Невролог зайцева: Зайцева Вера Юрьевна — 34 отзыва | Новосибирск

26.01.197618.02.2022 alexxlab 0 Комментариев

Содержание

Специалисты

Физическое лицо	Должность	Специальность	Дата получения	Действует по	Номер
1-е ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Садовникова Елена Викторовна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Терапия	25.04.2018	25.04.2023	1172241640873
Алексанова Ирина Николаевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	13. 03.2019	13.03.2024	1174241840035
Быковский Александр Николаевич	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	29.04.2016	31.12.2021	0157241019374
Грибакина Ирина Валерьевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	22.05.2017	22.05.2022	015241350395
Елизарова Надежда Сергеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	26. 09.2018	26.09.2023	1109241765931
Жульева Валентина Васильевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	27.03.2020	27.03.2025	1145040000044
Инкарова Диана Борисовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	77230036437
Лобова Валерия Сергеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	26. 09.2018	26.09.2023	77230036570
Позднякова Виктория Валерьевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	77230036573
Руднева Татьяна Викторовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	выписка из приказа
2-е ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Зайцева Наталия Николаевна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Терапия	25. 04.2018	25.04.2023	1172241640881
Агасиева Диана Играмовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	77230036431
Буленкова Кристина Андреевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	выписка из приказа
Воронцова Марина Анатольевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	25. 04.2018	25.04.2023	1172241640880
Григорьева Алина Леонидовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	выписка из приказа
Ковалева Анна Александровна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	22.07.2019	22.07.2024	772300174844
Малашина Марина Ивановна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	26. 07.2021	26.07.2026	выписка из приказа
Матвеева Дарья Александровна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	12.07.2021	12.07.2026	выписка из приказа
Соболь Татьяна Владимировна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	22.07.2019	22.07.2024	772300171310
Сумина Евгения Владимировна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	04. 02.2021	04.02.2026	332400063493
Трубицына Галина Евгеньевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	25.04.2018	25.04.2023	1172241640885
3-е ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Курченко Ольга Владимировна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Организация здравоохранения и общественное здоровье	27.03.2020	27. 03.2025	1145040000096
Курченко Ольга Владимировна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Профпатология	25.12.2019	25.12.2024	1177242203523
Курченко Ольга Владимировна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Терапия	27.03.2020	27.03.2025	1145040000046
Борисова Мария Михайловна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	27. 03.2020	27.03.2025	1145040000043
Визитиу Екатерина Михайловна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	28.12.2020	28.12.2025	1157242920709
Вилисова Екатерина Алексеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	06.07.2019	06.07.2024	772300177251
Гришина Екатерина Владимировна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	29. 07.2016	31.12.2021	0157241019603
Зайцева Ирина Викторовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	21.12.2020	21.12.2025	772300286369
Исаева Елена Егоровна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	02.08.2017	02.08.2022	0157180769018
Козина Мария Сергеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	04. 02.2021	04.02.2026	332400019160
Кукушкина Светлана Юрьевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	22.07.2019	22.07.2024	772300174900
Мусаева Айзанат Бейбалаевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	22.07.2019	22.07.2024	772300174870
Половитскова Надежда Владимировна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	25. 04.2018	25.04.2023	1172241640891
Прохорцева Олеся Сергеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	27.07.2021	27.07.2026	выписка из приказа
Русу Инна Ивановна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	28.12.2020	28.12.2025	1157242920708
Сивкова Карина Сергеевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	28. 10.2020	28.10.2025	772300224228
ДНЕВНОЙ СТАЦИОНАР
Катунина Екатерина Александровна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ДНЕВНЫМ СТАЦИОНАРОМ — ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ	Кардиология	20.04.2020	20.04.2025	1154242364276
Катунина Екатерина Александровна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ДНЕВНЫМ СТАЦИОНАРОМ — ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ	Терапия	27.03.2020	27. 03.2025	1145040000045
Кобзина Вера Николаевна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	10.04.2020	10.04.2025	1163242343955
Полищук Ирина Евгеньевна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ДНЕВНЫМ СТАЦИОНАРОМ — ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ	Терапия	27.03.2020	27.03.2025	1145040000068
Починкова Вера Николаевна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	15. 03.2019	15.03.2024	1172241731282
КАБИНЕТ ВРАЧА — ГАСТРОЭНТЕРОЛОГА
Баранова Наталья Николаевна	ВРАЧ-ГАСТРОЭНТЕРОЛОГ	Гастроэнтерология	12.08.2019	12.08.2024	1177040018739
Шалыгина Елена Леонидовна	ВРАЧ-ГАСТРОЭНТЕРОЛОГ	Гастроэнтерология	30.10.2020	30. 10.2025	1177242578173
Шалыгина Елена Леонидовна	ВРАЧ-ГАСТРОЭНТЕРОЛОГ	Терапия	13.03.2019	13.03.2024	1174241840038
КАБИНЕТ ВРАЧА-ПУЛЬМОНОЛОГА
Клочкова Валентина Николаевна	ВРАЧ-ПУЛЬМОНОЛОГ	Пульмонология	24.11.2017	24.11.2022	0377180728478

