Ктг инвитро: Допплерометрия при беременности в Москве, цены на исследования

В ожидании малыша. Мамочка, будь здорова / «Мамочкина школа»

A.M. Дорогая Алена! В первом триместре живот может болеть из-за физиологических изменений. Гормоны делают свое дело: ткани, поддерживающие матку, размягчаются. Да и сама матка растет, смещается. Не всегда боли в животе при беременности говорят о какой-либо патологии. Чаще всего это естественная перестройка организма при изменяющихся обстоятельствах (имплантация оплодотворенной яйцеклетки). Если боли в животе кратковременные, несильные, непериодические — это не страшно. Однако в любом случае нужно рассказать о них лечащему врачу.

Когда на УЗИ можно увидеть сердцебиение малыша?

На какой неделе беременности начинает биться сердечко крохи? И можно ли в этот период делать УЗИ?

Марина С., г. Раменское

A.M. Дорогая Марина! Сердце плода начинает биться на 5-й неделе беременности, а примерно с 7-й недели оно может быть выявлено с помощью УЗИ. В норме на 7 неделе беременности сердце плода сокращается со скоростью 90-110 ударов в минуту. Выполнения УЗИ безопасно и даже показано. Во время ранней диагностики беременности с помощью УЗИ важным моментом является выявление места прикрепления плодного яйца, которое обязательно должно располагаться в полости матки. УЗИ не вызывает никаких пороков развития плода, однако может помочь их своевременному выявлению. УЗИ безопасно, так как при нем не происходит излучение радиоактивных лучей. Ультразвуковые волны — это очень частые звуковые колебания, несущие очень малую энергию, которые не могут повредить ткани ребенка даже при очень длительном воздействии.

Как определить наличие цитомегаловируса?

После сдачи анализов на ТОРЧ-инфекции у меня оказался позитивным анализ на цитомегаловирус lg М. Нужно ли этот вирус лечить? Может быть нужно пересдать этот анализ через несколько недель?

Без подписи

A.M. Положительный титр антител IgM к цитомегаловирусу может быть при недав¬нем первичном инфицировании, реактивации хронической инфекции, после перенесенной инфекции (циркулируют в крови в течение 6-12 месяцев), а также являться ложноположительным вследствие перекрестной иммунологической реакции с другими вирусами.

Для определения стадии инфекции, времени инфицирования и дальнейшей лечебной тактики необходимо сдать кровь на антитела к цитомегаловирусу с определением индекса авидности: кровь, мочу и соскоб отделяемого половых органов на ДНК цитомегаловируса.

Какие упражнения помогут при расширении вен?

Моей доченьке 1,5 годика. Довольно часто приходится носить ее на руках. Но недавно на УЗИ органов малого таза у меня обнаружили расширенные вены около матки диаметром 10 мм. Врач прописала мне свечи Гепатромбин и лечебную физкультуру. Подскажите, пожалуйста, какие упражнения показаны в таком случае? Можно ли как-то вылечить это заболевание?

Александра С., г. Москва

A.M. Дорогая Александра! Вам противопоказаны физические нагрузки и длительное пребывание в вертикальном положении. Необходимо ежедневно делать разгрузочные упражнения, которые выполняются в положении лежа: «березка», «велосипед», «ножницы» и другие.

Могу порекомендовать вам комплекс лечебно-профилактических упражнений, разработанный ведущими российскими и зарубежными специалистами.

• Разгрузка вен ног и малого таза. Полежите с закрытыми глазами, глубоко и равномерно дыша, расслабьтесь. Положите под ноги несколько подушек так, чтобы ноги оказались приподнятыми под углом 15-20°.
• Упражнение «велосипед». Лежа на спине и равномерно дыша, имитируйте езду на велосипеде. Представьте, что вы крутите педали велосипеда.
• Упражнение состоит из нескольких частей, выполняется медленно и плавно. Лежа на спине с вытянутыми ногами, сделайте глубокий вдох. Выдыхая, согните правую ногу, подтянув колено к груди. Вдыхая, выпрямите ногу вертикально вверх. Выдыхая, опустите ее. Поочерёдно повторяйте это упражнение для каждой ноги.

• Вертикальные «ножницы». Лежа на спине, расположив руки вдоль туловища, равномерно дыша, попеременно скрещивайте ноги, чередуя их.
• Лежа на спине, руки вдоль туловища, ноги под углом 15-20°, между стопами зажмите маленькую подушку. Медленно вдыхая, прогнитесь в пояснице, оторвав ягодицы от матраса. Медленно выдыхая, вернитесь в исходное положение.

Также эвакуацию крови из венозных сплетений малого таза улучшает дыхательная гимнастика — медленные глубокие вдох и выдох с включением мышц передней брюшной стенки.

Обязательным является ношение лечебных колготок II компрессионного класса, улучшающих отток крови из вен нижних конечностей, венозных сплетений промежности и ягодиц.

Прайс — XXI Век

Сердце	700 руб
Подготовка материала к фильму	600 руб
Щитовидная железа	550 руб
Почки	500 руб
Печень + желчный пузырь	450 руб
Простата + остаточная моча	550 руб
Трузи	650 руб
УЗИ мошонки	550 руб
УЗИ генетическое (эксперт)	770 руб
Фолликулометрия	300 руб
Цервикальный канал	250 руб
Триплексное сканирование вен нижних конечностей	1 000 руб
Триплексное сканирование вены нижней конечности	500 руб
Триплексное сканирование артерий нижних конечностей	1 150 руб
Триплексное сканирование артерии нижней конечности	600 руб
Триплексное сканирование артерий верхних конечностей	650 руб
Триплексное сканирование сосудов шеи (БЦА)	1 100 руб
Триплексное сканирование сосудов головы	1 150 руб
УЗИ мягких тканей	300 руб
Шейные лимфоузлы	330 руб
Плечевой сустав (один)	400 руб
Плечевой сустав (два)	550 руб
Тазобедренный сустав (один)	500 руб
Тазобедренный сустав (два)	750 руб
Подвздошно-бедренный сегмент	400 руб
Беременность 14-40 недель + Доплер	1 200 руб
Брюшная аорта	450 руб
Локтевой сустав (два)	550 руб
Беременность до 12 недель	500 руб
Допплерометрия плода	500 руб
Доплерометрия органов малого таза	500 руб
Мочевой пузырь	350 руб
УЗИ полового члена	600 руб
Мочевой пузырь	350 руб
Коленный сустав (один)	500 руб
Локтевой сустав (один)	400 руб
Одна молочная железа	400 руб
Две молочные железы	700 руб
Одна молочная железа	350 руб
Голеностопный сустав (один)	400 руб
Малый таз	600 руб
Определение функции желочного пузыря	250 руб
Беременность 12-14 недель	800 руб
Брюшная полость	550 руб
Эхокардиография плода (20-22 нед)	700 руб
УЗИ контроль медицинского аборта	Бесплатно
Беременность 14-40 недель	750 руб
Узи сосудов головного мозга	1 800 руб
Голеностопный сустав (два)	550 руб
Церквиральный канал	250 руб
Коленный сустав (два)	850 руб
УЗИ контроль биобсии щитовидной железы	550 руб

Цены | Клиника «Надия»

НАИМЕНОВАНИЕ УСЛУГИ

СТОИМОСТЬ, ГРН

Цитогенетические исследования

Анализ спермы, FISH-метод

2 850,00

Анализ спермы, FISH-метод с исследованием индивидуальной хромосомы

4 980,00

Определение кариотипа амниоцитов развивающейся беременности

2 950,00

Определение кариотипа развивающейся беременности, FISH-метод

3 600,00

Определение кариотипа ворсин хориона в абортивном материале

2 880,00

Определение кариотипа ворсин хориона беременности, которая развивается

2 740,00

Определение кариотипа ворсин хориона беременности, которая развивается, FISH-метод

3 110,00

Определение кариотипа пациента

2 200,00

Доплата за срочное определение кариотипа пациента

1 290,00

Определение кариотипа плода из пуповинной крови

2 430,00

Предимплантационный генетический скрининг по 5 хромосомам (13, 18, 21, X, Y): биопсия бластомера, PGD

19 410,00

Предимплантационный генетический скрининг по 5 хромосомам (13, 18, 21, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 5 образцов включительно

6 900,00

Предимплантационный генетический скрининг по 5 хромосомам (13, 18, 21, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 10 образцов включительно

13 800,00

Доплата за 1 дополнительный эмбрион больше 10 образцов по 5 хромосомам (13, 18, 21, X, Y)

1 900,00

Предимплантационный генетический скрининг по 8 хромосомам (13, 15, 16, 18, 21, 22, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 5 образцов включительно

9 500,00

Предимплантационный генетический скрининг по 8 хромосомам (13, 15, 16, 18, 21, 22, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 10 образцов включительно

19 000,00

Доплата за 1 дополнительный эмбрион больше 10 образцов по 8 хромосомам (13, 15, 16, 18, 21, 22, X, Y)

1 400,00

Предимплантационный генетический скрининг по 9 хромосомам (13, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 5 образцов включительно

9 700,00

Предимплантационный генетический скрининг по 9 хромосомам (13, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y), без биопсии бластоцисты/бластомера, до 10 образцов включительно

19 400,00

Доплата за 1 дополнительный эмбрион больше 10 образцов по 9 хромосомам (13, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y)

1 400,00

Fish-анализ лимфоцитов крови (1 хромосома)

1 670,00

Fish-анализ лимфоцитов крови (2 хромосомы)

2 430,00

Аврора ВРТ Днепр IVF ЭКО Лечение бесплодия Днепропетровск, искусственное оплодотворение в Днепре Цены

Основной специализацией клиники является репродуктология, в частности – методики экстракорпорального оплодотворения – ЭКО. Вместе с тем, в нашей клинике работают специалисты различных терапевтических специальностей, связанных с материнством и детством. И, если Ваша пара желает иметь детей, но «аист всё не прилетает» — мы можем помочь.

Aurora стала воплощением нашей с мужем идеи создать клинику репродуктологии, которая бы использовала исключительно признанные передовые мировые протоколы лечения, лучшее оборудование – и при этом была бы доступна украинским семьям со средним уровнем достатка. Подробнее познакомиться с клиникой Вы можете в разделе «О нас».

