Амилаза инвитро: Сдать анализ на альфа-амилазу (диастазу)

Сдать анализ на альфа-амилазу (диастазу)

Метод определения Энзиматический колориметрический (рекомендованный IFCC).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Диастаза; Сывороточная амилаза; Амилаза сыворотки. α-Amylase; AMY; AML; Diastase; 1;4-?-D-glucanohydralase; Serum amylase; Blood amylase. 

Краткая характеристика определяемого вещества Альфа-амилаза 

Альфа-амилаза относится к группе ферментов, обеспечивающих расщепление поступающих с пищей углеводов, таких как крахмал, гликоген, до декстринов, мальтозы и глюкозы. Продуцируется этот фермент, преимущественно, в слюнных железах и поджелудочной железе, затем поступает соответственно в полость рта или просвет двенадцатиперстной кишки и участвует в расщеплении углеводов пищи. В сыворотке крови выделяют панкреатический (P-тип) и слюнной (S-тип) изоферменты амилазы (см. также тест № 12 Альфа-Амилаза панкреатическая). Обычно стабильно низкая активность альфа-амилазы в сыворотке значительно повышается при остром панкреатите или воспалении слюнных желез. Значительно более низкой амилазной активностью обладают яичники, фаллопиевы трубы, тонкий и толстый кишечник, печень, молочные железы в период лактации. 

С какой целью определяют концентрацию Альфа-амилазы в сыворотке крови

Исследование уровня альфа-амилазы используют, главным образом, для диагностики и мониторинга лечения острого панкреатита, дифференциации панкреатита от других острых абдоминальных расстройств, а также в диагностике иных видов патологии поджелудочной железы. 

При каких состояниях повышается концентрация Альфа-амилазы

При остром панкреатите через 2-12 часов от начала приступа наблюдается преходящее увеличение активности альфа-амилазы крови. Обычно при остром панкреатите активность альфа-амилазы в 4-6 раз выше референсных значений, при этом максимальные значения достигаются через 12-72 часа. Уровень альфа-амилазы возвращается к норме на третий или четвертый день. Величина повышения альфа-амилазы не связана прямо с тяжестью процесса в поджелудочной железе. Однако, чем больше повышение, тем выше вероятность острого панкреатита. 

До 20% случаев острого панкреатита могут протекать при нормальном уровне амилазы сыворотки крови, параллельное определение липазы (тест № 23) увеличивает вероятность его выявления. В частности, амилаза сыворотки может быть нормальной при острых панкреатитах, ассоциированных с гиперлипемией. Сывороточная амилаза экскретируется с мочой, поэтому увеличение значений амилазы в сыворотке крови отражается и в увеличении содержания амилазы в моче (см. тест № 108 Альфа-Амилаза (порционная/суточная моча). Активность амилазы в моче при острых панкреатитах увеличивается чаще и более значительно, чем активность амилазы в сыворотке крови, возрастание значений держится более длительный период после приступа. Тем не менее, диагностическая ценность определения активности амилазы в сыворотке крови выше.  

При некоторых патологических состояниях амилаза (обычно S-типа) может образовывать комплексы с иммуноглобулинами A и G и другими высокомолекулярными белками плазмы (макроамилаземия). Эти комплексы не проходят через мембрану почечных клубочков. В этом случае, хотя содержание амилазы в сыворотке крови возрастает, в моче определяется нормальная активность фермента. Несоответствие уровней сывороточной и мочевой активности амилазы наблюдается также при почечной недостаточности. При хроническом панкреатите вне обострения активность амилазы сыворотки обычно находится на субнормальном уровне. Обострения хронического панкреатита сопровождаются небольшими увеличениями уровня сывороточной альфа-амилазы. 

Некоторые заболевания, не имеющие отношения к поджелудочной железе, также могут сопровождаться гиперамилаземией. В их числе хроническая почечная недостаточность (снижение клиренса сывороточной амилазы), любого рода повреждения слюнных желез, заболевания желчного тракта, как результат первичного или вторичного вовлечения поджелудочной железы. Повышение содержания амилазы сыворотки наблюдается при многих патологических процессах в брюшной полости. Уровень амилазы может быть повышен при алкоголизме, а также при ожоговом и травматическом шоке с преходящей ишемией поджелудочной железы.

Что может повлиять на результат исследования на Альфа-амилазу

Прием некоторых лекарств может влиять на уровень амилазы, поэтому перед проведением исследования необходимо проконсультироваться с лечащим врачом. Повышенные уровни альфа-амилазы обнаруживаются у пациентов, страдающих алкоголизмом.

Анализ на альфа-амилазу панкреатическую сдать в Москве

Подтверждаю Подробнее

• ИНВИТРО
• org/ListItem»>Анализы
• Биохимические…
• Ферменты
• Альфа-Амилаза…

• • COVID-19
  • Программа обследования для офисных сотрудников
  • Обследование домашнего персонала
  • Оценка риска развития заболеваний сердечно-сосудистой системы
  • Диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС)
  • Оценка функции печени
  • Диагностика состояния почек и мочеполовой системы
  • Диагностика состояния желудочно-кишечного тракта
  • Диагностика заболеваний соединительной ткани
  • Диагностика сахарного диабета
  • Диагностика анемий
  • Онкология
  • Диагностика и контроль терапии остеопороза
  • Биохимия крови
  • Диагностика состояния щитовидной железы
  • Госпитальные профили
  • Здоров ты – здорова страна
  • Гинекология, репродукция
  • Здоровый ребёнок: для детей от 0 до 14 лет
  • Инфекции, передаваемые половым путём (ИППП)
  • Проблемы веса
  • VIP-обследования
  • Болезни органов дыхания
  • Аллергия
  • Определение запасов микроэлементов в организме
  • Красота
  • Витамины
  • Диеты
  • Лабораторные исследования перед диетой
  • Спортивные профили
  • Гормональные исследования для мужчин
  • Дифференциальная диагностика депрессий
  • Оценка свертывающей системы крови