КАБИНЕТ ВРАЧА-ЭНДОКРИНОЛОГА
Евтодиенко Наталья Михайловна	ВРАЧ-ЭНДОКРИНОЛОГ	Эндокринология	12. 11.2020	12.11.2025	1155310610757
Лукашина Анна Юрьевна	ВРАЧ-ЭНДОКРИНОЛОГ	Эндокринология	12.11.2020	12.11.2025	1155310610758
Сидорова Светлана Васильевна	ВРАЧ-ЭНДОКРИНОЛОГ	Эндокринология	12.11.2020	12.11.2025	1155310610749
КАБИНЕТ ГЕМАТОЛОГИИ
Козьмина Марина Николаевна	ВРАЧ — ГЕМАТОЛОГ	Гематология	28. 12.2016	28.12.2021	0377180424821
КАБИНЕТ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Вести Людмила Николаевна	ВРАЧ-ИНФЕКЦИОНИСТ	Инфекционные болезни	21.05.2018	21.05.2023	1166241441010
Жирова Анастасия Сергеевна	ВРАЧ-ЭПИДЕМИОЛОГ	Медико-профилактическое дело	15.07.2019	15. 07.2024	772300190106
Жирова Анастасия Сергеевна	ВРАЧ-ЭПИДЕМИОЛОГ	Организация здравоохранения и общественное здоровье	25.12.2019	25.12.2024	1174242167735
КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ КАБИНЕТ
Гурова Елена Евгеньевна	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Кардиология	29.12.2020	29.12.2025	1174242597344
Прокошина Елена Ивановна	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Кардиология	12. 02.2019	12.02.2024	0377180844610
Сунгурова Асият Абдусаламова	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Кардиология	27.09.2021	27.09.2026	выписка из приказа
Шевченко Маргарита Михайловна	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Кардиология	02.11.2020	02.11.2025	1163040006093
Шевченко Маргарита Михайловна	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Функциональная диагностика	29. 09.2020	29.09.2025	1177040063652
ФИЛИАЛ
Попрядухина Ольга Валентиновна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ФИЛИАЛОМ -ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ	Терапия	21.12.2020	21.12.2025	1177242573900
НЕВРОЛОГИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Кузьмина Екатерина Алексеевна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	27. 07.2021	27.07.2026	77230017486
Свиридова Юлия Вячеславовна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	15.03.2019	15.03.2024	1172241731283
Тучкова Екатерина Вячеславовна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	05.05.2017	05.05.2022	0157240581920
Черепова Людмила Дмитриевна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	10. 04.2020	10.04.2025	1163242343956
ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КАБИНЕТ
Абрамов Леонид Дмитриевич	ВРАЧ — ОНКОЛОГ	Онкология	14.02.2020	14.02.2025	1177181000332
ОТДЕЛЕНИЕ ЛУЧЕВОЙ ДИАГНОСТИКИ
Баркина Евгения Александровна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	22. 04.2020	22.04.2025	0157241583515
Белова Ирина Борисовна	ВРАЧ-РЕНТГЕНОЛОГ	Рентгенология	06.03.2020	06.03.2025	1125040001578
Еремин Александр Леонидович	ВРАЧ-РЕНТГЕНОЛОГ	Рентгенология	20.10.2018	20.10.2023	0377180838908
Еремин Александр Леонидович	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	01. 10.2016	01.10.2021	0377180541209
Зароченцева Екатерина Игоревна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	30.12.2020	30.12.2025	1145270001173
Исайкина Наталья Афанасьевна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	28.02.2017	28.02.2022	1123040002416
Мальцев Евгений Владимирович	ВРАЧ-РЕНТГЕНОЛОГ	Рентгенология	13. 07.2018	13.07.2023	0657241507837
Перелыгина Светлана Леонидовна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	30.12.2020	30.12.2025	1157242989270
ОТДЕЛЕНИЕ МЕДИЦИНСКОЙНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ
Афоничева Татьяна Валерьевна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ — ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ	Терапия	13.03.2019	13. 03.2024	1174241840036
ОТДЕЛЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ
Грибанова Татьяна Андреевна	ВРАЧ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ	Функциональная диагностика	05.10.2018	08.10.2023	1178270012123
Попов Сергей Васильевич	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ — ВРАЧ-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ	Функциональная диагностика	29.09.2020	29.09.2025	1177040063649
Удодова Галина Тихоновна	ВРАЧ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ	Функциональная диагностика	29. 09.2020	29.09.2025	1177040063650
ОТОРИНОЛАРИНГОЛОГИЧЕСКИЙ КАБИНЕТ
Азарова Татьяна Владимировна	ВРАЧ-ОТОРИНОЛАРИНГОЛОГ	Оториноларингология	26.04.2017	26.04.2022	0177040058345
ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИЙ КАБИНЕТ
Васильева Ирина Юрьевна	ВРАЧ-ОФТАЛЬМОЛОГ	Офтальмология	17. 04.2021	17.04.2026	180002529270
ПАРАКЛИНИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ФИЛИАЛА
Андреев Константин Юрьевич	ВРАЧ-РЕНТГЕНОЛОГ	Рентгенология	29.04.2017	29.04.2022	0157240581926
Ветрова Анастасия Владимировна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	20.08.2021	20. 08.2026	77230036491
Золотарева Татьяна Васильевна	ВРАЧ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ	Функциональная диагностика	10.04.2020	10.04.2025	1177040039922
Козьякова Светлана Леонидовна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	31.08.2020	31.08.2025	1166242460970
Суровцева Оксана Анатольевна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	18. 12.2020	18.12.2025	0377180992379
Харитонова Мирослава Михайловна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	14.12.2019	14.12.2024	0159180831530
ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ФИЛИАЛА
Иванова Евгения Николаевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	20.07.2018	20. 07.2023	332400083856
Маслова Татьяна Евгеньевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Профпатология	20.04.2020	20.04.2025	1157241754449
Маслова Татьяна Евгеньевна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	27.03.2020	27.03.2025	1145040000086
Пионтковская Ирина Викторовна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	27. 03.2020	27.03.2025	1145040000087
Ряднов Иван Николаевич	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Лечебное дело	27.10.2020	27.10.2025	772300204686
Сорина Елена Ивановна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Гериатрия	22.05.2018	22.05.2023	0167040014905
Сорина Елена Ивановна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	27. 03.2020	27.03.2025	1145040000088
Харитонова Людмила Владимировна	ВРАЧ-ТЕРАПЕВТ УЧАСТКОВЫЙ	Терапия	25.04.2018	25.04.2023	1172241640894
УЗКИЕ СПЕЦИАЛИСТЫ, ВЕДУЩИЕ АМБУЛАТОРНО-ПОЛИКЛИНИЧЕСКИЙ ПРИЕМ ФИЛИАЛА
Аболмасова Ирина Валерьевна	ВРАЧ-ОФТАЛЬМОЛОГ	Офтальмология	21.04.2020	21. 04.2025	572411885107
Аболмасова Ирина Валерьевна	ВРАЧ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ	Ультразвуковая диагностика	31.12.2020	31.23.2025	1166242865525
Аношкина Марина Игоревна	ВРАЧ-ЭНДОКРИНОЛОГ	Эндокринология	20.03.2019	20.03.2024	1102241886696
Антохина Екатерина Владимировна	ВРАЧ-ОТОРИНОЛАРИНГОЛОГ	Оториноларингология	27. 04.2017	26.04.2022	0177040058346
Лебедева Надежда Вячеславовна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Неврология	01.04.2020	01.04.2025	1163242344048
Лебедева Надежда Вячеславовна	ВРАЧ-НЕВРОЛОГ	Профпатология	31.05.2018	31.05.2023	1174241635443
Медведева Любовь Владимировна	ВРАЧ-ДЕРМАТОВЕНЕРОЛОГ	Дерматовенерология	30. 09.2017	30.09.2022	0377180725567
Орлова Надежда Николаевна	ВРАЧ-КАРДИОЛОГ	Кардиология	31.12.2020	31.12.2025	1163270000288
Погудин Анатолий Владимирович	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	26.03.2019	26.03.2024	1174241947028
Елисеева Галина Павловна	ВРАЧ-АКУШЕР-ГИНЕКОЛОГ	Акушерство и гинекология	28. 03.2018	28.03.2023	1174241524364
Стремоухов Семен Сергеевич	ВРАЧ-КОЛОПРОКТОЛОГ	Колопроктология	16.03.2018	16.03.2023	1154241522573
Стремоухов Семен Сергеевич	ВРАЧ-УРОЛОГ	Урология	11.12.2017	11.12.2022	1166241439971
Стремоухов Семен Сергеевич	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	02. 04.2020	02.04.2025	1154242402180
ФИЗИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Ермакова Елена Михайловна	ВРАЧ-ФИЗИОТЕРАПЕВТ	Физиотерапия	17.11.2020	17.11.2025	1177242542860
Зеленцова Инна Александровна	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ	Физиотерапия	27.04.2017	27.04.2022	1174241329665
ХИРУРГИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
Жилин Николай Васильевич	ВРАЧ-УРОЛОГ	Урология	10. 06.2020	10.06.2025	1118242296422
Крылов Александр Васильевич	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	05.05.2017	05.05.2022	0157240581950
Петина Наталья Витольдовна	ВРАЧ-ХИРУРГ	Организация здравоохранения и общественное здоровье	19.04.2019	19.04.2024	1174241947252
Петина Наталья Витольдовна	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	13. 04.2020	13.04.2025	1177040038679
Рубаник Дмитрий Сергеевич	ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	31.08.2018	31.08.2023	0157180812617
Савостиков Александр Михайлович	ЗАВЕДУЮЩИЙ ОТДЕЛЕНИЕМ ВРАЧ-ХИРУРГ	Хирургия	13.04.2020	13.04.2025	1177040038680
Савушкин Михаил Сергеевич	ВРАЧ-УРОЛОГ	Урология	28. 09.2019	28.09.2024	377180904168
ЭНДОСКОПИЧЕСКИЙ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ КАБИНЕТ
Петин Владимир Владимирович	ЗАВЕДУЮЩИЙ КАБИНЕТОМ — ВРАЧ-ЭНДОСКОПИСТ	Эндоскопия	13.06.2017	10.06.2022	0146180704042
Шевченко Андрей Викторович	ВРАЧ-ЭНДОСКОПИСТ	Ультразвуковая диагностика	02.11.2020	02. 11.2025	1163040006095
Шевченко Андрей Викторович	ВРАЧ-ЭНДОСКОПИСТ	Эндоскопия	02.11.2020	02.11.2025	1163040006096

Врач Зайцева Юлия Олеговна | Сеть медицинских центров «Академия здоровья»

Как вас зовут * :