Гюнтер Шмидт использовал свой опыт международного консультанта по оптимальному подбору хирургического и лабораторного оборудования, а также построения лечебных и бизнес-процессов в клиниках Западной Европы. Для клиники в Днепре им было подобрано лучшее новое оборудование, выбрано оптимальное месторасположение и отстроены лечебные процессы.

Моей мечтой всегда было дарить женщинам радость материнства, лечить украинских пациентов по высоким европейским стандартам. Поэтому, получив высшее медицинское образование в Украине, я прошла стажировки в Германии и Австрии на базе клиник, использующих современные технологии в сфере лечения бесплодия.

Стажировалась у таких известных европейских репродуктологов, как профессор Томас Эбнер (Австрия), сотрудников Немецкой клиники при Университете Дюссельдорфа и Гамбурга.

Мы приложили все усилия, чтобы пациенты чувствовали себя уютно и комфортно в нашей клинике, а главное – получали то, зачем к нам обратились – прекрасных малышей.

Поэтому, не откладывайте Ваше обращение, запишитесь на приём уже сегодня!

С лучшими пожеланиями,
Доктор Екатерина Шмидт

 

Женская консультация «ЛеО»

Биопсия (врач-акушер-гинеколог)

850 р

Биопсия аппаратом «SURGITRON»

600 р

Вакуум-аспирация из полости матки диагностическая (1 манипуляция)

1800 р

Введение внутриматочной спирали

900 р

Введение тампонов с лекарственным препаратом

200 р

Забор мазка (врач-гинеколог)

250 р

Интимная контурная пластика

10000 р

Кольпоскопия

850 р

Консультация врача акушера-гинеколога, маммолога, к. м.н. (Шрамко С.В.)

2500 р

Консультация врача-гинеколога

1000 р

Консультация врача-маммолога

1000 р

Микроаборт

2200 р

Миниаборт

2000 р

Обработка влагалища (1 процедура)

200 р

Пайпель биопсия эндометрия

1200 р

Повторный прием врача-гинеколога в течение 1 мес. по поводу одного заболевания

700 р

Радиокоагуляция шейки матки аппаратом «SURGITRON»

1800 р

Радиоконизация шейки матки аппаратом «SURGITRON»

2000 р

Удаление внутриматочной спирали

900 р

Удаление внутриматочной спирали (инструментальное)

900 р

Удаление лигатур

500 р

Физиологическая беременность: I триместр (0-12 недель)

15075 р

Физиологическая беременность: II триместр (12-26 недель)

10460 р

Физиологическая беременность: III триместр (26-39 недель)

13520 р

Бархатные аборты (2 осмотра, дин. наблюдение)

5300 р

Введение акушерского разгружающего пессария

800 р

Повторный прием врача-маммолога, к.м.н. в течение 1 мес. по поводу одного заболевания

1300 р

Подбор пессариев

800 р

Удаление акушерского разгружающего пессария

800 р

Женский УЗИ-скрининг (УЗИ молочных желез, органов малого таза, щитовидной железы)

2000 р

Женское здоровье (2 приема гинеколога, кольпоскопия, мазок на флору и цитологию, УЗИ молочных желез и органов малого таза)

3000 р

Пункция двух образований молочной железы под УЗ-контролем

3200 р

Пункция одного образования молочной железы под УЗ-контролем

2500 р

Консультация врача-репродуктолога

1000 р

УЗИ органов малого таза (врач-репродуктолог)

1000 р

Прием врача-репродуктолога первичный (Маркдорф А.Г.)

2000 р

Прием врача-репродуктолога повторный (Маркдорф А.Г.)

1500 р

Внутривенная инфузия

300 р

Внутривенная инъекция

150 р

Внутримышечная инъекция

150 р

Забор крови из вены

150 р

Подкожная инъекция

50 р

Доплерометрия в акушерстве (Темнов С.В.)

1200 р

Снимок 2D (Темнов С.В.)

160 р

Снимок 3D (Темнов С.В.)

200 р

УЗИ 1 скрининг (Темнов С.В.)

1500 р

УЗИ беременных 2 и 3 триместр (Темнов С.В.)

1500 р

УЗИ молочных желез (Темнов С.В.)

1000 р

УЗИ мочевого пузыря

450 р

УЗИ органов брюшной полости

800 р

УЗИ органов малого таза (Темнов С.В.)

1350 р

УЗИ органов малого таза (трансабдоминально)

800 р

УЗИ плода (Темнов С.В.)

1500 р

УЗИ при многоплодной беременности (Темнов С.В.)

1800 р

УЗИ щитовидной железы

800 р

Видеозапись 3/4D

300 р

Видеозапись плода

300 р

Доплерографическое исследование беременных женщин (без осмотра плода)

650 р

Доплерометрия в акушерстве (Елесина Ю.Ю.)

1200 р

Определение плаценты (Елесина Ю.Ю.)

300 р

Определение плаценты

300 р

Определение пола плода

250 р

Определение пола плода (Елесина Ю.Ю.)

350 р

Определение пола плода (многоплодная беременность)

400 р

Снимок 2D (Елесина Ю.Ю.)

160 р

Снимок 3D (Елесина Ю.Ю.)

200 р

Тонкоигольная аспирационная биопсия молочной железы под контролем УЗИ

2000 р

УЗИ 1 скрининг (Елесина Ю.Ю.)

1500 р

УЗИ 2-3 скрининг (Елесина Ю.Ю.)

1500 р

УЗИ 3/4D (многоплодная беременность)

1500 р

УЗИ беременных

1000 р

УЗИ беременных (многоплодная беременность)

1200 р

УЗИ молочных желез (Елесина Ю.Ю.)УЗИ молочных желез (Елесина Ю.Ю.)УЗИ молочных желез (Елесина Ю.Ю.)

1000 р

УЗИ молочных желез и регионарных лимфоузлов

900 р

УЗИ мониторинг созревания фолликула

1300 р

УЗИ органов малого таза (Елесина Ю.Ю.)

1350 р

УЗИ органов малого таза (трансабдоминально+трансвагинально)

900 р

УЗИ органов малого таза (трансвагинально)

800 р

УЗИ органов малого таза 3/4D

900 р

УЗИ органов малого таза, к.м.н.

1200 р

УЗИ плода (Елесина Ю.Ю.)

1500 р

УЗИ при многоплодной беременности (Елесина Ю.Ю.)

1800 р

Фото плода (многоплодная беременность)

250 р

Кардиотокография (КТГ) плода при беременности

Сделать КТГ плода в клинике «Дети из пробирки»

Ваша заявка успешно отправлена!

Благодарим за обращение в нашу компанию.
Наши менеджеры ответят вам в ближайшее время!

Кардиотокография (КТГ) первый раз обязательно проводится в третьем триместре, на 32-й неделе беременности. Однако в некоторых случаях доктор может назначить ее и в 28 недель, если есть показания. В дальнейшем частота прохождения кардиотокографии определяется врачом, ведущим беременность.

Цель процедуры – зафиксировать частоту сердцебиения ребенка в утробе матери в покое, движении, при сокращениях матки и других состояниях. Подобная оценка плода позволяет выявить возможные патологии, которые не дигностируются посредством УЗИ или анализов. КТГ входит в список обязательных диагностических процедур в период беременности.

Для чего и когда проводится кардиотокографию плода?

Кардиотокография необходима для:

• определения частоты маточных сокращений и ЧСС плода;
• общей оценки состояния ребенка – и во время беременности, и в процессе родов;
• выявления возможных патологий развития.

Кроме того, показаниями для КТГ являются:

• риск преждевременных родов;
• патологии плаценты;
• обвитие пуповиной;
• кровянистые выделения из матки;
• резус-конфликт матери и ребенка;
• многоплодие;
• хронические заболевания пациентки;
• задержка развития, неактивность плода;
• первая беременность в зрелом возрасте.

Как выполняется КТГ?

Это одна из самых простых и безопасных процедур, требующая от пациентки лишь усидчивости и хорошего самочувствия. КТГ плода занимает от 30 до 60 минут, кабинет диагностики нашей клиники оснащен всем необходимым для комфортабельного размещения пациентки. Женщине рекомендуется:

• прийти на обследование сытой и взять с собой что-нибудь для утоления голода (например, яблоко, шоколад, банан), опорожнить мочевой пузырь;
• постараться выбрать для КТГ то время суток, когда плод наиболее активен – для получения точных результатов.

Стоимость процедуры

Наименование	Цена (в рублях)
Кардиотокография плода при одноплодной беременности	2000
Кардиотокография плода при многоплодной беременности	3000

Кардиотокография в клинике ВРТ «Дети из пробирки» выполняется следующим образом: пациентка ложится на бок, на живот в области максимальной слышимости сердечных сокращений плода крепятся датчики: для регистрации частоты сердцебиения плода и оценки тонуса матки. Женщина жмет на пульт с кнопкой каждый раз, как только чувствует шевеление малыша. После завершения процедуры зафиксированные на бумаге результаты оценивает доктор. Наша клиника оснащена современным высокоточным оборудованием, позволяющим при прохождении КТГ беременной двойней пациенткой фиксировать отдельно ЧСС каждого из детей.