• • COVID-19
  • Биохимические исследования
    • Глюкоза и метаболиты углеводного обмена
    • Белки и аминокислоты
    • Желчные пигменты и кислоты
    • Липиды
    • Ферменты
    • Маркеры функции почек
    • Неорганические вещества/электролиты:
    • Витамины
    • Белки, участвующие в обмене железа
    • Кардиоспецифичные белки
    • Маркёры воспаления
    • Маркёры метаболизма костной ткани и остеопороза
    • Определение лекарственных препаратов и психоактивных веществ
    • Биогенные амины
    • Специфические белки
  • Гормональные исследования
    • Лабораторная оценка гипофизарно-надпочечниковой системы
    • Лабораторная оценка соматотропной функции гипофиза
    • Лабораторная оценка функции щитовидной железы
    • Оценка функции паращитовидных желез
    • Гипофизарные гонадотропные гормоны и пролактин
    • Эстрогены и прогестины
    • Оценка андрогенной функции
    • Нестероидные регуляторные факторы половых желёз
    • Мониторинг беременности, биохимические маркёры состояния плода
    • Лабораторная оценка эндокринной функции поджелудочной железы и диагностика диабета
    • Биогенные амины
    • Лабораторная оценка состояния ренин-ангиотензин-альдостероновой системы
    • Факторы, участвующие в регуляции аппетита и жирового обмена
    • Лабораторная оценка состояния инкреторной функции желудочно-кишечного тракта
    • Лабораторная оценка гормональной регуляции эритропоэза
    • Лабораторная оценка функции эпифиза
  • Анализы для ЗОЖ
  • Гематологические исследования
    • Клинический анализ крови
    • Иммуногематологические исследования
    • Коагулологические исследования (коагулограмма)
  • Иммунологические исследования
    • Комплексные иммунологические исследования
    • Лимфоциты, субпопуляции
    • Оценка фагоцитоза
    • Иммуноглобулины
    • Компоненты комплемента
    • Регуляторы и медиаторы иммунитета
    • Интерфероновый статус, оценка чувствительности к иммунотерапевтическим препаратам:
  • Аллергологические исследования
    • IgE — аллерген-специфические (аллерготесты), смеси, панели, общий IgE.
    • IgG, аллерген-специфические
    • Технология ImmunoCAP
    • Технология АлкорБио
  • Маркеры аутоиммунных заболеваний
    • Системные заболевания соединительной ткани
    • Ревматоидный артрит, поражения суставов
    • Антифосфолипидный синдром
    • Васкулиты и поражения почек
    • Аутоиммунные поражения желудочно-кишечного тракта. Целиакия
    • Аутоиммунные поражения печени
    • Неврологические аутоиммунные заболевания
    • Аутоиммунные эндокринопатии
    • Аутоиммунные заболевания кожи
    • Заболевания легких и сердца
    • Иммунная тромбоцитопения
  • Онкомаркёры
  • Микроэлементы
    • Алюминий
    • Барий
    • Бериллий
    • Бор
    • Ванадий
    • Висмут
    • Вольфрам
    • Галлий
    • Германий
    • Железо
    • Золото
    • Йод
    • Кадмий
    • Калий
    • Кальций
    • Кобальт
    • Кремний
    • Лантан
    • Литий
    • Магний
    • Марганец
    • Медь
    • Молибден
    • Мышьяк
    • Натрий
    • Никель
    • Олово
    • Платина
    • Ртуть
    • Рубидий
    • Свинец
    • Селен
    • Серебро
    • Стронций
    • Сурьма
    • Таллий
    • Фосфор
    • Хром
    • Цинк
    • Цирконий
  • Исследование структуры почечного камня
  • Исследования мочи
    • Клинический анализ мочи
    • Биохимический анализ мочи
  • Исследования кала
    • Клинический анализ кала
    • Биохимический анализ кала
  • Исследование спермы
    • Светооптическое исследование сперматозоидов
    • Электронно-микроскопическое исследование спермы
    • Антиспермальные антитела
  • Диагностика инфекционных заболеваний
    • Вирусные инфекции
    • Бактериальные инфекции
    • Грибковые инфекции
    • Паразитарные инфекции
    • Стрептококковая инфекция
  • Цитологические исследования
  • Гистологические исследования
  • Онкогенетические исследования
  • Цитогенетические исследования
  • Генетические предрасположенности
    • Образ жизни и генетические факторы
    • Репродуктивное здоровье
    • Иммуногенетика
    • Резус-фактор
    • Система свертывания крови
    • Болезни сердца и сосудов
    • Болезни желудочно-кишечного тракта
    • Болезни центральной нервной системы
    • Онкологические заболевания
    • Нарушения обмена веществ
    • Описание результатов генетических исследований врачом-генетиком
    • Фармакогенетика
    • Система детоксикации ксенобиотиков и канцерогенов
    • Определение пола плода
    • Резус-фактор плода
  • Наследственные заболевания
  • Наследственные болезни обмена веществ
    • Обследование новорождённых для выявления наследственных болезней обмена веществ
    • Дополнительные исследования (после проведения скрининга и консультации специалиста)
  • Определение биологического родства: отцовства и материнства
    • Определение биологического родства в семье: отцовства и материнства
  • Исследование качества воды и почвы
    • Исследование качества воды
    • Исследование качества почвы
  • Диагностика патологии печени без биопсии: ФиброМакс, ФиброТест, СтеатоСкрин
    • Расчётные тесты, выполняемые по результатам СтеатоСкрина без взятия крови
  • Дисбиотические состояния кишечника и урогенитального тракта
    • Общая оценка естественной микрофлоры организма
    • Исследование микробиоценоза урогенитального тракта
    • Фемофлор: профили исследований дисбиотических состояний урогенитального тракта у женщин
    • Специфическая оценка естественной микрофлоры организма
  • Бланк результатов исследования на английском языке