Специалист * : Аблаеев Аблаеев Рифкат Равилевич Аблаеев Рифкат Равилевич Аблаеев Рифкат Равилевич Абрамидзе Александра Исааковна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адамова Лина Юрьевна Адьякимова Светлана Николаевна Акулов Геннадий Михайлович Акулов Геннадий Михайлович Акулов Геннадий Михайлович Акулов Геннадий Михайлович Антипина Ирина Юрьевна Антипина Ирина Юрьевна Антипина Ирина Юрьевна Антипина Ирина Юрьевна Аржевитина Мария Александровна Аржевитина Мария Александровна Аржевитина Мария Александровна Ахметов Эдуард Айратович Балобанов Владимир Юрьевич Бегишев Георгий Николаевич Бегишев Георгий Николаевич Бегматов Ихтиёр Кимсанбоевич Бейлина Татьяна Анатольевна Бейлина Татьяна Анатольевна Белых Анна Николаевна Бурова Татьяна Владимировна Бусарева Марина Евгеньевна Бусарева Марина Евгеньевна Вайсерман Светлана Андреевна Вайсерман Светлана Андреевна Васильева Ирина Александровна Васильева Татьяна Владимировна Вахрушев Сергей Иванович Вахрушев Сергей Иванович Вахрушева Елена Витальевна Вахрушева Наталья Николаевна Веретенникова Татьяна Викторовна Веретенникова Татьяна Викторовна Веретенникова Татьяна Викторовна Вихарева Ирина Николаевна Ворончихина Татьяна Геннадьевна Ворончихина Татьяна Геннадьевна Габбасова Юлия Николаевна Габбасова Юлия Николаевна Габушева Наталья Станиславовна Габушева Наталья Станиславовна Гарабажиу Татьяна Владимировна Гареева Альфия Рашидовна Гизатуллина Ирина Владимировна Гизатуллина Ирина Владимировна Гизатуллина Ирина Владимировна Гизатуллина Ирина Владимировна Глазьев Артём Борисович Гордеев Альберт Юрьевич Гордеев Альберт Юрьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гулько Александр Геннадьевич Гусманова Эльгиза Хадисовна Давыдов Пётр Алексеевич Давыдов Пётр Алексеевич Давыдов Пётр Алексеевич Давыдов Пётр Алексеевич Дудорова Ирина Николаевна Дудорова Ирина Николаевна Дудорова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Дьяконова Ирина Николаевна Ежов Сергей Борисович Елмашев Юрий Владимирович Ерохин Олег Александрович Ерохин Олег Александрович Жихарев Дмитрий Алексеевич Жуковская Инна Геннадьевна Жуковская Инна Геннадьевна Жуковская Инна Геннадьевна Завалина Татьяна Геннадьевна Загребин Сергей Геннадьевич Загребина Ольга Олеговна Зайцева Юлия Олеговна Зайцева Юлия Олеговна Зайцева Юлия Олеговна Зайцева Юлия Олеговна Закирова Мария Александровна Зеленин Борис Павлович Зеленин Константин Андреевич Зеленин Константин Андреевич Зеленин Константин Андреевич Зеленин Константин Андреевич Зеленина Анна Михайловна Зеленина Анна Михайловна Зеленина Валентина Николаевна Зеленина Валентина Николаевна Земан Надежда Яковлевна Земан Надежда Яковлевна Земан Надежда Яковлевна Зернов Владимир Германович Зернов Владимир Германович Ивакина Елена Витальевна Иванова Елена Олеговна Иванова Наталья Леонидовна Иванова Наталья Леонидовна Иванова Наталья Леонидовна Игонина Светлана Валерьевна Исламов Эмиль Францевич Исламов Эмиль Францевич Исхакова Эльмира Фаридовна Ичетовкина Наталья Валентиновна Кайсина Екатерина Петровна Калинкина Кристина Андреевна Калинкина Кристина Андреевна Калинкина Кристина Андреевна Калинкина Кристина Андреевна Калинкина Кристина Андреевна Касаткина Мария Всеволодовна Кедров Юрий Николаевич Кедров Юрий Николаевич Киреева Екатерина Владимировна Киреева Екатерина Владимировна Киреева Екатерина Владимировна Киреева Екатерина Владимировна Кислицын Алексей Станиславович Клековкина Елена Анисимовна Клековкина Елена Анисимовна Клековкина Елена Анисимовна Клековкина Елена Анисимовна Коба Светлана Владимировна Козленкова Ирина Николаевна Козленкова Ирина Николаевна Козленкова Ирина Николаевна Комарова Елена Леонидовна Комарова Елена Леонидовна Кондратьева Ирина Николаевна Коробкова Юлия Александровна Косарева Татьяна Сергеевна Красноперова Наталья Анатольевна Крекнин Юрий Владимирович Крекнин Юрий Владимирович Кропотина (Иванова) Алёна Кузнецов Вадим Николаевич Кузнецова Ирина Анатольевна Кузнецова Ирина Анатольевна Курочкина Наталья Викторовна Курочкина Наталья Викторовна Кутузова Ирина Ивановна Кутузова Ирина Ивановна Кутузова Ирина Ивановна Ларченкова Ольга Владимировна Ларченкова Ольга Владимировна Ларченкова Ольга Владимировна Латыпова Гульнара Флюровна Латыпова Гульнара Флюровна Латыпова Гульнара Флюровна Латыпова Гульнара Флюровна Латыпова Гульнара Флюровна Латыпова Гульнара Флюровна Ленцов Иван Петрович Леонтьева Мария Васильевна Лисаковская Екатерина Лисаковская Екатерина Лисаковская Екатерина Лисаковская Екатерина Логинова Наталья Хамзяевна Логинова Наталья Хамзяевна Ложкина Екатерина Петровна Ложкина Екатерина Петровна Ложкина Екатерина Петровна Ложкина Екатерина Петровна Лукина Ольга Геннадьевна Лукиных Татьяна Олеговна Лукиных Татьяна Олеговна Лукиных Татьяна Олеговна Максимова Мария Викторовна Маркова Наталья Семеновна Метелева Юлия Игоревна Метелева Юлия Игоревна Михайлова Ираида Геннадьевна Михайлова Ираида Геннадьевна Михайлова Ираида Геннадьевна Михайлова Ираида Геннадьевна Михайлова Светлана Семеновна Могунова Екатерина Александровна Могунова Екатерина Александровна Могунова Екатерина Александровна Монашова Татьяна Владимировна Монашова Татьяна Владимировна Монашова Татьяна Владимировна Мухаметзянова Рита Раульевна Мухаметзянова Рита Раульевна Назаров Сергей Борисович Наймушина Вероника Александровна Негметзянова Елена Сергеевна Никитина Асия Флеровна Никитина Асия Флеровна Никифорова Елена Александровна Никифорова Елена Александровна Никифорова Елена Александровна Никифорова Елена Александровна Николаева Юлия Сергеевна Никонова Нина Александровна Огородников Никита Александрович Осипов Андрей Владимирович Перевозчиков Николай Геннадьевич Перевозчиков Николай Геннадьевич Перевозчикова Мария Перевозчикова Ольга Викторовна Петров Александр Генрихович Петров Александр Генрихович Петров Александр Генрихович Петров Александр Генрихович Петров Александр Генрихович Петрунина Дарья Сергеевна Петухова Валентина Алексеевна Петухова Валентина Алексеевна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пичугина Елена Борисовна Пономарева Наталья Владимировна Попова Милана Олеговна Попова Милана Олеговна Прозорова Лариса Евгеньевна Радаева Оксана Викторовна Радаева Оксана Викторовна Репина Анна Алексеевна Решетникова Ольга Александровна Решетникова Ольга Александровна Решетникова Ольга Александровна Рублев Сергей Георгиевич Сапегина Ольга Дмитриевна Семенова Ольга Геннадьевна Сивенцева Рамзалия Симагина Наталья Валерьевна Симагина Наталья Валерьевна Скорнякова Ольга Геннадьевна Скорнякова Ольга Геннадьевна Скорнякова Ольга Геннадьевна Снигирева Наталья Николаевна Снигирева Наталья Николаевна Снигирева Наталья Николаевна Соловьева Александра Николаевна Сохина Алевтина Михайловна Старостин Сергей Вячеславович Старостин Сергей Вячеславович Сташкова Лариса Ивановна Сташкова Лариса Ивановна Стрелкова Диана Михайловна Сунцов Андрей Евгеньевич Сунцов Андрей Евгеньевич Сухолита Леонид Григорьевич Сухолита Леонид Григорьевич Сухолита Леонид Григорьевич Сухолита Леонид Григорьевич Сухолита Леонид Григорьевич Тарасов Сергей Вениаминович Татаркина Екатерина Дмитриевна Тесля Алёна Александровна Тихонова Галина Николаевна Третьяков Евгений Васильевич Третьяков Евгений Васильевич Третьякова Людмила Викторовна Тройникова Юлия Анатольевна Тройникова Юлия Анатольевна Усманова Татьяна Ивановна Файзрахманова Адель Альбертовна Файзуллина Алина Айратовна Федоров Руслан Владиславович Федоров Руслан Владиславович Федоров Руслан Владиславович Филатова Светлана Владимировна Филатова Светлана Владимировна Филиппова Елена Сергеевна Хасанова Алия Ильшатовна Хасанова Алия Ильшатовна Хасанова Алия Ильшатовна Хузина Ильнара Аликова Хузина Ильнара Аликова Черепанова Надежда Николаевна Черепанова Надежда Николаевна Чернова Ирина Михайловна Чухланцева Наталья Демьяновна Чухланцева Наталья Демьяновна Шадрина Ольга Александровна Шайдуллин Азат Ахатович Шайдуллин Азат Ахатович Шаймуллина Розалия Рустамовна Шамшурина Евгения Николаевна Шарипов Наиль Ильдусович Шмакова Марина Линаровна Шмыкова Елена Михайловна Шмыкова Елена Михайловна Шмыкова Елена Михайловна Шокуев Эльдар Мухамедович Щус Николай Иванович Щус Николай Иванович Щус Николай Иванович Рифкат Равилевич (Врач ультразвуковой диагностики. ) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Пульмонолог) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Педиатр, специалист ультразвуковой диагностики) (Невролог) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Терапевт, врач ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Терапевт, врач ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Терапевт, врач ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Терапевт, врач ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Стоматолог-хирург) (Гастроэнтеролог. Кандидат медицинских наук.) (Невролог. Заслуженный работник здравоохранения. Первая квалификационная категория.) (Невролог. Заслуженный работник здравоохранения. Первая квалификационная категория.) (Врач-стоматолог) (Специалист ультразвуковой диагностики) (Специалист ультразвуковой диагностики) (Невролог, детский невролог) (Эндокринолог) (Терапевт. Кардиолог.) (Терапевт. Кардиолог.) (Эндокринолог, диетолог, детский эндокринолог) (Эндокринолог, диетолог, детский эндокринолог) (Терапевт, нефролог) (Пульмонолог, педиатр. ) (Гинеколог-эндокринолог, специалист ультразвуковой диагностики) (Гинеколог-эндокринолог, специалист ультразвуковой диагностики) (Невролог.) (Отоларинголог) (Специалист ультразвуковой диагностики. Гастроэнтеролог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Гастроэнтеролог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Гастроэнтеролог. Высшая квалификационная категория.) (Педиатр) (Дерматовенеролог) (Детский дерматовенеролог) (Гинеколог-эндокринолог. Детский гинеколог.) (Гинеколог-эндокринолог. Детский гинеколог.) (Кардиолог-аритмолог. Высшая квалификационная категория) (Кардиолог-аритмолог. Высшая квалификационная категория) (Оториноларинголог) (Нефролог. Высшая квалификационная категория.) (Врач УЗД) (Врач ультразвуковой диагностики) (Врач ультразвуковой диагностики) (Врач ультразвуковой диагностики) (Терапевт) (Оториноларинголог ) (Оториноларинголог ) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Уролог. Репродуктолог. Высшая квалификационная категория.) (Детский эндокринолог) (Эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Профпатолог) (Терапевт. Профпатолог.) (Терапевт. Профпатолог.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Невролог.) (Эндоскопист) (Уролог-онколог) (Уролог-онколог) (Стоматолог) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Доктор медицинских наук. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Доктор медицинских наук. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Доктор медицинских наук. Высшая квалификационная категория.) (Эндокринолог) (Стоматолог) () (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Терапевт) (Терапевт) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Акушер-гинеколог) (Акушер-гинеколог, специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог, специалист ультразвуковой диагностики) (Гинеколог-эндокринолог, специалист ультразвуковой диагностики) (Гинеколог-эндокринолог, специалист ультразвуковой диагностики) (Эндоскопист) (Эндоскопист) (Эндокринолог) (Невролог) (Гинеколог-эндокринолог) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики) (Гинеколог.) (Травматолог-ортопед) (Травматолог-ортопед) (Ревматолог) (Невролог, детский невролог) (Терапевт) (Врач ультразвуковой диагностики. Терапевт. ) (Врач ультразвуковой диагностики. Терапевт. ) (Врач ультразвуковой диагностики. Терапевт. ) (Врач ультразвуковой диагностики. Терапевт. ) (Врач ультразвуковой диагностики. Терапевт. ) (Кардиолог) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Специалист УЗД) (Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Врач-хирург) (Гинеколог. Маммолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Врач-гинеколог. Маммолог. Высшая квалификационная категория.) (Врач-гинеколог. Маммолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог. Маммолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Пульмонолог) (Врач ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Врач ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Врач ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог) (Акушер-гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гематолог) (Гинеколог-эндокринолог, специалист УЗД, акушер-гинеколог) (Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) Викторовна (Врач-акушер-гинеколог) (Уролог) (Врач функциональной диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Врач функциональной диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Аллерголог-иммунолог.) (Аллерголог-иммунолог.) (Гинеколог, врач УЗД) (Гинеколог, врач УЗД) (Гинеколог, врач УЗД) (Терапевт. Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Терапевт. Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Терапевт. Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Уролог) (Невролог-паркинсолог) Валентиновна (Гинеколог-эндокринолог, гинеколог-онколог, гинеколог, специалист ультразвуковой диагностики. Врач первой категории.) Валентиновна (Гинеколог-эндокринолог, гинеколог-онколог, гинеколог, специалист ультразвуковой диагностики. Врач первой категории.) Валентиновна (Гинеколог-эндокринолог, гинеколог-онколог, гинеколог, специалист ультразвуковой диагностики. Врач первой категории.) Валентиновна (Гинеколог-эндокринолог, гинеколог-онколог, гинеколог, специалист ультразвуковой диагностики. Врач первой категории.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог-эндокринолог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Дерматовенеролог) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Специалист ультразвуковой диагностики) (Специалист УЗД) (Терапевт. ) (Терапевт) (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Кардиолог. Эндокринолог. Терапевт.) (Специалист ультразвуковой диагностики. Сердечно-сосудистый хирург, врач-маммолог, врач-онколог) (Специалист ультразвуковой диагностики. Сердечно-сосудистый хирург, врач-маммолог, врач-онколог) (Специалист ультразвуковой диагностики. Сердечно-сосудистый хирург, врач-маммолог, врач-онколог) (Акушер-гинеколог) (Детский эндокринолог) (Акушер-гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Стоматолог-терапевт.) (Стоматолог-терапевт.) (Ангиохирург. Флеболог. Сердечно-сосудистый хирург. Высшая квалификационная категория. Кандидат медицинских наук.) (Терапевт) (Ревматолог ) (Врач ультразвуковой диагностики. Врач первой квалификационной категории.) (Врач ультразвуковой диагностики. Врач первой квалификационной категории.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Онколог) (Невролог) (Оториноларинголог) (Уролог) (Кардиолог) (Терапевт. Кардиолог.) () (Акушер-гинеколог) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Кардиолог. Специалист ультразвуковой диагностики. Кандидат медицинских наук.) (Офтальмолог) (Кардиолог. Ревматолог. Врач высшей квалификационной категории. Заслуженный врач Российской Федерации.) (Кардиолог. Ревматолог. Врач высшей квалификационной категории. Заслуженный врач Российской Федерации. ) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гинеколог-эндокринолог. Высшая квалификационная категория.) (Гастроэнтеролог, детский гастроэнтеролог) (Профпатолог) (Профпатолог) (Гинеколог) (Заведующая отделением. Кардиолог. Гастроэнтеролог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Заведующая отделением. Кардиолог. Гастроэнтеролог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Акушер-гинеколог) (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Врач ультразвуковой диагностики) (Врач функциональной диагностики) (Гинеколог-эндокринолог, акушер-гинеколог. ) ( ) (Эндокринолог) (Детский эндокринолог) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Ревматолог-кардиолог. Высшая квалификационная категория. ) (Ревматолог-кардиолог. Высшая квалификационная категория. ) (Ревматолог-кардиолог. Высшая квалификационная категория. ) (Терапевт) (Пульмонолог) (Терапевт, гастроэнтеролог, врач функциональной диагностики. ) (Терапевт, гастроэнтеролог, врач функциональной диагностики. ) (Офтальмолог) (Офтальмолог) (Оториноларинголог) (Психиатр-нарколог. ) (Психиатр-нарколог.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист ультразвуковой диагностики.) (Специалист УЗД) (Терапевт) (Терапевт) (Детский хирург) (Эндоскопист. Кандидат медицинских наук.) (Эндоскопист. Кандидат медицинских наук.) (Оториноларинголог) (Врач функциональной диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Врач функциональной диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Дерматовенеролог) (Терапевт) (Терапевт) (Оториноларинголог) (Оториноларинголог) (Оториноларинголог) (Невролог. ) (Невролог. ) (Акушер-гинеколог) (Педиатр) (Педиатр) (Педиатр) (Терапевт) (Терапевт) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики. ) (Гинеколог. Специалист ультразвуковой диагностики.) (Пульмонолог) (Гастроэнтеролог.) (Гастроэнтеролог.) (Специалист УЗД) (Онколог, онколог-маммолог) (Онколог, онколог-маммолог) (Терапевт, кардиолог.) (Врач ультразвуковой диагностики) (Ангиохирург-флеболог. Сердечно-сосудистый хирург.) (Врач ультразвуковой диагностики. Высшая квалификационная категория.) (Дерматовенеролог. Трихолог) (Дерматовенеролог. Трихолог) (Дерматовенеролог. Трихолог) (Детский уролог-андролог) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Врач ультразвуковой диагностики.) (Врач ультразвуковой диагностики. )