Фотографии отделения

Услуги и цены в клинике Евромед Инвитро на Суворовском

УЗИ малого таза (трансвагинальное, перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

3 900 ₽

Записаться + 100

Медикаментозный аборт (Мифегин, перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

16 500 ₽

Записаться + 100

Гистероскопия

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Кольпоскопия (перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

3 300 ₽

Записаться + 100

Биопсия шейки матки (для сдачи анализа требуется назначение доктора клиники Евромед)

2 200 ₽

Записаться + 100

Биопсия эндометрия (для сдачи анализа требуется назначение доктора клиники Евромед)

2 860 ₽

Записаться + 100

Гинекологический пессарий (перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

2 200 ₽

Записаться + 100

ГСГ / Гистеросальпингография (с седацией, перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

16 500 ₽

Записаться + 100

ИКСИ (до 5 клеток)

15 000 ₽

Записаться + 100

ИКСИ (от 15 клеток)

40 000 ₽

Записаться + 100

ИКСИ (от 5 до 15 клеток)

25 000 ₽

Записаться + 100

Искусственная инсеминация (без стоимости медикаментов, перед проведением манипуляции требуется консультация доктора)

21 000 ₽

Записаться + 100

КТГ при беременности

4 000 ₽

Записаться + 100

Лапароскопические операции (широкий спектр малоинвазивных гинекологических операций)

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

ПИКСИ

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Скрининговое УЗИ 1 триместр (многоплодная беременность)

5 200 ₽

Записаться + 100

Скрининговое УЗИ 1 триместр (одноплодная беременность)

4 000 ₽

Записаться + 100

Скрининговое УЗИ 2 триместр

5 500 ₽

Записаться + 100

Скрининговое УЗИ 3 триместр

5 500 ₽

Записаться + 100

ЭКО по ОМС

Полная информация по телефону

Записаться + 100

ЭКО с донорской яйцеклеткой

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

ЭКО с ИКСИ

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Аспирация сперматозоидов из придатка яичка

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Введение пессария

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Витрификация яйцеклеток и эмбрионов

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Выскабливание цервикального канала

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Гистероскопическое удаление полипа матки

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Извлечение пессария

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

ИМСИ

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Неспецифическая стимуляция сперматогенеза

Цену уточняйте по телефону

Записаться + 100

Функциональные изменения и характеристики подвижности сперматозоидов японского черного быка, выделенные перколлом

Сперматозоиды двух японских черных быков (Bull-ATF и Bull-KTG) отделяли центрифугированием при 700 x g в течение 15 минут в модифицированном TALP с 45-90% перколла или без него. Контрольные промытые сперматозоиды и сперматозоиды, собранные со дна 45 и 90% фракций Перколла, были исследованы на жизнеспособность и целостность мембран (с использованием бис-бензимида Hoechst 33258 или пропидия иодида и 6-карбоксифлуоресцеина диацетата (PI-CFDA)), акросомного статуса (с использованием флуоресценции). конъюгированный с изотиоцианатом (FITC) агглютинин Pisum Sativum (PSA) и агглютинин арахиса (PNA), нафтоловый желтый S и эритрозин B (NE) или тройное окрашивание (TS)), статус емкости (с использованием хлортетрациклина (CTC)), характеристики подвижности (с использованием компьютерная система анализа движения сперматозоидов (CASA)) и для определения фертильности in vitro.Сперматозоиды, отделенные перколлом, показали большую жизнеспособность и целостность мембран, чем контрольные, как было определено с помощью наджизненного окрашивания. Наблюдались различия в результатах относительно жизнеспособности и акросомного статуса сперматозоидов среди методов окрашивания сперматозоидов. Bull-ATF, который показал значительно более высокую фертильность in vitro, чем Bull-KTG (P <0,05), показал значительно более высокий уровень сперматозоидов с CTC-B-образным (конденсированным) (P <0,01), чем Bull-KTG. Характеристики подвижности контрольных промытых сперматозоидов и сперматозоидов, разделенных 45-90% перколлом, анализировали с помощью CASA.Более подвижные и прогрессивно подвижные сперматозоиды наблюдались во фракции на дне 90% раствора перколла, чем во фракции 45% перколла или в контроле (P <0,01). Более того, сперматозоиды Bull-KTG, которые показали более низкую фертильность in vitro, чем Bull-ATF, не показали значительных отличий в подвижности от таковых у Bull-ATF. Эти результаты предоставили основную информацию о сперматозоидах японского черного быка и предположили, что сперматозоиды с большей подвижностью и жизнеспособностью могут быть получены путем разделения Перколла, чем без разделения.Однако отделение Percoll не улучшило их фертильность in vitro.

Конъюгальный перенос генов между бактериями в почве и ризосфере — Research @ WUR

TY — THES

T1 — Конъюгальный перенос генов между бактериями в почве и ризосфере

AU — Smit, E.

N1 — WU thesis 1727 Proefschrift Wageningen

PY — 1994

Y1 — 1994

N2 — Изучена степень возможного конъюгированного переноса рекомбинантной ДНК, присутствующей в генно-инженерных микроорганизмах (GEM).Возникновение переноса рекомбинантной ДНК — это только одна из проблем, связанных с использованием GEM (Глава 2). Другими потенциальными опасностями, препятствующими применению GEM в сельскохозяйственных целях, являются (1) возможная патогенность, (2) нарушение экологического баланса, (3) нежелательные биохимические реакции и (4) негативное воздействие на разнообразие и конкретные популяции (Levin and Strauss, 1991). ). Судьба ГЭУ, внесенных в почву, не очень предсказуема, поскольку знания по большинству вышеупомянутых аспектов скудны.В большинстве стран строгие правила ограничивают крупномасштабные полевые исследования с GEM, что замедляет исследования. Исследования были сосредоточены на (1) разработке чувствительных методов обнаружения для изучения GEM в почве, (2) обнаружении конъюгированной передачи плазмид местным бактериям в почве, (2) оценка судьбы рекомбинантной ДНК, присутствующей в разных местах генома. В качестве модельного микроорганизма был выбран почвенный изолят Pseudomonas fluorescens R2f. Все исследования проводились in vitro и в микрокосмах почвы, засеянной пшеницей.Изучая конъюгированный перенос между гомологичными донорскими и реципиентными штаммами, внесенными в почву, мы обнаружили, что спаривания могут происходить на чашках для отбора трансконъюгантов, таким образом скрывая реальное количество трансконъюгантов в почве (Глава 3). Было показано, что использование налидиксовой кислоты вместо стрептомицина (в сочетании с рифампицином) для отбора реципиентов, получивших плазмиду, и для противодействия отбору донора предотвращает эти спаривания планшетов. Позднее Walter et al. Подтвердили использование налидиксовой кислоты для предотвращения спаривания пластин., (1991). Используя этот контр-отбор доноров, было показано, что количество трансконъюгантов уменьшалось с уменьшением количества введенных донорских и реципиентных клеток. Однако трансконъюгантов можно было обнаружить только при внесении в почву питательных веществ или бентонитовой глины или при наличии корней растений. Тот факт, что перенос плазмиды между штаммами P.fluorescens R2f был усилен в ризосфере, не был полностью удивительным, поскольку этот организм был первоначально изолирован от ризосферы.Стимуляция переноса плазмиды добавлением питательных веществ или присутствием корней растений была также обнаружена другими исследователями (Stotzky, 1989; Edwards, 1993). Эксперименты, в которых вводятся как донор, так и реципиент, могут быть показательными для факторов, влияющих на перенос конъюгальных генов, однако они не обязательно предсказывают передачу аборигенным бактериям. Большинство потенциальных реципиентов из числа коренных народов обычно находятся в другом физиологическом состоянии, чем свежевыращенные, метаболически активные реципиенты.Для обнаружения передачи аборигенным бактериям был разработан другой метод встречного отбора доноров (глава 4). Был выделен фаг, специфичный для донорского штамма, ΦR2f, который можно было использовать для лизирования донора перед посевом на планшеты, селективные к трансконъюгантам. Самопередаваемая плазмида RP4p, которая содержит подходящие гены устойчивости к антибиотикам для отбора, была ранее помечена фрагментом эукариотической ДНК для целей гибридизации, давая RP4p. Перенос RP4p аборигенным бактериям наблюдался в ризосфере пшеницы (Глава 5).Количество обнаруженных местных трансконъюгантов составляло около 10 3 КОЕ / г почвы, в то время как количество трансконъюгантов в соответствующей основной массе почвы было чуть ниже 10 2 КОЕ / г почвы. Все проанализированные местные трансконъюганты содержали плазмиду, и все были способны переносить RP4p штамму-реципиенту P.fluorescens в контрольных фильтрах. Трансконъюганты были идентифицированы как принадлежащие к родам Pseudomonas, Enterobacter, Comamonas и Alcaligenes. Эти роды очень хорошо вписываются в известный диапазон хозяев RP4 (Thomas, 1989).Передача RP4p аборигенным бактериям также изучалась на четырех различных почвах (глава 6). Наибольшее количество трансконъюгантов на грамм сухой почвы было обнаружено в иловых суглинках Montrond и Flevo илистых суглинках (10 3-10 4), тогда как в суглинистых песках Ede и Loss илистых суглинках количество трансконъюгантов составляло около 10 2. Наличие корней растений повлияло на трансконъюгант. в значительной степени в суглинистых песках Эде и лосских илистых суглинках, но не в других почвах. Высокое содержание глины и органического вещества, присутствующее в иловых суглинках Flevo и илистых суглинках Montrond, может быть благоприятным для совместного переноса и скрыть любой стимулирующий эффект ризосферы.Поскольку самопередающиеся плазмиды вряд ли будут использоваться в качестве векторов для встраивания рекомбинантной ДНК в GEM, была изучена возможность переноса меченой плазмиды IncQ (глава 7). Кассета маркеров была сконструирована на основе двух генов устойчивости к антибиотикам, npt II и aad B, придающих устойчивость к канамицину и гентамицину, и часть гена эндотоксина Bacillus thuringiensis cry IVB была использована в качестве молекулярного маркера. Эта маркерная кассета была клонирована плазмидой IncQ (производное RSF1010), что дало плазмиду pSKTG.Мобилизацию несамоходной плазмиды pSKTG изучали в фильтрующих матах, в стерильной и естественной почве. В матрицах фильтров pSKTG мобилизовался только в присутствии RP4p. Частоты переноса при спаривании с двумя и тремя родителями находились в одном и том же диапазоне, что указывает на то, что, по-видимому, межклеточный контакт не был ограничивающим фактором. В стерильной почве частота мобилизации pSKTG с RP4p, присутствующим в том же штамме, была в 100 раз ниже, чем на фильтрах (10 -4). Когда RP4p присутствовал в отдельно введенном штамме, (трехгодичный) перенос, как было обнаружено, происходил с частотой 10-6.В микрокосмах с нестерильной почвой, засеянной пшеницей, мобилизация pSKTG на аборигенные бактерии обнаруживалась только в присутствии RP4p. Результаты, полученные при подборе фильтров с использованием всего почвенного бактериального сообщества, позволили предположить наличие генетических элементов, способных к мобилизации плазмид. Такие элементы были обнаружены Hill et al. (1992) и Top (1993), элементы с мобилизующей способностью, вероятно, присутствуют в низких количествах в естественной почве, поскольку нельзя было показать, что pSKTG мобилизуется in situ в отсутствие RP4p.Было изучено влияние расположения гетерологичной ДНК в Pseudomonas fluorescens R2f на стабильность, экспрессию и перенос генов после внесения в суглинистые пески Эде и илы Флево (Глава 8). Использовали три штамма с маркерами на различных генетических элементах, то есть самопередаваемую плазмиду (RP4p), подвижную плазмиду (pSKTG) и кассету хромосомно встроенных маркерных генов (KTG). Эксперименты по спариванию фильтров in vitro показали, что самопередаваемая плазмида переносилась с высокими частотами (около 10 -2) и что эта плазмида могла мобилизовать pSKTG с аналогичными частотами.Кассета вставленных в хромосомы маркеров могла быть мобилизована с помощью RP4p в штамм-реципиент с низкой частотой (10-8). В стерильной почве перенос хромосомы не может быть обнаружен в присутствии RP4p. Три штамма показали плохую выживаемость в суглинистых песках Эде и хорошую выживаемость в илистых суглинках Флево. Более того, частичная, но значительная потеря экспрессии гена устойчивости к гентамицину aad B наблюдалась в суглинистых песках Эде, но не в илистых суглинках Флево. Было обнаружено, что RP4p передается от интродуцированного донора аборигенным бактериям в обеих нестерильных почвах. посажены на пшеницу, тогда как трансконъюганты, несущие подвижную плазмиду pSKTG или хромосомно встроенную маркерную кассету, не были обнаружены при использовании донорского штамма без плазмиды IncP1.С момента начала этого проекта в ноябре 1988 года было опубликовано множество данных, касающихся переноса генов в почве. Однако в то время большинство знаний о конъюгальном переносе генов было получено с использованием самопередающихся плазмид и введенных донорских и реципиентных штаммов. В этой работе мы показали, что следует соблюдать осторожность, чтобы избежать спаривания на селективных пластинах при проведении таких экспериментов. Эксперимент, который показал, что RP4p может передаваться местным бактериям в почве и ризосфере, был одним из первых сообщений об этом явлении.Позже мы подтвердили, что RP4p может также передаваться аборигенным бактериям в почвах разного типа и текстуры. Это указывает на то, что почвенная среда не является препятствием для переноса генов. Наблюдение за тем, что плазмида IncQ может быть мобилизована in situ к аборигенным бактериям с помощью RP4p, присутствующего в другом штамме, показало, что может иметь место тройное спаривание. Перенос плазмиды IncQ или маркеров, присутствующих на хромосоме, нельзя было обнаружить, если не добавляли RP4p. Однако были обнаружены признаки наличия в почвенных бактериях самопередающихся генетических элементов, которые могут мобилизовать плазмиду IncQ.Частоты переноса рекомбинантной ДНК, присутствующей либо на самопередающейся, подвижной плазмиде, либо на хромосоме, можно сравнить (некоторые из них основаны на оценках) с использованием полученных данных (см. Таблицу 1). Умножение цифр на количество внесенных донорных клеток (на грамм почвы) дает, в зависимости от условий в почве, количество трансконъюгантов на грамм почвы. Поскольку плазмиды IncQ и хромосомные вставки не могут передавать свой собственный перенос, мы предположили присутствие самопередающихся плазмид в 104 аборигенных бактериях на грамм почвы (всего 10 8 КОЕ / г почвы) в почве, с возможностью мобилизации плазмид и хромосом.Частоты ясно показывают, что перенос как плазмиды IncQ, так и вставки естественными генетическими элементами ниже предела обнаружения (который составляет от 10 до 100 бактерий на грамм почвы) и что перенос этих элементов является очень редким событием. Трудно указать, до какого уровня перенос гетерологичных генов допустим. Поэтому мы предполагаем, что если бактерии, содержащие гетерологичные гены, будут применяться в сельскохозяйственных целях, рекомбинантная ДНК будет вставлена ​​в хромосому для предотвращения ненужного переноса.

