторые случаи уретрита, цервицита и воспалительных заболеваний органов малого таза.

Как диагностировать

M genitalium : текущая доступность тестирования и перспективы на будущее

В настоящее время МАНК являются единственным доступным инструментом для обнаружения M genitalium . Из-за очень низкой нагрузки микоплазмами у некоторых пациентов для достижения достаточной чувствительности анализа необходимы тесты 18 с очень низким пределом обнаружения.Одобренных коммерческих анализов не было, хотя были представлены многообещающие результаты с наборами для использования в исследованиях. 19 В ближайшие годы одобренные тесты, скорее всего, станут доступны, но до тех пор крайне важно, чтобы лаборатории активно участвовали во внешних программах обеспечения качества с использованием реальных клинических образцов, прежде чем они будут предлагать МАНК на регулярной основе. Оптимальный тип образца может варьироваться в зависимости от метода подготовки образца, используемого в лаборатории.В одном крупном исследовании было обнаружено, что при первом мочеиспускании у мужчин выявляется больше инфекций с помощью M genitalium , а также с Chlamydia trachomatis , чем с помощью уретральных мазков, хотя это может отражать количество образцов, использованных в методе подготовки образцов. У женщин использование более одного образца также может повысить диагностическую чувствительность, например, дополнение образца мочи мазком из шейки матки. 20

Антибиотикотерапия

инфекций, вызываемых M genitalium

Для лечения инфекций, вызванных M genitalium , с разной степенью успеха используется ряд различных антибиотиков.Первоначально тетрациклины выглядели многообещающе, но более поздние исследования показывают, что неспособность полностью искоренить инфекцию возникает в высокой доле случаев, получающих лечение этими агентами. Макролиды, в частности азитромицин, дают наилучшие шансы на излечение с клиренсом 84% в недавнем рандомизированном контролируемом исследовании, проведенном у мужчин с уретритом M genitalium . 21 Новые хинолоны, такие как моксифлоксацин, также обладают хорошей активностью в отношении M genitalium in vitro (хотя ципрофлоксацин и офлоксацин менее эффективны). 22

Поскольку M genitalium растет очень медленно, для его ликвидации может потребоваться длительный курс терапии. В предварительном открытом исследовании, проведенном в Скандинавии, наблюдалась тенденция к улучшению исхода при более длительном лечении: азитромицин в дозе 1 г немедленно ликвидировал 85% (11/13) инфекций, вызванных М. genitalium , тогда как доза 500 мг в 1-й день с последующим введением 250 мг в день в течение 4 дней ликвидировали 95% (19/20) инфекций. 23

Рекомендации

С учетом текущего уровня знаний о M genitalium какие временные рекомендации можно дать по скринингу, тестированию и лечению?

Скрининг

Преждевременно начинать скрининг населения на M genitalium . Для этого нам нужна точная информация о распространенности инфекции и проспективные данные о естественном течении болезни у инфицированных людей. Только с помощью этой информации можно рассчитать эффективность и экономическую эффективность скрининга для различных групп населения. Предлагаемое тестирование образцов мочи на M genitalium из исследования NATSAL 24 предоставит важную информацию о распространенности, которая поможет определить роль скрининга в будущем. Доказательства, связывающие M genitalium с воспалительным заболеванием органов малого таза, убедительны, но в значительной степени косвенны, и нам до сих пор не хватает исследований естественного течения, которые демонстрируют временную связь между инфекцией и заболеванием.По крайней мере, одно такое исследование проводится в Соединенных Штатах, а другое планируется провести в Соединенном Королевстве, что поможет количественно оценить риск инфекции органов малого таза, связанный с инфекцией M genitalium , и определить роль скрининга.

Тестирование

Несмотря на то, что было разработано множество «внутренних» ПЦР, существует явная и насущная потребность в точном, стандартизированном и гарантированном качестве тест-наборе для M genitalium . Если тест доступен, кого следует проверить на M genitalium ?

Обследование мужчин с симптоматическим НГУ целесообразно, особенно в тех условиях, где используется эмпирическое лечение доксициклином.У двух третей из инфицированных М. genitalium пациентов с уретритом будет персистирующая инфекция и часто возникают рецидивирующие симптомы после терапии доксициклином. Тот же аргумент можно использовать для обоснования тестирования пациентов с такими осложнениями, как эпидидимит, простатит и реактивный артрит, приобретенный половым путем.

Основные сообщения

  • Mycoplasma Genitalium 9002 в настоящее время устанавливаются в виде сексуально, передаваемой инфекцией

  • Роль скрининга для инфекции в настоящее время неизвестна

  • Тестирование и лечение симптоматических лиц, инфицированных м. рекомендуется, но ограничено отсутствием подходящих тестов

  • Текущие данные поддерживают использование азитромицина в качестве терапии первой линии для M genitalium

Тестирование на M genitalium у женщин с симптомами со стороны половых путей, такими как выделения из половых органов, межменструальные кровотечения или боли в области таза оправданы связью между M genitalium и цервицитом, эндометритом и клиническим воспалительным заболеванием органов малого таза.Прежде чем рекомендовать тестирование бессимптомных женщин, необходима дополнительная информация о естественном течении и распространенности инфекции.

Лечение

Специфическое лечение M genitalium целесообразно у пациентов с симптомами, у которых был обнаружен микроорганизм, и текущие данные свидетельствуют о том, что терапия первой линии с 5-дневным курсом азитромицина была бы наиболее подходящей. Однократные дозы азитромицина могут быть менее эффективными у мужчин с уретритом, и иногда встречается резистентность к макролидам. Пациентов с неэффективностью лечения после азитромицина успешно лечили моксифлоксацином в дозе 400 мг ежедневно в течение 10 дней 25 , но из-за риска развития резистентности это лечение следует рассматривать как терапию второй линии.

Отсутствие проспективных данных естественного анамнеза делает твердой рекомендацией отслеживать и лечить все половые контакты преждевременно в настоящее время, но такой подход разумен для отдельных пациентов после соответствующего обсуждения.

Резюме

На основании имеющихся данных обоснована рекомендация тестировать пациентов с генитальными симптомами на M genitalium , а лечение инфицированных должно проводиться азитромицином.Однако возможности тестирования будут ограничены до тех пор, пока не станут доступны валидированные и, желательно, коммерчески доступные тесты.

Сокращения

NAAT — Тесты на нуклеиновые кислоты

NGU — нендококковый уретрит

PMNLS — полиморфноядерные лейкоциты

STI — сексуально, передаваемые инфекции

Сновые сноски

Сноски

Декларация интересов: JR получил консультационные сборы от Bayer и Pfizer и является помощником редактора журнала инфекций, передающихся половым путем.

Ссылки

1. Taylor-Robinson D. Mycoplasma genitalium — обновление. Int J STD AIDS 200213145–151. [PubMed] [Google Scholar]2. Чжан С., Уир Д.Дж., Ло С-С. Микоплазменные инфекции изменяют экспрессию генов в культивируемых эпителиальных клетках предстательной железы и шейки матки человека. FEMS Immunol Med Microbiol 20002743–50. [PubMed] [Google Scholar]3. Svenstrup HF, Fedder J, Abraham-Peskir J. et al. Mycoplasma genitalium прикрепляется к сперматозоидам человека. Хум Репрод 2003182103–2109. [PubMed] [Google Scholar]5.Тейлор-Робинсон Д., Хорнер П. Дж. Роль Mycoplasma genitalium в негонококковом уретрите. Секс-трансформация заражает 200177229–231. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Horner P J, Gilroy C B, Thomas B J. et al Ассоциация Mycoplasma genitalium с острым негонококковым уретритом. Ланцет 19

582–585. [PubMed] [Google Scholar]7. Jensen J S. Mycoplasma genitalium: этиологический агент уретрита и других заболеваний, передающихся половым путем. J Eur Acad Dermatol Venereol 2004181–11.[PubMed] [Google Scholar]8. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. Симптоматический уретрит более распространен у мужчин, инфицированных Mycoplasma genitalium, чем Chlamydia trachomatis. Секс-трансформация заражает 200480289–293. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Anagrius C, Lore B, Jensen J S. Mycoplasma genitalium: распространенность, клиническое значение и передача. Секс-трансформация заражает 200581458–462. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10. Eickhoff JH, Frimodt-Moller N, Walter S. et al Двойное слепое рандомизированное контролируемое многоцентровое исследование по сравнению эффективности ципрофлоксацина и пивампициллина при пероральном лечении эпидидимита у мужчин старше 40 лет.Бр Дж. Урол, международный, 199984827–834. [PubMed] [Google Scholar] 11. Кригер Дж. Н., Райли Д. Е., Робертс М. С. и др. Последовательности прокариотической ДНК у пациентов с хроническим идиопатическим простатитом. J Clin Microbiol 1996343120–3128. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Манхарт Л.Э., Кричлоу К.В., Холмс К.К. и др. Слизисто-гнойный цервицит и Mycoplasma genitalium. J Infect Dis 2003187650–657. [PubMed] [Google Scholar] 13. Falk L, Fredlund H, Jensen J S. et al Признаки и симптомы уретрита и цервицита у женщин с инфекцией Mycoplasma genitalium или Chlamydia trachomatis или без них.Секс-трансформация заражает 20058173–78. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Taylor-Robinson D, Furr PM, Tully J G. et al Животные модели урогенитальной инфекции Mycoplasma genitalium. Isr J Med Sci 198723561–564. [PubMed] [Google Scholar] 15. Cohen C R, Manhart L E, Bukusi E A. et al Связь между Mycoplasma genitalium и острым эндометритом. Ланцет 2002359765–766. [PubMed] [Google Scholar] 16. Cohen CR, Mugo NR, Astete SG. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium у женщин с лапароскопически диагностированным острым сальпингитом.Секс-трансформация заражает 200581463–466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Clausen HF, Fedder J, Drasbek M. et al Серологическое исследование Mycoplasma genitalium у бесплодных женщин. Хум Репрод 2001161866–1874. [PubMed] [Google Scholar] 18. Jensen J S, Bjornelius E, Dohn B. et al Использование TaqMan 5′-нуклеазы ПЦР в реальном времени для количественного определения ДНК Mycoplasma genitalium у мужчин с уретритом и без него, которые посещали клинику заболеваний, передающихся половым путем.J Clin Microbiol 200442683–692. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

19. Wroblewski J K, Manhart L E, Dickey K A. et al Обнаружение Mycoplasma genitalium в образцах влагалища, шейки матки и мочи с помощью ТМА и ПЦР. 16-я двухгодичная встреча Международного общества по исследованию заболеваний, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г.

20. Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B. et al Сравнение образцов мочи из первой порции и урогенитального мазка для обнаружения Mycoplasma genitalium и Chlamydia trachomatis с помощью полимеразы цепная реакция у пациентов, посещающих венерологические клиники. Sex Transm Dis 200431499–507. [PubMed] [Google Scholar]

21. Mroczkowski TF, Mena L, Nsuami M. et al Рандомизированное сравнение азитромицина и доксициклина для лечения уретрита с положительным результатом на Mycoplasma genitalium у мужчин. ISSTDR Conference: Abstract WP-108, 2005

22. Хамасуна Р., Осада Й., Дженсен Дж. С. Тестирование чувствительности Mycoplasma genitalium к антибиотикам с помощью ПЦР в реальном времени с 5′-нуклеазой TaqMan. Противомикробные агенты Chemother 20054–4998. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23.Bjornelius E, Anagrius C, Bojs G. et al Mycoplasma genitalium: когда проверять и лечить. Текущий статус в Скандинавии. 15-я двухгодичная встреча Международного общества исследований заболеваний, передающихся половым путем, Оттава, 2003 г.

24. Джонсон А.М., Мерсер Ч.Х., Эренс Б. и др. Сексуальное поведение в Британии: партнерство, практика и поведение, связанное с риском заражения ВИЧ. Ланцет 20013581835–1842. [PubMed] [Google Scholar]

25. Брэдшоу К.С., Табризи С.М., Рид Т.Р. и др. Mycoplasma genitalium, вирусы простого герпеса и аденовирусы при негонококковом уретрите.16-е двухгодичное совещание Международного общества по изучению болезней, передающихся половым путем, Амстердам, 2005 г.

Новый патоген, передающийся половым путем

Indian J Med Res. 2012 декабрь; 136(6): 942–955.

Sunil Sethi

Кафедра медицинской микробиологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Гагандип Сингх

Кафедра медицинской микробиологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

1 Палаш Саманта

Кафедра медицинской микробиологии, Последипломный институт медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Мира Шарма

Кафедра медицинской микробиологии, Последипломный институт медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

2 9 Департамент Медицинской микробиологии, Последипломный институт медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Запросы на перепечатку : Д-р Сунил Сети, Дополнительный профессор, Отдел ЗППП и туберкулеза, Отделение медицинской микробиологии, Последипломный институт медицинского образования и исследований, Чандигарх 160 012 , Электронная почта Индии: moc. [email protected]Авторское право: © The Indian Journal of Medical Research

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-Noncommercial-Share Alike 3.0 Unported, что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии оригинальная работа правильно цитируется.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Mycoplasma genitalium относится к генитальным микоплазмам, которые становятся важным возбудителем инфекций, передающихся половым путем, как у мужчин, так и у женщин.Появление полимеразной цепной реакции и других молекулярных методов сделало исследования M. genitalium более осуществимыми, которые в противном случае трудно изолировать. Помимо Chlamydia trachomatis , M. genitalium в настоящее время является важной и установленной причиной негонококкового уретрита (НГУ) у мужчин, особенно персистирующего и рецидивирующего НГУ. Многочисленные исследования также показали положительную связь M. genitalium со слизисто-гнойным цервицитом и выделениями из влагалища у женщин.Доказательства M. genitalium воспалительных заболеваний органов малого таза и бесплодия вполне убедительны и указывают на то, что этот микроорганизм может вызывать восходящую инфекцию. Сообщалось об отсутствии четкой связи с M. genitalium в отношении бактериального вагиноза и неблагоприятных исходов беременности. Диагностика инфекций M. genitalium проводится исключительно с использованием тестов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) из-за плохого или медленного роста бактерий в культуре. Несмотря на отсутствие рекомендаций по лечению, противомикробные препараты группы макролидов кажутся более эффективными, чем тетрациклины.В настоящем обзоре представлен обзор эпидемиологии, патогенеза, клинических проявлений и лечения инфекций, передающихся половым путем, вызванных M. genitalium .

Ключевые слова: Эмерджентная инфекция, Mycoplasma genitalium , негонококковый уретрит, заболевания, передающиеся половым путем ежегодно 1 . При своевременной диагностике эти инфекции можно легко лечить с минимальной заболеваемостью, а также с меньшим экономическим бременем. Mycoplasma genitalium является новым возбудителем ИППП и вызывает урогенитальные инфекции у мужчин и женщин во всем мире. Спустя более 25 лет после его первоначального выделения у мужчин с негонококковым уретритом (НГУ) 2 , M. genitalium в настоящее время признана важным этиологическим агентом острого и персистирующего мужского НГУ и ответственна примерно за 20–35 случаев процентов нехламидийных случаев НГУ 3 ,4 .Роль этого микроорганизма в мужских урогенитальных заболеваниях была значительным шагом вперед в наших знаниях об ИППП, но его роль в воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта у женщин до сих пор не очень ясна 5 .

Факторы риска инфекции M. genitalium типичны, как и для любой ИППП. Исследователи в различных исследуемых группах женщин и мужчин в возрасте 21-23 лет выявили поведенческие факторы риска инфекции M. genitalium 6 : большее количество партнеров, более молодой возраст при первом половом акте, наличие у партнера симптомов инфекции, коинфекция с другими патогены, передающиеся половым путем, такие как Chlamydia trachomatis 6 .Manhart et al 7 показали, что распространенность M. genitalium увеличивалась на 10% на каждого дополнительного полового партнера. Бессимптомное носительство 7 также представляет серьезную эпидемиологическую проблему из-за передачи половым партнерам и может быть вертикальной передачей от матери к новорожденному. Некоторые исследователи сообщают об инфекции, столь же распространенной, как хламидийная инфекция и трихомониаз, и более распространенной, чем гонорея 8 ,9 .

В исследованиях, проведенных в Дании, распространенность инфекции составила 2,3 и 1,1% среди женщин и мужчин соответственно 9 . Takahashi et al 10 продемонстрировали уровень положительности ДНК M. genitalium в моче бессимптомных здоровых молодых японских мужчин в размере 1%; среди студенток в Японии распространенность M. genitalium составила 2,8% 6 . Tosh et al показали высокую распространенность 13,6% среди молодых (14-17 лет) сексуально активных женщин с положительным результатом на M.гениталиум 11 . Среди женщин и мужчин, обратившихся в клинику ЗППП в Сиэтле, M. genitalium была обнаружена в 14 и 9% случаев соответственно 12 . дает хронологический отчет о важных исследованиях, сообщающих о географической распространенности M. genitalium .

Табл.Несмотря на отсутствие клеточной стенки, многие таксономисты отнесли

Mycoplasma и родственников к типу Firmicutes , состоящему из грамположительных бактерий с низким G+C, таких как Clostridium, Lactobacillus и Streptococcus на основе 16S рРНК. генный анализ. Отряд Mycoplasmatales включает одно семейство Mycoplasmataceae , состоящее из двух родов: Mycoplasma и Ureaplasma . Это одни из самых маленьких свободноживущих микроорганизмов, способных к самовоспроизведению. M. genitalium является одним из 15 названных видов микоплазм человеческого происхождения 13 . В 1981 г. два штамма микоплазмы, G-37 и М-30, были впервые выделены у двух мужчин с негонококковым уретритом (НГУ) 2 ,14 . Позже, в 1983 году, они были названы M. genitalium , двенадцатым видом микоплазмы, обнаруженным у людей 15 .

Род Mycoplasma содержит очень мелкие бактерии размером от 0.от 2 до 0,7 мкм. Форма зависит от конкретного вида микоплазмы, которая может варьироваться от сферической, нитевидной или колбовидной/грушевидной. M. genitalium представляет собой подвижную колбовидную микоплазму с терминальной верхушечной структурой, которая способствует прикреплению к различным поверхностям и обеспечивает скользящую подвижность. Он не имеет пептидогликановой клеточной стенки и, следовательно, не имеет маркеров клеточной поверхности. Отсутствие клеточной стенки также означает, что эта бактерия обладает меньшей осмотической стабильностью в среде хозяина.Отсутствие клеточной стенки является причиной отрицательной реакции окрашивания по Граму и нечувствительности к бета-лактамным антибиотикам, которые ингибируют синтез клеточной стенки бактерий 16 . Поскольку M. genitalium слишком мала, чтобы ее можно было увидеть отдельно под световым микроскопом, первое детальное исследование его структуры было проведено под трансмиссионным электронным микроскопом (ПЭМ) 16 . Эти организмы трудно культивировать, и может пройти от нескольких недель до нескольких месяцев, прежде чем культура покажет видимый рост.Микоплазмы проникают на поверхность агара и растут в нижележащей среде за счет отложения диоксида марганца (MnO 2 ). Колонии выглядят коричневыми и имеют типичный вид «глазуньи» (размер: 200–400 мкм): плотное, темное, гранулированное ядро, окаймленное тонкой светлой зоной 2 ,17 .

ГЕНОМ

В 1995 году была опубликована полная последовательность генома M. genitalium , что сделало ее второй бактерией после Haemophilus influenzae , геном которой был полностью секвенирован 18 .Это вид с самым маленьким геномом из всех изученных до сих пор микоплазм с геномом всего 580 т.п.н. Хотя большинство геномов микоплазмы имеют низкое содержание гуанина плюс цитозина (G+C) в диапазоне 24-33% G+C, геном M. genitalium имеет сравнительно более высокое содержание G+C — 32% 18 . Небольшой геном M. genitalium сделал его предпочтительным организмом в «Проекте минимального генома» — исследовании по поиску наименьшего набора генетического материала, необходимого для поддержания жизни 19 .

ПАТОГЕНЕЗ

Патогенез M. pneumoniae был тщательно изучен, и из-за близкого генетического сходства некоторые особенности патогенеза M. pneumoniae могут быть применены к M. genitalium . Хотя M. pneumoniae в основном обнаруживается в дыхательных путях, а M. genitalium в мочеполовых путях, было показано, что оба микроорганизма преодолевают тканевые барьеры. Было показано, что M. genitalium прикрепляется к различным типам клеток, включая эритроциты, клетки Vero, клетки фаллопиевых труб, респираторные клетки и сперматозоиды 13 ,20 .

M. genitalium имеет несколько факторов вирулентности, ответственных за его патогенность. К ним относятся способность прикрепляться к эпителиальным клеткам хозяина с помощью терминальной органеллы кончика с ее адгезинами, внутриклеточная локализация, высвобождение ферментов и способность уклоняться от иммунного ответа хозяина за счет антигенной изменчивости. M. genitalium Ассоциированные с липидами мембранные белки (LAMP) играют важную роль в воспалительной реакции мочеполового тракта 20 .Хотя показано, что микоплазмы продуцируют метаболиты перекиси водорода и супероксида, большая часть повреждения тканей связана с реакцией клеток-хозяев. Стимуляция и подавление клеток (в том числе лимфоцитов, моноцитов, макрофагов) посредством индукции продукции цитокинов (главным образом TNF-α, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-8 и IL-10) играют важную роль в патогенезе . Некоторые компоненты микоплазменных клеток также могут действовать как суперантигены

(i) Адгезия к эпителию хозяина — Для того чтобы любой Mollicute колонизировался и вызывал инфекцию, адгезия является первой предпосылкой.Микоплазмы в первую очередь считаются поверхностными паразитами клеток слизистых оболочек, поскольку они прочно прикрепляются к эпителиальным выстилкам дыхательных или мочеполовых путей, редко проникая в ткани. Урогенитальный тракт, по-видимому, является первичной тканью, инфицированной M. genitalium , но прикрепление, по-видимому, не ограничивается уроэпителиальными клетками in vitro 13 . Молекулы адгезина, сгруппированные в концевой структуре колбовидной полярной ячейки, интенсивно изучались как в 900–20 М. genitalium и M.pneumoniae 21 . Оба вида прикрепляются к эритроцитам различных видов, эукариотическим клеткам, таким как клетки Vero, но, что более важно, M. genitalium связывается с эпителиальными клетками фаллопиевых труб человека 13 .

Двадцать один предполагаемый ген белка был идентифицирован в геноме M. genitalium , но лишь некоторые из них были охарактеризованы как адгезии. Основным адгезином в комплексе белка прикрепления является белок MgPa 22 ,23 , и вместе с белком P32 (MG318) 24 он образует органеллу концевого кончика.MgPa кодирует белки цитоадгезии P140 (MG191) и P110 (MG192) (цитадгезины) в области кончика 13 . Эти белки иммуногенны как у экспериментальных животных, так и у человека. Потеря любого из этих двух белков приводит к потере подвижности и свойств прикрепления всей органеллы прикрепления MgPa 25 , таким образом показывая важность этих белков в прикреплении. Было показано, что P140 массой 140 кДа (MG191) связан с основным белком адгезии (P1) массой 170 кДа М.pneumoniae , тогда как 32 кДа белок P32 M. genitalium (MG318) очень похож на P30 M. pneumoniae 26 .

Было показано, что белки цитоскелета MG218 и MG317 играют роль в терминальной организации органелл, скользящей подвижности и цитоадгерентности. Гены, кодирующие белки прилипания, расположены в трех разных областях генома M. genitalium . Гены, кодирующие адгезины MgPa, организованы в оперон с тремя генами 22 ,23 .Компоненты прилипания P32 (MG318) M. genitalium , обнаруженные на кончиковидных концевых структурах, расположены в оперонах, которые находятся на расстоянии от оперона MgPa. Дополнительные белки и их аналоги в M. genitalium важны для кластеризации адгезина на кончике и поддержания кончика организма и формы клетки, тем самым действуя как цитоскелет. MG218 сгруппирован в оперон с MG217 и MG219 13 .