• • Кровь
  • Моча
  • Кал
  • Спермограмма
  • Гастропанель

• • Эндоскопия
  • Функциональная диагностика
  • УЗИ

• • Исследования, которые мы не делаем
  • Новые тесты
  • Получение результатов
  • Дозаказ исследований
  • Услуга врача консультанта
  • Профессиональная позиция
    • Венозная кровь для анализов
    • Онкомаркеры. Взгляд практического онколога. Лабораторные обоснования.
    • Тестостерон: диагностический порог, метод-зависимые референсные значения
    • Лабораторная оценка параметров липидного обмена в ИНВИТРО
    • Липидный профиль: натощак или не натощак

Cтоимость анализов указана без учета взятия биоматериала

Описание

Метод определения Энзиматический колориметрический.

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Анализ крови на панкреатическую амилазу; α-амилаза панкреатическая; P-амилаза; P-тип амилазы.

Pancreatic α-amylase; Pancreatic AML; P-type amylase; P-type alpha-amylase; Amylase isoenzymes; Amylase isoforms.

Краткая характеристика определяемого вещества Альфа-Амилаза панкреатическая

Панкреатическая альфа-амилаза синтезируется ацинарными клетками поджелудочной железы и в составе панкреатического сока через общий панкреатический проток попадает в двенадцатиперстную кишку. Панкреатическая альфа-амилаза относится к кальций-зависимым металлопротеинам и обеспечивает расщепление сложных углеводов, поступающих с пищей  гидролизирует альфа-1,4-гликозидные связи в полисахаридах и приводит к образованию олигосахаридов различной длины.

Бóльшая часть панкреатической амилазы расщепляется в нижней части кишечного тракта трипсином, небольшое количество попадает в кровь.

При каких состояниях может повышаться уровень Альфа-амилазы панкреатической

Тест на альфа-амилазу панкреатическую используют для диагностики и мониторинга лечения острого панкреатита и для дифференциации панкреатита от других острых абдоминальных расстройств.

Активность панкреатической альфа-амилазы в крови низкая, но она возрастает при острых панкреатитах, а также при хирургических и травматических повреждениях поджелудочной железы.

Заболевания желчных путей, такие как холецистит, вызывают повышение активности панкреатической альфа-амилазы в сыворотке в результате первичного или вторичного поражения поджелудочной железы.

По клинической чувствительности и специфичности диагностическая ценность исследования панкреатической альфа-амилазы сопоставима с диагностическим значением исследования липазы (см. тест № 23) – наиболее специфического для поджелудочной железы фермента. Если используется критерий трехкратного превышения нормальных значений, чувствительность панкреатической альфа-амилазы на 38% выше чувствительности общей альфа-амилазы (см. тест № 11) в диагностике острых панкреатитов.

С какой целью определяют Альфа-амилазу панкреатическую в сыворотке крови

Определение активности панкреатической амилазы используют в диагностике и мониторинге острых панкреатитов и обострений хронических панкреатитов.

Что может повлиять на результат исследования крови на Альфа-амилазу панкреатическую

Повышенный уровень альфа-амилазы панкреатической обнаруживается у пациентов, злоупотребляющих алкоголем, при диабетическом кетоацидозе, а также у беременных женщин.

Прием некоторых лекарств (например, оральных контрацептивов, антибиотиков, кортикостероидов, тиазидных диуретиков и др. ) может искажать результаты исследования крови на панкреатическую альфа-амилазу.

Подготовка

Правила подготовки к исследованию на Альфа-амилазу панкреатическую

Взятие крови предпочтительно проводить утром натощак, после 8-14 часов ночного периода голодания (воду пить можно), допустимо днем через 4 часа после легкого приема пищи. Накануне исследования необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), прием алкоголя.

Показания к назначению

В каких случаях проводят анализ крови на Альфа-амилазу панкреатическую:

• диагностика и мониторинг острых и хронических панкреатитов и иных нарушений с вовлечением поджелудочной железы;
• муковисцидоз;
• острые абдоминальные боли.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: Ед/л.

Референсные значения

Пол	Возраст	Референсные значения ЕД/л
оба	до 6 мес.	1 – 12
оба	6 мес. – 1 год	1 – 23
женский	1 — 2 года	3 – 38
мужской		1 — 23
оба	2 — 19 лет	4 – 31
оба	старше 19 лет	8 – 51

Трактовка результатов исследования крови на Альфа-амилазу панкреатическую

Повышение значений

1. Острый панкреатит (в 10 раз и более выше нормы, активность достигает пика в первые 6-12 часов заболевания).
2. Обострение хронического панкреатита.
3. Киста поджелудочной железы.
4. Закупорка протока поджелудочной железы камнем, спайками, опухолью.
5. Почечная недостаточность.
6. Перфорирующая пептическая язва, непроходимость кишечника, мезентериальный инфаркт, иные виды патологии с вовлечением поджелудочной железы.
7. Алкоголизм.
8. Диабетический кетоацидоз.
9. Лекарственные препараты, вызывающие сокращение сфинктера Одди (бетанехол, дифеноксилат, наркотические анальгетики), секретин, некоторые лекарственные препараты, вызывающие повышение уровня амилазы и, возможно, панкреатит (алкоголь, аспарагиназа, азатиоприн, каптоприл, циметидин, клофибрат, кортикостероиды, ципрогептадин, диданозин, эстрогены, этакриловая кислота, фуросемид, ибупрофен, индометацин, метилдопа, нитрофурантоин, оральные контрацептивы, пентамидин, фенилбутазон, сульфанамиды, тетрациклин, тиазидные диуретики, вальпроевая кислота, зальцитабин).