AB — Изучена степень возможного конъюгированного переноса рекомбинантной ДНК, присутствующей в генно-инженерных микроорганизмах (GEM). Возникновение переноса рекомбинантной ДНК — это только одна из проблем, связанных с использованием GEM (Глава 2). Другими потенциальными опасностями, препятствующими применению GEM в сельскохозяйственных целях, являются (1) возможная патогенность, (2) нарушение экологического баланса, (3) нежелательные биохимические реакции и (4) негативное воздействие на разнообразие и конкретные популяции (Levin and Strauss, 1991). ).Судьба ГЭУ, внесенных в почву, не очень предсказуема, поскольку знания по большинству вышеупомянутых аспектов скудны. В большинстве стран строгие правила ограничивают крупномасштабные полевые исследования с GEM, что замедляет исследования. Исследования были сосредоточены на (1) разработке чувствительных методов обнаружения для изучения GEM в почве, (2) обнаружении конъюгированной передачи плазмид местным бактериям в почве, (2) оценка судьбы рекомбинантной ДНК, присутствующей в разных местах генома. В качестве модельного микроорганизма был выбран почвенный изолят Pseudomonas fluorescens R2f.Все исследования проводились in vitro и в почвенных микрокосмах, которые были засеяны пшеницей. Изучая супружеский перенос между гомологичными донорскими и реципиентными штаммами, внесенными в почву, мы обнаружили, что спаривания могут происходить на трансконъюгантных селективных пластинах, таким образом скрывая реальное количество трансконъюгантов в почве ( Глава 3). Было показано, что использование налидиксовой кислоты вместо стрептомицина (в сочетании с рифампицином) для отбора реципиентов, получивших плазмиду, и для противодействия отбору донора предотвращает эти спаривания планшетов.Использование налидиксовой кислоты для предотвращения спаривания пластинок было позже подтверждено Walter et al. (1991). Используя этот контр-отбор доноров, было показано, что количество трансконъюгантов уменьшалось с уменьшением количества введенных донорских и реципиентных клеток. Однако трансконъюгантов можно было обнаружить только при внесении в почву питательных веществ или бентонитовой глины или при наличии корней растений. Тот факт, что перенос плазмиды между штаммами P.fluorescens R2f был усилен в ризосфере, не был полностью удивительным, поскольку этот организм был первоначально изолирован от ризосферы.Стимуляция переноса плазмиды добавлением питательных веществ или присутствием корней растений была также обнаружена другими исследователями (Stotzky, 1989; Edwards, 1993). Эксперименты, в которых вводятся как донор, так и реципиент, могут быть показательными для факторов, влияющих на перенос конъюгальных генов, однако они не обязательно предсказывают передачу аборигенным бактериям. Большинство потенциальных реципиентов из числа коренных народов обычно находятся в другом физиологическом состоянии, чем свежевыращенные, метаболически активные реципиенты.Для обнаружения передачи аборигенным бактериям был разработан другой метод встречного отбора доноров (глава 4). Был выделен фаг, специфичный для донорского штамма, ΦR2f, который можно было использовать для лизирования донора перед посевом на планшеты, селективные к трансконъюгантам. Самопередаваемая плазмида RP4p, которая содержит подходящие гены устойчивости к антибиотикам для отбора, была ранее помечена фрагментом эукариотической ДНК для целей гибридизации, давая RP4p. Перенос RP4p аборигенным бактериям наблюдался в ризосфере пшеницы (Глава 5).Количество обнаруженных местных трансконъюгантов составляло около 10 3 КОЕ / г почвы, в то время как количество трансконъюгантов в соответствующей основной массе почвы было чуть ниже 10 2 КОЕ / г почвы. Все проанализированные местные трансконъюганты содержали плазмиду, и все были способны переносить RP4p штамму-реципиенту P.fluorescens в контрольных фильтрах. Трансконъюганты были идентифицированы как принадлежащие к родам Pseudomonas, Enterobacter, Comamonas и Alcaligenes. Эти роды очень хорошо вписываются в известный диапазон хозяев RP4 (Thomas, 1989).Передача RP4p аборигенным бактериям также изучалась на четырех различных почвах (глава 6). Наибольшее количество трансконъюгантов на грамм сухой почвы было обнаружено в иловых суглинках Montrond и Flevo илистых суглинках (10 3-10 4), тогда как в суглинистых песках Ede и Loss илистых суглинках количество трансконъюгантов составляло около 10 2. Наличие корней растений повлияло на трансконъюгант. в значительной степени в суглинистых песках Эде и лосских илистых суглинках, но не в других почвах. Высокое содержание глины и органического вещества, присутствующее в иловых суглинках Flevo и илистых суглинках Montrond, может быть благоприятным для совместного переноса и скрыть любой стимулирующий эффект ризосферы.Поскольку самопередающиеся плазмиды вряд ли будут использоваться в качестве векторов для встраивания рекомбинантной ДНК в GEM, была изучена возможность переноса меченой плазмиды IncQ (глава 7). Кассета маркеров была сконструирована на основе двух генов устойчивости к антибиотикам, npt II и aad B, придающих устойчивость к канамицину и гентамицину, и часть гена эндотоксина Bacillus thuringiensis cry IVB была использована в качестве молекулярного маркера. Эта маркерная кассета была клонирована плазмидой IncQ (производное RSF1010), что дало плазмиду pSKTG.Мобилизацию несамоходной плазмиды pSKTG изучали в фильтрующих матах, в стерильной и естественной почве. В матрицах фильтров pSKTG мобилизовался только в присутствии RP4p. Частоты переноса при спаривании с двумя и тремя родителями находились в одном и том же диапазоне, что указывает на то, что, по-видимому, межклеточный контакт не был ограничивающим фактором. В стерильной почве частота мобилизации pSKTG с RP4p, присутствующим в том же штамме, была в 100 раз ниже, чем на фильтрах (10 -4). Когда RP4p присутствовал в отдельно введенном штамме, (трехгодичный) перенос, как было обнаружено, происходил с частотой 10-6.В микрокосмах с нестерильной почвой, засеянной пшеницей, мобилизация pSKTG на аборигенные бактерии обнаруживалась только в присутствии RP4p. Результаты, полученные при подборе фильтров с использованием всего почвенного бактериального сообщества, позволили предположить наличие генетических элементов, способных к мобилизации плазмид. Такие элементы были обнаружены Hill et al. (1992) и Top (1993), элементы с мобилизующей способностью, вероятно, присутствуют в низких количествах в естественной почве, поскольку нельзя было показать, что pSKTG мобилизуется in situ в отсутствие RP4p.Было изучено влияние расположения гетерологичной ДНК в Pseudomonas fluorescens R2f на стабильность, экспрессию и перенос генов после внесения в суглинистые пески Эде и илы Флево (Глава 8). Использовали три штамма с маркерами на различных генетических элементах, то есть самопередаваемую плазмиду (RP4p), подвижную плазмиду (pSKTG) и кассету хромосомно встроенных маркерных генов (KTG). Эксперименты по спариванию фильтров in vitro показали, что самопередаваемая плазмида переносилась с высокими частотами (около 10 -2) и что эта плазмида могла мобилизовать pSKTG с аналогичными частотами.Кассета вставленных в хромосомы маркеров могла быть мобилизована с помощью RP4p в штамм-реципиент с низкой частотой (10-8). В стерильной почве перенос хромосомы не может быть обнаружен в присутствии RP4p. Три штамма показали плохую выживаемость в суглинистых песках Эде и хорошую выживаемость в илистых суглинках Флево. Более того, частичная, но значительная потеря экспрессии гена устойчивости к гентамицину aad B наблюдалась в суглинистых песках Эде, но не в илистых суглинках Флево. Было обнаружено, что RP4p передается от интродуцированного донора аборигенным бактериям в обеих нестерильных почвах. посажены на пшеницу, тогда как трансконъюганты, несущие подвижную плазмиду pSKTG или хромосомно встроенную маркерную кассету, не были обнаружены при использовании донорского штамма без плазмиды IncP1.С момента начала этого проекта в ноябре 1988 года было опубликовано множество данных, касающихся переноса генов в почве. Однако в то время большинство знаний о конъюгальном переносе генов было получено с использованием самопередающихся плазмид и введенных донорских и реципиентных штаммов. В этой работе мы показали, что следует соблюдать осторожность, чтобы избежать спаривания на селективных пластинах при проведении таких экспериментов. Эксперимент, который показал, что RP4p может передаваться местным бактериям в почве и ризосфере, был одним из первых сообщений об этом явлении.Позже мы подтвердили, что RP4p может также передаваться аборигенным бактериям в почвах разного типа и текстуры. Это указывает на то, что почвенная среда не является препятствием для переноса генов. Наблюдение за тем, что плазмида IncQ может быть мобилизована in situ к аборигенным бактериям с помощью RP4p, присутствующего в другом штамме, показало, что может иметь место тройное спаривание. Перенос плазмиды IncQ или маркеров, присутствующих на хромосоме, нельзя было обнаружить, если не добавляли RP4p. Однако были обнаружены признаки наличия в почвенных бактериях самопередающихся генетических элементов, которые могут мобилизовать плазмиду IncQ.Частоты переноса рекомбинантной ДНК, присутствующей либо на самопередающейся, подвижной плазмиде, либо на хромосоме, можно сравнить (некоторые из них основаны на оценках) с использованием полученных данных (см. Таблицу 1). Умножение цифр на количество внесенных донорных клеток (на грамм почвы) дает, в зависимости от условий в почве, количество трансконъюгантов на грамм почвы. Поскольку плазмиды IncQ и хромосомные вставки не могут передавать свой собственный перенос, мы предположили присутствие самопередающихся плазмид в 104 аборигенных бактериях на грамм почвы (всего 10 8 КОЕ / г почвы) в почве, с возможностью мобилизации плазмид и хромосом.Частоты ясно показывают, что перенос как плазмиды IncQ, так и вставки естественными генетическими элементами ниже предела обнаружения (который составляет от 10 до 100 бактерий на грамм почвы) и что перенос этих элементов является очень редким событием. Трудно указать, до какого уровня перенос гетерологичных генов допустим. Поэтому мы предполагаем, что если бактерии, содержащие гетерологичные гены, будут применяться в сельскохозяйственных целях, рекомбинантная ДНК будет вставлена ​​в хромосому для предотвращения ненужного переноса.