(ii) Внутриклеточная локализация — С самого начала изучения микоплазмы 2 ,15 споры относительно поверхностной или внутриклеточной локализации микоплазмы остаются.Хотя внутриклеточное расположение некоторых из Mycoplasma spp., , например . M. penetrans, M. fermentans и M. hominis успешно доказано 27 ,29 , то же про M. genitalium не ясно. Хотя были проведены различные исследования 30 ,32 относительно местонахождения M. genitalium , никаких выводов еще предстоит сделать. Похоже, что M. genitalium ведет себя как факультативный внутриклеточный патоген i.е . способны сохранять жизнеспособность как внеклеточно, так и внутриклеточно in vitro 13 . Происходит ли то же самое в естественных условиях , не было доказано. Однако из клинического опыта пациентов, получающих многократные курсы лечения высокоактивными антибиотиками с временным улучшением, но последующим рецидивом, кажется вероятным, что такие механизмы могут действовать, по крайней мере, в подгруппе пациентов 13 .

(iii) Антигенная вариация — Микоплазмы, чтобы избежать иммунного ответа хозяина, проявляют антигенную вариацию своих поверхностных компонентов.Поверхностные липопротеины микоплазм демонстрируют антигенную изменчивость, и на протяжении поколений они развивались, чтобы генерировать более высокую частоту фенотипической гетерогенности даже в небольшой популяции этих организмов. Другие механизмы, такие как мимикрия антигенов-хозяев, также могут способствовать их выживанию в клетках-хозяевах , 33, , , 34, .

Для этого есть два основных механизма. Либо организм контролирует экспрессию молекул факторов вирулентности в соответствии с изменениями окружающей среды посредством пути передачи сигнала, либо организм может спонтанно генерировать мутантные фенотипы, которые выживают при изменениях окружающей среды i.е . ответы клеток-хозяев 33 . Чтобы избежать воздействия иммунной системы хозяина, белки P140 и P110 MgPa обладают способностью подвергаться антигенным вариациям, тем самым изменяя генетическую последовательность MgPa с последующим образованием вариантов, которые не распознаются иммунной системой хозяина 13 ,35 . Другими механизмами выживания этого организма могут быть способность имитировать антигены клеток-хозяев и внутриклеточное расположение внутри профессиональных макрофагов 13 .

Повреждение тканей, наблюдаемое при инфекциях M. pneumoniae , связано с реакцией клетки-хозяина, и это может указывать на то, что происходит во время инфекций M. genitalium . Микоплазмы взаимодействуют со многими компонентами иммунной системы, что может приводить к продукции цитокинов и активации макрофагов. Некоторые клеточные компоненты могут также действовать как суперантигены и вызывать усиленный аутоиммунный ответ 36 .

(iv) Ферменты — Alvarez et al 37 обнаружили, что в гликолитическом пути активность фермента гликолиза глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) вызывает присоединение M.genitalium к вагинальному и цервикальному муцину человека у женщин. Таким образом, GAPDH действует как лиганд на рецепторы муцина и фибронектина, особенно при заболеваниях влагалища и шейки матки. M. genitalium перемещает свои цитоплазматические ферменты на поверхность клеточной мембраны для усиления колонизации тканей хозяина 38 . Кроме того, метионинсульфоксидредуктаза (MsrA) может высвобождаться для усиления патогенности его небольшого генома 39 . MsrA является ферментом антиоксидантной репарации бактерии.Он восстанавливает белки, утратившие свою биологическую активность из-за окисления их метионинов, тем самым защищая белковую структуру бактерий от окислительного повреждения хозяина 39 . На рисунке показана блок-схема, изображающая патогенез M. genitalium .

Обзор механизмов патогенеза M. genitalium

ИНФЕКЦИИ У ЧЕЛОВЕКА

(A) Урогенитальные инфекции у мужчин классифицируются как гонококковые или негонококковые в зависимости от наличия или отсутствия Neisseria gonorrhoeae 3 .Примерно у 30% пациентов с НГУ ни бактериальный, ни микоплазменный агент не выделяются на обычной лабораторной среде, но некоторые, у которых не удается идентифицировать патогенный микроорганизм, реагируют на лечение противомикробными препаратами, активными в отношении C. trachomatis или U. urealyticum 40 ,41 . Эти наблюдения подразумевают, что в NGU 3 могут быть вовлечены другие, более прихотливые микоплазмы или другие микроорганизмы, чувствительные к противомикробным агентам, таким как тетрациклин, макролиды и фторхинолоны.Из-за трудностей с культивированием M. genitalium после обнаружения микроорганизма было проведено лишь несколько эпидемиологических исследований. Поскольку ДНК-зонд 42 и ПЦР-анализ 43 были разработаны для выявления M. genitalium , эта микоплазма в настоящее время выявляется чаще у пациентов с острым НГУ, чем у пациентов без уретрита 44 . Было показано, что он вызывает уретрит у человекоподобных приматов, привитых интрауретрально 45 ,46 .

Результаты многих исследований показывают, что M. genitalium может вызывать НГУ. Согласно этим данным M. Genitalium обнаруживается в 14. 1 47 до 33,3% 48 мужчин с острым NGU, набранным в клиниках STD 4 , 44 , 44 52 в 13,2 51 до 15,6% 54 из них в урологических клиниках. Более раннее исследование нашего центра показало, что M.genitalium была обнаружена в 6% (6/100) случаев НГУ. Уровень инфицирования составил 7,1% (5 из 70) среди ВИЧ-позитивных лиц, тогда как только один ВИЧ-отрицательный случай НГУ оказался положительным (3,3%). Ассоциация M. genitalium не зависела от присутствия C. trachomatis и U. urealyticum 55 . Распространенность этой микоплазмы у мужчин без уретрита, посещавших венерологические клиники, составляет от 0,8 до 9,1% 4 ,44 ,48 ,50 52 , тогда как у бессимптомных мужчин в урологии составляет от 0 до 2 процентов 53 ,54 .Таким образом, в большинстве исследований документально подтверждено, что M. genitalium значительно чаще выявляется у пациентов с острым НГУ, чем у контрольной группы без уретрита. Кроме того, распространенность M. genitalium составляет от 18,4 до 45,5% у пациентов с острым нехламидийным негонококковым уретритом (NCNGU), и в большинстве исследований распространенность значительно выше, чем у пациентов с острым хламидийно-позитивным НГУ или без уретрита, независимо от того, они были набраны в венерологических или урологических клиниках 4 ,44 ,51 ,53 ,54 .Распространенность M. genitalium у мужчин с гонококковым уретритом, вероятно, ниже, чем распространенность C. trachomatis 3 . Большинство пациентов с НГУ, ассоциированным с C. trachomatis или U. urealyticum , реагируют на антибактериальную терапию. Однако, когда ни один из микроорганизмов не обнаружен, НГУ иногда сохраняется или рецидивирует в течение 6 недель после лечения 56 ,57 . Различные исследования показывают, что M. genitalium может играть значительную роль в персистирующих или рецидивирующих НГУ 5 ,52 ,58 Он был обнаружен в простате примерно у 4% пациентов с хроническим абактериальным простатитом 59 , но в настоящее время нет достаточных данных, чтобы предположить, что он может быть важной причиной заболевания 60 .

(B) Урогенитальные инфекции у женщин — По сравнению с количеством исследований у мужчин было проведено лишь несколько исследований роли M. genitalium у женщин 5 .

(i) Цервицит — В нескольких исследованиях изучалась корреляция между М.genitalium и цервицит. Одной из основных проблем при интерпретации этих исследований были различные определения цервицита. В некоторых исследованиях наличие 10 полиморфноядерных лимфоцитов (PMNL)/поле большого увеличения (hpf) в мазке из шейки матки считалось значимым, в то время как в других исследованиях 30 PMNL/hpf считались определяющим признаком цервицита 13 . Одно раннее исследование, проведенное Uno et al. 59 , определило цервицит по выделениям из эндоцервикса и > 20 PMNL/hpf и выявило M.genitalium у 5 из 64 женщин по сравнению с ни одной из 80 бессимптомных беременных женщин 61 . В исследовании, проведенном в США с использованием архивных выделений из шейки матки 719 женщин, собранных на фильтровальную бумагу, было обнаружено, что M. genitalium тесно связаны с цервицитом, обнаруживаемым у 7% всех обследованных женщин, но у 11% женщин с цервицитом. (> 30 PMNLs/hpf) и у 5% женщин без цервицита 60 . В многофакторном логистическом регрессионном анализе с поправкой на другие факторы, связанные с цервицитом, и исключением 172 женщин, инфицированных N.gonorrohoeae и/или C. trachomatis , M. genitalium по-прежнему тесно связаны с цервицитом (ОШ 3,1; 95% ДИ 1,5-6,8), что дополнительно подтверждает независимую роль M. genitalium как причины цервицита. Процент атрибутивного риска составил 70 процентов, что свидетельствует о том, что среди женщин с цервицитом и M. genitalium 70 процентов цервицита можно отнести к M. genitalium 62 .

(ii) Воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) — ВЗОМТ представляет собой клинический синдром, обусловленный распространением микроорганизмов из нижних половых путей в верхние.Некоторые бактерии, в том числе обнаруженные при бактериальном вагинозе, C. trachomatis и N. gonorrhoeae , могут вызывать ВЗОМТ. Установление связи между M. genitalium и инфекцией верхних отделов половых путей имеет большое значение для определения значимости инфекции 13 . Более ранние исследования, основанные на серологии, были противоречивыми. В исследовании 115 женщин, обратившихся в клинику ЗППП в Кении с острой тазовой болью, плазмоклеточный эндометрит был обнаружен у 58 и 900–20 М.genitalium была обнаружена в цервикальных мазках или биоптатах эндометрия у 16 ​​процентов по сравнению с 2 процентами женщин без эндометрита 63 . Целых 33% обследованных женщин были ВИЧ-позитивными, но M. genitalium чаще не выявлялась у ВИЧ-инфицированных женщин. В другом исследовании у женщин с клиническим подозрением на ВЗОМТ 64 , M. genitalium чаще выявлялась у ВИЧ-позитивных женщин (19 против 5%). В исследовании случай-контроль Симмс и его коллеги 65 обследовали 45 женщин с клинически диагностированным ВЗОМТ и обнаружили M.genitalium с помощью ПЦР в мазках из эндоцервикса у девяти (16%) по сравнению с ни одним из 37 контрольных пациентов.

(iii) Бактериальный вагиноз (БВ) — Хотя в одном из ранних отчетов M. genitalium был обнаружен у 4 (16%) из 25 невыбранных женщин и у 3 из 10 женщин с БВ 66 , последующие исследования показали отсутствие связи M. genitalium с БВ. Keane et al 67 изучали 15 женщин с БВ, ни у одной из которых не было M.genitalium положительная, как и только 2 (12%) из 17 женщин без БВ, посещавших клинику ЗППП. Таким образом, в отличие от M. hominis , M. genitalium , вероятно, не ассоциирован с BV 17 .

(iv) Неблагоприятный исход беременности и бесплодие — Имеется мало информации о роли M. genitalium в неблагоприятном исходе беременности, будь то преждевременные роды, аборт или мертворождение. В одном исследовании M. genitalium была обнаружена только в 4 процентах вагинальных мазков в середине триместра от 124 женщин, родивших преждевременно 68 .Это, вероятно, немного выше, чем распространенность в нормальной популяции беременных женщин, как было оценено в другом исследовании 69 , где только 0,7% женщин, беременных в первом триместре, были M. genitalium положительными. Что касается бесплодия, были представлены только косвенные доказательства. В датском исследовании 70 образцы сыворотки от 308 бесплодных женщин исследовали на наличие антител к M. genitalium с помощью иммуноблотинга против цельноклеточных белков M. genitalium и M. pneumoniae , а также против рекомбинантного антигена MgPa. Среди женщин с трубным бесплодием 22% были серопозитивными по сравнению с 7% женщин с бесплодием по мужскому фактору или бесплодием неясного генеза с нормальными маточными трубами.

Результаты экспериментов на животных убедительно свидетельствуют о патогенности M. genitalium для урогенитального тракта человекообразных приматов, а возбудитель передается половым путем между партнерами 13 .Представляется разумным заключить, что M. genitalium может вызывать слизисто-гнойный цервицит, хотя гуморальный ответ отсутствует. M. genitalium передается половым путем с частотой передачи, аналогичной C. trachomatis 13 . Роль M. genitalium у женщин установлена ​​хуже, чем у мужчин, и необходимы дальнейшие исследования для изучения ее связи с ВЗОМТ и поздними последствиями, такими как бесплодие. Существуют только косвенные доказательства бесплодия, а БВ и неблагоприятный исход беременности, по-видимому, не связаны с 900–20 М. гениталиум инфекции. Как и у мужчин, необходимы рандомизированные контролируемые клинические испытания, направленные на определение оптимального лечения инфекции.

Ассоциация

M. genitalium с другими ЗППП

Поскольку путь передачи является общим для всех инфекций, передающихся половым путем, многие авторы наблюдали коинфекцию M. genitalium с другими патогенами. В исследовании Yokoi et al. 71 частота коинфекции M.genitalium среди мужчин с гонококковым уретритом оказалась низкой (4,1%) по сравнению с коинфекцией C. trachomatis (21,2%). В другом исследовании, когда 45 мужчин с гонококковым уретритом были одновременно обследованы на M. genitalium с помощью ПЦР, 4,4% показали положительный результат 72 . Gaydos et al 73 при проведении исследований ИППП среди мужчин, посещающих клиники ЗППП, показали, что 5,9% из них были коинфицированы C.трахоматис . В Западной Африке Pepin et al. 74 показали, что почти половина инфекций, вызванных M. genitalium , происходила как коинфекция. Распространенность коинфекции с гонококковым уретритом C. trachomatis и Trichomonas vaginalis составила 37,9, 10,6 и 7,6% соответственно 74 . Сообщалось также о коинфекциях среди генитальных микоплазм. В исследовании Amirmozafari et al 75 одновременное появление M.genitalium и U. urealyticum была выявлена ​​у 1,4% женщин с генитальными инфекциями, тогда как тройная инфекция M. genitalium , U. urealyticum и M. hominis наблюдалась у 0,5% этих пациенток. . Другие авторы также продемонстрировали сосуществование M. genitalium с другими патогенами 76 ,77 .

МОДЕЛИ НА ЖИВОТНЫХ

Исследования на животных полезны для установления трансмиссивности M.genitalium у человека. Хотя урогенитальные исследования на животных имеют серьезные ограничения, до сих пор шимпанзе считаются лучшими моделями животных для изучения мужского уретрита, вызванного M. genitalium 13 . Было показано, что интрауретральная инокуляция M. genitalium самцам шимпанзе приводит к инфекции у них, и в некоторых случаях микроорганизмы выделялись из крови 45 ,46 . Исследования на животных инфекций самок M. genitalium были более полезными, чем исследования, проведенные на самцах животных.У низших приматов, таких как макаки-резусы и яванские макаки, ​​снижена восприимчивость к инфекции 13 . Исследования, проведенные у мужчин с НГУ и их партнерш-женщин, показали, что M. genitalium передается половым путем так же эффективно, как и C. trachomatis , который был изучен более подробно 48 ,78 ,79 . Основываясь как на показателях конкордантности среди партнеров, так и на типировании ДНК, показывающем один и тот же тип последовательности среди партнеров, не вызывает сомнений, что M. genitalium является патогеном, передающимся половым путем 80 , но для подтверждения требуются дальнейшие исследования.

ДИАГНОСТИКА

Идентификация микоплазмы и лабораторная диагностика микоплазменных инфекций основана на классических бактериологических тестах, включая морфологию, культуральные характеристики, физиологические и серологические свойства. Новые тесты, основанные на молекулярном анализе геномной ДНК, рибосомных РНК, клеточных белков и липидов, похоже, вытесняют классические тесты, и можно ожидать, что молекулярные тесты вскоре станут преобладающими тестами для идентификации микоплазм 17 .

(i) Сбор проб

Образцы, подходящие для обнаружения M. genitalium культуральными или некультуральными методами, включают уретральный мазок, мочу, эндоцервикальный мазок и биопсию эндометрия. Предпочтительны тампоны из альгината кальция, дакрона или полиэстера с алюминиевыми или пластиковыми стержнями. Следует избегать использования ватных тампонов с деревянным стержнем из-за потенциального ингибирующего эффекта. Перед транспортировкой в ​​лабораторию мазки всегда следует снимать с образцов 81 .По возможности образцы следует инокулировать у постели больного с использованием подходящего транспорта и/или питательной среды. SP4 считается хорошим транспортом, а также культуральной средой для M. genitalium . Если немедленная транспортировка в лабораторию невозможна, образцы следует хранить в холодильнике, но не более 24 часов. Mollicutes можно хранить в течение длительного времени в подходящей среде для выращивания и транспортировки при температуре -80°C или в жидком азоте. Хранение при -20°C вредно для обнаружения, даже некультуральными методами.Микоплазмы человеческого происхождения можно исследовать на лабораторном столе и/или в боксе безопасности класса 2 81 .

(ii) Методы окрашивания и культивирования

Прямое обнаружение M. genitalium в образцах с помощью различных методов окрашивания практически невозможно из-за их небольшого размера и отсутствия клеточной стенки. Однако флуорохромы ДНК, такие как Hoechst 33258 или краситель акридинового оранжевого, могут быть нанесены на жидкости организма после центрифугирования. M. genitalium медленно растет с прототипом штамма G37, образуя колонии в течение 6 недель или более 82 .После первоначального выделения двух штаммов M. genitalium в 1981 г. ни один последующий изолят не выделялся из половых путей до 1996 г., когда Jensen et al. возможный рост на среде Фрииса.

Культуральная среда на основе фосфата сахарозы (SP4) сыграла важную роль в открытии M. genitalium . Эта среда, предназначенная для выделения микоплазм и спироплазм, была разработана Tully et al. 2 в Национальном институте здравоохранения (NIH), Мэриленд, США, и состояла из основы микоплазменного бульона с добавлением глутамина, дрожжевого экстракта, бычьей сыворотки, пенициллина. и феноловый красный в качестве индикатора.Доказательством микоплазменного роста было увеличение мутности, а также изменение кислотности p H с красного на желтый индикатор фенолового красного из-за ферментации глюкозы организмом 84 . Слой клеток, прилипший к поверхности контейнера, соскабливали для посева на твердую агаровую среду (0,6% агарозы или 0,8% агара Нобла в бульонной основе) перед анаэробной инкубацией при 37°С. Признаки роста в среде проявлялись очень медленно; изменение цвета происходит только через 50 дней.

Другой средой является бульон PPLO (организмы, подобные Pleuro Pneumonia), который широко используется для культивирования M. genitalium . Его также можно использовать для транспортировки уретральных тампонов. Процедуру можно сделать селективной в отношении микоплазм путем фильтрации образца через шприцевой фильтр 0,45 мкм. Пробирки инкубируют в 5-процентном растворе CO 2 и трижды в день наблюдают за любым изменением цвета в течение 15 дней. Как только наблюдается изменение цвета на красно-розовый при отсутствии какого-либо помутнения среды, рост пересевают на соответствующие чашки с агаром PPLO.Чашки с агаром PPLO инкубируют при 37°C с 5% CO 2 в течение 15 дней. Пластинки ежедневно наблюдают под микроскопом на наличие любого роста до 15 дней. После появления колоний микроорганизм идентифицируют стандартными биохимическими методами и окрашиванием красителями Диенеса и Гимзы по стандартным методикам 81 . Форма колоний похожа на другие микоплазмы, но не типична для яичницы-глазуньи.

Принимая во внимание восприимчивость культивируемых клеток к заражению микоплазмой различных зарегистрированных видов, а также зная о размножении прихотливых штаммов М.hyorhinis в клеточных культурах 85 , были предприняты попытки вырастить M. genitalium в клеточных культурах (например, клеточные линии Vero) 83 . Этот подход оказался очень эффективным, но чрезвычайно трудоемким 13 . Поскольку надежной среды для прямого выделения M. genitalium не существует, обнаружение проводят с помощью ПЦР. Тем не менее, культура важна для получения организмов для тестирования чувствительности и является предметом продолжающихся исследований.

(iii) Серодиагностика

Классические рекомендуемые тесты включают ингибирование роста и метаболизма с помощью специфической антисыворотки, а также тесты прямой и непрямой иммунофлуоресценции, применяемые к колониям микоплазм.В ряде случаев для диагностики микоплазмы применялись более чувствительные тесты, основанные на принципах ИФА, иммуносвязывания, иммуноблоттинга, иммунофлуоресценции и иммунопероксидазного теста. Перекрестные реакции между M. pneumoniae и M. genitalium значительно затруднили использование специфической серологии для диагностики и эпидемиологических исследований 17 . До настоящего времени ни один серологический тест на генитальные микоплазмы не был стандартизирован и коммерчески доступен для диагностического использования.

(iv) ДНК-зонды и ПЦР

До разработки методов ПЦР было предпринято несколько попыток использования ДНК-зондов. Сообщалось, что конструкция радиоактивно меченых олигонуклеотидных зондов, нацеленных на 16S рРНК, имеет предел обнаружения приблизительно 1000 организмов 86 и может быть адаптирована для обнаружения только M. genitalium . О клинических исследованиях с использованием таких зондов не сообщалось, но на самом деле информация о последовательности из этого исследования использовалась в одной из первых публикаций по ПЦР для М.пневмонии 87 . Risi et al. 88 использовали клонированный фрагмент из 256 п.н. с неизвестной функцией для зондирования смоделированных образцов женских половых органов и обнаружили предел обнаружения примерно в 10 000 копий генома. Полногеномный ник-транслируемый зонд с заявленным пределом обнаружения от 10 4 до 10 5 копий генома также использовался для изучения образцов уретры от 203 мужчин 89 . Доказательств, указывающих на важную роль M. genitalium в остром НГУ, обнаружено не было, но мужчины с рецидивирующим НГУ чаще были положительными.Учитывая, что большая часть пациентов имеет очень низкую ДНК-нагрузку в урогенитальных образцах 90 , удивительно, что Hooton et al 89 в своем исследовании обнаружили 15% положительных результатов M. genitalium . . Для обнаружения M. genitalium необходимы высокочувствительные анализы с высокой клинической чувствительностью. В настоящее время только тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) обладают необходимой чувствительностью, и до сих пор сообщалось только о тестах на основе ПЦР 5 ,82 .

Первый тест на основе ПЦР был опубликован в 1991 году 43 , а вскоре после этого Палмер и его коллеги 64 опубликовали свой метод. Оба были основаны на последовательности ДНК MgPa. В то время считалось, что ген адгезина будет достаточно консервативным, так как он играет важную роль в патогенезе инфекции. Поэтому было неожиданно, что область MgPa, окруженная праймерами MgPa-1 и MgPa-3 43 , оказалась изменчивой. Различные другие варианты последовательностей были обнаружены с помощью анализа ферментов рестрикции, а затем путем секвенирования 90 .Это наблюдение привело к дальнейшим исследованиям генетической изменчивости M. genitalium 91 и к необходимости альтернативных ПЦР-анализов 92 ,93 . Анализ, разработанный Palmer et al. 94 , представлял собой полувложенную ПЦР. Опыт работы с набором праймеров MgPa-476/MgPa-903 послужил дополнительным стимулом для разработки анализа на основе гена 16S рРНК 93 . Одной из последних разработок в диагностической ПЦР является гомогенная ПЦР в реальном времени.Первый анализ ПЦР в реальном времени для M. genitalium был разработан Yoshida et al в 2002 г. 95 . Анализ был основан на обнаружении гена 16S рРНК. Впоследствии анализ LightCycler, обнаруживающий ген P115 (MG299) с зондами LNA (закрытые нуклеиновые кислоты), был применен для обнаружения M. genitalium и для мониторинга реакции на лечение у девяти инфицированных мужчин 96 .