Вопросы

и ответы

{{{this.PREVIEW_TEXT}}}

Вам помог ответ на вопрос?

{{/each}}

В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «Альфа-Амилаза панкреатическая (Pancreatic Alpha-amylase, P-изофермент амилазы)» в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.

Ингибирующая активность экстрактов листьев Adenanthera pavonina в отношении альфа-амилазы in vitro | BMC Complementary Medicine and Therapies

• Исследовательская статья
• Открытый доступ
• Опубликовано: 15 ноября 2016 г.

• М. Нирмали Викрамаратне ¹ ,
• Дж. К. Пунчихева ² и
• Д. Б. М. Викрамаратне ³  

BMC Дополнительная и альтернативная медицина том 16 , Номер статьи: 466 (2016) Процитировать эту статью

• 6935 доступов

• 80 цитирований

• 1 Альтметрический

• Сведения о показателях

Abstract

Справочная информация

Диабет стал тяжелым бременем для сектора здравоохранения в развивающихся странах, и среди городского населения наблюдается тенденция к увеличению заболеваемости. Подсчитано, что большинство пациентов страдают диабетом II типа, который можно легко вылечить с помощью диетических изменений, физических упражнений и лекарств. Шри-Ланка имеет долгую историю аюрведической медицины, где растение используется для лечения многих заболеваний. Поэтому важно провести научную проверку лекарственных растений, чтобы их можно было безопасно и эффективно использовать в традиционной медицинской системе, а также использовать для дальнейших исследований.

Adenanthera pavonina — растение, используемое в аюрведической медицинской системе Шри-Ланки для лечения многих заболеваний, включая диабет. Мы оценили антидиабетические свойства и антиоксидантные свойства листьев Adenanthera pavonina .

Методы

Метанольный экстракт листьев последовательно экстрагировали петролейным эфиром, а затем распределяли между EtOAc и водой. Анализ ингибирования α-амилазы проводили с использованием метода 3,5-динитросалициловой кислоты. Антиоксидантную активность измеряли с использованием активности по удалению свободных радикалов DPPH и общего содержания фенолов с использованием реактива Фолина-Чиокальтеу. Цитотоксичность экстракта оценивали с помощью биоанализа артемии.

Результаты

Значения IC ₅₀ ингибирующей активности α -амилазы MEOH, ETOAC, нефтяного эфира и воды составляли 16,16 ± 2,23, 59,93 ± 0,25, 145,49 ± 4,86 ​​и 214,85 ± 9,72 мкг/мл. таковой у акарбозы (18,63 ± 1,21 (мкг/мл). Также была определена антиоксидантная активность, и фракция EtOAc показала самое высокое общее содержание фенолов (34,62 ± 1,14 мг/г экстракта) и самую высокую активность по удалению DPPH с IC ₅₀ из 249,92 ± 3,35 мкг/мл

Заключение

Экстракты листьев Adenanthera pavonina проявляют замечательную ингибирующую активность в отношении α-амилазы в неочищенном метанольном экстракте. Таким образом, листья Adenanthera pavonina могут быть использованы в качестве обычного зеленого овоща, а также могут быть дополнительно исследованы для выделения чистых соединений с антидиабетической активностью.

Отчеты экспертной оценки

Исходная информация

По оценкам, распространенность диабета в мире увеличивается с каждым годом, что создает серьезное бремя для сектора здравоохранения, особенно в развивающихся странах. Подсчитано, что распространенность диабета высока среди городского населения [1], где 90% приходится на диабет II типа [2]. Пациентов с диабетом II типа можно легко лечить с помощью диетических изменений, физических упражнений и лекарств. Осложнения, возникающие при диабете, тесно связаны с продукцией свободных радикалов, усиливающих окислительный стресс [3]. Следовательно, использование антиоксидантов оказалось эффективным в снижении тяжести диабетических осложнений [4].

Традиционные медицинские системы в таких странах, как Китай, Индия, Северная Африка и Шри-Ланка, используют отвары или свежие смеси соков, приготовленных из лекарственных растений, для лечения большинства заболеваний, таких как рак, артрит, диабет и т. д. Adenanthera pavonina (Madatiya – сингальский, черкесский боб – английский), относящийся к семейству Fabaceae; используется в традиционной фитотерапии при различных заболеваниях, включая диабет, липидные нарушения, диарею, кровотечения, а также в качестве противовоспалительного средства [5]. Фитохимические исследования растения выявили множество соединений, которые являются стероидами, гликозидами, алкалоидами, сапонинами, полисахаридами, жирными кислотами и различными аминокислотами [5, 6], при этом ни одно из вышеуказанных соединений не претендует на активность в качестве противодиабетического соединения. Исследования, проведенные с экстрактами семян и листьев на моделях крыс, показали, что они обладают гипогликемической и антигипергликемической активностью [7]. Сообщается, что семена токсичны, но некоторые употребляют в пищу жареные семена, в то время как жители пригородов в таких странах, как Индия и Шри-Ланка, потребляют нежные листья в качестве зеленых овощей в своем обычном рационе (http://www. worldagroforestry.org/treedb). /AFTPDFS/Adenanthera_pavonina.PDF).

Важно количественно оценить противодиабетическую активность листьев, что позволит более эффективно и действенно использовать листья Adenanthera pavonina ( A. pavonina ) при лечении диабетиков. Поэтому настоящее исследование было проведено для оценки in vitro ингибирующей активности α-амилазы и антиоксидантной активности экстрактов листьев A. pavonina .