кВт — микроорганизмы

кВт — бактерии

кВт — классификация

кВт — таксономия

кВт — генетическая модификация

кВт — генетическая модификация

кВт — рекомбинантная ДНК

0003

0003 — наследственность

кВт — микроорганизмы

кВт — бактерии

кВт — классификация

кВт — таксономия

кВт — генная инженерия

кВт — рекомбинантная ДНК

кВт — наследственность

кВт — генетика

—

M наследственность

—

M внешний PhD, WU

SN — 97852193

PB — Smit

CY — S.л.

ER —

Перспективы платформ in vitro для скрининга кандидатов на лекарства от НАЖБП

Гетерогенный патогенез метаболических жировых заболеваний печени ставит перед исследователями множество проблем при разработке лечения. В этой статье исследуется спектр этих заболеваний и представлена ​​новая платформа in vitro для скрининга кандидатов на лекарства.

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП), растущая эпидемия, приводящая к накоплению триглицеридов (ТГ) и свободных жирных кислот (СЖК) в печени, включает раннюю НАЖБП и прогрессирующую форму неалкогольного стеатогепатита (НАСГ). ^1,2 Распространенность НАЖБП, которая увеличилась вдвое за последние 20 лет, в настоящее время составляет 20-30 процентов в западных странах; и общая глобальная распространенность составляет 20-25 процентов, что делает НАЖБП ведущей причиной хронической болезни печени. ^3-6 В настоящее время на рынке нет одобренных Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) лекарств от НАЖБП. ⁶ Это в основном связано с чрезвычайно сложной природой НАЖБП, которая недавно была обозначена как заболевание с множественными поражениями и органами.Для разработки эффективных методов лечения необходимо хорошо понимать прогрессирование состояния, его сложность, пространственную и временную неоднородность.

НАЖБП представляет собой прогрессирующий и неоднородный спектр. Он начинается с изолированных гепатоцитов, накапливающих чрезмерное количество липидов, вовлекает другие типы клеток на протяжении всего прогрессирования заболевания и может прогрессировать до более тяжелых форм, таких как НАСГ, фиброз, цирроз и рак ( Рисунок 1 ). Это первоначальное накопление происходит в ответ на поглощение FFA, пищевых жиров и липогенеза de novo. ^7-9 Дальнейшее развитие тяжелых состояний связано с воспалением (как локально, так и через взаимодействие с кишечником и жировой тканью), инсулинорезистентностью и изменениями гомеостаза липидов. В конечном итоге они вызывают каскад стресса через окислительный и эндоплазматический ретикулум (ER) в гепатоцитах (липотоксичность) и высвобождение связанных с повреждениями молекулярных паттернов, которые активируют клетки Купфера (KC) и звездчатые клетки печени (HSC), дополнительно способствуя воспалению и фиброзу. ^6,10,11

Рисунок 1 : Частота прогрессирования НАЖБП: от здоровой печени к циррозу.Рисунок разработан и любезно предоставлен Каролиной Рей-Бедон, Милан, Италия.

Активированные KC продуцируют воспалительные цитокины (среди прочего, TNF-a, IL-1b и IL-6), которые дополнительно повреждают гепатоциты и факторы (TGF-a, PDGF), которые стимулируют HSC. ^12,13 Недавняя работа также указывает на то, что повреждение синусоидальных эндотелиальных клеток печени (LSEC) появляется во время фазы простого стеатоза и может играть роль «привратника» в прогрессировании от простого стеатоза к НАСГ, и что их травма может быть необходима для Активация KC и HSC, приводящая к порочному каскаду травм. ¹⁴

НАЖБП, особенно когда преобладает макростеатотис и орган прогрессирует в сторону НАСГ, представляет собой высокую сложность, включающую не один, а множество независимых и взаимосвязанных путей не только через гепатоциты, но и через непаренхимные клетки. В предыдущее десятилетие большинство появляющихся препаратов НАЖБП / НАСГ нацелены на один конкретный симптом одним путем; таким образом, их успехи были ограниченными. Благодаря нашему обновленному коллективному пониманию более сложной природы спектра заболеваний, появился новый рубеж в лечении НАЖБП / НАСГ, в котором используется комбинация методов лечения с двумя или более лекарствами, нацеленными на разные пути.Этот подход в последнее время набирает обороты, и в настоящее время проводится более 20 таких комбинаторных клинических испытаний (https: // Clinicaltrials.gov/). Несколько примеров таких испытаний включают пиоглитазон-эмпаглифлозин (NCT03646292), розиглитазон-метформин (NCT00699036), семаглутид-фирсокостат-цилофексор (NCT03987074), а также другие исследования, такие как исследования обетихолевой кислоты и элафибранора на животных. ¹⁵ Таким образом, проверка эффективных доз таких комбинаций является насущной и растущей потребностью. Еще одним сложным аспектом этого сложного заболевания является его неоднородность, проявляющаяся как зависящая от времени или пространственная неоднородность симптомов, что было зафиксировано недавним исследованием масс-спектрометрической визуализации (MALDI-MSI), демонстрирующим различные липидные составы на разных стадиях заболевания. ¹⁶ Более недавнее исследование показывает зональные различия в длине сохраняемых ТГ и обогащении макростеатотических гепатоцитов насыщенными ТГ по сравнению с микростеатотическими. ¹⁷

Чтобы понять патогенез этого сложного заболевания и протестировать существующие и новые лекарственные препараты-кандидаты, за последние десятилетия было разработано несколько моделей НАЖБП in vitro. Некоторыми из недостатков этих моделей in vitro традиционно были отсутствие перфузии для имитации кровотока in vivo, использование высоких концентраций глюкозы и инсулина, не соответствующих условиям in vivo , использование клеточных линий вместо первичных клеток, акцент на одноклеточный тип — обычно паренхиматозные клетки печени — и, что наиболее важно, концентрацию внимания только на одной фазе заболевания, вместо того, чтобы фиксировать пространственную неоднородность. ^18-24 Однако было проведено несколько исследований in vitro, которые подтолкнули нас в правильном направлении. Например, Feaver et al. ⁷ и Davidson et al. ⁸ оба использовали несколько типов клеток для повторения клеточной сложности НАЖБП и использовали более физиологические уровни глюкозы для своих базальных сред, чтобы лучше имитировать in vivo микроокружение . Кроме того, Feaver et al. использовали перфузируемую макроскопическую культуральную среду (платформа Hemoshear) на срок до 14 дней, где они намеревались воспроизвести сигнатуры NAFL и NASH.Интересным подходом в этом исследовании был подход однозначной корреляции между существующими данными о пациентах и ​​самой платформой in vitro . Тем не менее, производительность метода, использованного в этом исследовании, была довольно низкой, дорогостоящей и использовалось запатентованное оборудование. Lee et al. Продемонстрировали важный прогресс в рассмотрении теории множества органов, взаимодействия между различными тканями, участвующими в НАЖБП. , где они изучали ось кишечник-печень в двухкомпонентном микрофлюидном чипе, чтобы понять абсорбцию свободных кислот кишечником и их последующий метаболизм в печени.Обратной стороной этой работы было использование клеточных линий вместо первичных паренхиматозных клеток кишечника и печени.