Исследователи отмечают ненадежность иммунологических анализов и некоторых ПЦР-тестов, используемых для обнаружения M. genitalium 97 , вероятно, связана с обширной антигенной рекомбинацией, характерной для геномных исследований 98 . Некоторые тесты для тестирования мочи первого мочеиспускания (FVU) и самостоятельно взятых вагинальных мазков имеют некоторую научно обоснованную полезность (чувствительность или специфичность > 95%) для обнаружения M. genitalium , и они включают многоцелевую ПЦР в реальном времени, Gen- Probe (Gen-Probe, Сан-Диего, Калифорния, США), анализ транскрипционно-опосредованной амплификации (GPTMARA), ПЦР в реальном времени (RTPCR), MPCR Reverse Line Blot (MPCRRLB), LightCycler ПЦР в реальном времени (LCRTPCR) (Roche Applied Science, Индианаполис, Индиана, США) и ПЦР в реальном времени TaqMan® 99 .При отсутствии «золотого стандарта» выбор используемого анализа может зависеть от наличия на месте. Сообщается, что вагинальные мазки обладают высокой чувствительностью для обнаружения M. genitalium 12 . В настоящее время имеется достаточный объем информации, подтверждающей полезность MgPa, независимо от его потенциальной изменчивости, в качестве цели NAAT.

ЛЕЧЕНИЕ

Микоплазмы, включая M. genitalium , обычно чувствительны к тетрациклинам и фторхинолонам 100 , но устойчивы к тем, которые действуют на компоненты клеточной стенки бактерий, e.г . β-лактамы из-за отсутствия клеточной стенки. Из-за сложности выделения M. genitalium из клинических образцов существует лишь несколько сообщений о минимальной ингибирующей концентрации (МПК) различных антибиотиков. Эти МИК были определены только для нескольких изолятов M. genitalium , которые были созданы и поддерживались в лаборатории. Профиль чувствительности таких изолятов к противомикробным препаратам может не точно подтверждать профиль нынешних клинических изолятов M. genitalium .Однако эти исследования дают некоторую полезную информацию, когда противомикробные агенты были выбраны для лечения инфекции M. genitalium . Данные этих исследований показывают, что профиль чувствительности M. genitalium к противомикробным препаратам in vitro сходен с профилем M. pneumoniae 101 . Тетрациклин, эритромицин и некоторые новые макролиды, такие как кларитромицин и азитромицин, высокоактивны в отношении M. genitalium 101 105 .МИК тетрациклина, включая доксициклин и миноциклин, для M. genitalium составляет от 0,01 до 0,05 мкг/мл 101 . Информация о резистентности к тетрациклину у M. genitalium отсутствует, но M. genitalium -положительные мужчины с НГУ и женщины с цервицитом могут лучше реагировать на азитромицин, чем на тетрациклин, возможно, из-за более низких МПК. МИК эритромицина и более новых макролидов составляет 0,01 мкг/мл или меньше 101 . Телитромицин, входящий в состав новейших производных макролидов, называемых кетолидами, также обладает высокой активностью в отношении 900–20 М.genitalium с МПК 0,015 мкг/мл или менее 102 . Некоторые новые хинолоны обладают высокой активностью. Например, заявленная МИК составляет от 0,06 до 0,12 мкг/мл для спарфлоксацина, от 0,06 до 0,12 мкг/мл для грепафлоксацина, 0,05 мкг/мл для гемифлоксацина и от 0,03 до 0,06 мкг/мл для тросафлоксацина Однако офлоксацин и ципрофлоксацин проявляют лишь умеренную активность при концентрациях от 0,5 до 1 и 2 мкг/мл соответственно 101 ,102 . До сих пор не установлены общепринятые стандарты для p H, среды, условий инкубации или продолжительности инкубации для проведения теста на чувствительность к микоплазмам.Никакие контрольные точки МИК, специфичные для этих организмов, не одобрены каким-либо регулирующим органом.

На сегодняшний день нет опубликованных руководств или рекомендаций по лечению M. genitalium положительного уретрита. Сообщалось лишь о нескольких результатах антимикробной химиотерапии у мужчин с M. genitalium положительным уретритом 44 ,50 ,52 ,58 . Кроме того, эти исследования имеют некоторые ограничения, такие как небольшое число пациентов и отсутствие обнаружения других потенциально важных генитальных микоплазм или других типов организмов.Поэтому невозможно сделать выводы о наилучшей стратегии лечения M. genitalium положительного негонококкового уретрита 3 . Поскольку специфический микробиологический диагноз микоплазменной инфекции ставится редко, соответствующее лечение обеспечивает защиту противомикробными препаратами от микроорганизмов, вызывающих конкретный синдром. Соответственно НГУ лечат доксициклином (100 мг перорально два раза в день в течение 7 дней) или азитромицином (1,0 г однократно перорально) для обеспечения активности против 900–20 C.trachomatis, U. urealyticum и M. genitalium 106 . Gambini et al 50 наблюдали, что лечение доксициклином приводило к облегчению симптомов и микробиологическому излечению инфекции у 94,3% пациентов с M. genitalium положительным негонококковым уретритом. В случаях НГУ персистирование M. genitalium в уретре связано с рецидивирующим НГУ. Таким образом, у пациентов с НГУ, индуцированным M. genitalium , может быть рекомендован более длительный курс лечения антибиотиками, а в случае M – курс лечения антибиотиками продолжительностью 2 или 3 недели.пневмония пневмония 3 . Медленный рост M. genitalium и его способность внедряться и размножаться в эпителиальных клетках могут объяснить его персистенцию в уретре или других местах, особенно после лечения 60 . M. genitalium была обнаружена у некоторых пациентов с хроническим НГУ, которых первоначально лечили доксициклином (100 мг/день в течение 10 дней) и 6-недельным курсом эритромицина (500 мг QDS) 107 . Другие обнаружены M. genitalium , сохраняющиеся у некоторых пациентов с острым НГУ после лечения доксициклином (200 мг, затем 100 мг в течение 13 дней) или эритромицином 108 , или после лечения тетрациклином (500 мг 2 раза в день в течение 10 дней) 58 или после лечения левофлоксацином (100 мг TDS в течение 14 дней) 58 .В одном исследовании схема азитромицина, включающая 500 мг однократно в 1-й день с последующим приемом 250 мг 1 раз в сутки в течение 4 дней, обеспечила отличные показатели излечения 60 . Необходимы дальнейшие исследования для определения наиболее подходящего лечения M. genitalium положительного острого и хронического НГУ и других M. genitalium -ассоциированных инфекций.

Заключение

M. genitalium является одним из самых маленьких прокариот, способных к репликации, не имеет клеточной стенки и имеет характерную форму груши/колбы с органеллой на конце. M. genitalium имеет несколько факторов вирулентности, ответственных за его патогенность. Последнее включает его способность прикрепляться к эпителиальным клеткам хозяина, используя концевую органеллу с ее адгезинами, высвобождение ферментов и способность уклоняться от иммунного ответа хозяина за счет антигенной изменчивости. M. genitalium в последнее время стала важной причиной инфекций, передающихся половым путем, и в настоящее время известна как установленная причина негонококкового уретерита (НГУ) у мужчин.Разумно заключить, что он тесно связан со слизисто-гнойным цервицитом у женщин. Доказательства в отношении M. genitalium PID и бесплодия вполне убедительны и указывают на то, что этот микроорганизм может вызывать восходящую инфекцию, но необходимы дополнительные исследования, чтобы понять взаимосвязь между M. genitalium и заболеванием репродуктивного тракта у женщин. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять динамику коинфекции ВИЧ и M. genitalium .Несмотря на то, что для диагностики инфекций M. genitalium было разработано множество внутренних ПЦР, существует потребность в высокоточных, проверенных на международном уровне и одобренных коммерческих МАНК. Все представленные данные поддерживают использование азитромицина в качестве препарата первого выбора при инфекциях, вызванных M. genitalium . В заключение, M. genitalium является важной причиной инфекций, передающихся половым путем, как у мужчин, так и у женщин, и при необходимости их следует лечить азитромицином. 123