Контактный телефон * :

Любой медицинский центр
Ижевск, ул. Весенняя 6
Ижевск, ул. Зои Космодемьянской, 15
Ижевск, ул. Петрова 33 Б
Ижевск, ул. 30 лет Победы, 43
Ижевск, ул. Кунгурцева, 6
Ижевск, ул. Ленина, 146
Ижевск, ул. Красноармейская, 86а
Ижевск, ул. Пушкинская, 254
Сарапул, ул. Дубровская, 61
Воткинск, ул. 1 Мая, 74
Можга, ул. Наговицына, 162
Глазов, ул. Комсомольская,16
Глазов, ул. Парковая 36
Якшур-Бодья, ул. Пушиной, д.109
Малая Пурга, площадь Победы, 2
Ува, ул. Пушкина, 36
Игра, мкр. Нефтяников, дом 1
Камбарка, ул. Советская, 23
Яр, Школьная, 10
Чайковский, приморский бульвар, 51

Записаться на прием

Мы сами перезвоним вам в течение 1 рабочего часа, ответим на вопросы или запишем на приём.

Врачи клиники МЕДСИ в Брянске

Уточнить поиск

Начать поиск

Выберите категорию

Специализация врача

ВсеГастроэнтерологияГинекология и акушерствоМаммологияНеврологияОториноларингология (лор)ОфтальмологияПедиатрияТерапияУльтразвуковая диагностикаФункциональная диагностикаХирургияЭндокринология

Категория врача

Все Кандидат медицинских наук Заслуженный врач РФ Врач высшей квалификационной категории Врач первой квалификационной категории

Что будет с больным Зайцевым при возвращении к работе

Знаменитый модельер Вячеслав Зайцев, несмотря на тяжелый недуг, намерен в ближайшее время вернутся к работе. Причем не только к творческой деятельности по созданию новых коллекций, но и к непосредственному руководству Домом Моды.

Судя по всему, 83-летнего кутюрье не устраивает то, как обстоят дела, и он решил вновь взять бразды правления в свои руки. По словам Зайцева, он намерен провести внеочередное собрание акционеров.

«Назрели перемены. На повестке дня будет досрочное прекращение полномочий действующего Совета директоров. Я полон сил и энергии и возвращаюсь на пост генерального директора. Уже в ближайшее время сам начну вести прием клиентов», — сообщил модельер в интервью сайту KP.RU.

Между тем, еще совсем недавно страдающего болезнью Паркинсона кутюрье буквально водили под руки во время Недели моды в Москве. Многие заметили, что Зайцев с трудом выдержал светское мероприятие практически не мог говорить.

Судя по тому, что знаменитость теперь чувствует себя лучше, для него была выбрана правильная и эффективная тактика лечения, благодаря которой удалось замедлить развитие тяжелого недуга. Однако в случае с таким заболеванием о полном выздоровлении речь не идет.

Об этом в 5-tv.ru рассказала генеральный директор многопрофильного медицинского центра, врач-невролог и нейрореабилитолог Алиса Коротина.

По словам специалиста, болезнь Паркинсона — это нейродегенеративное заболевание, которое проявляется тремором и деменцией. При этом неизбежно возникают изменения в веществе, структурах головного мозга, которые и приводят к таким проявлениям, как потеря памяти и другие расстройства.

«Если на первоначальных этапах развития заболевания мы говорим о том, что у пациента лишь снижается память, то через десять лет развернутой клинической картины и подтвержденного диагноза, дементные проявления будут намного ярче», — отметила врач.

Оптимально, если наблюдать больного будет один и тот же специалист, который знаком с полной картиной заболеваниями и анамнезом именно этого пациента. В таком случае, при правильном подходе к лечению, можно добиться очень хороших результатов.

«Если пациент ухожен, постоянно находится под наблюдением, мы можем говорить о том, что мы замедляем развитие болезни. Можно замедлить процессы дегенерации головного мозга, облегчить состояние пациента, снизить тремор, убрать когнитивные проявления — улучшить память, мышление, внимание», — сказала невролог.

По словам доктора, то, что Вячеслав Зайцев почувствовал себя лучше не говорит о выздоровлении, однако указывает на то, что лечение было выбрано правильно.

«То, что ему стало лучше, он провел праздники со своими близкими, говорит лишь о том, что его врач выбрал правильную тактику. И, несмотря на болезнь, он может вернуться к своей профессиональной деятельности», — считает врач.

Ранее 5-tv.ru рассказал, что сын Зайцева раскрыл баснословную сумму долгов кутюрье.