Методы

Все использованные химикаты были аналитической чистоты. 1,1-дифенил-2-пикрилгидразилрадикал (DPPH), 3,5-динитросалициловая кислота (DNSA), галловая кислота и α-амилаза из Aspergillus oryzae , приобретенный у (Sigma USA). Диметилсульфоксид (ДМСО) был приобретен Sigma-Aldrich. УФ-видимый спектрофотометр (Thermo Fisher Scientific G10S).

Коллекция растительного сырья: Свежие листья A. pavonina были собраны в Перадении, и их подлинность была подтверждена Национальным гербарием Королевского ботанического сада, Перадения, Шри-Ланка.

Растительный экстракт

Высушенные на воздухе порошкообразные листья (200 г) A. pavonina экстрагировали метанолом (MeOH) при комнатной температуре в течение 2 × 24 ч, используя 1500 мл MeOH для каждой экстракции. Объединенные экстракты MeOH концентрировали в вакууме при 40 °C до 1 л и распределяли в петролейном эфире (2 × 500 мл). Объединенную фракцию петролейного эфира фильтровали и сушили над безводным Na ₂ SO ₄ и выпаривали в вакууме досуха. Высушенный петролейный эфирный экстракт хранили в холодильнике в плотно закрытой посуде до использования. Оставшуюся метанольную фракцию выпаривали в вакууме досуха и остаток распределяли между этилацетатом (EtOAc, 1 л) и водой (1 л). Экстракт этилацетата сушили над безводным Na ₂ SO ₄ , выпаривали в вакууме досуха и хранили в холодильнике до дальнейшего использования. Водную фракцию замораживали и лиофилизировали, а остаток хранили в холодильнике до дальнейшего использования.

Исследования ингибирования α-амилазы in vitro

Анализ ингибирования α-амилазы проводили с использованием метода 3,5-динитросалициловой кислоты (DNSA) [8]. Экстракт листьев A. pavonina растворяли в минимальном количестве 10% ДМСО и далее растворяли в буфере ((Na ₂ HPO ₄ /NaH ₂ PO ₄ (0,02 М), NaCl ( 0,006 М) при рН 6,9) с получением концентраций от 10 до 1000 мкг/мл. Объем 200 мкл раствора α-амилазы (2 ед./мл) смешивали с 200 мкл экстракта и инкубировали в течение 10 мин при 30 °C. Затем в каждую пробирку добавляли по 200 мкл раствора крахмала (1% в воде (вес/объем)) и инкубировали в течение 3 мин. Реакцию останавливали добавлением 200 мкл реагента ДНКА (12 г натрия тетрагидрат тартрата калия в 8,0 мл 2 М NaOH и 20 мл 96 мМ раствора 3,5-динитросалициловой кислоты) и кипятили 10 мин на водяной бане при 85–90 °С. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли 5 мл дистиллированной воды, и измеряли оптическую плотность при 540 нм с использованием спектрофотометра УФ-видимого диапазона. Бланк со 100% ферментативной активностью готовили путем замены растительного экстракта 200 мкл буфера. Аналогичным образом готовили контрольную реакцию с использованием растительного экстракта в каждой концентрации в отсутствие раствора фермента. Образец положительного контроля готовили с использованием акарбозы (100 мкг/мл–2 мкг/мл), и реакцию проводили аналогично реакции с растительным экстрактом, как указано выше. Ингибирующую активность α-амилазы выражали в процентах ингибирования и рассчитывали по уравнению, приведенному ниже: % ингибирования α-амилазы наносили на график в зависимости от концентрации экстракта и IC ₅₀ значений были получены из графика.

$$ \%\kern0.5em \alpha \kern0.5em \mathrm{амилаза}\kern0.5em \mathrm{ингибирование}\kern0.5em =\kern0.5em 100\times \frac{\mathrm{Ab} {\ mathrm {s}} _ {100 \% \ kern0.5em \ mathrm {control}} — \ mathrm {Ab} {\ mathrm {s}} _ {\ mathrm {Sample}}} {\ mathrm {Ab} {\mathrm{s}}_{100\%\kern0.5em \mathrm{Control}}} $$

Антиоксидантная активность

A. pavonina Экстракт листьев

Активность по удалению радикалов DPPH

Активность по удалению свободных радикалов 9Экстракт листьев 0057 A. pavonina измеряли с использованием анализа DPPH, как в Gulluce et al., [9] с небольшими изменениями. Экстракт растения растворяли в метаноле и готовили образцы с различными концентрациями в диапазоне от 50 до 1000 мкг/мл. Метанольный раствор (0,1 М) DPPH был свежеприготовлен и хранился в темноте при 4 °C до использования. Объем 1 мл экстракта добавляли к 1 мл метанольного раствора DPPH. Заменив экстракт 100% раствором метанола, поставили контрольную реакцию. Смесь инкубировали в течение 30 минут в темноте при температуре окружающей среды, после чего измеряли оптическую плотность на спектрофотометре УФ-видимого диапазона с длиной волны 517 нм [10]. Антиоксидантную активность рассчитывали по следующему уравнению:

$$ \%\kern0.5em \mathrm{DPPH}\kern0.5em \mathrm{Очистка}\kern0.5em \mathrm{активность}\kern0.5em =\kern0.5em 100\times \frac{\mathrm {Ab}{\mathrm{s}}_{\mathrm{Control}}\hbox{-} \mathrm{Ab}{\mathrm{s}}_{\mathrm{Образец}}}{\mathrm{Ab} {\mathrm{s}}_{\mathrm{Контроль}}} $$

Общее содержание фенолов

Общее содержание фенолов в A. pavonina определяли спектрофотометрически с использованием реактива Фолина-Чокальтеу. Экстракт (100 мкл; 1 мг/мл) смешивали со 100 мкл фенольного реактива Фолина-Чокальтеу и выдерживали 5 мин. Объем 1,00 мл 7% Na 9К реакционной смеси добавляли раствор 0069 2 CO ₃ с последующим добавлением 1,30 мл деионизированной (ДИ) воды. Смесь выдерживали в темноте при температуре окружающей среды в течение 90 мин, после чего измеряли оптическую плотность при 750 нм. Градуировочный график строили, используя галловую кислоту в качестве эталона, и общее содержание фенолов в экстракте выражали в миллиграммах эквивалентов галловой кислоты на один грамм экстракта [10, 11].