Ссылки

2. Талли Дж.Г., Тейлор-Робинсон Д., Коул Р.М., Роуз Д.Л. Недавно обнаруженная микоплазма в урогенитальном тракте человека. Ланцет. 1981; 1: 1288–91. [PubMed] [Google Scholar]3. Deguchi T, Maeda S. Mycoplasma genitalium : еще один важный возбудитель негонококкового уретрита. Дж Урол. 2002; 167:1210–7. [PubMed] [Google Scholar]4. Тоттен П.А., Шварц М.А., Шостром К.Е., Кенни Г.Е., Хэндсфилд Х.Х., Вайс Дж.Б. и др. Ассоциация Mycoplasma genitalium с негонококковым уретритом у гетеросексуальных мужчин.J заразить дис. 2001; 183: 269–76. [PubMed] [Google Scholar]5. McGowin CL, Anderson-Smits C. Mycoplasma genitalium : новая причина венерических заболеваний у женщин. PLoS Патог. 2011;7:e1001324. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Хамасуна Р., Имаи Х., Цукино Х., Дженсен Дж. С., Осада Ю. Распространенность Mycoplasma genitalium среди учениц профессиональных учебных заведений в Японии. Секс Трансм Инфекция. 2008; 84: 303–5. [PubMed] [Google Scholar]7. Манхарт Л.Э., Холмс К.К., Хьюз Дж.П., Хьюстон Л.С., Тоттен П.А. Mycoplasma genitalium среди молодых людей в США: возникающая инфекция, передающаяся половым путем. Am J Общественное здравоохранение. 2007;97:1118–25. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]8. Ю Дж.Т., Танг В.И., Лау К.Х., Чонг Л.И., Ло К.К. Бессимптомная уретральная инфекция у мужчин, посещающих клинику заболеваний, передающихся половым путем. Int J STD AIDS. 2008; 19: 155–8. [PubMed] [Google Scholar]9. Андерсен Б., Соколовский И., Остергаард Л., Кьолсет Моллер Дж., Олесен Ф., Дженсен Дж.С. Mycoplasma genitalium : распространенность и поведенческие факторы риска среди населения в целом.Секс Трансм Инфекция. 2007; 83: 237–41. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10. Такахаши С., Такэяма К., Миямото С., Ичихара К., Маэда Т., Кунишима Ю. и др. Обнаружение ДНК Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Ureaplasma parvum в моче бессимптомных здоровых молодых японских мужчин. J заразить Chemother. 2006; 12: 269–71. [PubMed] [Google Scholar] 11. Тош А.К., Ван Дер Пол Б., Фортенберри Д.Д., Уильямс Д.А., Кац Б.П., Баттейгер Б.Э. и др. Mycoplasma genitalium среди женщин-подростков и их партнеров.Дж Адолеск Здоровье. 2007;40:412–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Wroblewski JK, Manhart LE, Dickey KA, Hudspeth MK, Totten PA. Сравнение результатов опосредованной транскрипцией амплификации и ПЦР для различных типов образцов половых органов для обнаружения Mycoplasma genitalium . Дж. Клин Микробиол. 2006;44:3306–12. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Дженсен Дж.С. Инфекции Mycoplasma genitalium . Диагностика, клиника и патогенез. Дэн Мед Булл.2006; 53:1–27. [PubMed] [Google Scholar] 14. Тейлор-Робинсон Д., Талли Дж. Г., Ферр П. М., Коул Р. М., Роуз Д. Л., Ханна Н. Ф. Урогенитальные микоплазменные инфекции человека: обзор с наблюдениями за недавно обнаруженной микоплазмой. Isr J Med Sci. 1981; 17: 524–30. [PubMed] [Google Scholar] 15. Талли Дж.Г., Тейлор-Робинсон Д., Роуз Д.Л., Коул Р.М., Боув Дж.М. Mycoplasma genitalium , новый вид из мочеполового тракта человека. Int J Syst Bacteriol. 1983; 33: 387–96. [Google Академия] 16. Тейлор-Робинсон Д. Лекция Харрисона.История и роль Mycoplasma genitalium в заболеваниях, передающихся половым путем. Генитурин Мед. 1995; 71: 1–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Разин С. Микоплазма. В: Boricello SP, Murray PR, Funke G, редакторы. Микробиология Топли и Уилсона и микробные инфекции. 10-е изд. Лондон: Ходдер Арнольд; 2005. стр. 1957–2005. [Google Академия] 18. Fraser CM, Gocayne JD, White O, Adams MD, Clayton RA, Fleischmann RD, et al. Минимальный набор генов Mycoplasma genitalium.Наука. 1995; 270:397–403. [PubMed] [Google Scholar] 19. Пейс Х. Игра в Бога с синтетической жизнью? Начиная с проекта минимального генома. Пасха Тройной спирали. 2009: 8–9. [Google Академия] 20. Ekiel A, Jozwiak J, Martirosian G. Mycoplasma genitalium: значительный урогенитальный патоген? Медицинский научный монит. 2009;15:RA102–6. [PubMed] [Google Scholar] 21. Разин С., Джейкобс Э. Микоплазменная адгезия. J Gen Microbiol. 1992; 138: 407–22. [PubMed] [Google Scholar] 22. Инамин Дж. М., Лехель С., Ху ПК. Анализ нуклеотидной последовательности оперона P1 Mycoplasma pneumoniae .Ген. 1988; 73: 175–83. [PubMed] [Google Scholar] 23. Инамин Дж. М., Лехель С., Коллиер А. М., Бариле М. Ф., Ху ПК. Нуклеотидная последовательность оперона MgPa (mgp) Mycoplasma genitalium и сравнение с опероном P1 (mpp) Mycoplasma pneumoniae . Ген. 1989; 82: 259–67. [PubMed] [Google Scholar] 24. Редди С.П., Расмуссен В.Г., Бейсмен Дж.Б. Молекулярное клонирование и характеристика связанного с прилипанием оперона Mycoplasma genitalium . J Бактериол. 1995; 177: 5943–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25.Burgos R, Pich OQ, Ferrer-Navarro M, Baseman JB, Querol E, Pinol J. Mycoplasma genitalium Цитаадгезины P140 и P110 реципрокно стабилизируются и необходимы для клеточной адгезии и развития терминальных органелл. J Бактериол. 2006; 188:8627–37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]26. Бейсмен Дж. Б., Далло С. Ф., Талли Дж. Г., Роуз Д. Л. Выделение и характеристика штаммов Mycoplasma genitalium из дыхательных путей человека. Дж. Клин Микробиол. 1988; 26: 2266–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]27.Lo SC, Hayes MM, Kotani H, Pierce PF, Wear DJ, Newton PB, 3rd, и др. Адгезия и инвазия в клетки млекопитающих микоплазм пенетранс: недавно выделенная микоплазма от больных СПИДом. Мод Патол. 1993; 6: 276–80. [PubMed] [Google Scholar] 28. Тейлор-Робинсон Д., Саратчандра П., Ферр П.М. Mycoplasma fermentans — взаимодействие клеток HeLa. Клин Инфекция Дис. 1993; 17 (Приложение 1): S302–4. [PubMed] [Google Scholar] 29. Тейлор-Робинсон Д., Дэвис Х.А., Саратчандра П., Ферр П.М. Внутриклеточное расположение микоплазм в культивируемых клетках показано методами иммуноцитохимии и электронной микроскопии.Int J Exp Pathol. 1991; 72: 705–14. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. Мерно Г.Р., Далло С.Ф., Холт С.К., Бейсмен Дж.Б. Свойства прикрепляющихся и неприкрепляющихся популяций Mycoplasma genitalium . Клин Инфекция Дис. 1993; 17 (Приложение 1): S69–78. [PubMed] [Google Scholar] 31. Игрок с низов Дж. Б., Ланге М., Криссиманья Н. Л., Хирон Дж. А., Томас К. А. Взаимодействие между микоплазмами и клетками-мишенями хозяина. Микроб Патог. 1995; 19: 105–16. [PubMed] [Google Scholar] 32. Далло С.Ф., бейсмен Дж.Б. Репликация внутриклеточной ДНК и долговременное выживание патогенных микоплазм.Микроб Патог. 2000; 29: 301–9. [PubMed] [Google Scholar] 34. Роттем С. Взаимодействие микоплазм с клетками-хозяевами. Physiol Rev. 2003; 83: 417–32. [PubMed] [Google Scholar] 35. Уэно П.М., Тименецки Дж., Сентонзе В.Е., Вевер Дж.Дж., Кейгл М., Штейн М.А. и соавт. Взаимодействие Mycoplasma genitalium с клетками-хозяевами: свидетельство ядерной локализации. Микробиология. 2008; 154:3033–41. [PubMed] [Google Scholar] 36. Svenstrup HF, Fedder J, Kristoffersen SE, Trolle B, Birkelund S, Christiansen G. Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis и трубное бесплодие – проспективное исследование. Фертил Стерил. 2008; 90: 513–20. [PubMed] [Google Scholar] 37. Альварес Р.А., Блейлок М.В., Бейсмен Дж.Б. Локализованная на поверхности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа Mycoplasma genitalium связывает муцин. Мол микробиол. 2003;48:1417–25. [PubMed] [Google Scholar] 38. Блейлок М.В., Мусатовова О., Бейсмен Дж.Г., Бейсмен Дж.Б. Определение инфекционной нагрузки Mycoplasma genitalium в клинических образцах вагинальных клеток человека. Дж. Клин Микробиол. 2004; 42: 746–52. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]39.Дхандаютхапани С., Блейлок М.В., Бебер К.М., Расмуссен В.Г., Бейсмен Дж.Б. Пептид метионинсульфоксидредуктазы (MsrA) является детерминантой вирулентности Mycoplasma genitalium . J Бактериол. 2001; 183:5645–50. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]40. Ibsen HH, Moller BR, Halkier-Sorensen L, From E. Лечение негонококкового уретрита: сравнение офлоксацина и эритромицина. Секс Трансм Дис. 1989; 16:32–5. [PubMed] [Google Scholar]41. Stamm WE, Hicks CB, Martin DH, Leone P, Hook EW, 3rd, Cooper RH и др.Азитромицин для эмпирического лечения синдрома негонококкового уретрита у мужчин. Рандомизированное двойное слепое исследование. ДЖАМА. 1995; 274: 545–9. [PubMed] [Google Scholar]42. Хайман Х.К., Йогев Д., Разин С. ДНК-зонды для обнаружения и идентификации Mycoplasma pneumoniae и Mycoplasma genitalium . Дж. Клин Микробиол. 1987; 25: 726–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]43. Дженсен Дж.С., Ульдум С.А., Сондергард-Андерсен Дж., Вууст Дж., Линд К. Полимеразная цепная реакция для обнаружения Mycoplasma genitalium в клинических образцах.Дж. Клин Микробиол. 1991; 29:46–50. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]44. Horner PJ, Gilroy CB, Thomas BJ, Naidoo RO, Taylor-Robinson D. Ассоциация Mycoplasma genitalium с острым негонококковым уретритом. Ланцет. 1993; 342: 582–5. [PubMed] [Google Scholar]45. Тейлор-Робинсон Д., Талли Дж. Г., Бариле М. Ф. Уретральная инфекция у самцов шимпанзе, полученная экспериментально с помощью Mycoplasma genitalium . Br J Exp патол. 1985; 66: 95–101. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46.Талли Дж.Г., Тейлор-Робинсон Д., Роуз Д.Л., Ферр П.М., Грэм К.Е., Бариле М.Ф. Урогенитальное заражение видов приматов Mycoplasma genitalium и характеристики инфекции, индуцированной у шимпанзе. J заразить дис. 1986; 153:1046–54. [PubMed] [Google Scholar]47. Бланшар А., Хэмрик В., Даффи Л., Бальдус К., Касселл Г.Х. Использование полимеразной цепной реакции для выявления Mycoplasma fermentans и Mycoplasma genitalium в урогенитальном тракте и амниотической жидкости. Клин Инфекция Дис.1993; 17 (Приложение 1): S272–9. [PubMed] [Google Scholar]48. Keane FE, Thomas BJ, Gilroy CB, Renton A, Taylor-Robinson D. Ассоциация Chlamydia trachomatis и Mycoplasma genitalium с негонококковым уретритом: наблюдения за гетеросексуальными мужчинами и их партнершами. Int J STD AIDS. 2000; 11: 435–9. [PubMed] [Google Scholar]49. de Barbeyrac B, Bernet-Poggi C, Febrer F, Renaudin H, Dupon M, Bebear C. Обнаружение Mycoplasma pneumoniae и Mycoplasma genitalium в клинических образцах методом полимеразной цепной реакции.Клин Инфекция Дис. 1993; 17 (Приложение 1): S83–9. [PubMed] [Google Scholar]50. Gambini D, Decleva I, Lupica L, Ghislanzoni M, Cusini M, Alessi E. Mycoplasma genitalium у мужчин с негонококковым уретритом: распространенность и клиническая эффективность эрадикации. Секс Трансм Дис. 2000; 27: 226–9. [PubMed] [Google Scholar]51. Бьорнелиус Э., Лидбринк П., Дженсен Дж.С. Mycoplasma genitalium при негонококковом уретрите — исследование у шведских пациентов мужского пола, страдающих ЗППП. Int J STD AIDS. 2000; 11: 292–6. [PubMed] [Google Scholar]52.Йоханниссон Г., Энстром Ю., Лоухаген Г.Б., Надь В., Райберг К., Сиберг С. и др. Возникновение и лечение Mycoplasma genitalium у пациентов, посещающих клиники ЗППП в Швеции. Int J STD AIDS. 2000; 11: 324–6. [PubMed] [Google Scholar]53. Маэда С., Тамаки М., Накано М., Уно М., Дегучи Т. , Кавада Ю. Обнаружение Mycoplasma genitalium у пациентов с уретритом. Дж Урол. 1998;159:405–7. [PubMed] [Google Scholar]54. Дегучи Т., Комеда Х., Ясуда М., Тада К., Ивата Х., Асано М. и др. Mycoplasma genitalium при негонококковом уретрите.Int J STD AIDS. 1995; 6: 144–5. [PubMed] [Google Scholar]55. Манхас А., Сетхи С., Шарма М., Ванчу А., Канвар А.Дж., Каур К. и др. Ассоциация генитальных микоплазм, включая Mycoplasma genitalium , у ВИЧ-инфицированных мужчин с негонококковым уретритом, посещающих клиники ЗППП и ВИЧ. Индийская J Med Res. 2009;129:305–10. [PubMed] [Google Scholar]56. Боуи В.Р., Александр Э.Р., Стимсон Дж.Б., Флойд Дж.Ф., Холмс К.К. Терапия негонококкового уретрита: двойное слепое рандомизированное сравнение двух доз и двух продолжительностей приема миноциклина.Энн Интерн Мед. 1981; 95: 306–11. [PubMed] [Google Scholar]57. Вонг Э.С., Хутон ТМ, Хилл К.С., Маккевитт М., Стамм В.Е. Клинико-микробиологические особенности персистирующего или рецидивирующего негонококкового уретрита у мужчин. J заразить дис. 1988; 158:1098–101. [PubMed] [Google Scholar]58. Маэда С.И., Тамаки М., Кодзима К., Ёсида Т., Ишико Х., Ясуда М. и др. Ассоциация персистенции Mycoplasma genitalium в уретре с рецидивом негонококкового уретрита. Секс Трансм Дис. 2001; 28: 472–6. [PubMed] [Google Scholar]59.Кригер Дж. Н., Райли Д. Е., Робертс М. С., Бергер Р. Е. Последовательности прокариотической ДНК у больных хроническим идиопатическим простатитом. Дж. Клин Микробиол. 1996; 34:3120–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60. Тейлор-Робинсон Д. Микоплазма гениталиум — обновление. Int J STD AIDS. 2002; 13: 145–51. [PubMed] [Google Scholar]61. Уно М., Дегучи Т., Комеда Х., Хаясаки М., Иида М., Нагатани М. и др. Mycoplasma genitalium в шейке матки японских женщин. Секс Трансм Дис. 1997; 24: 284–6. [PubMed] [Google Scholar]62.Manhart LE, Critchlow CW, Holmes KK, Dutro SM, Eschenbach DA, Stevens CE, et al. Слизисто-гнойный цервицит и Mycoplasma genitalium . J заразить дис. 2003; 187: 650–7. [PubMed] [Google Scholar]63. Cohen CR, Manhart LE, Bukusi EA, Astete S, Brunham RC, Holmes KK, et al. Ассоциация между Mycoplasma genitalium и острым эндометритом. Ланцет. 2002; 359: 765–6. [PubMed] [Google Scholar]64. Ирвин К.Л., Мурман А.С., О’Салливан М.Дж., Сперлинг Р., Кестлер М.Е., Сото И. и др.Влияние инфекции вируса иммунодефицита человека на воспалительные заболевания органов малого таза. Акушерство Гинекол. 2000;95:525–34. [PubMed] [Google Scholar]65. Симмс И., Истик К., Маллинсон Х., Томас К., Гокхале Р., Хэй П. и др. Связь между Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis и воспалительными заболеваниями органов малого таза. Секс Трансм Инфекция. 2003; 79: 154–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]66. Palmer HM, Gilroy CB, Claydon EJ, Taylor-Robinson D. Обнаружение Mycoplasma genitalium в мочеполовых путях женщин с помощью полимеразной цепной реакции.Int J STD AIDS. 1991; 2: 261–3. [PubMed] [Google Scholar]67. Keane FE, Thomas BJ, Gilroy CB, Renton A, Taylor-Robinson D. Ассоциация Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma genitalium с бактериальным вагинозом: наблюдения за гетеросексуальными женщинами и их партнерами-мужчинами. Int J STD AIDS. 2000; 11: 356–60. [PubMed] [Google Scholar]68. Lu GC, Schwebke JR, Duffy LB, Cassell GH, Hauth JC, Andrews WW, et al. Вагинальный в середине триместра Mycoplasma genitalium у женщин с последующими спонтанными преждевременными родами.Am J Obstet Gynecol. 2001; 185:163–5. [PubMed] [Google Scholar]69. Окшот П., Хэй П., Тейлор-Робинсон Д., Хэй С., Дон Б., Керри С. и др. Распространенность Mycoplasma genitalium на ранних сроках беременности и взаимосвязь между ее присутствием и исходом беременности. БЖОГ. 2004; 111:1464–7. [PubMed] [Google Scholar]70. Clausen HF, Fedder J, Drasbek M, Nielsen PK, Toft B, Ingerslev HJ, et al. Серологическое исследование Mycoplasma genitalium у женщин с бесплодием. Хум Репрод. 2001; 16: 1866–74. [PubMed] [Google Scholar]71.Ёкои С., Маэда С., Кубота Ю., Тамаки М., Мизутани К., Ясуда М. и др. Роль Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum биовара 2 при постгонококковом уретрите. Клин Инфекция Дис. 2007; 45: 866–71. [PubMed] [Google Scholar]72. Уно М., Дегучи Т., Комеда Х., Ясуда М., Тамаки М., Маэда С. и др. Распространенность Mycoplasma genitalium у мужчин с гонококковым уретритом. Int J STD AIDS. 1996; 7: 443–4. [PubMed] [Google Scholar]73. Гайдос С., Мальдейс Н.Е., Хардик А., Хардик Дж., Куинн Т.С. Mycoplasma genitalium как фактор множественной этиологии цервицита у женщин, посещающих венерологические клиники. Секс Трансм Дис. 2009; 36: 598–606. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]74. Пепин Дж., Собела Ф., Десландес С., Алари М., Вегнер К., Хонде Н. и др. Этиология выделений из уретры в Западной Африке: роль Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis . Всемирный орган здравоохранения Быка. 2001; 79: 118–26. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]75.Амирмозафари Н., Мирнеджад Р., Каземи Б., Сарири Э., Боджари М.Р., Даркахи Ф.Д. Одновременное выявление генитальной микоплазмы у женщин с генитальными инфекциями методом ПЦР. J Biol Sci. 2009; 9: 804–9. [Google Академия]76. Мирнеджад Р., Амирмозафари Н., Каземи Б. Одновременная и экспресс-дифференциальная диагностика Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum на основе полиморфизма длины рестрикционных фрагментов полимеразной цепной реакции. Индийская J Med Microbiol. 2011;29:33–6. [PubMed] [Google Scholar]77.Самра З., Розенберг С., Мадар-Шапиро Л. Прямое одновременное обнаружение 6 патогенов, передающихся половым путем, в клинических образцах с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции и аутокапиллярного электрофореза. Диагностика Microbiol Infect Dis. 2011;70:17–21. [PubMed] [Google Scholar]78. Тейт И.А., Харт К.А. Chlamydia trachomatis у пациентов с негонококковым уретритом и их гетеросексуальных партнеров: рутинное тестирование методом полимеразной цепной реакции. Секс Трансм Инфекция. 2002; 78: 286–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]79.Куинн Т.С., Гайдос С., Шеперд М., Бобо Л., Крюк Э.В., 3-й, Висциди Р. и др. Эпидемиологические и микробиологические корреляты инфекции Chlamydia trachomatis при половых связях. ДЖАМА. 1996; 276:1737–42. [PubMed] [Google Scholar]80. Росс Дж.Д., Дженсен Дж.С. Mycoplasma genitalium как инфекция, передающаяся половым путем: значение для скрининга, тестирования и лечения. Секс Трансм Инфекция. 2006; 82: 269–71. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]81. Уэйтс К.Б., Тейлор-Робинсон Д. Микоплазма и уреаплазма.В: Мюррей П.Р., Барон Э.Дж., Йоргенсен Дж.Х., Лэндри М.Л., Пфаллер М.А., редакторы. Руководство по клинической микробиологии. 9-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2007. стр. 1004–20. [Google Академия]82. Кенни Г.Э. Генитальные микоплазмы: виды Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и Ureaplasma . В: Манделл Г.Л., Беннетт Дж.Е., Долин Р. , редакторы. Принципы и практика инфекционных заболеваний. 7-е изд. Филадельфия: Черчилль Ливингстон; 2010. С. 2491–3. [Google Академия]83. Дженсен Дж.С., Хансен Х.Т., Линд К.Выделение штаммов Mycoplasma genitalium из мочеиспускательного канала мужчины. Дж. Клин Микробиол. 1996; 34: 286–91. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]84. Хуссейн А.И., Робсон В.Л., Келли Р., Рид Т., Гангеми Д.Д. Mycoplasma penetrans и другие микоплазмы в моче детей, инфицированных вирусом иммунодефицита человека. Дж. Клин Микробиол. 1999; 37: 1518–23. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]85. Хоппс Х.Е., Дель Джудиче Р.А. Модели клеточных культур как вспомогательные инструменты при выделении и характеристике микоплазм.Isr J Med Sci. 1984; 20: 927–30. [PubMed] [Google Scholar]86. Гобель У.Б., Гейзер А., Стэнбридж Э.Дж. Олигонуклеотидные зонды, комплементарные вариабельным областям рибосомной РНК, позволяют различать виды Mycoplasma. J Gen Microbiol. 1987; 133: 1969–74. [PubMed] [Google Scholar]87. Дженсен Дж.С., Сондергард-Андерсен Дж., Ульдум С.А., Линд К. Обнаружение Mycoplasma pneumoniae в смоделированных клинических образцах с помощью полимеразной цепной реакции. Краткий отчет. АПМИС. 1989; 97: 1046–8. [PubMed] [Google Scholar]88.Риси Г.Ф., младший, Мартин Д.Х., Зильберман Дж.А., Коэн Дж.К. ДНК-зонд для обнаружения Mycoplasma genitalium в клинических образцах. Молекулярные зонды. 1987; 1: 327–35. [PubMed] [Google Scholar]89. Hooton TM, Roberts MC, Roberts PL, Holmes KK, Stamm WE, Kenny GE. Распространенность Mycoplasma genitalium определена с помощью ДНК-зонда у мужчин с уретритом. Ланцет. 1988; 1: 266–8. [PubMed] [Google Scholar]90. Дженсен Дж. С., Бьорнелиус Э., Дон Б., Лидбринк П. Использование TaqMan 5’-нуклеазы ПЦР в реальном времени для количественного обнаружения ДНК Mycoplasma genitalium у мужчин с уретритом и без него, которые посещали клинику заболеваний, передающихся половым путем.Дж. Клин Микробиол. 2004; 42: 683–92. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]91. Петерсон С.Н., Бейли К.С., Дженсен Дж.С., Борре М.Б., Кинг Э.С., Ботт К.Ф. и др. Характеристика повторяющейся ДНК в геноме Mycoplasma genitalium : возможная роль в возникновении антигенных вариаций. Proc Natl Acad Sci USA. 1995; 92:11829–33. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]92. Дженсен Дж.С., Орсум Р., Дон Б., Ульдум С., Ворм А.М., Линд К. Mycoplasma genitalium : причина мужского уретрита? Генитурин Мед.1993; 69: 265–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]93. Дженсен Дж. С., Борре М. Б., Дон Б. Обнаружение Mycoplasma genitalium с помощью ПЦР-амплификации гена 16S рРНК. Дж. Клин Микробиол. 2003; 41: 261–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]94. Палмер Х.М., Гилрой К.Б., Ферр П.М., Тейлор-Робинсон Д. Разработка и оценка полимеразной цепной реакции для обнаружения Mycoplasma genitalium . FEMS Microbiol Lett. 1991; 61: 199–203. [PubMed] [Google Scholar]95. Ёсида Т., Дегучи Т., Ито М., Маэда С., Тамаки М., Ишико Х. Количественное обнаружение Mycoplasma genitalium в моче при первом прохождении мочи мужчин с уретритом и бессимптомных мужчин с помощью ПЦР в реальном времени. Дж. Клин Микробиол. 2002; 40:1451–5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]96. Дюпен Н., Бижауи Г., Шварцингер М., Эрно П., Герхардт П., Дждид Р. и соавт. Обнаружение и количественная оценка Mycoplasma genitalium у пациентов мужского пола с уретритом. Клин Инфекция Дис. 2003; 37: 602–5. [PubMed] [Google Scholar]97. Эдберг А., Юрстранд М., Йоханссон Э., Викандер Э., Хуг А., Альквист Т. и др.Сравнительное исследование трех различных ПЦР-анализов для обнаружения Mycoplasma genitalium в урогенитальных образцах мужчин и женщин. J Med Microbiol. 2008; 57: 304–9. [PubMed] [Google Scholar]98. Ма Л., Дженсен Дж. С., Майерс Л., Бернетт Дж., Уэлч М., Цзя К. и др. Mycoplasma genitalium : эффективная стратегия создания генетических вариаций из минимального генома. Мол микробиол. 2007; 66: 220–36. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]99. Вайнштейн С.А., Стайлз Б.Г. Обзор эпидемиологии, диагностики и доказательной медицины Mycoplasma genitalium .Сексуальное здоровье. 2011; 8: 143–58. [PubMed] [Google Scholar] 100. Taylor-Robinson D, Bebear C. Чувствительность микоплазм к антибиотикам и лечение микоплазменных инфекций. J Антимикробная химиотерапия. 1997; 40: 622–30. [PubMed] [Google Scholar] 101. Renaudin H, Tully JG, Bebear C. In vitro чувствительность Mycoplasma genitalium к антибиотикам. Противомикробные агенты Chemother. 1992; 36: 870–2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]102. Bebear CM, Renaudin H, Bryskier A, Bebear C.Сравнительная активность телитромицина (HMR 3647), левофлоксацина и других противомикробных препаратов в отношении микоплазм человека. Противомикробные агенты Chemother. 2000;44:1980–2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]103. Bebear CM, Renaudin H, Schaeverbeke T, Leblanc F, Bebear C. Активность in vitro грепафлоксацина, нового фторхинолона, против микоплазм. J Антимикробная химиотерапия. 1999;43:711–4. [PubMed] [Google Scholar] 104. Bebear CM, Renaudin H, Charron A, Gruson D, Lefrancois M, Bebear C. Активность тровафлоксацина in vitro по сравнению с активностью пяти противомикробных препаратов против микоплазм, включая Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum , устойчивые к фторхинолонам генетически охарактеризованы.Противомикробные агенты Chemother. 2000;44:2557–60. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]105. Hannan PC, Woodnutt G. In vitro активность гемифлоксацина (SB 265805; LB20304a) против микоплазм человека. J Антимикробная химиотерапия. 2000;45:367–9. [PubMed] [Google Scholar] 106. Маккормак ВМ. Инфекции, вызванные микоплазмами. В: Фаучи А.С., Браунвальд Э., Каспер Д.Л., Хаузер С.Л., Лонго Д.Л., Джеймсон Д.Л., редакторы. Принципы внутренней медицины Харрисона. 17-е изд. Нью-Йорк: McGraw-Hill Medical; 2008. с.1068–70. [Google Академия] 107. Тейлор-Робинсон Д., Гилрой С.Б., Хей Ч. П. Встречаемость Mycoplasma genitalium в различных популяциях и ее клиническое значение. Клин Инфекция Дис. 1993; 17 (Приложение 1): S66–8. [PubMed] [Google Scholar] 108. Хорнер П., Томас Б., Гилрой С.Б., Эггер М., Тейлор-Робинсон Д. Роль Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum при остром и хроническом негонококковом уретрите. Клин Инфекция Дис. 2001; 32: 995–1003. [PubMed] [Google Scholar] 109.Casin I, Vexiau-Robert D, De La Salmoniere P, Eche A, Grandry B, Janier M. Высокая распространенность Mycoplasma genitalium в нижних отделах мочеполового тракта у женщин, посещающих клинику заболеваний, передающихся половым путем, в Париже, Франция. Секс Трансм Дис. 2002; 29: 353–9. [PubMed] [Google Scholar] 110. Пепин Дж., Лаббе А.С., Хонде Н., Десландес С., Алари М., Дзокото А. и др. Mycoplasma genitalium : микроорганизм, обычно вызывающий цервицит у работников секс-бизнеса в Западной Африке. Секс Трансм Инфекция.2005; 81: 67–72. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]111. Анагриус С., Лор Б., Дженсен Дж.С. Mycoplasma genitalium : распространенность, клиническое значение и передача. Секс Трансм Инфекция. 2005; 81: 458–62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]112. Фальк Л., Фредлунд Х., Дженсен Дж.С. Признаки и симптомы уретрита и цервицита у женщин с инфекцией Mycoplasma genitalium или Chlamydia trachomatis или без нее. Секс Трансм Инфекция. 2005; 81: 73–78. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]113.Korte JE, Baseman JB, Cagle MP, Herrera C, Piper JM, Holden AE, et al. Цервицит и симптомы мочеполовой системы у женщин с положительной культурой на Mycoplasma genitalium . Am J Reprod Immunol. 2006; 55: 265–75. [PubMed] [Google Scholar] 114. Коэн К.Р., Носек М., Мейер А., Астете С.Г., Иверсон-Кабрал С., Муго Н.Р. и соавт. Инфекция Mycoplasma genitalium и персистенция в когорте работниц коммерческого секса в Найроби, Кения. Секс Трансм Дис. 2007; 34: 274–9. [PubMed] [Google Scholar] 115. Хогдал М., Килстром Э.Анализ на лейкоцитарную эстеразу первой порции мочи и мазков из уретры и шейки матки для выявления мужчин и женщин, инфицированных Mycoplasma genitalium. Int J STD AIDS. 2007; 18:835–8. [PubMed] [Google Scholar] 116. Юпперт Дж. С., Мортенсен Дж. Э., Рид Дж. Л., Кан Дж. А., Рич К. Д., Хоббс М. М. Mycoplasma genitalium , обнаруженная с помощью транскрипционно-опосредованной амплификации, ассоциирована с Chlamydia trachomatis у женщин-подростков. Секс Трансм Дис. 2008; 35: 250–4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]117. Arraiz RN, Colina CS, Marcucci JR, Rondon GN, Reyes SF, Bermúdez PV, et al.Выявление Mycoplasma genitalium и корреляция с клиническими проявлениями у населения штата Сулия, Венесуэла. Преподобный Чилена Инфектол. 2008; 25: 256–61. [PubMed] [Google Scholar] 118. Манхарт Л.Е., Мостад С.Б., Баетен Дж.М., Астете С.Г., Мандалия К., Тоттен П.А. Высокая нагрузка на организм Mycoplasma genitalium связана с выделением ДНК ВИЧ-1 из шейки матки. J заразить дис. 2008; 197: 733–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]119. Moi H, Reinton N, Moghaddam A. Mycoplasma genitalium связана с симптоматическим и бессимптомным негонококковым уретритом у мужчин.Секс Трансм Инфекция. 2009;85:15–8. [PubMed] [Google Scholar] 120. Турман А.Р., Мусатовова О., Пердью С., Шаин Р.Н., Бейсман Дж.Г., Бейсман Дж.Б. Mycoplasma genitalium симптомы, соответствие и лечение в сексуальных парах высокого риска. Int J STD AIDS. 2010;21:177–83. [PubMed] [Google Scholar] 121. Le Roux MC, Ramoncha MR, Adam A, Hoosen AA. Этиологические агенты уретрита у южноафриканских мужчин с симптомами, посещающих семейную практику. Int J STD AIDS. 2010;21:477–81. [PubMed] [Google Scholar] 122. Шигехара К., Кавагути С., Сасагава Т., Фурубаяси К., Шимамура М., Маэда Ю. и др.Распространенность генитальной микоплазмы , уреаплазмы, гарднереллы и вируса папилломы человека у японских мужчин с уретритом и факторы риска для выявления уретральной папилломавирусной инфекции. J заразить Chemother. 2011;17:487–92. [PubMed] [Google Scholar] 123. Зимба Т.Ф., Апалата Т., Штурм В.А., Мудли П. Этиология инфекций, передающихся половым путем, в Мапуту, Мозамбик. J Infect Dev Cries. 2011;5:41–7. [PubMed] [Google Scholar]

Mycoplasma genitalium: для адекватного лечения необходима точная диагностика | Журнал инфекционных болезней

Аннотация

История вопроса

Mycoplasma genitalium очень трудно выращивать в культуре, но с появлением исследовательских методов молекулярной амплификации ее стало легче изучать на предмет ассоциации с заболеванием.Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие молекулярные анализы продемонстрировали связь с неблагоприятными исходами заболеваний, такими как уретрит или негонококковый уретрит у мужчин, и неблагоприятными репродуктивными последствиями у женщин, например, цервицитом, эндометритом и воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ), включая связь с риском заражения вирусом иммунодефицита человека. Отсутствие коммерчески доступных диагностических тестов ограничивает широкое распространение рутинных тестов. Растущие сообщения о высоких показателях резистентности к азитромицину, обнаруженной в научных исследованиях, повысили потребность в доступных коммерческих диагностических тестах, а также в стандартизированных методах обнаружения маркеров резистентности.В этом обзоре рассматриваются доступные молекулярные методы диагностики M. genitalium и тесты для прогнозирования чувствительности антибиотиков к азитромицину.

Методы

В PubMed (Национальная медицинская библиотека США и Национальные институты здравоохранения) был проведен поиск литературы, опубликованной в период с 2000 по 2016 год, с использованием поисковых терминов Mycoplasma genitalium, M. genitalium, диагностика и обнаружение.

Результаты

Первые диагностические ПЦР-тесты были сосредоточены на гене адгезии MPa и гене рибосомной РНК 16S.Впоследствии был разработан анализ опосредованной транскрипцией амплификации, нацеленный на рибосомы, и он широко использовался для изучения эпидемиологии M. genitalium . Получили распространение новые методы, в том числе количественная ПЦР для определения нагрузки организмом, ПЦР AmpliSens, ПЦР для гена pdhD, микрочип на основе ПЦР для множественных инфекций, передающихся половым путем, и мультиплексная ПЦР. Ни один из них еще не одобрен Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, хотя некоторые анализы имеют маркировку CE в Европе.Кроме того, многие исследовательские методы, включая ПЦР, секвенирование генов и анализ кривых плавления, были разработаны для обнаружения мутаций гена 23S рибосомной РНК, которые придают устойчивость к азитромицину. Один недавно разработанный тест может одновременно тестировать как M. genitalium , так и мутации устойчивости к азитромицину.

Выводы

Рекомендуется, чтобы больше коммерческих анализов как для диагностики этого микроорганизма, так и для определения выбора лечения, были разработаны и доступны после одобрения регулирующими органами. Необходимы исследования, чтобы установить экономическую эффективность планового тестирования M. genitalium у пациентов с симптомами и скрининга у всех лиц с высоким риском заражения и передачи инфекций, передающихся половым путем.

Mollicute Mycoplasma genitalium — прихотливая облигатная внутриклеточная бактерия и самая маленькая из прокариот, способных к саморепликации [1]. Его крошечный геном имеет длину 580 т.п.н. и содержит 482 гена, кодирующих белок [1, 2]. Хотя выращивать M.genitalium была впервые выделена Tully et al. [3] из уретральных образцов, полученных от мужчин с уретритом (негонококковым) в 1981 г. Культура ткани используется для улучшения восстановления организма, но медленный рост и громоздкие методы обнаружения препятствуют рутинному использованию этого метода. для диагностики [4]. Бактерия стала лучше изучаться на предмет ассоциации с заболеванием с появлением исследовательских методов молекулярной амплификации, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и анализы амплификации, опосредованные транскрипцией (ТМА) [5–10].

С момента появления таких молекулярных анализов микроорганизм был связан со многими неблагоприятными исходами заболеваний, такими как уретрит или негонококковый уретрит у мужчин и многими неблагоприятными репродуктивными последствиями у женщин, включая цервицит, эндометрит и ВЗОМТ [11–16]. Существует также тесная связь с риском заражения вирусом иммунодефицита человека [17]. Однако отсутствие диагностического теста, одобренного Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), серьезно ограничило доступность тестирования у лиц с симптомами и без симптомов из группы высокого риска.Растущую озабоченность по поводу лечения заболеваний, вызванных M. genitalium , вызывают сообщения о росте показателей резистентности к азитромицину [18]. Возникающая роль M. genitalium в качестве возбудителя инфекции, передающейся половым путем (ИППП), была всесторонне рассмотрена Taylor-Robinson and Jensen [19] и Manhart [11]. Этот обзор посвящен новым молекулярным методам диагностики M. genitalium и анализам для прогнозирования чувствительности антибиотиков к азитромицину.

МЕТОДЫ

В PubMed (Национальной медицинской библиотеке США и Национальном институте здравоохранения) был проведен поиск литературы, опубликованной в период с 2000 по 2016 год, с использованием следующих поисковых терминов: Mycoplasma genitalium, M. genitalium, диагностика и обнаружение. Был получен список из 1003 опубликованных статей. Статьи были просмотрены и проанализированы на наличие методов диагностики амплификационными и молекулярными методами, а также на предмет диагностики маркеров резистентности.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Диагностика синдромов, связанных с

M. genitalium

Уретрит у мужчин был первым синдромом, связанным с Mycoplasma . Диагноз и причины уретрита хорошо известны и недавно были рассмотрены Bachmann et al. [20]. Этот обзор охватывал M. genitalium как возможную причину уретрита. Хотя во многих исследованиях для диагностики уретрита использовался критерий окрашивания уретры по Граму с наличием ≥5 полиморфноядерных лейкоцитов в поле зрения при большом увеличении, многие хламидии и, возможно, M.genitalium может быть пропущена по этому критерию, и в настоящее время Центры по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать в качестве диагностического порога ≥2 полиморфноядерных лейкоцитов в поле зрения [20]. Персистенция уретрита после терапии была особенно связана с M. genitalium и может быть связана с подозрением на устойчивость к антибиотикам [21–22]. Однако есть и другие возможные причины, в том числе реинфекция, несоблюдение режима лечения, лекарственная устойчивость или постинфекционная иммунологическая реакция.Диагноз инфекции Mycoplasma и других ИППП у женщин с меньшей вероятностью связан с определенными симптоматическими состояниями и часто протекает бессимптомно. Микоплазма может быть обнаружена во влагалище, шейке матки и эндометрии. За последние несколько лет накопилось много новых данных, свидетельствующих о том, что M. genitalium является важной причиной болезненных явлений у женщин [11, 12, 15]. (См. статью на эту тему в этом приложении.)

Диагностика

М.гениталиум молекулярными методами

Хотя в настоящее время в Соединенных Штатах нет одобренных FDA анализов M. genitalium , исследовательские анализы, основанные на тестах амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), используются с начала 1990-х годов и обладают высокой чувствительностью и специфичностью для выявления многих инфекционных заболеваний. микроорганизмы, такие как хламидии, гонореи и трихомонады, а также M. genitalium [5–9]. Анализ, сформулированный Дженсеном и его коллегами [6–8], нацеленный на консервативную область гена 16S рибосомной РНК (рРНК), широко использовался в научных исследованиях (таблица 1).