Расписание приема врачей корпус №1

Ф.И.О.сотрудника	Должность	Дни работы	Часы приёма	№ кабинета
КОЦУР Нина Геннадьевна	Заведующая	Понедельник Среда	9. 00-14.00	каб.242
КОЦУР Нина Геннадьевна	врач ЭХОКГ	Четверг Пятница	9.00-14.00 9.00-14.00	каб.238
ШАЙГАНДАРОВ Харун Шайгандарович	врач ЭХОКГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	15.00-19.00 9.00-14.00 9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00	каб.242 каб.242 каб.239 каб.242 каб.242
ГОНЧАРОВА Ольга Васильевна	врач ЭХОКГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	9. 00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00	каб.238 каб.238 каб.238 каб.238 каб.239
БЕЛАН Наталья Сергеевна	врач ЭХОКГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	09.00-14.00 9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00	каб.239 каб.238 каб.238 каб.238 каб.238
КУРБАКО Владимир Анатольевич	врач ЭХОКГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00	каб.239 каб.239 каб.242 каб.239 каб.239
БАХТИНА Мария Викторовна	врач УЗДГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	9. 00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 9.00-14.00 09.00-14.00	каб.207 каб.240 каб.208 каб.207 каб.208
САДОВСКАЯ Маргарита Петровна	врач УЗДГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00 09.00-14.00	каб.209 каб.207 каб.207 каб.207 каб.207
МАСЛОВА Татьяна Геннадьевна	врач УЗДГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00 9.00-14.00 9.00-14.00	каб.336 каб.336 каб.336 каб.336 каб.336
КОЗЛОВА Ирина Аркадьевна	врач УЗДГ, ЭЭГ, РЭГ, МЭХО	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница ч/д Пятница н/ч	9. 00-15.00 14.30-19.00 8.30-14.00 14.30-19.00 9.00-14.00 14.30-19.00	каб.336 каб.209 каб.209 каб.209 каб.209 каб.209
МАТАКОВА Татьяна Владимировна	врач УЗДГ, ЭЭГ, РЭГ, МЭХО, УЗДС	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница ч/д Пятница н/ч	14.30-19.00 9.00-14.00 14.30-19.00 9.00-14.00 14.30-19.00 9.00-14.00	каб.209 каб.209 каб.209 каб.209 каб.209 каб.209
РОМАНОВА Лариса Егоровна	врач УЗДГ, РЭГ,	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	15.00-19.00 9.00-14.00 15.00-19.00 09.00-14.00 9.00-14.00	каб.207 каб. 207 каб.207 каб.343 каб.343
МЯЧИНА Ксения Владимировна	врач УЗДГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	9.00-14.00 9.00-14.00 9.00-14.00 09.00-14.00 9.00-14.00	каб.240 каб.240 каб.240 каб.240 каб.240
	Холтеровское мониторирование ЭКГ	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	8.30-19.00 8.30-14.00 8.30-14.00 8.30-14.00 8.30-14.00	каб.340 каб.340 каб.340 каб.340 каб.340
	ЭКГ+АД	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	8.30-19.00 8. 30-14.00 8.30-14.00 8.30-14.00 8.30-14.00	каб.340 каб.340 каб.340 каб.340 каб.340
	Велоэргометрия	Вторник	13.30-15.00	каб.343
	Электрокардиография	Понедельник Вторник Среда Четверг Пятница	9.00-14.00 9.00-14.00 15.00-10.00 15.00-19.00 9.00-14.00	каб.343 каб.212 каб.343 каб.343 каб.343

йызайт2 | Медицинский колледж

Моя лаборатория изучает роль липогенеза de novo в возникновении и прогрессировании колоректального рака (КРР). Большое количество доклинических исследований, в том числе наше, продемонстрировало, что синтаза жирных кислот (FASN), ключевой фермент липогенеза de novo, является критически важным компонентом выживания и пролиферации опухолевых клеток при широком спектре видов рака, что делает ее привлекательной мишенью. для терапии рака.
Используя анализ микрочипов тканей, наша группа продемонстрировала, что повышенная экспрессия FASN связана с более высокой стадией CRC.Наши исследования впервые продемонстрировали важность активации FASN в развитии метастазирования CRC. Мы показали, что опосредованное кшРНК ингибирование FASN значительно снижает метастазы в легкие и печень у голых мышей и ингибирует ангиогенез в модели ортотопического CRC у мышей. Наша недавняя работа предполагает, что сверхэкспрессия FASN способствует метаболическому переключению, которое подпитывает биоэнергетические пути для повышения выживаемости раковых клеток и поддержки метастазирования, особенно в условиях энергетического стресса.Что еще более важно, мы показали, что даже в присутствии экзогенных жирных кислот клетки CRC предпочтительно окисляют эндогенные жирные кислоты, синтезированные FASN, тем самым предоставляя дополнительные доказательства решающей роли синтеза липидов de novo в прогрессировании CRC.
Текущие исследовательские проекты в лаборатории преследуют следующие цели:
1. Определить функциональное значение FASN в моделях ксенотрансплантатов, полученных от пациентов (PDX). Мы используем модели PDX, полученные из резецированных тканей CRC человека, чтобы определить влияние нового ингибитора FASN (3V-Biosciences) на рост опухоли в качестве монотерапии или в сочетании с другими терапевтическими агентами.Мы используем целевое секвенирование следующего поколения с панелью из 198 связанных с раком генов, чтобы определить мутационные профили опухолей и сопоставить их с ответом на терапию, направленную на FASN. Выявленные «драйверные мутации» также используются для выбора таргетной терапии. Мы используем анализ метаболомики с разрешением стабильных изотопов (SIRM) для оценки влияния ингибирования FASN на метаболизм опухоли in vivo. Наша цель состоит в том, чтобы выявить подмножество пациентов, которым будет полезна терапия, направленная на FASN, и установить уникальные метаболические уязвимости и генетические биомаркеры, которые могут в дальнейшем направлять разработку таргетных методов лечения CRC.
2. Выяснить молекулярные механизмы регуляции метастазирования посредством FASN-опосредованного изменения метаболизма сфинголипидов. Мы обнаружили, что ингибирование синтеза жирных кислот de novo снижает уровень сфингозинкиназ (SPHK) и их продукта S1P и избирательно изменяет уровни других сфинголипидов в клетках CRC. Мы используем первичные клетки CRC и метастатические модели in vivo, чтобы понять влияние FASN-опосредованного метаболизма сфинголипидов на метастазирование CRC, и целевую метаболику на основе масс-спектрометрии, чтобы определить влияние FASN на состав сфинголипидов в клетках CRC.
3. Определить роль CD36 в КРР. Мы обнаружили, что мембранная локализация CD36, транслоказы жирных кислот, связана с метастатическим CRC, а экспрессия/локализация CD36 регулируется уровнем экспрессии FASN. Мы используем модели PDX, первичные клетки CRC, образцы CRC человека и несколько методов молекулярной биологии, включая систему редактирования генов CRISPR-Cas, чтобы понять роль CD36 и определить механизмы его регуляции с помощью FASN при этом заболевании. Мы также исследуем роль CD36 в развитии устойчивости к ингибированию FASN.
4. Выяснить влияние FASN на инициацию и прогрессирование CRC с использованием моделей генетически модифицированных мышей. Мы используем мышиные модели C57BL/6J-ApcMin и FASN/Apc/Cre, чтобы определить влияние FASN и диеты на возникновение и прогрессирование опухоли и выживаемость животных.
Образование:

Ростовский государственный университет
Ростов-на-Дону, Россия
Бакалавр биологии, специальность химия, сертификат учителя

Северо-Кавказский кадровый центр
Ростов-на-Дону, Россия
Бакалавр делового и государственного управления

Университет Кентукки
Кафедра биомедицинской фармакологии
Лексингтон, Кентукки
Кандидат наук, фармакология

Экологическая медико-научная перспектива с учетом Covid-19 — Орегонский университет здравоохранения и науки

TY — JOUR

T1 — Понимание восприятия и иерархии рисков Разум

AU — Рейс, Дж.

AU — Зайцева Н.В.

AU — Spencer, P.S.

N1 — Издательство Copyright: © Рейс Дж., Зайцева Н.В., Спенсер П.С., 2020

PY — 2020

Y1 — 2020

N2 — Целью данной статьи является изучение восприятия риска некоторыми конкретными заинтересованными сторонами, включая международные межправительственные организации, частные западные корпораций, а также среди европейских опросов общественного мнения. Мы также обращаем внимание на обеспокоенность Российской Федерации и воздействие китайской инициативы «Один пояс, один путь».Восприятие рисков играет ключевую роль в принятии политических решений и, возможно, более важно, чем оценка рисков. Мы предлагаем научно-медицинскую точку зрения, основанную на фактических данных, полученных в основном с официальных сайтов и публикаций. Наша первая цель — понять, уделяется ли достаточно внимания здоровью человека, профилактике и борьбе с болезнями с точки зрения экономических и финансовых соображений. Нашей второй целью является продвижение трансляционного и межпрофессионального подхода к приоритизации глобальных рисков путем сотрудничества между медико-научным сообществом и финансово-экономическим миром. С этой целью мы изучаем преимущества практики оценки экономических рисков от привлечения биомедицинских экспертов, ориентированных на глобальное состояние окружающей среды. Поддержание, расширение и устойчивость человеческого предприятия требуют здоровья и хорошего самочувствия.

AB. Целью данной статьи является изучение восприятия риска некоторыми конкретными заинтересованными сторонами, включая международные межправительственные органы, частные западные корпорации и европейские опросы общественного мнения. Мы также обращаем внимание на обеспокоенность Российской Федерации и воздействие китайской инициативы «Один пояс, один путь».Восприятие рисков играет ключевую роль в принятии политических решений и, возможно, более важно, чем оценка рисков. Мы предлагаем научно-медицинскую точку зрения, основанную на фактических данных, полученных в основном с официальных сайтов и публикаций. Наша первая цель — понять, уделяется ли достаточно внимания здоровью человека, профилактике и борьбе с болезнями с точки зрения экономических и финансовых соображений. Нашей второй целью является продвижение трансляционного и межпрофессионального подхода к приоритизации глобальных рисков путем сотрудничества между медико-научным сообществом и финансово-экономическим миром.С этой целью мы изучаем преимущества практики оценки экономических рисков от привлечения биомедицинских экспертов, ориентированных на глобальное состояние окружающей среды. Поддержание, расширение и устойчивость человеческого предприятия требуют здоровья и хорошего самочувствия.