Несмотря на этот прогресс, существующие платформы, большинство из которых находятся в зачаточном состоянии, не обеспечивают ни высокой точности (различные аспекты НАЖБП и ее пространственной и временной неоднородности), ни производительности для эффективного выполнения исследований доза-реакция для подходов к комбинаторной терапии. In vitro повторение такой гетерогенности при НАЖБП в настоящее время отсутствует, что имеет большое значение для понимания механизма и прогрессирования заболевания; и продвигать целевые лидеры в разработке эффективных подходов к лечению.В нашей недавней работе (, рис. 2, ) мы установили in vitro прогрессирующую НАЖБП на платформе чипа с использованием градиента свободных жирных кислот для захвата спектра болезненных состояний в непрерывной ткани. ²⁵ С помощью этой микрофлюидной платформы мы смогли показать возможность все более серьезного накопления липидов за счет формирования метаболического паттерна, а также исследовать влияние градиентов кислорода при НАЖБП, приводящее к зональному накоплению липидов ²⁵ — аналогично тому, что наблюдается in vivo . ²⁶ Хотя это еще не продемонстрировано и ограничение платформы ограничено пятью каналами, то есть условиями, его можно использовать для тестирования лекарственных препаратов-кандидатов либо в одной концентрации, либо в линейно возрастающей манере в зависимости от тяжести заболевания. Комбинации лекарств также могут быть проанализированы либо в пропорциональном увеличении, либо в обратном уменьшении концентраций путем творческой модуляции крайних концов входных сигналов генератора градиента. Кроме того, увеличение пропускной способности в такой модели может быть достигнуто за счет увеличения количества каналов и мультиплексирования камер перекрестного градиента для тестирования еще большего количества условий.Важным преимуществом таких платформ с помощью градиентных микрожидкостных подходов является уменьшенное количество насосов на каждое условие, тестируемое с целью уменьшения занимаемой площади платформы in vitro .

Рисунок 2 : Дизайн устройства Microfluidic-Pattern-on-a-Chip (MPOC), создающего градиент от среды с низким содержанием жира (синий) к среде с высоким содержанием жира (оранжевый) в гексагональных камерах для культивирования клеток. Это создает прогрессивное накопление липидов в культивируемых гепатоцитах, что визуализируется с помощью окрашивания Oil-Red-O.

Пропускная способность моделей НАЖБП / НАСГ особенно важна с учетом двух обсуждаемых осложнений этого заболевания. Это а) появляющаяся новая парадигма комбинаторной терапии, которая значительно увеличивает количество состояний, требующих тестирования, и б) очень гетерогенная природа заболевания в одной ткани. Платформы для культивирования тканей Microfluidic in vitro уже имеют преимущества благодаря своим физиологически значимым размерам и способности к перфузии. Мы утверждаем, что они также идеально подходят для создания практически полезных моделей НАЖБП / НАСГ, поскольку они также могут быть разработаны для обеспечения высокой производительности, когда можно одновременно тестировать комбинацию нескольких лекарств и стадий заболевания.

В дополнение к нашему собственному видению расширения нашей платформы НАЖБП до 64 или более одновременных состояний с использованием только четырех вводных насосов и с несколькими типами клеток, в этой области проводится много интересных новых исследований. Многообещающая платформа принадлежит Draper Laboratories, где их 96-луночная индивидуально адресуемая платформа может поддерживать стабильные культуры печени в течение 14 дней. ²⁷ Мы полагаем, что следующее десятилетие повысит актуальность, точность (пространственная и временная неоднородность) и пропускная способность платформ in vitro для тестирования эффективности лекарств НАЖБП с использованием микрофлюидики.Ожидается, что это, в свою очередь, поможет и ускорит поиски лучших методов лечения этого изнурительного заболевания более эффективным и рентабельным образом.

Об авторах

Бейза Булутоглу имеет докторскую степень в области химической инженерии Колумбийского университета и степень магистра биомедицинской инженерии Йельского университета. Она закончила докторантуру в Центре инженерных наук в медицине при Массачусетской больнице общего профиля, где возглавила несколько проектов, включая создание платформ «болезнь на чипе» для изучения прогрессирования НАЖБП.Бейза имеет большой опыт в области генной инженерии и белковой инженерии и участвовал в проектах в широком спектре областей исследований, включая синтетическую биологию и тканевую инженерию. Недавно она присоединилась к Genentech, где ее группа занимается разработкой крупномолекулярных терапевтических средств для эффективных методов лечения в различных областях, включая иммунологию рака.

Камило Рей-Бедон — техник в Массачусетской больнице общего профиля. В Центре инженерных наук в медицине его исследования сосредоточены на изучении влияния жировой болезни печени на метаболизм лекарств, разработке моделей болезни «орган на чипе» и глубоком переохлаждении органоидов печени.Его исследовательские интересы заключаются в применении новых микротехнологий и молекулярных технологий для имитации сложности человеческой биологии in vitro .

Peony Banik , проведенное Центром инженерных наук в области медицины, исследует влияние жировой болезни печени на метаболизм лекарств. Она также участвует в проектах, направленных на продление срока жизни трансплантируемой человеческой печени ex vivo посредством криоконсервации. Ее интересы заключаются в создании и развитии биотехнологий в области токсикологии и трансплантологии.

Аслихан Гокалтун получил степень бакалавра химического машиностроения в университете Хаджеттепе в Турции. Затем она получила степень магистра и доктора наук в области химического машиностроения по программе науки и технологии полимеров в Университете Хаджеттепе. В настоящее время она работает докторантом в Центре инженерии в медицине и хирургии Гарвардской медицинской школы. Ее исследовательские интересы сосредоточены на разработке и синтезе новых материалов для приложений «органы на чипах» и тканевой инженерии.

Мартин Л. Ярмуш — директор-основатель Центра инженерных наук в медицине, Массачусетской больницы общего профиля и Гарвардской медицинской школы. Он всемирно известный эксперт в широких областях биомедицинской инженерии, тканевой инженерии и биосохранения. Следственная деятельность Мартина включает как фундаментальные, так и прикладные исследования, результатом которых стали многочисленные патенты и создание более 10 новых компаний.

Осман Берк Уста — доцент кафедры хирургии и биоинженерии в Гарвардской медицинской школе и Массачусетской больнице общего профиля в составе Центра инженерных наук в медицине.Его исследовательские интересы лежат на пересечении (микро) инженерных моделей тканей для здоровой и больной физиологии, биосохранения и компьютерного моделирования. Он и его команда разрабатывают сложные модели ткани печени, чтобы имитировать различные аспекты физиологии печени, такие как зонирование, а недавно они разработали модели, имитирующие прогрессирование неалкогольной жировой болезни печени.