Биоанализ цитотоксичности артемии

Экстракт растения сначала растворяли в 100 мкл ДМСО, а затем растворяли в искусственной морской воде для получения концентраций в диапазоне от 125 до 1000 мкг/мл. Искусственную морскую воду готовили по протоколу лаборатории Колд-Спринг-Харбор, 2011 г. [12]. A 26,29 г NaCl (450 мМ), 0,74 г KCl (10 мМ), CaCl ₂ 0,99 г (9 мМ), MgCl ₂ • 6H ₂ O 6,09 г (30 мМ) и MgSO _{4 • 7H 2 O 3,94 г (16 мМ) растворяли в 1 л деионизированной воды и фильтровали с использованием фильтровальной бумаги Whatmann № 42. pH раствора доводили до 7,8, автоклавировали и хранили при 4 °C до использовать (максимум в течение 1 недели). Два миллилитра раствора экстракта добавляли в отдельные пробирки и в каждую пробирку добавляли по десять половозрелых артемий. Пробирки инкубировали при 30 °C в течение 24 ч и подсчитывали количество живых креветок под увеличением. Количество смертей креветок наносили на график в зависимости от концентрации экстракта и LD 9было оценено значение 0069 50} [13]. Дихромат калия, растворенный в искусственной морской воде в концентрациях от 125 до 1000 мкг/мл, использовали в качестве положительных контролей эксперимента. Каждый эксперимент проводили в трехкратной повторности.

Результаты

Исследования ингибирования α-амилазы in vitro

Оценивая график зависимости % ингибирования α-амилазы от концентрации экстракта (рис. 1), были рассчитаны значения IC ₅₀ (таблица 1). Неочищенный экстракт MeOH показал самую низкую IC ₅₀ 16,16 ± 2,23 мкг/мл, а значения IC50 ₅₀ EtOAc, петролейного эфира и водных экстрактов составили 59,93 ± 0,25, 145,49 ± 4,86 ​​и 214,85 мкг/м2 ± 9,7 соответственно. Стандартный положительный контроль Acarbose показал IC ₅₀ 18,63 ± 1,21 мкг/мл. В этом исследовании были обнаружены значительные различия между значениями IC ₅₀ всех экстрактов ( P =2,23 × 10 ^-11 , однофакторный дисперсионный анализ). Однако разница между IC ₅₀ акарбозы и метанольного экстракта не показала существенной разницы ( P  = 0,175, односторонний ANOVA).

Рис. 1

Ингибирование ферментов (%) в зависимости от концентрации экстракта Adenanthera pavonina

Изображение в полный размер

Adenanthera pavonina Экстракты листьев

Полноразмерная таблица

Антиоксидантная активность

Общее содержание фенолов

Общее содержание фенолов (TPC) выражено в эквивалентах галловой кислоты в мг/г экстракта (таблица 1, рис. 2). Неочищенный экстракт МеОН A. pavonia содержал 9,73 ± 0,12 мг эквивалентов галловой кислоты на г экстракта, а водный раствор EtOAc и экстракт петролейного эфира показали содержание фенолов 34,62 ± 1,14, 13,46 ± 0,11 и 2,88 ± 0,23 мг. эквивалентов галловой кислоты на грамм экстракта соответственно.

Рис. 2

Общее содержание фенолов в эквивалентах галловой кислоты в экстрактах Adenanthera pavonina extracts

Full size image

DPPH radical scavenging activity

The DPPH radical scavenging activities of the A. pavonina extracts showed IC ₅₀ value of 751.66 ± 4.91, 423.62 ± 2.45 and 249.92 ± 3.35 μg /мл для экстрактов петролейного эфира-сырца, метанола и этилацетата соответственно (рис. 3, таблица 1). Наилучшая активность наблюдалась во фракции EtOAc со значением IC ₅₀ 249,92 ± 3,35 мкг/мл и IC50 ₅₀ водного экстракта не определяли, так как оно было больше 1 мг/мл. % ингибирования водного экстракта при концентрации 1 мг/мл составило всего 25,87 ± 1,75%. Значительные различия были обнаружены между значениями IC ₅₀ всех экстрактов для активности удаления DPPH ( P =0,00019, односторонний ANOVA).

Рис. 3

График зависимости активности удаления радикалов DPPH от концентрации экстракта Adenanthera pavonina

Полноразмерное изображение

Анализ цитотоксичности артемии

LD ₅₀ Значения ниже 1000 мкг/мл считаются цитотоксическими при оценке токсичности растительных экстрактов с использованием анализа артемии [13]. Величина LD ₅₀ неочищенного метанольного экстракта листьев A. pavonina составила 1963,936 мкг/мл, что указывает на отсутствие цитотоксических соединений в экстракте.

Обсуждение

Тенденция к скринингу лекарственных растений на антидиабетическую активность усилилась, так как важно открывать новые эффективные лекарства от этого заболевания. Тем не менее, ВОЗ рекомендует ежедневные физические упражнения и здоровое питание в качестве эффективного метода контроля диабета II типа [1]. Поэтому пропаганда среди городского населения здорового образа жизни с использованием в ежедневном рационе зелени, обладающей антидиабетической активностью и антиоксидантной активностью, была бы одним из экономически эффективных способов борьбы с заболеванием. Хотя экстракты семян и листьев проявляли гипогликемическую и антигипергликемическую активность при тестировании на крысах, это исследование будет первым отчетом о подробном изучении ингибирующей активности α-амилазы, насколько нам известно.