Таблица 1. Избранные типы амплифицированных молекулярных тестов

для обнаружения Mycoplasma genitalium

9239 Ген 5
Тип теста . Наименование испытания . Генная мишень . Автор . Маркировка CE .
PCR NA MGPA MGPA Deguchi et al [5]
PCR NA MGPA;
16S рРНК
Jensen et al [6–8] No
ПЦР Дуплекс ПЦР MgPA;
16S RRNA
Hardick et al [9] NO
APTima MG 23S RRNA 23S RRNA Hologic 23] / Getman et et al [24] Да
Мультиплекс PCR STD Finder MLPA MUVUUNYI et al [25] NO
Multilex PCR Bio-Rad DX NA Le Roy et al [26]
QPCR ПЦР в реальном времени pdhD Мюллер и др [27] Нет
Multiplex КПЦР AmpliSense GyrB Румянцева и др [28] Да
ДНК-микрочипов Multiplex Микрочип на основе ПЦР 16S рРНК Cao et al [29] Нет
кПЦР Диагенод S-DiaMGTV van Alphen et al [30] Да
ПЦР в реальном времени
сравнение
TIB MOLBIOL/
Roche and Diagenode M. Genitalium
MG219 и GAP Фрагменты генов Le Roy et al [31]
MulitPlex QPCR Plexzyme Speedx 23S RRNA;
выявляет устойчивые мутации
Tabrizi et al [44] Да
9239 Ген 5
Тип теста . Наименование испытания . Генная мишень . Автор . Маркировка CE .
PCR NA MGPA MGPA Deguchi et al [5]
PCR NA MGPA;
16S рРНК
Jensen et al [6–8] No
ПЦР Дуплекс ПЦР MgPA;
16S RRNA
Hardick et al [9] NO
APTima MG 23S RRNA 23S RRNA Hologic 23] / Getman et et al [24] Да
Мультиплекс PCR STD Finder MLPA MUVUUNYI et al [25] NO
Multilex PCR Bio-Rad DX NA Le Roy et al [26]
QPCR ПЦР в реальном времени pdhD Мюллер и др [27] Нет
Multiplex КПЦР AmpliSense GyrB Румянцева и др [28] Да
ДНК-микрочипов Multiplex Микрочип на основе ПЦР 16S рРНК Cao et al [29] Нет
кПЦР Диагенод S-DiaMGTV van Alphen et al [30] Да
ПЦР в реальном времени
сравнение
TIB MOLBIOL/
Roche and Diagenode M. Genitalium
MG219 и GAP Фрагменты генов Le Roy et al [31]
MulitPlex QPCR Plexzyme Speedx 23S RRNA;
обнаруживает устойчивые мутации
Tabrizi et al [44] Да
Таблица 1.

Выбранные типы усиленных молекулярных испытаний для обнаружения MyCoplasma Genitalium

9239 Ген 5
Тип теста . Наименование испытания . Генная мишень . Автор . Маркировка CE .
PCR NA MGPA MGPA Deguchi et al [5]
PCR NA MGPA;
16S рРНК
Jensen et al [6–8] No
ПЦР Дуплекс ПЦР MgPA;
16S RRNA
Hardick et al [9] NO
APTima MG 23S RRNA 23S RRNA Hologic 23] / Getman et et al [24] Да
Мультиплекс PCR STD Finder MLPA MUVUUNYI et al [25] NO
Multilex PCR Bio-Rad DX NA Le Roy et al [26]
QPCR ПЦР в реальном времени pdhD Мюллер и др [27] Нет
Multiplex КПЦР AmpliSense GyrB Румянцева и др [28] Да
ДНК-микрочипов Multiplex Микрочип на основе ПЦР 16S рРНК Cao et al [29] Нет
кПЦР Диагенод S-DiaMGTV van Alphen et al [30] Да
ПЦР в реальном времени
сравнение
TIB MOLBIOL/
Roche and Diagenode M. Genitalium
MG219 и GAP Фрагменты генов Le Roy et al [31]
MulitPlex QPCR Plexzyme Speedx 23S RRNA;
выявляет устойчивые мутации
Tabrizi et al [44] Да
9239 Ген 5
Тип теста . Наименование испытания . Генная мишень . Автор . Маркировка CE .
PCR NA MGPA MGPA Deguchi et al [5]
PCR NA MGPA;
16S рРНК
Jensen et al [6–8] No
ПЦР Дуплекс ПЦР MgPA;
16S RRNA
Hardick et al [9] NO
APTima MG 23S RRNA 23S RRNA Hologic 23] / Getman et et al [24] Да
Мультиплекс PCR STD Finder MLPA MUVUUNYI et al [25] NO
Multilex PCR Bio-Rad DX NA Le Roy et al [26]
QPCR ПЦР в реальном времени pdhD Мюллер и др [27] Нет
Multiplex КПЦР AmpliSense GyrB Румянцева и др [28] Да
ДНК-микрочипов Multiplex Микрочип на основе ПЦР 16S рРНК Cao et al [29] Нет
кПЦР Диагенод S-DiaMGTV van Alphen et al [30] Да
ПЦР в реальном времени
сравнение
TIB MOLBIOL/
Roche and Diagenode M. Genitalium
MG219 и GAP Фрагменты генов Le Roy et al [31]
MulitPlex QPCR Plexzyme Speedx 23S RRNA;
выявляет устойчивые мутации
Tabrizi et al [44] Да

Процесс разработки и использования лабораторией исследовательского диагностического теста в рамках одной лаборатории требует тщательного тестирования для подтверждения его точности и известен как лабораторно-разработанный тест ( LDT ).LDT — это лабораторные тесты, которые больницы, академические и клинические лаборатории разрабатывают как службы тестирования в соответствии со своими собственными процедурами. Они часто создаются в ответ на неудовлетворенные клинические потребности и могут использоваться для точной диагностики, а также для мониторинга и руководства лечением пациентов. LDT также используются для диагностики и оценки заболеваний и расстройств, для которых в настоящее время не существует утвержденного FDA тестового набора, например, для редких заболеваний.

Чтобы лаборатории в Соединенных Штатах могли использовать исследовательские МАНК, разработанные компанией, часто называемые тестами «только для научных исследований» (RUO), для диагностики и лечения заболеваний у пациентов, наблюдаемых в клинических условиях, каждая лаборатория должна пройти внутреннюю валидацию анализ, аналогичный процедуре, необходимой для LDT.В этом процессе каждая отдельная лаборатория проводит собственное исследование для сравнения анализа RUO с другим анализом аналита или сравнивает индивидуальные результаты лаборатории с результатами, полученными другой лабораторией, во многом аналогично тому, что FDA требует для LDT. Это дорогостоящий процесс, и его нелегко осуществить.

Следующим шагом на пути к коммерциализации для компании является подача тестовых реагентов в FDA для получения статуса реагента, специфичного для аналита (ASR).Это означает, что компания может продавать реагенты, но не в виде «набора» с контролями или контролями. Лаборатории все равно придется провести валидационное исследование, аналогичное процессу разработки LDR, чтобы использовать результаты этого анализа в клинических условиях, то есть для лечения пациентов. Очень немногие лаборатории сделали это. Только 1 компания получила статус ASR в Соединенных Штатах с тестом TMA, первоначально разработанным и предлагаемым в качестве анализа RUO компанией GenProbe/Hologic Company [9, 10]. Hardick et al. сообщили об общей чувствительности и специфичности продукта RUO у 607 человек как 98.1% и 98,1% соответственно по сравнению с двумя исследовательскими анализами (100% и 97,9% в образцах мочи у мужчин, соответственно, и 98,4% в образцах вагинальных мазков) [9]. Этот анализ M. genitalium TMA ASR теперь также имеет маркировку CE в Европе [23, 24]. Он широко использовался для многих исследований Mycoplasma и для изучения эпидемиологии M. genitalium [10, 13, 14, 21, 22]. Следующим шагом будет проведение клинических испытаний FDA, что является дорогостоящим процессом.

Термин CE возник как аббревиатура от conformité Européenne, означающая европейское соответствие, но этот термин не определен как таковой в соответствующем законодательстве. Маркировка CE является символом свободной продажи в Европейском экономическом пространстве (внутреннем рынке). Знак СЕ на анализе в Европе является заявлением производителя о том, что продукт соответствует основным требованиям соответствующих европейских законов о защите. Это означает, что продукты, продаваемые в Европейском экономическом пространстве, были оценены как отвечающие высоким требованиям безопасности, здоровья и защиты окружающей среды. Он обеспечивает свободное перемещение продукта в пределах Европейского Союза. Клиническая валидация по эталонному стандарту не требуется.

К счастью, большая группа других диагностических молекулярных методов, описанных ниже, была разработана как на международном, так и на национальном уровне, и некоторые из них начинают получать маркировку СЕ. Некоторые из них имеют большие перспективы для диагностических возможностей как для исследований, так и для клинического использования. Также было разработано несколько очень новых анализов (таблица 1).

При изучении нового мультиплексного ПЦР-анализа STDFinder было сообщено, что он обладает 100% специфичностью и 100% чувствительностью при обнаружении Mycoplasma, , но было выявлено только 3 случая [25].В технологии амплификации зонда, зависящей от мультиплексного лигирования, используется один анализ, который позволяет одновременно амплифицировать до 45 различных мишеней с использованием 1 универсального набора праймеров в окончательной амплификации.

Предварительная оценка эффективности анализа Bio-Rad Dx CT/NG/MG для обнаружения Chlamydia trachomatis, M. genitalium, и Neisseria gonorrhoeae в урогенитальных образцах показала, что по сравнению с внутренним ПЦР TaqMan для М.genitalium, , новый анализ имел специфичность для обнаружения M. genitalium , составляющую 99,5% для образцов мазков и 100% для образцов мочи женщин, но было обнаружено очень мало случаев Mycoplasma [26].

Müller et al. разработали и утвердили метод количественной ПЦР (КПЦР) в режиме реального времени для определения бактериальной нагрузки M. genitalium в образцах эндоцервикального мазка на основе амплификации гена pdhD, кодирующего дигидролипоамиддегидрогеназу, с использованием Rotor-Gene платформа [27].Анализ продемонстрировал предел обнаружения 300 копий генома/мл с использованием геномной ДНК G37 M. genitalium (ASTCC 33530D). В анализе был амплифицирован фрагмент гена pdhD из 82 пар оснований M. genitalium (нуклеотиды, соответствующие последовательности с GenBank № L43967.2). Анализ был специфичен для ДНК M. genitalium и не амплифицирует ДНК других видов Mycoplasma и Ureaplasma по сравнению с коммерческим анализом (Sacace Biotechnologies).Были протестированы только образцы эндоцервикального мазка. В 119 положительных образцах эндоцервикального мазка из 1600 загрузка M. genitalium варьировалась от <300 до 3240000 копий/мл с пределом обнаружения 10 копий на реакцию (или 300 копий/мл цервикального мазка). образец суспензии). Этот предел был аналогичен тому, который был обнаружен другими в образцах мочи мужчин [8]. Этот анализ кПЦР продемонстрировал хорошее обнаружение, воспроизводимость и специфичность и полезен для качественного и количественного анализа М.genitalium в эндоцервикальных и, возможно, других генитальных образцах [27].

Новый мультиплексный анализ AmpliSens в режиме реального времени с маркировкой CE N. gonorrhoeae / C.trachomatis/M.genitalium/T.vaginalis -MULTIPRIME-FRT ПЦР был оценен и сравнен с 4 тестами Aptima: анализ COMBO 2 , анализ Trichomonas vaginalis (одобрен FDA) и 2 разных анализа APTIMA M. genitalium RUO [28], один из которых использовался для анализа расхождений. В целом для М.genitalium мультиплексный ПЦР-анализ AmpliSens продемонстрировал 100% специфичность, но субоптимальную чувствительность (81,9%; 95% доверительный интервал, 70,7–89,7%). Эти результаты согласуются с ранее оцененными характеристиками однокомпонентного ПЦР-анализа AmpliSens M. genitalium . Интересно, что для вагинальных образцов была получена более низкая чувствительность (76,5%), в отличие от результатов многих предыдущих исследований с использованием других МАНК [28].

Исследование, проведенное в 2015 году, задокументировало микроматрицу на основе ПЦР, включающую 31 специфический зонд для одновременного обнаружения разнообразной панели из 17 инфекций, связанных с ИППП, включая N.gonorrhoeae, C. trachomatis, M. genitalium, M. hominis, Ureaplasma, вирус простого герпеса типов 1 и 2 и 10 типов вируса папилломы человека [29]. Микрочип был специфичным, потому что комменсальные и другие близкородственные урогенитальные микробы не реагировали перекрестно с зондами микрочипа. Он был в 10 раз более чувствительным, чем мультиплексная ПЦР. Из 158 проанализированных образцов с подозрением на вирус папилломы человека Ureaplasma было обнаружено в 21 , M. hominis в 15, C. trachomatis в 4 и N.gonorrhoeae в 1. Однако M. genitalium , по-видимому, не обнаружена. Это исследование может быть одним из первых сообщений о высокопроизводительной системе обнаружения, которая идентифицирует распространенные патогены, связанные с ИППП, из клинических образцов [29].

Достаточно новый коммерческий набор для количественной ПЦР Diagenode S-DiaMGTV позволяет качественно обнаруживать и дифференцировать M. genitalium и T. vaginalis методом количественной ПЦР в клинических образцах [30]. В небольшом исследовании, где распространенность Mycoplasma составила 3.7%, он продемонстрировал почти идеальное совпадение с эталонными анализами, и мы приветствуем проведение дополнительных исследований. В одном отчете сравнивали набор TIB MOLBIOL LightMix Kit и набор для ПЦР в реальном времени Diagenode для M. genitalium с собственным ОТ-ПЦР TaqMan, обычно используемым для диагностики M. genitalium [31]. Для анализов TIB MOLBIOL и Diagenode было обнаружено совпадение 96% и 93% соответственно по сравнению с результатами внутреннего анализа.

Обнаружение и диагностика устойчивости к антибиотикам у

M.гениталиум

Мутации, придающие устойчивость к антибиотикам макролидам для M genitalium , сосредоточены в положениях нуклеотидов 2058 и 2059 в области V гена 23S рРНК и представляют собой переходы аденина в гуанин, цитозин или тимидин [18]. Местонахождение 5 мутаций, придающих устойчивость, — A2058G, A2058C, A2058T, A2059G и A2059C. Jensen и соавт. [18, 32] впервые описали неэффективность азитромицина у пациентов с M. genitalium , связанную с индуцированной макролидной резистентностью и мутациями в области 23S гена рРНК.Опубликовано несколько опубликованных исследований, позволяющих выявить устойчивость к макролидам в образцах, о которых известно, что они положительны в отношении M. genitalium, , с использованием выявления мутаций гена 23s рРНК, связанных с устойчивостью, с помощью ПЦР и анализа кривой плавления [32–36]. Однако ни один из этих анализов не доступен на коммерческой основе. Все эти исследования резистентности подтверждают высокую распространенность мутаций, наблюдаемую в других исследованиях [24, 37].

Обычно макролидные антибиотики, такие как азитромицин, ингибируют размножение бактерий путем связывания с 50S-субъединицей рибосомы, которая включает как 5S-, так и 23S-субъединицы, для предотвращения трансляции матричной РНК и предотвращения синтеза белка. Резистентность возникает в результате мутационных изменений, препятствующих связыванию антибиотика, и, таким образом, синтез белка не предотвращается, как это происходит, когда организм чувствителен к антибиотику.

Getman et al. [24] сообщили об использовании анализа ТМА с маркировкой CE (GenProbe/Hologic) для определения распространенности инфекции M. genitalium . и коинфекции с другими микроорганизмами, передающимися половым путем, и частоту фенотипа резистентности к макролидным антибиотикам определяли в урогенитальных образцах, собранных у 946 мужчин и женщин, обратившихся за медицинской помощью в Соединенных Штатах.Ни ASR, ни анализ ТМА с маркировкой CE не обнаруживают мутации резистентности, но в исследовании Getman et al [24] для оценки резистентности к макролидам-антибиотикам среди M. genitalium – положительных субъектов [24]. Показатели распространенности M. genitalium составили 16,1% для женщин и 17,2% для мужчин. Фенотип устойчивости к макролидам был обнаружен у 50,8% женщин и 42% мужчин, что подтверждает высокую распространенность устойчивости в других исследованиях [32–37]

Необходимость обнаружения и тестирования устойчивости

При быстром появлении резистентных к макролидам штаммов M. genitalium [37–43], рекомендуется, чтобы все положительные анализы M genitalium были отражены в тесте для определения мутаций устойчивости к макролидам. Это может быть выполнено с помощью секвенирования по Сэнгеру [32], пиросеквенирования [37], анализа расплава с высоким разрешением [32] или использования зондов FRET [34, 35, 36],

Комбинированный анализ, который может быстро обнаружить организм и в то же время крайне необходимо определить маркеры молекулярной резистентности к азитромицину, стандартному антибиотику, используемому для терапии.Одним из недавно разработанных таких анализов является анализ 23S, в котором используются новые технологии PlexZyme и PlexPrime (SpeeDX) [44]. Мультиплексный анализ кПЦР для обнаружения M. genitalium и 5 мутаций, связанных с устойчивостью к макролидам, использует новую технологию PlexZyme (ранее известную как MNAzyme) и PlexPrimers, которые избирательно амплифицируют целевые последовательности, соединенные для обеспечения мультиплексирования высокого уровня для обнаружения мутантов (рис. 1).

Рисунок 1.

PlexPrimers комбинируются с PlexZymes для специфичной для мутации амплификации и обнаружения с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР).PlexPrimer содержит 3 раздела; длинная 5′-последовательность распознавания мишени (5T), короткая 3′-специфическая область мишени (3T), совпадающая с последовательностью мутации (M), и промежуточная последовательность-вставка (INS), которая не связывается с мишенью, а скорее увеличивает специфичность области 3Т для мутанта по сравнению с последовательностью дикого типа. Во время амплификации INS включается в ампликоны PlexPrimer, и их можно обнаружить в режиме реального времени с помощью PlexZymes, ферментов нуклеиновых кислот, которые образуются из составляющих их парзимов (A и B) только при наличии соответствующих ампликонов PlexPrimer.Каждый парзим содержит плечо, связывающее зонд, частичное каталитическое ядро ​​и плечо, связывающееся с мишенью, ориентированные таким образом, что парзим А связывается с ампликоном в области, содержащей INS, а парзим В связывается по соседству ниже по течению. Каталитически активные PlexZymes связывают и расщепляют репортерные зонды, разделяя флуорофор (F) и гаситель (Q), что приводит к генерации сигнала.

Рисунок 1.

PlexPrimers комбинируются с PlexZymes для специфичной для мутации амплификации и обнаружения с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР).PlexPrimer содержит 3 раздела; длинная 5′-последовательность распознавания мишени (5T), короткая 3′-специфическая область мишени (3T), совпадающая с последовательностью мутации (M), и промежуточная последовательность-вставка (INS), которая не связывается с мишенью, а скорее увеличивает специфичность области 3Т для мутанта по сравнению с последовательностью дикого типа. Во время амплификации INS включается в ампликоны PlexPrimer, и их можно обнаружить в режиме реального времени с помощью PlexZymes, ферментов нуклеиновых кислот, которые образуются из составляющих их парзимов (A и B) только при наличии соответствующих ампликонов PlexPrimer.Каждый парзим содержит плечо, связывающее зонд, частичное каталитическое ядро ​​и плечо, связывающееся с мишенью, ориентированные таким образом, что парзим А связывается с ампликоном в области, содержащей INS, а парзим В связывается по соседству ниже по течению. Каталитически активные PlexZymes связывают и расщепляют репортерные зонды, разделяя флуорофор (F) и гаситель (Q), что приводит к генерации сигнала.

Анализ был проведен на 400 образцах от 254 последовательно инфицированных участников, прошедших тесты на излечение. Из М.genitalium – положительные образцы в тесте на излечение, 56% показали мутацию резистентности к макролидам. Анализ MG 23S сравнивали с эталонным методом количественной ПЦР для обнаружения M. genitalium и анализом расплава с высоким разрешением и секвенированием для обнаружения мутаций устойчивости к макролидам; его чувствительность и специфичность составляли 99,1% и 98,5% для выявления M. genitalium и 97,4% и 100% для обнаружения устойчивости к макролидам. Недавнее использование этого анализа в наших исследованиях в США продемонстрировало аналогичную высокую распространенность моделей резистентности к макролидам: 50 % в проспективном исследовании и 36 % в ретроспективном исследовании в общей сложности с более чем 400 урогенитальными образцами от женщин (Justin Hardick, личный коммуникация). Возможность одновременной диагностики инфекций M. genitalium и генетических маркеров устойчивости к макролидам является клинически важным достижением в новой технологии диагностических тестов.

Моксифлоксин часто рекомендуется для лечения пациентов, у которых азитромицин неэффективен, но в настоящее время хорошо задокументирована резистентность к фторхинолонам [39, 43, 45–47]. Микробиологическая неудача лечения моксифлоксацином у пациентов была связана с обнаружением в их клинических образцах мутаций, связанных с устойчивостью к фторхинолонам [27].Если резистентность к моксифлоксацину возрастает до высоких уровней, может потребоваться дальнейшая разработка диагностических тестов для выявления и этих маркеров резистентности.

ВЫВОДЫ

В настоящее время лечение большинства инфекций, вызванных M. genitalium , происходит в основном в контексте синдромного лечения уретрита, цервицита и ВЗОМТ из-за отсутствия диагностических тестов в Соединенных Штатах. Тестирование доступно в Европе, но неясно, насколько широко оно используется.Значительный объем клинических исследований, основанных на диагностических тестах RUO, позволил многое узнать об эпидемиологии и связях с болезнями M. genitalium . Теперь, когда мы узнали, что этот микроорганизм в значительной степени связан с уретритом у мужчин и значительными патологическими эффектами у женщин, включая ВЗОМТ и повышенную восприимчивость к инфекции вируса иммунодефицита человека, и что лечение рекомендованными антибиотиками для распространенных синдромов ИППП часто неэффективно, пришло время для дальнейшей разработки коммерчески доступных анализов для использования в диагностике M.genitalium и принятие решений о лечении [45]. Определение экономической эффективности широко распространенной диагностики M. genitalium у симптомных и бессимптомных лиц с высоким риском срочно необходимо для продвижения этой повестки дня, как и более коммерчески доступные анализы, одобренные FDA.

Примечания

Подтверждение.  Эта работа является результатом технической консультации экспертов Mycoplasma genitalium , которая проводилась при поддержке Отдела микробиологии и инфекционных заболеваний Национального института аллергии и инфекционных заболеваний, контракт HHSN272201300012I с Университетом Алабамы в Бирмингеме Инфекции, передаваемые половым путем Группа клинических испытаний.

Финансовая поддержка.  Эта работа была поддержана Национальным институтом биомедицинской визуализации и биоинженерии (грант U54EB007958) и Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний (грант U-01068613), Национальными институтами здравоохранения.

Дополнение к спонсорству.  Эта работа является частью приложения, спонсируемого Отделением клинических испытаний инфекций, передающихся половым путем, Университета Алабамы в Бирмингеме и Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний.

Возможные конфликты интересов.  C.A.G. получила тестовых наборов M. genitalium от компаний GenProbe//Hologic и SpeeDX для научных исследований. Автор представил форму ICMJE для раскрытия потенциальных конфликтов интересов. Выявлены конфликты, которые редакция считает относящимися к содержанию рукописи.

Каталожные номера

1.

Фрейзер

см

,

Gocayne

JD

,

Белый

O

и др.

Минимальный набор генов Mycoplasma genitalium

.

Наука

1995

;

270

:

397

403

.2.

Стекло

СО

,

Асад-Гарсия

N

,

Альперович

N

и др.

Основные гены минимальной бактерии

.

Proc Natl Acad Sci USA

2006

;

103

:

425

30

. 3.

Талли

ДжГ

,

Тейлор-Робинсон

D

,

Коул

RM

,

Роуз

DL

.