Список литературы

1. Angulo, P .; Линдор К. Д. Неалкогольная жировая болезнь печени.J Gastroenterol Hepatol 2002, 17, S186-S190.
2. Benedict, M .; Чжан X. Неалкогольная жировая болезнь печени: расширенный обзор. Мир J Hepatol 2017, 9 (16), 715-732.
3. Younossi, Z .; Ансти, К. М .; Marietti, M .; Харди, Т .; Генри, L .; Эслам, М .; Джордж, Дж .; Бугианези Э. Глобальное бремя НАЖБП и НАСГ: тенденции, прогнозы, факторы риска и профилактика. Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол 2018, 15 (1), 11-20.
4. LaBrecque, D. R .; Аббас, З .; Анания, Ф .; Ferenci, P .; Хан, А.Г .; Гох, К.L .; Hamid, S. S .; Исаков, В .; Lizarzabal, M .; Penaranda, M. M .; Ramos, J. F .; Зарин, С .; Stimac, D .; Томсон, А. Б .; Умар, М .; Krabshuis, J .; Лемэр, А., Глобальные рекомендации Всемирной Гастроэнтерологической Организации: Неалкогольная жировая болезнь печени и неалкогольный стеатогепатит. J Clin Gastroenterol 2014, 48 (6), 467-73.
5. Rinella, M .; Чарльтон, М., Глобализация неалкогольной жировой болезни печени: распространенность и влияние на здоровье в мире. Гепатология 2016, 64 (1), 19-22.
6. Диль, А. М.; Дэй, С., Причина, патогенез и лечение неалкогольного стеатогепатита. N Engl J Med 2017, 377 (21), 2063-2072.
7. Feaver, R.E .; Cole, B.K .; Лоусон, М. Дж .; Hoang, S.A .; Марукян, С .; Blackman, B.R .; Figler, R.A .; Sanyal, A. J .; Wamhoff, B.R .; Дэш А. Разработка системы печени человека in vitro для исследования неалкогольного стеатогепатита. JCI Insight 2016, 1 (20), e90954.
8. Sanders, F.W .; Гриффин, Дж. Л., De novo липогенез в печени при здоровье и болезни: больше, чем просто шунтирующая площадка для глюкозы.Биол Рев Кэмб Филос Соц 2016, 91 (2), 452-68.
9. Хеллерштейн, М. К. Липогенез De novo у человека: метаболические и регуляторные аспекты. Eur J Clin Nutr 1999, 53 Приложение 1, S53-65.
10. Fierbinteanu-Braticevici, C .; Sinescu, C .; Молдовяну, А .; Petrisor, A .; Diaconu, S .; Cretoiu, D .; Братичевичи, Б., Неалкогольная жировая болезнь печени: единое целое, множественные воздействия на здоровье печени. Cell Biol Toxicol 2017, 33 (1), 5-14.
11. Di Maso, V .; Беллентани С. Существует ли эффективная терапия неалкогольной жировой болезни печени? F1000 Med Rep 2009, 1.
12. Heymann, F .; Tacke, F., Иммунология в печени — от гомеостаза к болезни. Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол 2016, 13 (2), 88-110.
13. Arrese, M .; Cabrera, D .; Калергис, А. М .; Фельдштейн А. Э. Врожденный иммунитет и воспаление при НАЖБП / НАСГ. Dig Dis Sci 2016, 61 (5), 1294-303.
14. Miyao, M .; Kotani, H .; Ishida, T .; Kawai, C .; Manabe, S .; Abiru, H .; Тамаки, К., Ключевая роль синусоидальных эндотелиальных клеток печени в прогрессировании НАЖБП / НАСГ. Лаборатория Инвест 2015, 95 (10), 1130-44.
15.Roth, J.D .; Veidal, S. S .; Fensholdt, L.K.D .; Rigbolt, K. T. G .; Папазян, Р .; Nielsen, J.C .; Feigh, M .; Vrang, N .; Янг, М .; Jelsing, J .; Adorini, L .; Хансен, Х. Х., Комбинированное лечение обетихолевой кислотой и элафибранором способствует дополнительным гистологическим улучшениям печени в индуцированной диетой модели ob / ob мыши с подтвержденным биопсией НАСГ. Sci Rep 2019, 9 (1), 9046.
16. Щупакова, К .; Скоро, З .; Эртайлан, Г .; Pierzchalski, K. A .; Eijkel, G. B .; Ellis, S. R .; Greve, J. W .; Дриссен, А .; Верхей, Дж.; Де Кок, Т. М .; Olde Damink, S. W. M .; Rensen, S. S .; Херен Р. М. Липидомика пространственных систем выявляет неоднородность неалкогольной жировой болезни печени. Anal Chem 2018, 90 (8), 5130-5138.
17. Alamri, H .; Patterson, N.H .; Ян, Э .; Zoroquiain, P .; Lazaris, A .; Chaurand, P .; Метракос П. Картирование распределения триглицеридов в печени человека с НАЖБП с помощью визуализирующей масс-спектрометрии MALDI выявляет молекулярные различия в микро- и макростеатозе. Анал Биоанал Химия 2019, 411 (4), 885-894.
18.Дэвидсон, М. Д .; Ballinger, K. R .; Хетани, С. Р., Длительное воздействие аномальных уровней глюкозы изменяет пути метаболизма лекарств и чувствительность к инсулину в первичных гепатоцитах человека. Sci Rep 2016, 6, 28178.
19. Lee, S. Y .; Сунг, Дж. Х., Кишечник-печень на чипе к модели стеатоза печени in vitro. Biotechnol Bioeng 2018.
20. Машек Д.Г .; Груммер Р. Р. Влияние длинноцепочечных жирных кислот на метаболизм липидов и глюкозы в однослойных культурах гепатоцитов крупного рогатого скота. J Dairy Sci 2003, 86, 2390-2396.
21. Ricchi, M .; Odoardi, M. R .; Carulli, L .; Анзивино, Ц .; Ballestri, S .; Pinetti, A .; Fantoni, L.I .; Marra, F .; Бертолотти, М .; Banni, S .; Lonardo, A .; Карулли, Н .; Лориа П., Дифференциальное действие олеиновой и пальмитиновой кислоты на накопление липидов и апоптоз в культивируемых гепатоцитах. J Gastroenterol Hepatol 2009, 24 (5), 830-40.
22. Janorkar, A. V .; King, K. R .; Megeed, Z .; Ярмуш, М. Л., Разработка модели стеатоза печени in vitro на культуре клеток с использованием репортерных клеток, полученных из гепатоцитов.Biotechnol Bioeng 2009, 102 (5), 1466-74.
23. Zhao, F .; Xie, P .; Jiang, J .; Zhang, L .; An, W .; Жан Ю. Эффект и механизм тамоксифен-индуцированного стеатоза гепатоцитов in vitro. Int J Mol Sci 2014, 15 (3), 4019-30.
24. Гори, М .; Simonelli, M.C .; Giannitelli, S.M .; Businaro, L .; Trombetta, M .; Райнер А. Исследование неалкогольной жировой болезни печени в микрофлюидном устройстве «печень на чипе». PLoS One 2016, 11 (7), e0159729.
25. Bulutoglu, B .; Rey-Bedon, C .; Канг, Ю.; Mert, S .; Ярмуш, М. Л .; Уста О. Б. Микрожидкостная модель неалкогольной жировой болезни печени: приложения к прогрессированию болезни и зонированию. Лабораторный чип 2019, 19 (18), 3022-3031.
26. Холл, З .; Bond, N.J .; Ashmore, T .; Сандерс, Ф .; Амент, З .; Ван, X .; Мюррей, А. Дж .; Bellafante, E .; Добродетель, S .; Vidal-Puig, A .; Allison, M .; Davies, S.E .; Кулман, А .; Vacca, M .; Гриффин, Дж. Л., Зонирование липидов и ремоделирование фосфолипидов при неалкогольной жировой болезни печени. Гепатология 2017, 65 (4), 1165-1180.
27. Tan, K .; Keegan, P .; Роджерс, М .; Lu, M .; Gosset, J. R .; Charest, J .; Бейл, С. С., Микрофлюидная микрофизиологическая система с высокой пропускной способностью (PREDICT-96) для повторения функции гепатоцитов в условиях динамического рециркулирующего потока. Лабораторный чип 2019, 19 (9), 1556-1566.

Связанные темы
Анализ, Аналитические методы, Исследование болезней, Открытие лекарств, Целевые лекарственные средства, Высокопроизводительный скрининг (HTS), In vitro, Микрожидкостная технология, Орган на чипе, Органоиды, Исследования и разработки, Скрининг, Терапия

Зонд KTG FISH

Зонд KTG FISH разработан для гибридизации с геном KTG и в основном используется для обнаружения амплификаций и делеций, связанных с этим геном.Этот зонд Подтверждено ли FISH на нормальных метафазных распространениях периферической крови и межфазных ядрах. Зонд можно маркировать одним из пяти цветов. Каждый зонд продается в комплекте из 20 тестов (примерно 20 слайдов — площадь 22×22 мм) и включает: буфер для гибридизации. Обратите внимание, что в связи с оптимизацией дизайна цены могут измениться.

** Этот продукт предназначен только для in vitro и исследований. Этот продукт не предназначен для диагностического использования.

Сводка гена

Белок, кодируемый этим геном, представляет собой мембранный белок, который катализирует присоединение алкильной группы акиламина к остатку глутамина в белке, образуя в белке алкилглутамин.Это алкилирование белков приводит к сшиванию белков и связыванию полиаминов с белками. Этот ген содержит одну или две копии повторяющейся единицы из 22 нуклеотидов в его 3 ‘UTR. Мутации в этом гене были связаны с аутосомно-рецессивным пластинчатым ихтиозом (LI) и небуллезной врожденной ихтиозиформной эритродермией (NCIE). [предоставлено RefSeq, июль 2008 г.]

Детали гена

Символ гена : TGM1

Название гена : Трансглутаминаза 1

Хромосома : CHR14: 24718319-24732416

Локус : 14q12

В корзину

Протоколы датчиков FISH

Название протокола, процедуры или формы	Последнее изменение	Скачать

Публикации клиентов

В настоящее время нет публикаций, связанных с FISH для этого гена.

Подробнее о продукте

Продукт : Зонд KTG FISH

Тестовые наборы : 20 (40 мкл)

Буфер ISH : 200 мкл

Артикул : TGM1-20-OR

Паспорт безопасности материала : MSDS.pdf

Срок выполнения : 7-10 рабочих дней

Время доставки : ускоренная доставка 1-2 дня

В корзину

CRS0367P12450.TIF

% PDF-1.4 % 211 0 объект > эндобдж 208 0 объект [/ CalGray>] эндобдж 209 0 объект [/ CalRGB>] эндобдж 240 0 объект > поток application / pdf

CRS0367P12450.TIF

Среда, 12 сентября, 14:40:20 2007PageGenie PDFGeneratorCRS0367P12450.TIF2021-07-30T13: 42: 54-07: 002021-07-30T13: 42: 54-07: 00uuid: 670f92da-1dd2-11b2-0a00-200a27edca00uuid: 670f92dd-1dd2 -11b2-0a00-380000000000 конечный поток эндобдж 212 0 объект > эндобдж 192 0 объект > эндобдж 207 0 объект > эндобдж 213 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Thumb 193 0 R / Type / Page >> эндобдж 1 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Thumb 195 0 R / Type / Page >> эндобдж 47 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Thumb 197 0 R / Type / Page >> эндобдж 85 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Thumb 199 0 R / Type / Page >> эндобдж 127 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Thumb 201 0 R / Type / Page >> эндобдж 241 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 253 0 объект [260 0 R 261 0 R 262 0 R 263 0 R 264 0 R] эндобдж 254 0 объект > поток q 540.0594177 0 0 68.6011963 26.9702911 675.3988037 см / Im0 Do Q BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 85,56998 576,99985 тм (1976; 36: 2450-2454.) Tj / T1_1 1 Тс -5.557 0 Тд (Рак Res \ 240) Tj / T1_0 1 Тс 0 1 ТД (\ 240) Tj 0 1.00001 TD (Бартель Барлоги, Бенджамин Древинко, Роберт С. Бенджамин и др.) Tj / T1_2 1 Тс 0 1 ТД (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс 18 0 0 18 264,03561 616,99997 тм (в пробирке) Tj / T1_4 1 Тс -13.00198 0 Тд (Комплекс адриамицин-ДНК) Tj Т * (Кинетический ответ лимфоидных клеток человека на) Tj ET 30 522 534 35 рэ 0 0 мес. S BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 529,99997 тм (\ 240) Tj / T1_4 1 Тс -7,55696 1 тд (Обновленная версия) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 141 521,99994 тм (\ 240) Tj / T1_0 1 Тс 26.12495 1 тд () Tj 0 0 1 рг -26.12495 0 Тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/36/7_Part_1/2450)Tj 0 г 0 1.00001 TD (См. Самую последнюю версию этой статьи по адресу:) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 501,99997 тм (\ 240) Tj 0 1 ТД (\ 240) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 481,99997 тм (\ 240) Tj Т * (\ 240) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 461,99997 тм (\ 240) Tj Т * (\ 240) Tj ET 30 347 534 115 рэ 0 0 мес. S BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 429,99997 тм (\ 240) Tj / T1_4 1 Тс -5.66901 1 тд (Оповещения по электронной почте) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 295,49963 442 тм (относится к этой статье или журналу.) Tj 0 0 1 рг -15.44996 0 Тд (Зарегистрируйтесь, чтобы получать бесплатные уведомления по электронной почте) Tj ET BT 0 г / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 396.99994 тм (\ 240) Tj / T1_4 1 Тс -6.38997 1 тд (Подписки) Tj 0,556 1,00001 тд (Отпечатки и) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 141 399,99994 тм (\ 240) Tj 13,46496 1 тд (.) Tj 0 0 1 рг -6.85098 0 Тд ([email protected]) Tj 0 г -6.61398 0 Тд (Отделение) Tj 0 1.00001 TD (Чтобы заказать перепечатку статьи или подписаться на журнал, свяжитесь с нами \ t Публикации AACR) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120,94 202 374,99997 тм (\ 240) Tj / T1_4 1 Тс -5.66901 1 тд (Разрешения) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 141 346,99988 тм (\ 240) Tj 0 1 ТД (Сайт Rightlink.) Tj 0 1.00001 TD (Нажмите «Запросить разрешения», чтобы перейти на страницу защиты авторских прав \ Центр раннса \ (CCC \)) Tj 26.12495 1 тд (.) Tj 0 0 1 рг -26.12495 0 Тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/36/7_Part_1/2450)Tj 0 г 0 1 ТД (Чтобы запросить разрешение на повторное использование всей или части этой статьи, используйте это li \ nk) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 9 0 0 9 274.\ q