KW — Азиатский банк инфраструктурных инвестиций

KW — Инициатива «Один пояс, один путь»

KW — Гигиена окружающей среды

KW — Организация экономического сотрудничества и развития

KW — Группа Всемирного банка

KW — Всемирный экономический форум

2 KW – Всемирная организация здравоохранения

KW – Всемирная торговая организация

KW – принятие решений

UR – http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=85101602105&partnerID=8YFLogxK

UR – http://www. scopus.com/inward/citedby.url?scp=85101602105&partnerID=8YFLogxK

U2 – 10.21668/health/risk 2020.3.01.ENG

do — 10.21668 / Health.ruisk / 2020.3.01.Eg

м3 — Статья

An — Scopus: 85101602105

VL — 2020

SP — 5

EP — 18

Jo — Анализ рисков для здоровья

JF — Анализ рисков для здоровья

SN — 2542-2308

IS — 3

ER —

Вычислительный интеллект, медицина и биология

‘) var buybox = документ.querySelector(«[data-id=id_»+ метка времени +»]»).parentNode ;[].slice.call(buybox.querySelectorAll(«.вариант-покупки»)).forEach(initCollapsibles) функция initCollapsibles(подписка, индекс) { var toggle = подписка.querySelector(«.цена-варианта-покупки») подписка.classList.remove(«расширенный») var form = подписка.

querySelector(«.форма-варианта-покупки») если (форма) { var formAction = форма.получить атрибут («действие») form.setAttribute(«действие», formAction.replace(«/checkout», «/cart»)) document.querySelector(«#ecommerce-scripts»).addEventListener(«load», bindModal(form, formAction, timestamp, index), false) } var priceInfo = подписка.querySelector(«.Информация о цене») var PurchaseOption = toggle.parentElement если (переключить && форма && priceInfo) { переключать.setAttribute(«роль», «кнопка») toggle.setAttribute(«tabindex», «0») toggle.addEventListener («щелчок», функция (событие) { var expand = toggle.getAttribute(«aria-expanded») === «true» || ложный toggle.

setAttribute(«aria-expanded», !expanded) form.hidden = расширенный если (! расширено) { покупкаВариант.classList.add («расширенный») } еще { покупкаOption.classList.remove(«расширенный») } priceInfo.hidden = расширенный }, ложный) } } функция bindModal (форма, formAction, метка времени, индекс) { var weHasBrowserSupport = window.fetch && Array.from функция возврата () { var Buybox = EcommScripts ? EcommScripts.Ящик для покупок: ноль var Modal = EcommScripts ? EcommScripts.Modal : ноль if (weHasBrowserSupport && Buybox && Modal) { var modalID = «ecomm-modal_» + метка времени + «_» + индекс var modal = новый модальный (modalID) modal.

domEl.addEventListener («закрыть», закрыть) функция закрыть () { форма.querySelector(«кнопка[тип=отправить]»).фокус() } форма.setAttribute( «действие», formAction.replace(«/checkout», «/cart?messageOnly=1») ) form.addEventListener( «представить», Buybox.interceptFormSubmit( Буйбокс.fetchFormAction(окно.fetch), Buybox.triggerModalAfterAddToCartSuccess(модальный), консоль.лог, ), ложный ) document.

body.appendChild(modal.domEl) } } } функция initKeyControls() { документ.addEventListener(«keydown», функция (событие) { if (document.activeElement.classList.contains(«цена-варианта-покупки») && (event.code === «Пробел» || event.code === «Enter»)) { если (document.activeElement) { событие.preventDefault() документ.activeElement.click() } } }, ложный) } функция InitialStateOpen() { var узкаяBuyboxArea = покупная коробка.смещениеШирина -1 ;[].slice.call(buybox.querySelectorAll(«.опция покупки»)).forEach(функция (опция, индекс) { var toggle = option.

querySelector(«.цена-варианта-покупки») var form = option.querySelector(«.форма-варианта-покупки») var priceInfo = option.querySelector(«.Информация о цене») если (allOptionsInitiallyCollapsed || узкаяBuyboxArea && индекс > 0) { переключать.setAttribute («ария-расширенная», «ложь») form.hidden = «скрытый» priceInfo.hidden = «скрытый» } еще { переключить.щелчок() } }) } начальное состояниеОткрыть() если (window.buyboxInitialized) вернуть window.buyboxInitialized = истина initKeyControls() })()

Книги по неврологии в Photon — Photon eBooks

СОРЕДАКТАРИИ

проф. Питер Спенсер , доктор философии, FANA, FRCPath, профессор Невролог, старший научный сотрудник Орегонского института гигиены труда наук и член Глобального центра здравоохранения, Oregon Health & Science. Университет (OHSU), Портленд, Орегон, США. Спенсер является выпускником Лондонский университет , занимал должности профессора в области неврологии и неврологии. и патологии (невропатологии) в Колледже Альберта Эйнштейна в Нью-Йорке. медицины и был директором-основателем Центра исследований OHSU по Токсикология труда и окружающей среды (CROET) и Глобальное здравоохранение OHSU Центр.Проф. Спенсер и проф. Герберт Шаумбург редактировали первое издание Экспериментальная и клиническая нейротоксикология, опубликованная на английском языке в 1980 г. Уильямс и Уилкинс, Филадельфия.

Проф. Герберт Шаумбург , доктор медицинских наук, профессор неврологии, Альберт Медицинский колледж Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк, США. Шаумбург является выпускником Гарвардский колледж и Медицинская школа Вашингтонского университета, Сент-Луис. Он прошел медицинскую интернатуру в Университетской больнице Вандербильта, резидентуру по неврологии в Медицинском колледже Альберта Эйнштейна (AECM) и стипендию в области невропатологии. в Массачусетской больнице общего профиля.Он стал соучредителем Института AECM. Нейротоксикология с профессором Спенсером.

ПОМОЩНИК РЕДАКТОРА

Проф. д-р Альберт Людольф , доктор медицинских наук, профессор и заведующий кафедрой неврологии. Председатель Центра неврологии Ульмского университета, Ульм, Германия. Людольф получил свои советы по неврологии и психиатрии в Мюнстерском университете, а позже работал со Спенсером и Шаумбургом в США. Он присоединился к ним как соредактор второго издания Experimental and Clinical Neurotoxicology, которая была опубликована на английском языке в 2000 году издательством Oxford University Press, Нью-Йорк.

РЕДАКТОР ПЕРЕВОДОВ

Ян Донгрен , MS, PhD, Ян окончил Харбинскую школу общественного здравоохранения. Медицинский университет, получил степень магистра в области питания и пищевой гигиены в Медицинский университет Шаньси и докторская степень в области труда и окружающей среды. Health от Института медицины труда Китайской академии Профилактическая медицина, Пекин, Китай. Ян перевел этот текст с английского на Китаец во время его работы в качестве научного сотрудника с докторской степенью в CROET, OHSU.

Бесплатная загрузка Книги

Программа роялти: отчисления за ваши книги, диссертации и диссертации
Вы также можете разместить список своих престижных книг/тезисов и научных статей на сайте Photon eBooks. Он может быть выставлен на продажу по цене 100 долларов США. Пишите по адресу [email protected] для запроса листинга.
Выберите варианты годового гонорара, как показано ниже:
Вариант B : Оплатите регистрационный сбор в размере 155 долларов США и 40% роялти авторам
Вариант C : Оплатите регистрационный взнос в размере 255 долларов США и 50% роялти авторам D : Оплатить регистрационный взнос в размере 355 долларов США и 60% отчислений авторам
Вариант E : Оплатить регистрационный сбор 455 долларов США и 70% отчислений авторам
Вариант F : Оплатить регистрационный сбор 5 и 805 долларов США Роялти авторам
Вариант G : Оплатить регистрационный сбор 655 долларов США и 90% роялти авторам.
Получайте роялти прямо на свой банковский счет и зарабатывайте на своих книгах, главах, диссертациях, диссертациях и патентах.
Купить самые популярные книги-

Особенности саркоидоза у пациентов с избыточной массой тела

Резюме

Нашей целью было выявить особенности течения саркоидоза у пациентов с избыточной массой тела и ожирением.

Методы: Мы проанализировали 160 историй болезни пациентов с подтвержденным диагнозом саркоидоз.В соответствии с ИМТ пациенты были разделены на две группы: пациенты с нормальной массой тела (N = 49) и пациенты с повышенной массой тела (N = 111). Сравнивали выраженность симптомов заболевания, лабораторные признаки активности заболевания, параметры функции легких (ФЖЕЛ, ОФВ1, DLCO), а также изменения, выявляемые при компьютерной томографии (КТ).

Результаты: пациентов с избыточной массой тела и ожирением по сравнению с пациентами с нормальным ИМТ имели большую продолжительность заболевания (47,3±5,7 против 31,9±5,5 месяцев, p = 0,05), большую тяжесть одышки по шкале mMRC (1,2 ± 0,36 против 0,82 ± 0,4, p = 0,01), более высокий СРБ мг/л (7,1 ± 1,9 против 1,5 ± 0,34, р = 0,006) и СОЭ мм/ч (28±2,3 против 15,7±2,1, р = 0,005). КТ у больных с избыточной массой тела чаще выявляла ретикулярные изменения — 59% против 41% у больных с нормальным ИМТ (р = 0,04) и тракционные бронхоэктазы — 40% против 23% (р = 0,046). Частота внутригрудной лимфаденопатии, перилимфатической диссеминации и сотовой диссеминации статистически не отличалась. Нам также не удалось продемонстрировать разницу в параметрах функции легких (p>0,05).

Заключение: Наши результаты позволяют сделать предположение о существовании особого фенотипа саркоидоза — саркоидоза у больных с повышенной массой тела.Необходимы дальнейшие исследования для изучения саркоидоза у пациентов с избыточной массой тела, что позволит разработать персонализированные стратегии диагностики и лечения для этой категории пациентов. 58: Доп. 65, PA707.

Этот тезис был представлен на Международном конгрессе ERS 2021, в секции «Прогнозирование обострений у пациентов с ХОБЛ».

Это реферат Международного конгресса ERS.Полнотекстовой версии нет. Дополнительные материалы, сопровождающие этот реферат, могут быть доступны на сайте www.ers-education.org (доступ только для членов ERS).

Слитый белок класса II альфавирусов управляет слиянием мембран по тому же пути, что и белки класса I | Журнал клеточной биологии

Вирусные слитые белки классов I и II радикально различаются по своей исходной структуре, но при активации восстанавливаются до сходных конформаций.Пути слияния, опосредованные альфавирусом E1 и гемагглютинином (HA) вируса гриппа, которые иллюстрируют классы II и I, отличаются, чтобы отразить разницу в их начальных конформациях, или совпадают, чтобы отразить сходство в конечных конформациях? Здесь мы проанализировали путь запускаемого низким pH E1-опосредованного слияния клеток с клетками, уменьшая количество активированных белков E1 и блокируя различные стадии слияния с помощью специфических ингибиторов. Обнаруженная прогрессия от транзиторной гемифузии к маленьким, а затем расширяющимся порам слияния при увеличении количества активированных белков слияния параллельна установленной для HA-опосредованного слияния. Мы пришли к выводу, что такие разные белки, как E1 и HA, управляют слиянием через поразительно сходные мембранные интермедиаты, причем наиболее энергоемкие стадии следуют, а не предшествуют полуслиянию. Мы предполагаем, что реакции слияния, катализируемые всеми белками обоих классов, протекают по сходному пути.