Недавно обнаруженная Mycoplasma в урогенитальном тракте человека

.

Ланцет

1981

;

1

:

1288

91

.4.

Хамасуна

Р

,

Осада

Y

,

Дженсен

JS

.

Выделение Mycoplasma genitalium из образцов первой порции мочи совместным культивированием с клетками Vero

.

J Clin Microbiol

2007

;

45

:

847

50

.5.

Дегучи

Т

,

Yoshida

T

,

Yokoi

S

и др.

Продольное количественное обнаружение с помощью ПЦР в реальном времени Mycoplasma genitalium в моче первого прохождения у мужчин с рецидивирующим негонококковым уретритом

.

J Clin Microbiol

2002

;

40

:

3854

6

.6.

Дженсен

JS

,

Uldum

SA

,

Søndergård-Andersen

J

,

Vuust

J

,

Lind

K

3 .

Полимеразная цепная реакция для обнаружения Mycoplasma genitalium в клинических образцах

.

J Clin Microbiol

1991

;

29

:

46

50

.7.

Дженсен

JS

,

Борре

МБ

,

Дон

Б

.

Обнаружение Mycoplasma genitalium с помощью ПЦР-амплификации гена 16S рРНК

.

J Clin Microbiol

2003

;

41

:

261

6

.8.

Дженсен

JS

,

Бьернелиус

E

,

Дон

B

,

Лидбринк

P

.

Использование TaqMan 5’ нуклеазной ПЦР в режиме реального времени для количественного определения ДНК Mycoplasma genitalium у мужчин с уретритом и без него, которые посещали клинику заболеваний, передающихся половым путем

.

J Clin Microbiol

2004

;

42

:

683

92

.9.

Хардик

Дж

,

Gile

J

,

Hardick

A

,

HSIEH

YH

,

Quinn

T

,

Gaydos

C

.

Эффективность исследования амплификации, опосредованной транскрипцией gen-probe [скорректированной], по сравнению с многоцелевой ПЦР в реальном времени для обнаружения Mycoplasma genitalium

.

J Clin Microbiol

2006

;

44

:

1236

40

.10.

Мансон

Е

,

Bykowski

H

,

Munson

KL

и др.

Клиническая лабораторная оценка опосредованной транскрипцией Mycoplasma genitalium амплификации с использованием первичных женских урогенитальных образцов

.

J Clin Microbiol

2016

;

54

:

432

8

.11.

Манхарт

ЛЭ

.

Mycoplasma genitalium : эмерджентное заболевание, передающееся половым путем?

Infect Dis Clin North Am

2013

;

27

:

779

92

.12.

Манхарт

ЛЭ

,

Холмс

КК

,

Хьюз

JP

,

Хьюстон

Л.С.

Mycoplasma genitalium среди молодых людей в США: новая инфекция, передающаяся половым путем

.

Am J Public Health

2007

;

97

:

1118

25

.13.

Гайдос

С

,

Maldeis

NE

,

Hardick

A

,

Hardick

J

,

Quinn

TC

.

Mycoplasma genitalium в сравнении с хламидиозом, гонореей и трихомонадой как этиологическим агентом уретрита у мужчин, посещающих клиники ЗППП

.

Половой переход Заражение

2009

;

85

:

438

40

.14.

Гайдос

С

,

Maldeis

NE

,

Hardick

A

,

Hardick

J

,

Quinn

TC

.

Mycoplasma genitalium как фактор множественной этиологии цервицита у женщин, посещающих венерологические клиники

.

Sex Transm Dis

2009

;

36

:

598

606

.15.

Лис

Р

,

Роухани-Рахбар

А

,

Манхарт

LE

.

Инфекция Mycoplasma genitalium и заболевания женских половых путей: метаанализ

.

Clin Infect Dis

2015

;

61

:

418

26

.16.

Макгоуин

класс

,

Андерсон-Смитс

C

.

Mycoplasma genitalium : новая причина венерических заболеваний у женщин

.

PLoS Pathog

2011

;

7

,

e1001324

.17.

Напьерала Маведзенге

С

,

Вайс

HA

.

Ассоциация Mycoplasma genitalium и ВИЧ-инфекции: систематический обзор и метаанализ

.

СПИД

2009

;

23

:

611

20

.18.

Дженсен

JS

.

Неэффективность лечения азитромицином у Mycoplasma genitalium -положительных пациентов с негонококковым уретритом связана с индуцированной резистентностью к макролидам

.

Clin Infect Dis

2008

;

47

:

1546

53

.19.

Тейлор-Робинсон

Д

,

Дженсен

ДЖС

.

Mycoplasma genitalium : от куколки до разноцветной бабочки

.

Clin Microbiol Rev

2011

;

24

:

498

514

.20.

Бахманн

левый

,

Manhart

LE

,

Martin

DH

и др.

Достижения в понимании и лечении мужского уретрита

.

Clin Infect Dis

2015

;

61

:

S763

9

.21.

Швебке

JR

,

Rompalo

A

,

Taylor

S

и др.

Переоценка лечения негонококкового уретрита: выделение новых патогенов — рандомизированное клиническое исследование

.

Clin Infect Dis

2011

;

52

:

163

70

.22.

Сенья

АС

,

Lensing

S

,

Rompalo

A

и др.

Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis инфекции у мужчин с негонококковым уретритом: предикторы и персистенция после терапии

.

J Infect Dis

2012

;

206

:

357

65

.23. AW-14170-001, ред.002. Сан-Диего, Калифорния: Hologic, 2015 .24.

Гетман

Д

,

Цзян

А

,

О’Доннелл

М

,

Коэн

С

.

Распространенность Mycoplasma genitalium , коинфекция и частота резистентности к макролидам в когорте многоцентровых клинических исследований в США

.

J Clin Microbiol

2016

;

54

:

2278

83

.25.

Мувуньи

см

,

Dhont

N

,

Verhelst

R

и др.

Оценка нового мультиплексного анализа полимеразной цепной реакции STDFinder для одновременного обнаружения 7 возбудителей заболеваний, передающихся половым путем

.

Diagn Microbiol Infect Dis

2011

;

71

:

29

37

.26.

Ле Рой

С

,

Le Hen

I

,

Clerc

M

и др.

Первый отчет об эффективности анализа Bio-Rad Dx CT/NG/MG для одновременного обнаружения Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae и Mycoplasma genitalium в образцах мочеполовых органов

.

J Microbiol Methods

2012

;

89

:

193

7

.27.

Мюллер

ЕЕ

,

Venter

JM

,

MAGOAA

MP

,

MORRISON

C

,

LEWIS

DA

,

Mavedzenge

Sn

.

Разработка ПЦР-анализа в реальном времени с роторным геном для обнаружения и количественного определения Mycoplasma genitalium

.

J Microbiol Methods

2012

;

88

:

311

5

.28.

Румянцева

Т

,

Голпарян

D

,

Нильссон

CS

и др.

Оценка нового мультиплексного ПЦР-анализа в реальном времени AmpliSens для одновременного обнаружения Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis

.

АПМИС

2015

;

123

:

879

86

.29.

Цао

Б

,

Wang

S

,

Tian

Z

и др.

Определение характеристик патогенов, связанных с заболеваниями, передающимися половым путем, с помощью ДНК-микрочипов

.

PLoS One

2015

;

10

:

e0133927

.31.

Ле Рой

С

,

Перейр

S

,

Бебеар

C

.

Оценка двух коммерческих ПЦР в реальном времени для обнаружения Mycoplasma genitalium в урогенитальных образцах

.

J Clin Microbiol

2014

;

52

:

971

3

.32.

Дженсен

JS

.

Протокол обнаружения Mycoplasma genitalium с помощью ПЦР в клинических образцах и последующего обнаружения мутаций, опосредующих устойчивость к макролидам, в области V гена 23S рРНК

.

Методы Мол Биол

2012

;

903

:

129

39

.33.

Двойной

Дж

,

Jensen

JS

,

Bradshaw

CS

и др.

Передача и отбор устойчивых к макролидам Mycoplasma genitalium инфекций, обнаруженных с помощью экспресс-анализа расплава с высоким разрешением

.

PLoS One

2012

;

7

:

e35593

.34.

Туати

А

,

Peuchant

O

,

Jensen

JS

,

Bébéar

C

,

Pereyre

S

.

Прямое выявление устойчивости к макролидам в изолятах Mycoplasma genitalium из клинических образцов из Франции с помощью ПЦР в реальном времени и анализа кривой плавления

.

J Clin Microbiol

2014

;

52

:

1549

55

.35.

Мир

С

,

Sorthe

J

,

u

,

U

,

OLSEN

AO

,

Moghaddam

A

,

Reinton

N

.

Идентификация резистентной к макролидам Mycoplasma genitalium с помощью ПЦР в реальном времени

.

J Eur Acad Dermatol Venereol

2015

;

29

:

1616

20

.36.

Кристиансен

GQ

,

Лисби

JG

,

Шеннинг

К

.

Анализ 5′-нуклеазного генотипа для выявления устойчивых к макролидам Mycoplasma genitalium в клинических образцах

.

J Clin Microbiol

2016

;

54

:

1593

7

.37.

Саладо-Расмуссен

К

,

Дженсен

ДЖС

.

Mycoplasma genitalium Схема тестирования и резистентность к макролидам: датское общенациональное ретроспективное исследование

.

Clin Infect Dis

2014

;

59

:

24

30

.38.

Манхарт

ЛЭ

.

Диагностика и тестирование на устойчивость к Mycoplasma genitalium : что для этого потребуется?

Clin Infect Dis

2014

;

59

:

31

3

.39.

Тагг

КА

,

Джеффрис

Нью-Джерси

,

Кэдвелл

DL

,

Дональд

Дж.А.

Мутации, связанные с резистентностью к фторхинолонам и макролидам, у Mycoplasma genitalium

.

J Clin Microbiol

2013

;

51

:

2245

9

.40.

Нейхуис

РХ

,

Северс

ТТ

,

Ван дер Вегт

ДС

,

Ван Цвет

АА

,

Кустерс

JG

.

Высокие уровни мутаций, связанных с устойчивостью к макролидам, у Mycoplasma genitalium требуют лечения с учетом чувствительности к антибиотикам

.

J Antimicrob Chemother

2015

;

70

:

2515

8

.41.

Лау

А

,

Брэдшоу

CS

,

Льюис

D

и др.

Эффективность азитромицина для лечения генитальной инфекции Mycoplasma genitalium : систематический обзор и метаанализ

.

Clin Infect Dis

2015

;

61

:

1389

99

.42.

Уокер

Дж

,

Fairley

CK

,

Bradshaw

CS

и др.

Mycoplasma genitalium Заболеваемость, нагрузка на организм и неэффективность лечения в когорте молодых австралийских женщин

.

Clin Infect Dis

2013

;

56

:

1094

100

.43.

Дегучи

Т

,

Ясуда

М

,

Хори

К

и др.

Мутации, связанные с лекарственной устойчивостью, в Mycoplasma genitalium у работниц секс-индустрии, Япония

.

Emerg Infect Dis

2015

;

21

:

1062

4

.44.

Тебризи

серийный номер

,

Tan

LY

,

Walker

S

и др.

Мультиплексный анализ для одновременного выявления Mycoplasma genitalium и устойчивости к макролидам с использованием технологии PlexZyme и PlexPrime

.

PLoS One

2016

;

11

:

e0156740

.45.

Пруд

МДж

,

NORI

AV

,

AV

,

Witney

AA

,

Lopman

RC

,

Beetcher

PD

,

SADIQ

st

.

Высокая распространенность устойчивых к антибиотикам Mycoplasma genitalium при негонококковом уретрите: необходимость рутинного тестирования и неадекватность существующих вариантов лечения

.

Clin Infect Dis

2014

;

58

:

631

7

.46.

Кикучи

М

,

Ito

S

,

Yasuda

M

и др.

Значительное увеличение числа устойчивых к фторхинолонам Mycoplasma genitalium в Японии

.

J Antimicrob Chemother

2014

;

69

:

2376

82

.47.

Кэдвелл

ДЛ

,

Тагг

КА

,

Джеффрис

Нью-Джерси

,

Гилберт

ГЛ

.

Неэффективность лечения моксифлоксацином при инфекциях Mycoplasma genitalium из-за резистентности к макролидам и фторхинолонам

.

Int J STD AIDS

2013

;

24

:

822

8

.

Примечания автора

© Автор, 2017 г. Опубликовано Oxford University Press для Американского общества инфекционистов. Все права защищены. Для разрешений, электронная почта: [email protected]ком.

Количественная геномная ДНК из штамма Mycoplasma genitalium G37

Продукт предоставляется «КАК ЕСТЬ», и жизнеспособность продуктов ATCC ® гарантируется в течение 30 дней с даты отгрузки при условии, что покупатель хранил и обращался с продуктом в соответствии с информацией, содержащейся в информационном листе продукта, веб-сайт и сертификат анализа. Для живых культур ATCC перечисляет состав среды и реагенты, которые оказались эффективными для продукта.В то время как другие неуказанные среды и реагенты также могут давать удовлетворительные результаты, изменение ATCC и/или протоколов, рекомендованных депозитором, может повлиять на извлечение, рост и/или функцию продукта. Если используется альтернативный состав среды или реагент, гарантия жизнеспособности ATCC больше не действует. За исключением случаев, прямо указанных в настоящем документе, не предоставляются никакие другие гарантии любого рода, явные или подразумеваемые, включая, помимо прочего, любые подразумеваемые гарантии товарного состояния, пригодности для определенной цели, производства в соответствии со стандартами cGMP, типичности, безопасности, точности. и/или отсутствие нарушений.

Этот продукт предназначен только для лабораторных исследований. Он не предназначен для терапевтического использования на животных или людях, для потребления человеком или животными или для любого диагностического использования. Любое предлагаемое коммерческое использование запрещено без лицензии ATCC.

Несмотря на то, что ATCC прилагает разумные усилия для включения точной и актуальной информации в это описание продукта, ATCC не дает никаких гарантий или заявлений относительно ее точности.Цитаты из научной литературы и патентов приводятся только в ознакомительных целях. ATCC не гарантирует, что такая информация была подтверждена как точная или полная, и клиент несет исключительную ответственность за подтверждение точности и полноты любой такой информации.

Этот продукт отправляется при условии, что покупатель несет ответственность и принимает на себя все риски и ответственность в связи с получением, обращением, хранением, утилизацией и использованием продукта ATCC, включая, помимо прочего, принятие всех соответствующих мер безопасности и манипуляций для минимизации риск для здоровья или окружающей среды.В качестве условия получения материала клиент соглашается с тем, что любая деятельность, предпринятая с продуктом ATCC, а также любым потомством или модификациями, будет осуществляться в соответствии со всеми применимыми законами, правилами и рекомендациями. Этот продукт предоставляется «КАК ЕСТЬ» без каких-либо заверений или гарантий, за исключением случаев, прямо указанных в настоящем документе, и ни при каких обстоятельствах ATCC, ее материнские компании, дочерние компании, директора, должностные лица, агенты, сотрудники, правопреемники, правопреемники и аффилированные лица не несут ответственности за косвенные , специальные, случайные или косвенные убытки любого рода в связи или в результате использования покупателем продукта.Несмотря на то, что прилагаются разумные усилия для обеспечения подлинности и надежности депонируемых материалов, ATCC не несет ответственности за ущерб, возникший в результате неправильной идентификации или искажения таких материалов.

Дополнительные сведения об использовании этого продукта см. в соглашении о передаче материала (MTA). MTA доступен на сайте www.atcc.org.

границ | Функциональная характеристика кластера генов клеточного деления бесстеночной бактерии Mycoplasma genitalium

Введение

Деление клеток играет центральную роль в жизни всех прокариотических и эукариотических организмов и требует скоординированного действия множества белков и регуляторных цепей.У бактерий большинство генов, необходимых для цитокинеза и биосинтеза стенки пептидогликана, кодируются в кластере генов деления и клеточной стенки ( dcw ). Организация и длина кластера генов dcw исключительно консервативны у филогенетически отдаленных видов. В качестве исключения, несколько генов, лежащих в кластере генов dcw грамотрицательных и грамположительных палочек, расположены в другом месте хромосомы у грамположительных кокков (Pucci et al., 1997). На основании этого наблюдения была предложена связь между структурой кластера генов dcw и морфологией клеток.Механизм, лежащий в основе этих отношений, который включает котрансляционную сборку белковых комплексов, участвующих в клеточном делении, называется геномным каналированием (Mingorance et al., 2004). В микоплазмах кластер генов dcw обычно ограничен четырьмя генами: mraZ , mraW , MG_223 и ftsZ (рис. 1А; Alarcón et al., 2007). Микоплазмы филогенетически родственны грамположительным бактериям, но они утратили гены биосинтеза пептидогликана в результате обширной редукции генома.Хотя клетки микоплазмы обычно имеют сферическую форму, наличие у некоторых видов верхушечной структуры, способствующей цитоадгезии, приводит к удлиненной колбовидной морфологии.

Рисунок 1 . Обзор организации кластера генов dcw у выбранных бактерий. Схема, изображающая кластер генов dcw трех репрезентативных видов рода Firmicutes (A) . Bacillus subtilis (17 генов, 18,9 т.п.н.), Staphylococcus aureus (девять генов, 10.7kb) и Mycoplasma genitalium (четыре гена, 3,7kb). (B) Схема кластера генов клеточного деления у различных мутантов M. genitalium , созданных в этом исследовании. Промоторная область гена mraZ (P mraZ ) была охарактеризована в предыдущем сообщении (Benders et al., 2005). Маркеры tetM или cat (желтые) вводили для отбора предполагаемых мутантов.

Функция mraZ и mraW , первых двух генов кластера генов dcw , оставалась неясной в течение многих лет.Всестороннее исследование Escherichia coli показало, что MraZ является репрессором транскрипции, который контролирует свою собственную экспрессию и экспрессию других генов кластера генов dcw (Eraso et al., 2014). В том же исследовании авторы обнаружили, что MraZ связывается с консервативными последовательностями, обозначенными как MraZ-боксы, в восходящей области кластера генов dcw . Возможно, неожиданно, что потеря MraZ не была связана с каким-либо явным фенотипом у этой модельной бактерии. Несмотря на это, был обнаружен антагонистический эффект между MraZ и MraW.MraW представляет собой РНК-метилтрансферазу, нацеленную на 16S рибосомную РНК (Kimura and Suzuki, 2010). Характеристика мутанта mraW в E. coli продемонстрировала измененную инициацию, отличную от AUG, и сниженную точность трансляции, что позволяет предположить, что MraW может играть роль в выборе стартового кодона и распознавании классических кодонов STOP. Мутанты Staphylococcus aureus , mraW также демонстрируют аномальную точность трансляции наряду со сниженной скоростью роста и повышенной чувствительностью к окислительному стрессу (Kyuma et al., 2015). Совсем недавно было обнаружено, что белок MraW также метилирует ДНК и изменяет экспрессию генов в E. coli (Xu et al., 2019). Следует отметить, что потеря MraW увеличивает экспрессию MraZ, что поддерживает антагонистическую активность между этими двумя белками, описанную ранее (Eraso et al., 2014; Xu et al., 2019).

Напротив, функция предкового гомолога тубулина, FtsZ, установлена ​​гораздо лучше. FtsZ полимеризуется и деполимеризуется посредством гидролиза GTP и образует кольцеобразную структуру в средней клетке, известную как Z-кольцо, которая впоследствии сжимается во время разделения (Adams and Errington, 2009; Busiek and Margolin, 2015).Z-кольцо рекрутирует белки клеточного деления и ферменты, синтезирующие септальный пептидогликан, к месту деления и составляет каркас бактериальной дивисомы (Errington et al., 2003). У E. coli FtsA является первым известным белком, рекрутируемым в септальное кольцо, и он важен для стабильности FtsZ (Vicente and Rico, 2006). Следует отметить, что соотношение FtsZ и FtsA имеет решающее значение для правильного функционирования аппарата клеточного деления (Dai and Lutkenhaus, 1992; Dewar et al., 1992). Действительно, недавно было продемонстрировано, что деление клеток грамположительной бактерии Bacillus subtilis опосредуется филаментами FtsZ и FtsA, которые движутся по окружности вокруг делительного кольца, управляя движением ферментов, синтезирующих пептидогликаны (Bisson-Filho). и др., 2017).

Из-за своей ключевой роли в клеточном делении экспрессия FtsZ контролируется на множестве уровней (Robin et al., 1990). Точно так же формирование и локализация септального кольца строго регулируются (Vicente et al., 1998). Сложная регуляция, наблюдаемая в кластере генов dcw , играет фундаментальную биологическую роль, и, соответственно, диссоциация экспрессии ftsZ от его естественных регуляторных сигналов приводит к важным изменениям в физиологии клеточного деления. Однако до сих пор очень мало известно о факторах, контролирующих экспрессию, локализацию и функцию FtsZ в микоплазмах. Кластер генов клеточного деления имеет оперонную структуру у Mycoplasma genitalium и близкородственных видов Mycoplasma pneumoniae (Benders et al., 2005). С другой стороны, N-концевая область FtsZ из Mycoplasma pulmonis может функционировать для клеточного деления в супрессорных штаммах E. coli при условии замены C-концевого хвоста (Osawa and Erickson, 2006). Кроме того, у Mycoplasma hominis протофиламенты FtsZ могут образовывать спиральные структуры, сходные с Z-спиралями B. subtilis и E. coli , что также указывает на функциональную роль FtsZ в клеточном делении (Vishnyakov et al., 2009). ).Недавние данные также предполагают, что стабильность FtsZ контролируется протеазой Lon в M. pneumoniae (Burgos et al., 2020).

Примечательно, что хотя ген ftsZ необходим для большинства бактерий (Beall and Lutkenhaus, 1991; Dai and Lutkenhaus, 1991), он необязателен для производных с дефицитом клеточной стенки некоторых грамположительных и грамотрицательных бактерий, известных как L -формы (Мерсье и др., 2014). Точно так же бактерии из Planctomycetes и надфиля Chlamydiae лишены белка FtsZ (Pilhofer et al., 2008). В предыдущем исследовании наша лаборатория продемонстрировала, что ftsZ не являются существенными для роста in vitro M. genitalium (Lluch-Senar et al., 2010), поднимая важные вопросы относительно сохранения ftsZ . в микоплазмах. В соответствии с этим, другие виды, филогенетически родственные M. genitalium , такие как Mycoplasma mobile или Ureaplasma urealyticum , не кодируют гомолог гена ftsZ (Glass et al., 2000; Джаффе и др., 2004). Итак, какова роль генов клеточного деления в микоплазмах? Мы рассмотрели этот вопрос, сконструировав и охарактеризовав несколько мутантов клеточного деления у бактерии с редуцированным геномом M. genitalium .

Материалы и методы

Бактериальные штаммы и культуральные условия

Все штамма M. genitalium выращивали в бульоне SP-4 при 37°C в атмосфере с 5% CO 2 в колбах для тканевых культур. Готовили чашки SP-4, добавляя в среду 0.8% агар (BD). Для отбора мутантов добавляли хлорамфеникол (17 мкг мл -1 ) или тетрациклин (3 мкг мл -1 ). Все штамма M. genitalium , использованные в этой работе, перечислены в дополнительной таблице S1. Штамм XL-1 Blue Escherichia coli использовали для клонирования и размножения плазмиды. Штамм выращивали в чашках с агаром Luria Bertani (LB) или LB, содержащих 100 мкг мл -1 ампициллина, 40 мкг мл -1 X-Gal и 24 мкг мл -1 изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG) при необходимости. .

Манипуляции с ДНК

Плазмидную ДНК

получали с использованием набора 5Prime. Продукты ПЦР очищали из агарозных гелей с использованием геля Nucleospin и набора для очистки ПЦР (Macherey-Nagel) и при необходимости расщепляли соответствующими рестрикционными ферментами (Fermentas). Все праймеры, использованные в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице S2. Плазмиды для трансформации M. genitalium получали с использованием набора GenElute HP Midiprep (Sigma).