Проведенные исследования ингибирования α-амилазы показали, что экстракты A.pavonina (неочищенный MeOH, EtOAc, петролейный эфир и вода) обладают значительным ингибирующим потенциалом. Значение IC ₅₀ (16,16 ± 2,30 мкг/мл) метанольных экстрактов почти аналогично значению акарбозы (18,63 ± 1,21 мкг/мл), широко используемого и продаваемого антидиабетического препарата. Эти ингибиторы α-амилазы также называют блокаторами крахмала, поскольку они предотвращают или замедляют всасывание крахмала в организм, главным образом, блокируя гидролиз 1,4-гликозидных связей крахмала и других олигосахаридов в мальтозу, мальтриозу и другие простые сахара [14]. ]. Ингибирующая активность α-амилазы в метанольном экстракте, скорее всего, связана с полярными соединениями и заслуживает дальнейшего изучения и выделения чистых активных соединений.

Прогнозируется, что диабетические осложнения возникают в результате окислительного стресса из-за образования свободных радикалов при окислении глюкозы и последующей окислительной деградации гликозилированных белков [15]. Поэтому часто рекомендуется использование антиоксидантов вместе с антидиабетическими препаратами, чтобы избежать таких осложнений. Антиоксидантная активность, измеренная по свойствам удаления ДФПГ и общему содержанию фенолов в экстрактах листьев A. pavonina , показывает, что все экстракты действительно обладают умеренными антиоксидантными свойствами, а этилацетатная фракция проявляет наилучшие свойства удаления ДФПГ (IC 9).0069 50 249,92 ± 3,35 мкг/мл) и с самым высоким общим содержанием фенолов 34,62 ± 1,14 (эквиваленты галловой кислоты мг/г экстракта). Предварительное исследование цитотоксичности, проведенное с использованием артемии, показало, что метанольный экстракт листьев не содержит токсичных соединений, поскольку значение LD ₅₀ было выше 1 мг/мл (1963,936 мкг/мл).

Таким образом, приведенные выше результаты показывают, что экстракты листьев A. pavonina могут быть очень полезными для снижения всасывания крахмала в организм, а также могут эффективно использоваться в аюрведических процедурах. Начиная с листьев A. pavonina в основном используется сельским населением в качестве зеленого овоща. Использование этого листового овоща может быть пропагандировано среди городского населения из-за его пользы для здоровья, особенно при лечении диабетиков.

Заключение

Согласно результатам исследования экстрактов листьев Adenanthera pavonina проявляют ингибиторную активность в отношении α-амилазы с заметной активностью в неочищенном метанольном экстракте. Следовательно, листья Adenanthera pavonina можно использовать в качестве зеленого овоща, а также использовать в аюрведических отварах для контроля и лечения сахарного диабета II типа. Кроме того, это исследование открыло возможности для будущих исследований по поиску новых эффективных лекарств для диабетиков, обладающих как антиоксидантной активностью, так и антидиабетической активностью.

Ссылки

1. Информационный бюллетень ВОЗ Информационный бюллетень. 2015 г. № 312 http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs312. По состоянию на 24 января 2016 г.

2. Американская диабетическая ассоциация. Диагностика и классификация сахарного диабета. Уход за диабетом. 2012;35(1):64–71.

   Артикул Google ученый

3. Аб Хамид М.Р., Мустафа З., Суради Н.Р.М., Идрис Ф., Абдулла М. Многофакторные ценности сотрудников: подтверждение подтверждающей факторной аналитики (CFA). Afr J Управление бизнесом. 2010;5(32):12632–40.

   Google ученый

4. Робертс Л.Дж., Оутс Дж.А., Линтон М.Ф., Фацио С., Меадор Б.П., Гросс М.Д., Шир И., Морроу Д.Д. Взаимосвязь между дозой витамина Е и подавлением окислительного стресса у человека. Свободный Радик Биол Мед. 2007; 10:1388–93.

   Артикул Google ученый

5. Пандхаре Р.Б., Сангамесваран Б., Мохите П.Б., Ханаге С.Г. Ослабляющее действие семян Adenanthera pavonina 9Водный экстракт 0028 при нейропатической боли у крыс с диабетом, вызванным стрептозотоцином: свидетельство нейропротекторного действия. Браз Дж. Фармакогнозия. 2011;22(2):428–35.

   Google ученый

6. Арзуманд АРА, Хашем МДА, Муслим Т. Химическое исследование коры Adenenthera Pavonona Linn. Int J Chem Sci. 2012;10(1):98–103.

   Google ученый

7. Диссанаяке DMRK, Виджаябандара MDJ, Ратнасурия WD. Гипогликемическая и антигипергликемическая активность водного экстракта листьев Adenanthera Pavonina (Fabaceae) у крыс. Int J Pharm Res & Allied Sci. 2016;5(1):34–8.

   Google ученый

8. Миллер Г.Л. Использование реагента динитросалициловой кислоты для определения редуцирующих сахаров. Анальная хим. 1959; 31: 426–8.

   Артикул КАС Google ученый

9. Гуллюс М., Сахин Ф., Сокмен М., Озер Х., Даферера Д., Сокмен А., Полиссиу М., Адигузель А., Озкан Х. Противомикробные и антиоксидантные свойства эфирных масел и экстракта метанола из Mentha longifolia L. ssp . длиннолистный. Пищевая хим. 2007; 103:1449–56.

   Артикул КАС Google ученый

10. Викрамаратне М.Н., Гунатилаке Л.П., Анурадха Н.Г.Д., Годавиллатанна А.Н., Перера М.Г.Н., Николай I. Антиоксидантная активность и антибактериальная активность Валидда противодизентерийная . J Pharmacog и Phytochem. 2015;4(2):121–6.