Реакции слияния мембран, опосредованные различными слитыми белками, имеют решающее значение для эукариотических клеток и для развития многоклеточных организмов (Jahn et al., 2003; Шемер и Подбилевич, 2003). Недавние исследования разнообразия слитых белков были сосредоточены на белках, которые опосредуют слияние, посредством которого оболочечные вирусы доставляют свой геном в клетки-хозяева. Вирусы гриппа и Синдбис являются одними из наиболее изученных прототипов термоядерных машин. Для обоих вирусов слияние запускается подкислением эндосомы, содержащей вирус. В случае вируса гриппа низкий рН запускает реструктуризацию гомотримерного гликопротеина НА (Skehel and Wiley, 2000; Tamm, 2003; Earp et al. , 2005). В случае вируса Синдбис (SIN) расположение 1:1:1 трех структурных белков (фузогенного гликопротеина оболочки E1, дополнительного гликопротеина оболочки E2 и капсидного белка C) образует икосаэдр с двойной оболочкой (Paredes et al. ., 1998). Низкий рН освобождает SIN E1 от его гетеродимерного взаимодействия с E2 и индуцирует гомотримеризацию E1. Конечные низкоэнергетические формы E1, HA и многих других слитых белков имеют общий важный мотив, две последовательности, которые взаимодействуют с мембранами: слитый пептид и трансмембранный домен перемещаются к одному и тому же концу палочковидной молекулы (Weber et al., 1998; Скехел и Уайли, 2000 г.; Гиббонс и др., 2003, 2004b; Брессанелли и др., 2004; Модис и др., 2004). Реструктуризация HA и E1 в условиях слияния включает ранние обратимые конформации (Leikina et al., 2002; Gibbons et al., 2004a) и латеральные взаимодействия между соседними белками (Markovic et al., 2001; Gibbons et al., 2004b).

Несмотря на сходство, HA и E1 радикально различаются по своим первоначальным структурам и стали представлять два различных класса белков слияния вирусов (Lescar et al. , 2001). Белки класса I (на примере HA и gp120/gp41 ВИЧ) ориентированы перпендикулярно поверхности оболочки и имеют α-спиральные домены в виде суперспирали. Высококонсервативная и критическая для слияния последовательность «пептида слияния» расположена на или вблизи конца NH ₂ белка слияния. Белки класса II (например, белок E1 альфавирусов, таких как SIN и вирус леса Семлики [SFV], и белок E флавивирусов) располагаются по касательной к вирусной мембране и имеют «внутренний», а не «терминальный» гибридный пептид.Белки класса II содержат преимущественно вторичные структуры β-цепи и, по прогнозам, не образуют спиральные спирали.

Реструктуризация, при которой белки классов I и II из несходных начальных конформаций в сходные конечные структуры приводят к слиянию мембран. Путь слияния, опосредованный белками класса I, был изучен в экспериментах, в которых слияние замедлялось или блокировалось на разных стадиях путем генетической модификации белков слияния или уменьшения их количества, а также с использованием специфических ингибиторов (Kemble et al. , 1994; Черномордик и др., 1998; Козерски и др., 2000; Меликян и др., 2000; Рассел и др., 2001; Боррего-Диас и др., 2003 г.; Парк и др., 2003). Для HA продвижение по пути слияния к открытию расширяющейся поры слияния, соединяющей экспрессирующую HA клетку и связанные RBC, контролируется поверхностной плотностью HA (для обзора см. Chernomordik and Kozlov, 2003). При увеличении количества активированных ГК происходит сдвиг наблюдаемых фенотипов слияния от ограниченного гемислияния (RH), при котором поток липидов через соединения гемислияния ограничивается белками, окружающими сайт слияния, к неограниченному гемислиянию (UH). , определяемый как смешивание липидов без смешивания содержимого.Только при очень высоких плотностях активированных ГК реакция слияния достигает необратимой стадии расширения пор слияния.

Хотя, в отличие от пути, опосредованного белками класса I, путь слияния белков класса II не был исследован, слияние, опосредованное альфавирусами и флавивирусами, систематически характеризовалось с использованием в основном экспериментальной системы слияния вирусных частиц с липосомами (белые и Helenius, 1980; Bron et al. , 1993; Ниева и др., 1994; Килян и др., 1996; Корвер и др., 1997; Смит и др., 1999, 2002; Макинерни и др., 2004). Слияние, опосредованное белками класса II, происходит значительно быстрее, менее чувствительно к понижению температуры и менее протекающее, чем реакции слияния, опосредованные вирусами с белками слияния класса I (например, вирус гриппа) (Shangguan et al., 1996; Corver et al. ., 2000; Смит и др., 2002). Эти различия наряду с несходством между начальными конформациями белков классов I и II могут указывать на то, что реструктуризация белков и мембран для этих двух классов происходит разными путями.С другой стороны, сходство между структурами после слияния предполагает сходство между путями слияния (Gibbons et al., 2004b; Modis et al., 2004).

Белки разных классов катализируют слияние радикально разными путями? Например, очень надежное слияние, опосредованное белками класса II, может происходить через полностью белковую пору слияния, как предполагается для некоторых событий слияния (Lindau and Almers, 1995; Peters et al. , 2001; Han et al., 2004), а не через интермедиаты полуслияния, сходные с таковыми при слиянии HA (Kemble et al., 1994; Melikyan et al., 1997a; Черномордик, Козлов, 2003). В рамках пути слияния через гемислияние этапы, ограничивающие скорость в процессе слияния, и, таким образом, «описание работы» слитых белков могут различаться: белки могут управлять всем путем, как в случае HA, или, альтернативно, действовать только для того, чтобы катализировать полуслияние с последующими стадиями слияния, чтобы протекать спонтанно.

В этой работе мы обнаружили, что слияние клеток, опосредованное E1 SIN и SFV, происходит через промежуточные продукты, поразительно сходные с теми, что идентифицированы ранее для слияния HA. Только часть всех активированных при низком pH E1, необходимых для слияния, требуется для локального слияния контактирующих монослоев двух мембран в промежуточные соединения RH. Дополнительные активированные E1s вызывают переход от RH к UH фенотипу, что позволяет липидам смешиваться между мембранами. Еще большее количество активированных E1 продвигает слияние за пределы переходных промежуточных звеньев полуслияния к открытию, а затем к расширению поры слияния. Зависимость фенотипа слияния от числа активированных E1 указывает на то, что наиболее требовательная часть работы для белков слияния класса II, как и для белков класса I, скорее следует, чем предшествует локальному слиянию мембран.

Для изучения пути слияния E1 для клеток HAb2, которые использовались в работе по слиянию HA (Danieli et al., 1996; Черномордик и др., 1998) мы инфицировали эти клетки SIN. Клетки HAb2 экспрессируют незрелую форму HA0 HA. HA0, хотя и способна опосредовать связывание с рецепторами сиаловой кислоты, приобретает фузогенную активность только в том случае, если расщепляется трипсином до зрелой формы HA1-HA2. SIN-инфицированные клетки HAb2 (называемые ниже клетками E1-HAb2), использованные без предварительной обработки трипсином и, таким образом, имеющие только некомпетентную к слиянию форму HA0, инкубировали с эритроцитами, меченными липидным зондом PKh36, и различными водными зондами.

Применение pH 5,6 к парам E1-HAb2/RBC вызвало сильное смешивание липидов и содержимого (рис. 1). Не наблюдалось слияния при нейтральном pH (C1) или для неинфицированных HA0-экспрессирующих клеток HAb2, обработанных pH 5,6 (C2) или pH 4,9 (не показано). Обратите внимание, что слияние E1 запускается при менее кислом pH, чем слияние HA. Даже для клеток HAb2 с полностью расщепленной HA применение pH 5,6 не дало заметного слияния (не показано; см. также Chernomordik et al., 1998). Эти контроли подтвердили, что слияние между клетками E1-HAb2 и эритроцитами опосредовано формами SIN E1 с низким pH.

Чем менее кислый применяемый pH, тем ниже процент альфавируса E1, который подвергается конформационной реструктуризации в функциональные гомотримеры E1 (Sjoberg and Garoff, 2003). Изменяя pH, применяемый к парам E1-HAb2/RBC, до pH>5,6, мы постепенно уменьшали степень слияния и, что более важно, обнаруживали два фенотипа частичного слияния. Разница между степенью слияния, обнаруженной как перенос 6-карбоксифлуоресцеина (CF) и перенос более крупного водного зонда, 70-кДа флуоресцентного декстрана (FD) (рис. 1, зеленые и синие столбцы), указывает на то, что некоторые пары клеток развили небольшие , нерасширяющиеся поры плавления (НЭП). Точно так же разница между степенью смешивания липидов и CF (рис. 1, красные и зеленые столбцы) указывала на то, что в некоторых парах клеток развилось смешивание липидов без смешивания содержимого, т. Е. UH.

Чтобы проверить, являются ли соединения UH стабильными или диссоциируют со временем, мы проанализировали кинетику и конечную степень смешивания липидов.События слияния, приводящие к переносу как липидов, так и CF, приводили к полному смешиванию липидов, определяемому отсутствием отчетливой круглой формы RBC в конце эксперимента (рис. 2). Напротив, большинство пар E1-HAb2/RBC, которые демонстрировали UH, представляли фенотип «частичного смешивания липидов» (Mittal et al. , 2003), где перенос липидного красителя остается незавершенным в конце процесса смешивания липидов. Поскольку UH приводит к частичному, а не полному перемешиванию липидов, и, таким образом, поток липидов через UH-соединения прекращается до его завершения, мы заключаем, что эти соединения спонтанно диссоциируют.