Создание и скрининг мутантов

Подробное объяснение методологии, включая праймеры и плазмиды, использованной для создания различных мутантов, созданных в этом исследовании, представлено в дополнительных материалах.Целостность хромосомы в мутантных штаммах, кроме предполагаемых делеций, была оценена и подтверждена секвенированием всего генома (WGS; дополнительная таблица S3). Трансформацию M. genitalium проводили, как описано ранее (Torres-Puig et al., 2015). Скрининг мутантов проводили с использованием клеточных лизатов в качестве матрицы для ПЦР или реакций секвенирования. Клеточные лизаты получали центрифугированием 1,5 мл клеточных культур, разрушением осадка с использованием 30 мкл лизирующего буфера (Tris-HCl 0.1M pH 8,5, Tween-20 0,05% и протеиназа K 0,25 мг/мл -1 ) и инкубация в течение 1 часа при 37°C с последующей инактивацией при 95°C в течение 10 минут.

Секвенирование ДНК

Реакции секвенирования ДНК

проводили с использованием набора BigDye® v3.1 Cycle Sequencing с использованием 2,5 мкл геномной ДНК или лизата M. genitalium в соответствии с инструкциями производителя. Все реакции были проанализированы на генетическом анализаторе ABI PRISM 3130xl в Servei de Genòmica i Bioinformàtica (UAB).

Количественная оценка скорости роста

Скорость роста М.Genitalium определяли с использованием адаптированного колориметрического протокола, описанного Karr et al. (2012). Штаммы выращивали до средней логарифмической фазы в 25-см колбах 2 с 5 мл SP4. Прикрепленные клетки соскабливали, извлекали центрифугированием при 12000 об/мин и ресуспендировали в 3 мл свежего SP4. Затем 300 мкл клеточной суспензии инокулировали в четыре разные лунки 96-луночного планшета. Каждая из этих лунок представляет собой первый образец из четырех технических повторов. Около 100 мкл первой лунки (образец 1) инокулировали в следующую лунку (образец 2), уже содержащую 200 мкл свежего SP4, тем самым разбавляя 1/3 исходной концентрации.Этот процесс повторяли еще четыре раза (образцы 3, 4, 5 и 6), достигая конечного разведения 1/243. 96-луночный планшет заклеивали прозрачной лентой, помещали в устройство для считывания микропланшетов Tecan Sunrise Absorbance (Tecan) и инкубировали при 37°C в течение 7 дней. По мере роста M. genitalium бактериальный метаболизм подкисляет культуральную среду, изменяя цвет индикатора фенолового красного с красного (рН 7,8) на желтый (рН 6), что определяли путем измерения поглощения при 550 нм. Для каждого анализа показания снимались каждые 30 минут в течение 8 дней (всего 400 показаний на лунку).Показания были сохранены в таблице данных Excel и проанализированы после завершения эксперимента, и для каждого разведения была построена кривая, и была определена точка перегиба. Затем точки перегиба были нанесены на график с использованием логарифма Напьера разведения в качестве координаты × для каждого разведения. После того, как все точки перегиба были нанесены на график, наклон ( μ , константа скорости роста) был выведен с помощью линейной регрессии, и было получено время удвоения ( g ) в соответствии с общим уравнением для экспоненциального роста бактерий [ g = ln2/(1/ μ )].

РНК-Seq

Анализ

РНК-Seq был выполнен, как описано ранее (Torres-Puig et al., 2018; Martínez-Torró et al., 2020). Культуры M. genitalium в средней логарифмической фазе соскабливали в 1 мл свежей среды SP-4 и повторно засевали в две новые 25-сантиметровые колбы для тканевых культур 2 со свежей средой SP-4 на 6 часов. Затем клетки лизировали и выделяли тотальную РНК с помощью набора miRNeasy Mini Kit (Qiagen). Библиотеки РНК готовили с помощью набора для подготовки библиотеки полных РНК TruSeq Stranded Total RNA Library Prep Kit (Illumina) и анализировали с использованием системы HiSeq 3000 (Illumina) в отделе геномики Центра геномной регуляции (CRG), Барселона.Кластеры кДНК иммобилизовали на дорожках секвенирования 2×50 прочтений. Обратные и комплементарные были вычислены для последовательностей, исходящих из праймера Read1. Анализ данных и выравнивание последовательностей выполняли с использованием Bowtie2 (Langmead and Salzberg, 2012) в режиме End-to-End и парных концов вперед-вперед. Последовательности были собраны с использованием SAMtools (Li et al., 2009) без ограничения количества последовательностей в выравнивании. Подсчеты в различных ORF проводились с помощью автономной версии программы featureCounts (Liao et al., 2014) без подсчета операций чтения с несколькими сопоставлениями и отключения операций чтения с несколькими перекрытиями.

Затем

подсчитанных признаков были отправлены в пакет R/Bioconductor DESeq2 (Love et al., 2014) для статистического анализа. В анализе DESeq2 использовались параметрический тип fitType и нормальный априорный коэффициент с нулевым средним значением для непересекающихся коэффициентов. Данные были отсортированы по кратности log2, а статистическая значимость была установлена ​​на уровне общего порогового значения p <0,05. Были проанализированы три независимых биологических повтора каждого штамма или состояния.

кОТ-ПЦР

РНК экстрагировали из среднелогарифмических культур M. genitalium с использованием набора RNAqueous Kit (Thermo Fisher Scientific), а затем обрабатывали турбо-ДНКазой (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя. Обратную транскрипцию выполняли с помощью обратной транскриптазы iScript (Bio-Rad) и случайных праймеров, как описано ранее (Torres-Puig et al., 2015). Праймеры, используемые для количественной ПЦР, перечислены в дополнительной таблице S2 и были разработаны с использованием программного обеспечения Primer3.количественную ПЦР выполняли с использованием полимеразы iTaq (Bio-Rad) и зеленого SYBR на приборах для ПЦР CFX96 или CFX384 (Bio-Rad). Относительную экспрессию генов рассчитывали по методу Пфаффла (Pfaffl, 2001). Дифференциальную экспрессию генов оценивали на основе общего произвольного 2-кратного отсечения. Данные, представленные в рукописи, соответствуют анализу РНК, выделенных из трех независимых биологических повторов.

Количественная оценка содержания белка

Различия в относительном содержании белка оценивали с помощью мечения стабильными изотопами аминокислот в клеточной культуре (SILAC).С этой целью культуры M. genitalium выращивали до средней логарифмической фазы в 25-сантиметровых колбах 2 на среде Хейфлика с 15 мМ легкого ( 12 С) или тяжелого ( 13 С) лизина. После выращивания клетки разделяли (1:10) и культивировали в тех же условиях. Затем клетки промывали PBS, соскабливали и осадки хранили при -80°С. Белковые лизаты готовили, как описано ранее (Sabidó et al., 2012). Количественное определение белка проводили с использованием набора для анализа белков Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific), белковые экстракты культур на тяжелых и легких средах смешивали в соотношении 1:1.Затем образцы восстанавливали дитиотреитом (150 нмоль, 1 ч, 37°С) и алкилировали в темноте йодацетамидом (300 нмоль, 30 мин, 25°С). Полученный белковый экстракт разбавляли на 1/3 200 мМ NH 4 HCO 3 и расщепляли 5 мкг LysC (Wako) в течение ночи при 37°C. Наконец, смесь пептидов подкисляли муравьиной кислотой и обессоливали с помощью самодельной колонки Empore C18 (3M, Сент-Пол, Миннесота, США; Rappsilber et al., 2007). Образцы анализировали с использованием масс-спектрометра LTQ-Orbitrap Velos Pro (Thermo Fisher Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США), соединенного с EasyLC [Thermo Fisher Scientific (Proxeon), Оденсе, Дания].Пептиды наносили непосредственно на аналитическую 25-сантиметровую колонку с внутренним диаметром 75 мкм, заполненную частицами С18 размером 5 мкм (Nikkyo Technos Co. Ltd., Япония). Хроматографические градиенты начинались с 97% буфера А и 3% буфера В при скорости потока 250 нл/мин и постепенно увеличивались до 65% буфера А/35% буфера В в течение 360 мин. После каждого анализа колонку промывали в течение 10 минут 10% буфером А/90% буфером В. Буфер А: 0,1% муравьиной кислоты в воде. Буфер B: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле. Масс-спектрометр работал в режиме положительной ионизации с напряжением нанораспыления, равным 2.2кВ и температура источника 250°C. Ultramark 1621 для масс-анализатора FT использовался для внешней калибровки перед анализом. Кроме того, была также выполнена внутренняя калибровка с использованием сигнала фонового полисилоксанового иона при m / z 445,1200. Прибор работал в режиме сбора данных, зависящего от данных (DDA), и использовались полные МС-сканы с одним микросканированием с разрешением 60 000 в диапазоне масс 94 542 m 94 543 / 94 542 z 94 543 350–2 000 с обнаружением в орбитальной ловушке.Автоматический контроль усиления (AGC) был установлен на 10 6 , и были выполнены динамическое исключение (60 с) и фильтрация состояния заряда, исключающая однозарядные пептиды. В каждом цикле DDA-анализа, после каждого сканирования обзора, 10 наиболее интенсивных ионов с несколькими заряженными ионами выше порогового количества ионов 5000 были отобраны для фрагментации при нормализованной энергии столкновения 35%. Спектры фрагментарных ионов, полученные в результате диссоциации, индуцированной столкновением (CID) , были получены в ионной ловушке, AGC была установлена ​​​​на 5e 4 с окном изоляции 2.0 m / z , время активации 0,1 мс и максимальное время впрыска 100 мс. Все данные были получены с помощью программного обеспечения Xcalibur v2.2. Программный пакет MaxQuant (v1.4.0.5) использовали для идентификации пептидов и количественного определения белков SILAC (Cox and Mann, 2008). Поиск данных проводился в собственной базе данных, содержащей все 94 542 белка M. genitalium 94 543.

Сканирующая электронная микроскопия

Культуры Mycoplasma genitalium выращивали до средней логарифмической фазы на покровных стеклах.Образцы фиксировали, обезвоживали и сушили до критической точки, как описано ранее (Pich et al., 2008). Затем на покровные стекла напыляли золото и исследовали в сканирующем электронном микроскопе (SEM) Merlin (Zeiss). СЭМ-микрофотографии анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ для определения частоты деления клеток. С этой целью мы определили количество терминальных органелл (ТМО) на клетку. Поскольку клетки микоплазмы дублируют структуру кончика во время клеточного деления, клетки с одной ТМО были классифицированы как неделящиеся, а клетки с двумя или более ТМО были классифицированы как делящиеся.С другой стороны, мы измерили длину одиночных клеток от кончика ТМО до противоположного полюса. Кроме того, определяли длину цитокинетических клеток, измеряя расстояние от кончика одной ТМО до кончика противоположной ТМО. Для этого анализа рассматривались только клетки с одной ТМО на каждом клеточном полюсе.

Фазово-контрастная и флуоресцентная микроскопия

Клетки Mycoplasma genitalium выращивали в фильтрованной среде SP-4 (0,22 мкм) на предметных стеклах камеры IBIDI в течение 16 часов, один раз промывали 1×PBS и визуализировали на инвертированном микроскопе Nikon Eclipse TE 2000-E.Для анализа неприлипающего мутанта mg191ftsZCh предметные стекла камеры IBIDI предварительно обрабатывали 0,2 мг/мл раствором гидробромида поли- L -лизина (Sigma-Aldrich), что обеспечивало прилипание к поверхности. Кроме того, клетки пропускали 10 раз через шприц 25 размера для разрушения агрегатов. При необходимости добавляли Hoechst 33342 0,01 мг/мл -1 . Все штаммы выращивали и визуализировали в одинаковых условиях. Фазовый контраст, усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), 4′,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) и эпифлуоресцентные изображения TRITC были получены с помощью камеры Nikon Digital Sight DS-SMC, управляемой программным обеспечением NIS-Elements BR.Изображения анализировали с использованием программного обеспечения ImageJ и подключаемого модуля GDSC.

Результаты

Делеция кластера генов всего клеточного деления

Mycoplasma genitalium

Ранее мы продемонстрировали, что ген ftsZ является несущественным у M. genitalium (Lluch-Senar et al., 2010). Основываясь на этом открытии, мы предположили, может ли весь кластер генов клеточного деления быть необязательным для этой бесстеночной бактерии. Чтобы убедиться в этом, мы заменили четыре гена кластера генов клеточного деления M.genitalium по маркеру устойчивости к хлорамфениколу (рис. 1В). Мы восстановили несколько трансформантов, устойчивых к хлорамфениколу, и подтвердили делецию всего кластера генов (3,7 т.п.н.) с помощью ПЦР и секвенирования. Мы обнаружили, что время удвоения полученного мутанта dcw было значительно больше (10,13 ± 0,33 ч), чем у штамма дикого типа (8,38 ± 0,28 ч; рис. 2А). Кроме того, анализ СЭМ выявил повышенную частоту деления клеток у мутанта dcw (30.53%) по сравнению со штаммом дикого типа (13,35%; рис. 2В).

Рисунок 2 . Анализ приспособленности клеток штамма дикого типа и нескольких мутантов M. genitalium . Темпы роста (A) и процент клеток в делении (B) различных мутантов M. genitalium кластера генов клеточного деления. Статистическую значимость оценивали с помощью критерия Стьюдента t и значения p значимых значений ( p <0.05) указывается над каждой точкой данных. Анализировали в среднем 900 клеток для каждого штамма (C) . График, изображающий длину одиночных или цитокинетических клеток. Измеряли в среднем 320 клеток для каждого штамма.

Характеристика мутантов клеточного деления

Mycoplasma genitalium

Чтобы проанализировать и лучше понять фенотип мутанта dcw , мы создали штаммы, дефектные по каждому гену кластера генов клеточного деления путем аллельного обмена.Во-первых, мы получили мутанты для генов MG_223 и ftsZ , используя для селекции маркер устойчивости к хлорамфениколу (рис. 1В; дополнительный материал). Наши анализы показали, что скорость роста мутанта ftsZ (8,29 ± 0,09 ч) была сравнима со скоростью роста штамма дикого типа (8,38 ± 0,28 ч; рис. 2А). Напротив, время дублирования мутанта MG_223 значительно увеличилось (9,80 ± 0,56 ч). СЭМ-анализ выявил повышенную частоту деления клеток у обоих мутантных штаммов ( ftsZ , 22.44%; MG_223, 29,15%; Рисунок 2Б).

Затем мы создали мутантов, лишенных либо mraZ , либо mraW . В этом случае, чтобы сохранить оперонную структуру кластера генов, маркер устойчивости к антибиотикам был помещен на 5′-конце UTR mraZ (рис. 1B; дополнительный материал). В целях контроля мы также создали эталонный штамм, обозначенный mraREF , несущий селектируемый маркер в том же месте хромосомы, но с интактным кластером генов клеточного деления (рис. 1В; дополнительный материал).Клетки штамма mraREF росли с такой же скоростью (8,81 ± 0,29 ч), что и клетки штамма дикого типа (8,38 ± 0,28 ч; рис. 2А). Однако время удвоения значительно увеличилось при потере MraZ (11,54 ± 0,38 ч). Клетки нулевого мутанта mraW удваивались с меньшей скоростью (9,96 ± 0,53 ч), что указывает на то, что отсутствие MraW также вредно для роста. Все полученные мутантные штаммы были исследованы с помощью ресеквенирования генома на наличие мутаций, отличных от тех, которые были введены в результате генетических манипуляций.Во всех проанализированных штаммах не было обнаружено серьезных перестроек генома, таких как крупные делеции или транслокации. Однако все штаммы показали наличие небольших вариантов, таких как SNP или INDELS, с разной частотой. Многие из этих вариантов были также идентифицированы в штамме G37. Все новые варианты были обнаружены в рекомбиногенных вариабельных повторяющихся областях, причем большинство из них находились в некодирующих участках генома, что подтверждает отсутствие дополнительных мутаций, которые могли повлиять на фенотип штаммов dcw (дополнительный материал).

Анализы с помощью сканирующей электронной микроскопии выявили небольшое увеличение частоты деления клеток у мутанта mraW (19,0%) по сравнению со штаммами дикого типа (13,35%) или штаммами mraREF (12,99%; рис. 2B). . Примечательно, что частота делящихся клеток, обнаруженная у мутанта mraZ , была заметно высокой (38,44%). Более того, мы наблюдали, что цитокинетические клетки мутанта mraZ были заметно удлинены (рис. 3А, В). Количественный анализ подтвердил, что клетки в цитокинезе мутанта mraZ были длиннее (1.651 ± 0,372 мкм, n = 96), чем у штамма дикого типа (1,118 ± 0,177 мкм, n = 24; рис. 2C). Напротив, анализ других мутантов клеточного деления, полученных в этом исследовании, не выявил морфологических изменений в цитокинетических клетках (рис. 2С).

Рисунок 3 . Характеристика клеточной морфологии мутанта mraZ . Сканирующие электронные микрофотографии штамма дикого типа (A) и мутанта mraZ (B) .Белые стрелки указывают на некоторые клетки в цитокинезе.

Транскрипционный анализ кластера генов клеточного деления в различных мутантных фонах

Предыдущие исследования E. coli показали, что MraZ является репрессором транскрипции (Eraso et al., 2014). Поэтому мы провели полногеномный анализ транскрипции M. genitalium с помощью RNA-Seq для выявления транскрипционных изменений у мутанта mraZ (таблица 1). Наши транскриптомные данные показали, что mraW , ftsZ и ген MG_223 значительно активировались в отсутствие MraZ.Напротив, транскрипция практически не изменялась как у мутанта mraW , так и у контрольного штамма mraREF . Анализы qRT-PCR подтвердили повышенную экспрессию генов клеточного деления в отсутствие MraZ (рис. 4). Чтобы подтвердить, что измененная экспрессия гена, наблюдаемая у мутанта mraZ , была связана с потерей белка MraZ, мы повторно ввели эктопическую копию гена mraZ под контролем его нативного промотора. Следует отметить, что несколько попыток комплементации с кодируемой транспозоном копией гена mraZ , отдельно или в комбинации с mraW , оказались безуспешными.Однако вставка гена mraZ в конце кластера генов клеточного деления у мутанта mraZ восстановила уровни транскрипции mraW , ftsZ и гена MG_223 (рис. 4; дополнительная фигура S1). С другой стороны, мы также оценили транскрипцию кластера генов клеточного деления в мутантном штамме, лишенном гена mg191 , который кодирует главный цитоадгезин P140 M. genitalium . Клетки мутанта mg191 являются плеоморфными и растут в суспензии в виде крупных клеточных агрегатов (Burgos et al., 2006). Этот неприлипающий мутант был проанализирован, чтобы пролить свет на связь между клеточным делением и прилипанием M. genitalium . В этом смысле в предыдущем исследовании (Lluch-Senar et al., 2010) мы показали, что, в отличие от клеток WT, мутант ftsZ не может генерировать неадгезивные варианты. Основываясь на этом наблюдении, мы предположили, что неприлипающие мутанты полагаются исключительно на кластер клеточного деления для деления. Примечательно, что анализ транскрипции мутанта mg191 выявил значительную активацию кластера генов клеточного деления (рис. 4).

Таблица 1 . Транскрипционные изменения у мутантов mraZ и mraW с помощью RNA-Seq.

Рисунок 4 . Транскрипционный анализ кластера генов клеточного деления нескольких мутантов M. genitalium с помощью qRT-PCR. Транскрипционные изменения кластера генов клеточного деления у mraREF мутанта (A) или mraZ , mraW и mg191 мутантов (B) по сравнению со штаммом дикого типа.Столбцы представляют собой среднее log2-кратное изменение по меньшей мере трех независимых биологических повторов. Статистическую значимость оценивали с использованием критерия Стьюдента t , и значение p биологически значимых значений (log2±1) указано над соответствующей полосой, если оно значимо (значение p <0,05).

Анализ протеома мутантов

mraZ и mraW

Затем мы задались вопросом, сохраняются ли транскрипционные изменения, наблюдаемые у нулевого мутанта mraZ , на уровне белка.С этой целью мы определили профиль протеома мутанта mraZ с помощью SILAC (дополнительные таблицы S4 и S5). Наши анализы продемонстрировали заметное увеличение клеточных уровней MraW (в 14,3 раза) и FtsZ (в 25 раз; таблица 2). Точно так же экспрессию белка MG_223 можно было обнаружить только при отсутствии MraZ.

Таблица 2 . Сравнительный анализ обилия белков клеточного деления у штамма дикого типа и мутантов mraZ и mraW методом мечения стабильными изотопами аминокислотами в культуре клеток (SILAC).

Мы также исследовали наличие протеомных изменений у мутанта mraW (дополнительные таблицы S6 и S7). Мы обнаружили, что несколько белков, в том числе ряд ДНК- и РНК-метилтрансфераз, по-разному экспрессировались в отсутствие MraW. Поскольку эти изменения содержания белка не сопровождались изменениями уровней мРНК, мы ожидаем, что MraW может модулировать экспрессию белка на посттранскрипционном уровне. Следует отметить, что мы обнаружили, что уровни белка FtsZ были несколько выше (в 2 раза) у мутанта mraW (табл. 2).

Выражение FtsZ и динамика локализации

Предыдущие попытки в нашей лаборатории контролировать экспрессию FtsZ в M. genitalium с использованием флуоресцентных маркеров не увенчались успехом. В этих исследованиях мы охарактеризовали мутантные штаммы, несущие слияние ftsZ mcherry в его нативном локусе, то есть на 3′-конце кластера генов клеточного деления (рис. 5). Предположительно, экспрессия FtsZ была слишком низкой, чтобы можно было обнаружить флуоресцентное слияние в одиночных клетках.Однако мы предположили, что повышенный уровень экспрессии FtsZ, наблюдаемый у мутанта mraZ , может способствовать визуализации этого белка в живых клетках. Поэтому мы оценили экспрессию FtsZ-mCherry в клетках, лишенных MraZ (дополнительный материал), и обнаружили большое количество (56,63%) флуоресцентных клеток, хотя и в разной степени (рис. 5). Присутствие нефлуоресцентных клеток предполагает, что экспрессия и сборка FtsZ находятся под контролем других факторов, помимо MraZ (Burgos et al., 2020). Отдельно мы оценили экспрессию FtsZ в отсутствие MraW и обнаружили, что небольшая часть клеток (1,58%) проявляла флуоресценцию mCherry (рис. 5). Этот результат согласуется с повышенным количеством FtsZ, идентифицированным в мутанте mraW с помощью протеомного анализа. С другой стороны, мы проверили, было ли видно слияние FtsZ-mCherry в мутанте адгезина P140. В соответствии с данными транскрипции мы заметили, что некоторые клетки демонстрируют заметную флуоресценцию, связанную с FtsZ (рис. 5).

Рисунок 5 . Анализ отдельных клеток экспрессии FtsZ у различных мутантов M. genitalium . Изображения флуоресцентной микроскопии, показывающие локализацию FtsZ-mCherry в живых клетках штамма дикого типа, мутантов mraZ , mraW и mg191 . Каждая строка содержит фазовый контраст, канал TRITC и результирующее наложение соответственно. Масштабная линейка представляет 2 мкм. Все изображения показаны с одинаковым увеличением.