    КАС Google ученый

11. «>

    Станкович М.С. Общее содержание фенолов, концентрация флавоноидов и антиоксидантная активность экстрактов Marrubium peregrinum L. Крагуевац J Sci. 2011; 33:63–72.

    Google ученый

12. Колд Спринг Харб Протокол. 2012 г.; doi:10.1101/pdb.rec068270, © Cold Spring Harbour Laboratory Press.

13. Мейер Б.Н., Ферригни Н.Р., Патнэм Дж.Е., Джейкобсон Л.Б., Николс Д.Е., Маклафлин Д.Л. Морские креветки: удобный общий биоанализ на активные растительные компоненты. Планта Мед. 1982; 45:31–34.

    Артикул КАС Google ученый

14. Кумар Б.Д., Митра А., Манджунатха М. Сравнительное исследование активности ингибиторов альфа-амилазы обычных противодиабетических растений блока Харагпур 1. Международный J Грин Фарм. 2010;4:115–21.

    Артикул КАС Google ученый

15. «>

    Мехта Дж.Л., Расули Н., Синха А.К., Молави Б. Окислительный стресс при диабете: механистический обзор его влияния на атерогенез и дисфункцию миокарда. Int J Biochem Cell Biol. 2006; 38: 794–803.

    Артикул КАС пабмед Google ученый

Ссылки на скачивание

Благодарности

Неприменимо.

Финансирование

Университет Перадения.

Доступность данных и материалов

Все данные, полученные или проанализированные в ходе этого исследования, включены в эту опубликованную статью.

Вклад авторов

JCP-Проведение всех исследовательских экспериментов. MNW-консультант по исследованиям и подготовка рукописи. Консультант DBMW-Research и предоставление средств на исследование. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Информация об авторах

Г-жа Дж. К. Пунчихева (бакалавр фармации)

Студент-исследователь/демонстратор кафедры фармации Факультета смежных медицинских наук Университета Перадения Перадения, Шри-Ланка. [email protected]

Д-р М. Нирмали Викрамаратне (доктор биохимии)

Старший преподаватель Gr I/Научный консультант кафедры физических наук и технологий факультета прикладных наук Университета Сабарагамува, Шри-Ланка, Белихулоя, Шри-Ланка. меранирмали@gmail.com

Проф. Д.Б.М. Викрамаратне (доктор медицинских наук и фармакогнозии)

Профессор/научный руководитель Факультет смежных медицинских наук Университет Перадения, Перадения, Шри-Ланка. [email protected]

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. Нефинансовые конкурирующие интересы включают (но не ограничиваются) политические, личные, религиозные, идеологические, академические и интеллектуальные конкурирующие интересы.

Согласие на публикацию

Неприменимо.

Одобрение этики и согласие на участие

Неприменимо.

Информация об авторе

Авторы и организации

1. Кафедра физических наук и технологии, Факультет прикладных наук, Университет Сабарагамува, Шри-Ланка, Белихулоя, Шри-Ланка

   М. Нирмали Викрамаратне

4 Фармацевтический факультет Союзнические медицинские науки, Университет Перадении, Перадения, Шри-Ланка

J. C. Punchihewa

2. Факультет медицинских наук, Университет Перадения, Перадения, Шри -Ланка

   D. B. M. WICKRAMARATN автор в PubMed Google Scholar

3. J. C. Punchihewa

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

4. Д. Б. М. Викрамаратне

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Автор, ответственный за переписку

М. Нирмали Викрамаратне.

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение, и воспроизведение на любом носителе, при условии, что вы укажете автора(ов) оригинала и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Отказ от права Creative Commons на общественное достояние (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Дизайн, синтез, спектроскопическая характеристика, вычислительный анализ и оценка in vitro α-амилазы и α-глюкозидазы новых монотиооксамидов на основе 3-аминопиридин-2(1H)-она и 1, 3,4-тиадиазолы

Разработка, синтез, спектроскопическая характеристика, вычислительный анализ и оценка

in vitro α-амилазы и α-глюкозидазы новых монотиооксамидов и 1,3,4-тиадиазолов на основе 3-аминопиридин-2(1 H )-она†

Ирина В. Паламарчук, ^и Зарина Т. Шульгау, ^б Адилет Я. Даутов, ^б Шынгыс Д. Сергази ^б а также Иван В. Кулаков * ^а

Принадлежности автора

* Соответствующие авторы

^и Тюменский государственный университет, Институт химии, ул. Перекопская, 15а, Тюмень 625003, Россия
Электронная почта: [email protected]

^б Национальный центр биотехнологии, Кургалжынское шоссе, 13/5, Нур-Султан, Казахстан

Аннотация

rsc.org/schema/rscart38″> В связи с ростом заболеваемости сахарным диабетом во всем мире возрастает актуальность поиска новых безопасных и эффективных ингибиторов α-амилазы и α-глюкозидазы. В данной работе мы попытались провести исследования по синтезу, модификации и комплексным компьютерным и биологическим исследованиям новых производных монотиооксамидов. Показано, что монотиооксамиды на основе 3-аминопиридина-2(1 H )-оны вступают в реакции переамидирования с гидразингидратом с образованием соответствующих тиогидразидов. Кроме того, под действием хлорацетилхлорида и янтарного ангидрида эти тиогидразиды циклизуются в сопряженные производные 1,3,4-тиадиазола. Возможную биологическую активность полученных продуктов оценивали методом молекулярного докинга с использованием программы AutoDock Vina. Соединения 7a и 8b показали более высокую аффинность связывания с выбранными белками-мишенями по сравнению с известными антидиабетическими препаратами акарбозой и TAK-875.