Новая замена PBP3 в Haemophilus influenzae снижает чувствительность к аминопенициллину | BMC Microbiology

Бактериальные штаммы и условия культивирования

Клинический изолят крови из округа Кроноберг (Швеция) (NTHi93–57485) был собран в рамках рутинной диагностики в лаборатории клинической микробиологии в Векшё, Швеция. Изолят подвергся скринингу на устойчивость к β-лактамам посредством дисковой диффузии, оказался отрицательным по β-лактамазе при испытании на нитроцефин и имел МПК для амоксициллина 2 мг / л в соответствии с первоначальным тестом Etest (bioMérieux, Marcy l’Etoile, Франция), и, таким образом, резистентность к аминопенициллину в соответствии с клиническими контрольными точками EUCAST на то время (2011 г.).Однако изолят не нес ни одной из ранее описанных ключевых мутаций в ftsI и поэтому был выбран для дальнейшего тестирования. Секвенирование ДНК fstI выявило альтернативную аминокислотную замену, расположенную рядом с KTG-мотивом; Y528H (рис.1).

Рис. 1

Аминокислотная последовательность домена транспептидазы PBP3 показана для штамма PBP3 дикого типа NTHi3655, а также для мутантного штамма NTHi3655-PBP3 ^Y528H и клинического штамма NTHi93–57,485, экспрессирующего Y528H. подмена.Для сравнения последовательность PBP3 H.influenzae Rd. также отображается (GenBank: U32793). Ни одна из других замен, связанных с устойчивостью, перечисленных в таблице 1, не присутствует ни в одном из изолятов

. Для сайт-направленного мутагенеза хорошо охарактеризованный, чувствительный к β-лактамам изолят (NTHi3655), ранее любезно предоставленный R. Munson, St Был выбран Луис, Миссури [12]. Этот штамм был выбран, поскольку известна его полная последовательность генома, и он имеет последовательность wtPBP3, идентичную последовательности H.influenzae Rd. (инвентарный номер AAZF01000004.1). ATCC49766 (Американская коллекция типовых культур, стандарты LGC, Теддингтон, Великобритания) использовали в качестве контроля качества при тестировании на чувствительность к противомикробным препаратам. Все штаммы культивировали на шоколадном агаре или в бульоне для инфузии сердца мозга (BHI) с добавлением 10 мкг / мл каждого из никотинамидадениндинуклеотида (NAD) и гемина в течение ночи при 37 ° C и 5% CO ₂ . Все изоляты были подтверждены как Haemophilus influenzae по методу Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF, баллы> 2).

В этом проекте не использовались только микроорганизмы, а не человеческий материал.

Сайт-направленный мутагенез (SDM)

Геномную ДНК очищали с использованием набора для бактериальной геномной ДНК GenElute ™ (Sigma-Aldrich, St Louis, MO). Ген ftsI и его фланкирующие области были амплифицированы из WT NTHi3655 с использованием системы Expand ™ High Fidelity PCR (Roche, Mannheim, Germany) и праймеров, перечисленных в таблице 2.

Таблица 2 Праймеры, используемые для амплификации ПЦР, сайт-направленный мутагенез и секвенирование генов ftsI и acrR

Полученный продукт ПЦР клонировали в вектор pCR-XL-TOPO ^® с использованием набора для клонирования для ПЦР TOPO ^® XL (Invitrogen, Carlsbad, CA).После этого рекомбинантную плазмидную конструкцию трансформировали в Escherichia coli TOP10. Ген fstI был подтвержден секвенированием ДНК (Eurofins Genomics, Эберсберг, Германия). Сайт-направленный мутагенез проводили с использованием ДНК-полимеразы Pfu Turbo (Agilent, Санта-Клара, Калифорния) и праймеров, представленных в таблице 2. Продукты ПЦР расщепляли с использованием Dpn I (Thermo Scientific, Waltham, MA) в течение 1 часа при 37 ° C. ° C. Мутировавший ген ftsI с подтвержденной мутацией Y528H был амплифицирован с помощью ПЦР и трансформирован в штамм-реципиент NTHi3655 с использованием протокола Poje и Redfield [13].Созданный мутант (названный NTHi3655-PBP3 ^Y528H ) был отобран на агаре BHI, содержащем НАД и гемин, и увеличивающиеся концентрации ампициллина (0, 0,125, 0,25, 0,5, 0,75, 1 и 2 мг / л соответственно). Наконец, последовательность гена ftsI в полученном мутанте была подтверждена секвенированием ДНК.

Тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам

Тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам проводилось в лаборатории разработки EUCAST (Växjö, Швеция). Скрининг устойчивости к β-лактамам с дисковой диффузией с использованием 1 Ед бензилпенициллина (PcG) на требовательной твердой среде Мюллера-Хинтона (MH-F) проводили с NTHi93–57,485, NTHi3655 и NTHi3655-PBP3 ^Y528H [10].МИК к обычным β-лактамным агентам также определяли с помощью микроразведения (BMD) бульона в соответствии со стандартом ISO 20776–1 [14] с использованием бульона MH-F [15]. Отсутствие продукции β-лактамаз подтверждено стандартным нитроцефиновым тестом [16].

Кривые роста и секвенирование гена

acrR

Несколько колоний NTHi ресуспендировали в бульоне с добавкой BHI и разбавляли до исходной OD ₆₀₀ 0,05. Бактериальную суспензию инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ при 200 об / мин и измеряли OD ₆₀₀ в указанные моменты времени.Ген acrR , который кодирует регулятор оттока AcrAB, был секвенирован с использованием праймеров, указанных в таблице 2.

Klinika Leczenia Niepłodności Łodź | Gameta

nad przebiegiem stymulacji (wizyty lek., USG owulacyjne, badania labourjne przed znieczuleniem):

opieka psychoologa,

zabieg pobrania komórek jajowych,

znieczulenie ogólne — do zabiegu pobrania komórek jajowych,

odnalezienie i ocena komórek jajowych w płynie pęcherzykowym,

бадание и препараты насения,

konsultacja medyczna w dniu pobrania komórek jajowych,

procedure labjne — pozaustrojowe zapłodnienie IN VITRO:

• zapłodnienie pozaustrojowe (IVF),
• Observacja rozwoju zarodków do 2, 3 lub 5 doby (tzw.стадионная бластоцистия).
• nadzór nad wszystkimi etapami scheme przez niezależny, zewnętrzny system elektroniczny RI-Witness wykorzystujący technologię RFID, który pozwala na identityfikację, śledzench rodójestrowanie, 90 zrodójestrowanie

zamrożenie zarodków w stadium blastocysty,

pierwsze 12 miesięcy przechowywania zarodków,

konsultacja medyczna z testem ciążowym do 15 dnia po transferze (nie obejmuje wykonania testu ciowego w labratorium).

PAKIET IVF ZAPŁODNIENIE
PAKIET IVF ZAPŁODNIENIE
6540
ПРОГРАММА ЭКО — ICSI ЗАПЛОДНИЕ POZAUSTROJOWE Z MIKROINIEKCJĄ PLEMNIKA DO KOMÓRKI JAJOWEJ
	1	8680 902	1450 * cena nie dotyczy transferu odroczonego
Процедура dodatkowe przy in vitro:
Embriotransfer rozmrożonego zarodka (FET) / transfer rozmrożonego zarodka (FET) 9 odroczony	1960
IMSI — docytoplazmatyczna iniekcja plemnika wyselekcjonowanego pod względem morfologicznym	720
HBA-IMSi — dwustopniowa selekcj plemników- docytoplazmatyczna iniekcja morfologicznie wyselekcjonowanego plemnika do komórki jajoweja uj »	1180
PCISI — technika, która wykorzystuje fizjologiczne właściwości dojrzałych i prawidłowo zbudowanych plemników do wiązania sięwęcóní kwasemów, hizania sięzózówióníčá.	620
PICSI / HBA — selekcja plemników przy użyciu kwasu hialuronowego w trakcie IVF — ICSI	650
Płukanie pęcherzyków jajnikowych podczas punkcji jajników — dopłata do programu IVF-ICSI	630
Nadzór systemem Свидетель: — nadzór przez niezależny, zewnętrzny sytsem electroniczny wykorzystujący technologię RFID.System pozwala na identityfikację, śledzenie i prowadzenie rejestru komórek rozrodczych oraz zarodków.	240
Procedura zamrożenia oocytów (opłata za zamroenie max 3 komórek jajowych), pierwsze 12 miesięcy przechowania	490
Procedura ciągłego monitorowania zarodków ciągłe, bezinwazyjne monitorowanie rozwoju zarodków wewnątrz inkubatora (Primo Vison — Технология замедленной съемки) autorski algorytm wyboru zarodka do transferu (морфокинетическая карта) całodobowy nadzór certyfikowanego embriologa klinicznego ciągłe monitorowanie warunków fizycznych w inkubatorze (IRI SIRIUS)	870
Podłoże do transferu zarodka — Embryoglue *	290
Вспомогательный вывод — wspomaganie wylęgania *	520
Cult-Active — aktywacja komórek jajowych *	520
Dożylny wlew z antagonisty oksytocyny przed podaniem zarodka (ET) *	1230
Biopsja rysowa endometrium przed transferem zarodka pod kontrolą УЗИ — царапание эндометрия *	440
Przechowywanie zarodków — kolejne 12 m-cy	620
Przechowywanie oocytów — kolejne 12 m-cy	620
Depozyt nasienia do zapłodnienia pozaustrojowego	395
Punkcja przetrwałego pęcherzyka przed / w trakcie programu IVF	410

.