Детальный анализ мутанта mraZ показал, что фокусы FtsZ имеют полярное расположение.Следует отметить, что клетки M. genitalium являются полярными, поскольку они демонстрируют ТМО, способствующую цитоадгезии. По этой причине мы хотели проверить, локализованы ли очаги FtsZ совместно с TMO этой бактерии. С этой целью мы пометили P65, белок, локализующийся на дистальном конце TMO (Burgos et al., 2008). Введение флуоресцентного маркера eYFP в нативный локус P65 (MG_217) позволило идентифицировать острые очаги P65-eYFP, предоставив способ однозначно идентифицировать клеточный полюс, содержащий ТМО (рис. 6).Мы обнаружили, что FtsZ сгруппирован на клеточном полюсе, противоположном P65, в клетках, демонстрирующих одиночный фокус P65. Это важно, потому что, поскольку клетки микоплазмы дублируют ТМО до цитокинеза (Miyata and Seto, 1999), некоторые клетки демонстрируют два отдельных фокуса P65. Кроме того, мы заметили, что интенсивность и локализация очагов FtsZ менялись в течение цикла клеточного деления. На основании локализации двух меченых белков (FtsZ и P65) и хромосомы, окрашенной Hoechst 33258, мы определили восемь различных стадий клеточного цикла (рис. 7).Неделящиеся клетки (стадия 1) имеют один фокус P65, а сигнал FtsZ слабый. Со временем FtsZ рекрутируется на клеточном полюсе, противоположном ТМО (стадия 2). Перед цитокинезом вблизи ранее существовавшего очага формируется новый очаг Р65 (стадия 3). Затем один из этих очагов Р65 мигрирует к противоположному клеточному полюсу и локализуется вблизи очага FtsZ (стадия 4). Затем, вероятно, совпадая с сегрегацией хромосом, FtsZ покидает полярное положение и перемещается в среднюю клетку, образуя диффузную полосу (стадия 5). По мере развития цитокинеза сигнал FtsZ снижается (стадия 6), а в дочерних клетках появляются небольшие фокусы FtsZ с маргинальной флуоресценцией (стадия 7).Наконец, происходит разделение дочерних клеток и исчезновение сигнала FtsZ (стадия 8), но вскоре после этого начинается накопление FtsZ в теле клетки (стадия 1).

Рисунок 6 . Анализ отдельных клеток FtsZ, P65 и локализации хромосом у мутанта mraZ . Анализ флуоресцентной микроскопии, показывающий FtsZ-mCherry, P65-eYFP и локализацию хромосом в живых клетках M. genitalium . На каждой панели показаны изображения TRITC, 4′,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) и eYFP или комбинация трех каналов и фазового контраста.Масштабная линейка представляет 2 мкм. Все изображения показаны с одинаковым увеличением.

Рисунок 7 . Динамика локализации FtsZ на протяжении клеточного цикла M. genitalium . Схема, изображающая различные стадии клеточного цикла M. genitalium , основанная на локализации очагов FtsZ относительно терминальной органеллы (ТМО) и хромосомы. В этой модели FtsZ накапливается в теле клетки (1) и кластеризуется на полюсе клетки, противоположном ТМО (2). Затем TMO дублируется (3) и один TMO перемещается к противоположному полюсу ячейки (4).Далее фокусы FtsZ перемещаются в среднюю клетку (5). Наконец, начинается цитокинез (6), и сигнал FtsZ снижается (7), пока процесс не завершится (8).

Обсуждение

Микоплазмы — бесстеночные бактерии, которые делятся бинарным делением. Пока что факторы, опосредующие и координирующие клеточное деление у этих бактерий с редуцированным геномом, плохо изучены. Как правило, кластер генов клеточного деления микоплазм включает четыре гена, в том числе ftsZ . У бактерий со стенками хорошо известно, что FtsZ управляет синтезом пептидогликана в месте деления (Bisson-Filho et al., 2017). Однако сохранение в микоплазмах FtsZ и других белков, связанных с клеточным делением, таких как MraZ или MraW, вызывает недоумение. В этом исследовании мы сконструировали и охарактеризовали несколько мутантов клеточного деления M. genitalium . Мы обнаружили, что делеция mraZ индуцирует сильную активацию других генов кластера генов клеточного деления. Следовательно, наши результаты показывают, что MraZ действует как репрессор транскрипции. Это открытие хорошо коррелирует с данными протеомики, показывающими, что белки MraW, FtsZ и MG_223 сверхэкспрессируются в отсутствие MraZ.В целом, наши результаты подтверждают репрессорную роль MraZ, ранее задокументированную Eraso et al. (2014). В отличие от E. coli , истощение MraZ в M. genitalium приводит к четкому фенотипу. Мутант mraZ демонстрирует значительную задержку роста, важные морфологические изменения и высокую частоту клеток, застрявших в цитокинезе. Эти данные показывают, что экспрессия белков клеточного деления M. genitalium на относительно высоких уровнях на протяжении клеточного цикла в значительной степени вредна.

Предыдущее исследование Mycoplasma gallisepticum показало, что сверхэкспрессия MraZ индуцирует характерное клеточное филаментирование (Fisunov et al., 2016), которое напоминает фенотип, описанный у mraZ мутанта M. genitalium . Более того, филаментация, описанная в M. gallisepticum , также была связана с повышенным уровнем FtsZ. В том же исследовании авторы определяют сайт связывания MraZ у Mollicutes, характеризующийся серией прямых повторов последовательности AAAGTG[T/G].Единственное появление этого мотива в хромосоме M. genitalium находится в промоторной области гена mraZ . Этот вывод согласуется с отсутствием транскрипционных изменений за пределами кластера генов клеточного деления у нашего мутанта mraZ . Следует отметить, что комплементация mraZ мутанта M. genitalium могла быть достигнута только в цис , т.е. повторная интродукция копии mraZ гена в эктопическом сайте внутри кластера генов клеточного деления.Этот результат показывает сложное взаимодействие между относительным расположением гена mraZ в хромосоме и активностью MraZ. В этом смысле наши результаты показывают, что репрессорная роль MraZ требует транскрипционной связи между геном mraZ , оператором MraZ и кластером генов клеточного деления.

С другой стороны, мы обнаружили, что культуры мутанта mraW росли медленнее, чем культуры штамма дикого типа. Что еще более важно, мы смогли обнаружить флуоресценцию FtsZ-mCherry в небольшой подгруппе клеток этого мутанта.Этот факт важен, поскольку мы не смогли обнаружить экспрессию FtsZ-mCherry на фоне дикого типа. Т.о., MraW может играть роль в регуляции экспрессии FtsZ у M. genitalium . Эта регуляция должна происходить на посттранскрипционном уровне, т.к. у мутанта mraW не было обнаружено транскрипционных изменений. В соответствии с этими данными наш протеомный анализ выявил небольшое повышение уровня FtsZ в отсутствие MraW. Следует отметить, что экспрессия FtsZ у мутанта mraW , как ожидается, будет низкой из-за репрессорной активности MraZ.Дифференциальная экспрессия нескольких метилтрансфераз у мутанта mraW также была заметна, что может представлять собой реакцию M. genitalium на потерю метилтрансферазной активности MraW. Существование видов с орфанными генами mraW подтверждает роль MraW, независимую от функции MraZ, в регуляции клеточного деления. Сообщалось, что MraW метилирует остаток C1402 16S рРНК (Kimura and Suzuki, 2010). Этот остаток участвует в инициации трансляции и ее мутации в E.coli приводит к увеличению времени удвоения (Jemiolo et al., 1985). Более того, потеря функции MraW напрямую связана с измененной точностью трансляции (Kyuma et al., 2015), метилированием ДНК и регуляцией экспрессии генов (Xu et al., 2019). Наши данные RNA-Seq от мутанта mraW позволяют предположить, что MraW не регулирует экспрессию генов у M. genitalium . Тем не менее, еще предстоит полностью выяснить, играет ли MraW роль в метилировании ДНК или рРНК у этой бактерии.

Повышенный уровень экспрессии FtsZ у мутанта mraZ позволил нам визуализировать этот белок в одиночных клетках и определить динамику FtsZ на протяжении клеточного цикла M. genitalium . Мы обнаружили, что FtsZ кластеризуется на клеточном полюсе, противоположном ТМО. Когда ТМО дублируются и мигрируют к противоположному клеточному полюсу, FtsZ-ассоциированные фокусы перемещаются к средней клетке. Интенсивность очагов FtsZ снижается, когда они достигают средней клетки и две хромосомы начинают разделяться.Этот паттерн убедительно свидетельствует о том, что FtsZ может играть активную роль в клеточном делении и способствует цитокинезу M. genitalium . Кроме того, локализация белка FtsZ во время клеточного цикла, по-видимому, строго регулируется. Хотя наличие системы Min (Lutkenhaus, 2007; Rowlett, Margolin, 2015) у микоплазм не описано, предполагается, что неидентифицированные регуляторные факторы ингибируют образование Z-кольца вблизи ТМО. Интересно, что M. genitalium кодирует белок, содержащий домен DivIVA (MG211), ключевой компонент системы Min B.subtilis (Эдвардс и Эррингтон, 1997). Кроме того, мы наблюдали, что фокусы FtsZ иногда располагались между двумя фокусами ДНК, указывая на то, что нуклеоидная окклюзия также имеет место в M. genitalium . В целом, отчетливая локализация белка FtsZ на протяжении клеточного цикла предполагает существование неизвестных факторов, регулирующих клеточное деление у этой бактерии с редуцированным геномом. Эти лежащие в основе регуляторные механизмы координируют процесс цитокинеза с сегрегацией хромосом (Seto and Miyata, 1999).

Результаты нашего исследования показывают, что кластер генов клеточного деления M. genitalium играет незначительную роль во время размножения in vitro клеток дикого типа. Это согласуется с предыдущими отчетами, показывающими, что подвижность, по-видимому, является основной силой, облегчающей цитокинез у M. pneumoniae , близкого родственного вида (Hasselbring et al., 2006). Несколько лет назад мы задокументировали, что делеция гена ftsZ отменила возникновение вариантов неприлипающей фазы у М.genitalium (Lluch-Senar et al., 2010). Эти неприлипающие варианты возникают с относительно высокой частотой и могут играть важную роль в уклонении от иммунного ответа во время инфекции (Burgos et al., 2018). Основываясь на этом наблюдении, мы предположили, что FtsZ может быть важен для клеточного деления в неприлипающих клетках M. genitalium . Следует отметить, что неадгезивные производные M. genitalium неподвижны, в значительной степени плеоморфны и растут в виде крупных клеточных агрегатов (Burgos et al., 2006). В текущем исследовании мы предоставляем доказательства того, что кластер генов клеточного деления активируется у неприлипающих мутантов M. genitalium . Это открытие согласуется с нашей предыдущей гипотезой, что FtsZ и образование рудиментарной дивисомы могут быть необходимы, когда скользящая подвижность невозможна. Таким образом, строгий паразитический образ жизни M. genitalium и изощренная стратегия ухода от иммунного надзора, вероятно, обусловливают сохранение кластера генов клеточного деления у этой бесстеночной бактерии.Примечательно, что большинство из видов Mycoplasma неподвижны, что также может обеспечивать сохранение генов клеточного деления. В поддержку этого представления недавний отчет продемонстрировал, что ftsZ важен для восстановления клеточной морфологии и эффективности клеточного деления в синтетических минимальных клетках (Pelletier et al., 2021).

Заявление о доступности данных

Первоначальные материалы, представленные в исследовании, общедоступны. Эти данные можно найти здесь: Национальный центр биотехнологической информации (NCBI) База данных BioProject под номером доступа PRJNA750275.

Вклад авторов

CM-T, ST-P, ML-S, LS, EQ, JP и OQP способствовали разработке концепции и дизайна исследования. Эксперименты проводили CM-T, ST-P, MM-S, MH-R, CM-N, ML-S и OQP. CM-T и ST-P выполнили статистический анализ. CM-T и OQP написали первый черновик рукописи. ST-P, EQ и JP написали некоторые части рукописи. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантом BIO2017-84166-R от Ministryio de Ciencia, Innovación y Universidades.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Благодарности

Мы благодарны сотрудникам Servei de Genòmica i Bioinformàtica (UAB), отделу геномики (CRG) и отделу протеомики (CRG) за проведение секвенирования по Сэнгеру, анализов RNA-Seq и SILAC соответственно. Кроме того, мы благодарны тезисному комитету CM-T и двум рецензентам этой рукописи за их полезные комментарии и конструктивное обсуждение. Наконец, CM-T и MM-S хотят признать стипендию PIF от UAB и стипендию FI для докторантов от Generalitat de Catalunya соответственно.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2021.695572/full#supplementary-material

.

Сокращения

СЭМ, Сканирующая электронная микроскопия, ТМО, Терминальные органеллы, WGS, Полногеномное секвенирование,

Ссылки

Аларкон, Ф., де Васконселос, А.Т.Р., Йим, Л., и Заха, А. (2007). Гены, участвующие в клеточном делении микоплазм. Жен. Мол. биол. 30, 174–181. дои: 10.1590/S1415-47572007000200003

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Билл, Б., и Луткенхаус, Дж. (1991). FtsZ в Bacillus subtilis необходим для вегетативного разделения и для асимметричного разделения во время спорообразования. Гены Дев. 5, 447–455. doi: 10.1101/gad.5.3.447

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бендерс, Г. А., Пауэлл, Б. К., и Хатчисон, К.А. (2005). Транскрипционный анализ консервативного кластера генов ftsZ у Mycoplasma genitalium и Mycoplasma pneumoniae . J. Бактериол. 187, 4542–4551. doi: 10.1128/JB.187.13.4542-4551.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Bisson-Filho, A.W., Hsu, Y.P., Squyres, G.R., Kuru, E., Wu, F., Jukes, C., et al. (2017). Беговая дорожка с помощью филаментов FtsZ стимулирует синтез пептидогликана и деление бактериальных клеток. Наука 355, 739–743. doi: 10.1126/science.aak9973

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бургос, Р., Пич, О. К., Феррер-Наварро, М., Бейсман, Дж. Б., Керол, Э., и Пиньоль, Дж. (2006). Mycoplasma genitalium Цитаадгезины P140 и P110 реципрокно стабилизируются и необходимы для клеточной адгезии и развития терминальных органелл. J. Бактериол. 188, 8627–8637. doi: 10.1128/JB.00978-06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бургос, Р., Pich, O.Q., Querol, E., и Piñol, J. (2008). Делеция гена Mycoplasma genitalium MG_217 изменяет поведение клеток в плане скольжения путем изменения кривизны концевых органелл. Мол. микробиол. 69, 1029–1040. doi: 10.1111/j.1365-2958.2008.06343.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бургос Р., Вебер М., Мартинес С., Лух-Сенар М. и Серрано Л. (2020). Контроль качества белков и регулируемый протеолиз в организме с редуцированным геномом Mycoplasma pneumoniae . Мол. Сист. биол. 16:e9530. doi: 10.15252/msb.20209530

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бургос Р., Вуд Г. Э., Айверсон-Кабрал С. Л. и Тоттен П. А. (2018). Mycoplasma genitalium варианты неадгезивной фазы возникают по множеству механизмов и избегают зависимого от антител ингибирования роста. Заразить. Иммун. 86:e00866-17. doi: 10.1128/IAI.00866-17

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кокс, Дж.и Манн, М. (2008). MaxQuant обеспечивает высокую скорость идентификации пептидов, индивидуальную точность массы в диапазоне частей на миллиард и количественную оценку белков в масштабах всего протеома. Нац. Биотехнолог. 26, 1367–1372. doi: 10.1038/nbt.1511

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дай, К., и Луткенхаус, Дж. (1992). Правильное соотношение FtsZ к FtsA необходимо для деления клеток Escherichia coli . J. Бактериол. 174, 6145–6151. дои: 10.1128/jb.174.19.6145-6151.1992

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дьюар, С.Дж., Бегг, К.Дж., и Доначи, В.Д. (1992). Ингибирование инициации клеточного деления при дисбалансе соотношения FtsA и FtsZ. J. Бактериол. 174, 6314–6316. doi: 10.1128/jb.174.19.6314-6316.1992

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эдвардс, Д. Х., и Эррингтон, Дж. (1997). Белок Bacillus subtilis DivIVA нацеливается на перегородку деления и контролирует специфичность участка клеточного деления. Мол. микробиол. 24, 905–915. doi: 10.1046/j.1365-2958.1997.3811764.x

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Эрасо, Дж. М., Маркилли, Л. М., Митчелл, Х. Д., Тейлор, Р. К., Орр, Г., и Марголин, В. (2014). Высококонсервативный белок MraZ является регулятором транскрипции в Escherichia coli . J. Бактериол. 196, 2053–2066. doi: 10.1128/JB.01370-13

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фисунов Г.Ю., Евсютина Д.В., Семашко Т.А., Арзамасов А.А., Манувера В.А., Летаров А.В., и соавт. (2016). Сайт связывания фактора транскрипции MraZ у молликутов. Биохимия 125, 59–65. doi: 10.1016/j.biochi.2016.02.016

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гласс Дж., Лефковиц Э., Гласс Дж., Хайнер С.Р., Чен Э.Ю. и Кассел Г.Х. (2000). Полная последовательность слизистого возбудителя Ureaplasma urealyticum . Природа 407, 757–762.дои: 10.1038/35037619

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хассельбринг Б.М., Джордан Дж.Л., Краузе Р.В. и Краузе Д.К. (2006). Развитие терминальных органелл у бесклеточной бактерии Mycoplasma pneumoniae . Проц. Натл. акад. науч. США 103, 16478–16483. doi: 10.1073/pnas.0608051103

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Яффе, Дж. Д., Штанге-Томанн, Н., Смит, К., ДеКаприо, Д., Фишер, С., Батлер, Дж., и соавт. (2004). Полный геном и протеом Mycoplasma mobile. Рез. генома. 14, 1447–1461. doi: 10.1101/гр.2674004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Джемиоло, Д.К., Цвиб, К., и Дальберг, А.Е. (1985). Точечные мутации в 3′ минорном домене 16S рРНК E. coli . Рез. нуклеиновых кислот. 13, 8631–8643. дои: 10.1093/нар/13.23.8631

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Карр, Дж.R., Sanghvi, J.C., MacKlin, D.N., Gutschow, M.V., Jacobs, J.M., Bolival, B., et al. (2012). Вычислительная модель цельной клетки предсказывает фенотип по генотипу. Моб. 150, 389–401. doi: 10.1016/j.cell.2012.05.044

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кимура, С., и Судзуки, Т. (2010). Тонкая настройка рибосомного центра декодирования с помощью консервативных метиловых модификаций в Escherichia coli 16S рРНК. Рез. нуклеиновых кислот. 38, 1341–1352.doi: 10.1093/nar/gkp1073

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кьюма Т., Кимура С., Ханада Ю., Судзуки Т., Секимидзу К. и Кайто К. (2015). Рибосомальные РНК-метилтрансферазы способствуют вирулентности Staphylococcus aureus . FEBS J. 282, 2570–2584. doi: 10.1111/февраль 13302

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Х., Хэндсейкер, Б., Высокер, А., Феннелл, Т., Руан, Дж., Гомер, Н., и другие. (2009). Формат выравнивания/карты последовательностей и SAMtools. Биоинформатика 25, 2078–2079. doi: 10.1093/биоинформатика/btp352

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ляо, Ю., Смит, Г.К., и Ши, В. (2014). featureCounts: эффективная программа общего назначения для назначения чтений последовательностей геномным признакам. Биоинформатика 30, 923–930. doi: 10.1093/биоинформатика/btt656

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ллуч-Сенар, М., Керол, Э., и Пиньоль, Дж. (2010). Деление клеток у минимальной бактерии в отсутствие ftsZ. Мол. микробиол. 78, 278–289. doi: 10.1111/j.1365-2958.2010.07306.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Луткенхаус, Дж. (2007). Динамика сборки бактериальной системы MinCDE и пространственная регуляция кольца Z. Год. Преподобный Биохим. 76, 539–562. doi: 10.1146/annurev.biochem.75.103004.142652

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мартинес-Торро, К., Торрес-Пуч, С., Монж, М., Санчес-Альба, Л., Гонсалес-Мартин, М., Маркос-Сильва, М., и др. (2020). Транскрипционный ответ на голодание металлов у эмерджентного патогена Mycoplasma genitalium опосредован мех-зависимым и – независимым регуляторными путями. Аварийный. микробы заражают. 9, 5–19. дои: 10.1080/22221751.2019.1700762

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мерсье Р., Каваи Ю. и Эррингтон Дж. (2014). Общие принципы образования и размножения бесстеночного (L-формы) состояния у бактерий. eLife 3:e04629. doi: 10.7554/eLife.04629

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Осава, М., и Эриксон, Х. П. (2006). FtsZ дивергентных чужеродных бактерий может функционировать для клеточного деления Escherichia coli . J. Бактериол. 188, 7132–7140. doi: 10.1128/JB.00647-06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пеллетье, Дж. Ф., Сан, Л., Уайз, К. С., Асад-Гарсия, Н., Карас, Б.J., Deerinck, T.J., et al. (2021). Генетические требования к клеточному делению в геномно минимальной клетке. Сотовый 184, 2430.e16–2440.e16. doi: 10.1016/J.cell.2021.03.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пич, О. К., Бургос, Р., Феррер-Наварро, М., Кероль, Э., и Пиньоль, Дж. (2008). Роль цитоскелетных белков Mycoplasma genitalium MG218 и MG317 в организации терминальных органелл, скользящей подвижности и цитагерентности. Микробиология 154, 3188–3198.doi: 10.1099/mic.0.2008/020636-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Pilhofer, M., Rappl, K., Eckl, C., Bauer, A.P., Ludwig, W., Schleifer, K.H., et al. (2008). Характеристика и эволюция генов клеточного деления и синтеза клеточной стенки у бактериальных типов Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae и Planctomycetes и филогенетическое сравнение с генами рРНК. J. Бактериол. 190, 3192–3202. doi: 10.1128/JB.01797-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пуччи, М.Дж., Танасси, Дж. А., Дискотто, Л. Ф., Кесслер, Р. Э., и Догерти, Т. Дж. (1997). Идентификация и характеристика кластеров генов деления клеточной стенки у патогенных грамположительных кокков. J. Бактериол. 179, 5632–5635. doi: 10.1128/jb.179.17.5632-5635.1997

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Раппсилбер Дж., Манн М. и Исихама Ю. (2007). Протокол микроочистки, обогащения, предварительного фракционирования и хранения пептидов для протеомики с использованием StageTips. Нац. протокол 2, 1896–1906 гг. doi: 10.1038/nprot.2007.261

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Робин, А., Жозеле-Пти, Д., и Д’Ари, Р. (1990). Транскрипция гена ftsZ и деление клеток Escherichia coli . J. Бактериол. 172, 1392–1399. doi: 10.1128/jb.172.3.1392-1399.1990

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сабидо, Э., Квенбергер, О., Шен, К., Чанг, К.Ю., Шах И., Армандо А.М. и соавт. (2012). Направленная протеомика пути биосинтеза эйкозаноидов дополняет интегрированную картину клеточного метаболизма геномика-протеомика-метаболомика. Мол. Клетка. Протеомика 11:M111.014746. doi: 10.1074/mcp.M111.014746

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сето, С., и Мията, М. (1999). Разделение, движение и расположение нуклеоидов в Mycoplasma capricolum . J. Бактериол. 181, 6073–6080. doi: 10.1128/JB.181.19.6073-6080.1999

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Торрес-Пуч С., Брото А., Керол Э., Пиньол Дж. и Пич О. К. (2015). Новый сигма-фактор обнаруживает уникальный регулон, контролирующий клеточно-специфическую рекомбинацию в Mycoplasma genitalium . Рез. нуклеиновых кислот. 43, 4923–4936. doi: 10.1093/нар/gkv422

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Торрес-Пуч, С., Мартинес-Торро, К., Гранеро-Мойя, И., Кероль, Э., Пиньоль, Дж., и Пич, О.К. (2018). Активация σ20-зависимой рекомбинации и горизонтального переноса генов у Mycoplasma genitalium . Рез. ДНК. 25, 383–393. doi: 10.1093/dnares/dsy011

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Висенте, М., Гомес, М.Дж., и Айяла, Дж.А. (1998). Регуляция транскрипции генов клеточного деления в кластере Eschericia coli dcw . Сотовый.Мол. Жизнь наук. 54, 317–324. дои: 10.1007/s000180050158

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Вишняков И.Е., Борхсениус С.Н., Басовский Ю.И., Левицкий С.А., Лазарев В.Н., Снигиревская Е.С. и др. (2009). Локализация белка деления FtsZ у Mycoplasma hominis . Сотовый тисс. биол. 3, 254–262. дои: 10.1134/S19X0

79

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Сюй, X., Чжан, Х., Huang, Y., Zhang, Y., Wu, C., Gao, P., et al. (2019). Помимо рибосомной РНК-метилтрансферазы, более широкая роль MraW в метилировании, подвижности и колонизации ДНК в Escherichia coli O157:H7. Фронт. микробиол.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.