Отметим, что в экспериментах, представленных на рис. 2, слияние не только инициировалось, но и наблюдалось в среде с низким рН. Таким образом, для слияния в нашей экспериментальной системе не требовался возврат к нейтральному pH после применения низкого pH. Этот вывод противоречит выводам, сделанным Paredes et al. (2004), но согласуется с выводом, сделанным Waarts et al. (2002).

Как UH, так и RH соединения могут быть преобразованы в полное слияние путем кратковременного применения хлорпромазина (CPZ). Этот катионный амфипат преимущественно расщепляет и дестабилизирует монослои внутренней мембраны, образующие гемифузионную структуру (Меликян и др., 1997а). Чтобы проверить, способен ли E1 образовывать RH, пары E1-HAb2/RBC сначала обрабатывали импульсом низкого pH, а затем, уже при нейтральном pH, 1-минутным импульсом CPZ (рис. 3). Импульс CPZ вызывал значительное увеличение степени смешивания как липидов, так и содержимого по сравнению с контролями, наблюдаемое после импульса низкого pH без применения CPZ.Индуцированное CPZ продвижение слияния было менее выраженным при более низком pH (фиг. 3B по сравнению с рис. 3A), потому что слияние происходило дальше при более низком pH.

промежуточных соединений RH были образованы E1, активированным при низком pH. Ни смешивание липидов, ни смешивание содержимого не стимулировалось, когда CPZ применяли к парам E1-HAb2/RBC, не подвергавшимся воздействию низкого pH, или к обработанным низким pH неинфицированным клеткам HAb2 со связанными RBC. Значительное снижение стимулирования слияния при применении ХПЗ через 40 мин после импульса с низким рН (рис.3), указывает на то, что RH является переходным интермедиатом, который либо диссоциирует (Лейкина, Черномордик, 2000), либо переходит в еще не идентифицированные нечувствительные к CPZ формы полуслияния.

Подводя итог, можно сказать, что при субоптимальном рН, когда количество активированных белков Е1 недостаточно для образования расширяющейся поры слияния, Е1 устанавливает менее продвинутые фенотипы слияния, два типа временных промежуточных полупродуктов слияния (RH и UH) и небольшие поры слияния.Даже когда слияние не достигло необратимой стадии расширения поры слияния, эритроциты оставались связанными с НА-клетками посредством связывания с НА1-рецептором (Черномордик и др., 1998).

Фенотипы слияния, наблюдаемые для слияния E1-HAb2, могут наблюдаться в отсутствие каких-либо форм HA. Меченым эритроцитам давали осесть на прикрепленные SIN-инфицированные клетки BHK21. В отличие от клеток E1-HAb2, инфицированные клетки BHK21 не имеют механизма связывания эритроцитов.Однако мягкая замена среды буфером с низким pH, не содержащим эритроцитов, позволила нам наблюдать слияние между инфицированными клетками BHK21 и слабо прикрепленными эритроцитами. Хотя отсутствие прочного связывания эритроцитов препятствовало количественной оценке слияния E1 в этой системе, мы действительно наблюдали полное слияние (перенос как PKh36, так и FITC-меченого FD [FFD]), фенотип NEP (перенос CF, но не меченного родамином FD). [RFD]), UH и RH после применения субоптимального pH (неопубликованные данные).

Дополнительный фенотип слияния E1 был идентифицирован с использованием ингибитора слияния лизофосфатидилхолина (LPC), липида, который ингибирует различные реакции слияния (Cernomordik et al., 1993; обзор см. Черномордик и Козлов, 2003). Чтобы проверить активность LPC в отношении слияния E1, пары E1-HAb2/RBC инкубировали с лауроиловым LPC в течение 5 минут, а затем, все еще в присутствии LPC, обрабатывали импульсным импульсом pH 6,0 (рис. 5). В отличие от контроля без присутствия LPC, мы наблюдали значительное ингибирование слияния (рис. 5А, столбцы 2 по сравнению с столбцами 1). Слияние началось после удаления LPC (рис. 5А, столбцы 3 и столбцы 1). Таким образом, стадия слияния с остановкой LPC (LAS) в слиянии E1 предшествует смешиванию липидов и CF, но следует за низкой pH-зависимой активацией E1.

Что касается слияния E1-HAb2/RBC, LPC ингибировала слияние SIN-инфицированных клеток BHK21 с RBC (фиг. 5B). Важно отметить, что хотя слияния клеток BHK21 со слабо прикрепленными эритроцитами не происходило, когда их обрабатывали импульсом низкого pH в присутствии LPC, после импульса эритроциты становились прочно прикрепленными к инфицированным клеткам. Это зависимое от низкого pH связывание было опосредовано гликопротеинами SIN, о чем свидетельствует отсутствие такого связывания RBC в контроле с SIN-инфицированными клетками, не обработанными низким pH, и неинфицированными BHK21, обработанными низким pH.Индуцированное низким pH связывание между мембраной, экспрессирующей E1, и мембраной-мишенью без рецепторов, как известно, опосредуется вставкой петли слияния E1 (FL) в мембрану-мишень, что является необходимым условием для гомотримеризации E1 и для слияния (Kielian et al., 1996). ; Смит и др., 1999; Гиббонс и др., 2004а). Наше открытие, что низкое pH-зависимое связывание между SIN-инфицированными клетками BHK21 и эритроцитами не изменяется в присутствии LPC, указывает на то, что ингибирование слияния LPC не включает ингибирование вставки FL.

В описанных выше экспериментах LPC добавляли к обеим мембранам для слияния. Чтобы дополнительно проверить, влияет ли ингибирование слияния с помощью LPC на взаимодействие между E1 и мембраной эритроцитов, мы добавили стеароил LPC только к клеткам E1-HAb2 (рис. 5C). Из-за низкой растворимости в воде стеароил-ЛФХ, в отличие от лауроил-ЛФХ, остается в клеточной мембране даже при промывании клеток средой, не содержащей ЛФХ (Черномордик и соавт., 1997). Обработка Stearoyl LPC клеток E1-HAb2 до приведения их в контакт с эритроцитами была достаточной для ингибирования последующего слияния, запускаемого низким pH, что подтверждает, что ингибирование LPC не связано с нарушением взаимодействия E1 с мембраной-мишенью.

В отличие от LPC, который ингибирует различные реакции слияния, Zn является специфическим ингибитором слияния альфавирусов (Corver et al., 1997). Хотя, как и ожидалось, 5 мМ Zn не ингибировали слияние HA обработанных трипсином клеток HAb2 со связанными эритроцитами (неопубликованные данные), пары E1-HAb2/эритроциты, обработанные буфером с низким pH, содержащим 5 мМ Zn, почти не давали слияния (рис.6 А, столбцы 2 по сравнению со столбцами 1). Чтобы предотвратить плавление, Zn должен был присутствовать во время применения с низким pH. Предварительная инкубация клеточных пар с Zn в течение 5 мин с последующей промывкой клеток буфером, содержащим ЭДТА, не содержащим Zn, перед импульсом низкого pH не влияла на слияние.

Предварительная обработка мембраны, экспрессирующей E1, при низком pH в отсутствие мембраны-мишени инактивирует E1, о чем свидетельствует отсутствие слияния после применения дополнительного импульса низкого pH в присутствии мембраны-мишени (Smit et al., 1999). В соответствии с более ранней работой по слиянию SFV/липосомы (Corver et al., 1997) мы обнаружили, что Zn не ингибирует инактивацию E1 (рис. 6А, столбцы 1i). В контроле мы обработали клетки E1-HAb2 импульсом низкого pH, повторно нейтрализовали клетки, добавили эритроциты и применили второй импульс низкого pH. Функциональная инактивация E1 после первого импульса низкого pH приводила к значительному снижению слияния (столбики 2i). Таким образом, в наших условиях количество функциональных гликопротеинов SIN, доставленных на поверхность инфицированной клетки в течение 25-минутного интервала времени между двумя импульсами низкого pH, было недостаточным для получения измеримого слияния.Сходная инактивация E1 наблюдалась, когда первый импульс с низким pH применялся к клеткам E1-HAb2 в присутствии Zn, а затем, после повторной нейтрализации клеток, Zn удаляли промывками с EDTA-содержащим PBS, не содержащим Zn, перед добавлением эритроцитов и второй импульс низкого pH (столбцы 1i).

Применение низкого pH к парам E1-HAb2/RBC в присутствии Zn не инактивировало E1. Хотя импульс низкого pH, применяемый в присутствии Zn, не приводил к сплавлению даже после удаления Zn (рис.6А, столбцы 3), второй импульс низкого pH дал значительное слияние (столбцы 4). Таким образом, SIN E1, которые были активированы низким pH в присутствии Zn и эритроцитов, не были ни необратимо детерминированы для слияния при удалении Zn, ни необратимо инактивированы.

Поскольку Zn, как и LPC, ингибирует слияние после зависимой от низкого pH активации E1, но до смешивания липидов и содержимого, мы затем проверили, наступает ли Zn-остановленная стадия слияния (ZnAS) до или после LAS.Мы установили LAS, обрабатывая пары E1-HAb2/RBC импульсом низкого pH в присутствии LPC (рис. 6B). Затем, все еще при низком pH и в присутствии LPC, мы инкубировали клетки с Zn. Последующее удаление LPC, все еще в присутствии Zn, привело к значительному слиянию (столбцы 5), что указывает на то, что стадии слияния после LAS уже нечувствительны к Zn. В дополнительном эксперименте, когда мы обрабатывали пары E1-HAb2/RBC импульсом низкого pH в присутствии как LPC, так и Zn, клетки никогда не достигали LAS, о чем свидетельствует отсутствие слияния при последующем удалении как Zn, так и LPC. (Рисунок.6 С, столбцы 4). Слияние, наблюдаемое после применения второго импульса низкого pH (столбцы 5), подтвердило, что первый импульс низкого pH, примененный в присутствии Zn и LPC, не инактивировал E1. Эти данные указывают на то, что ZnAS предшествует LAS.

Хотя белки, которые опосредуют различные реакции слияния, выполняют, по-видимому, сходную работу, пути и лежащие в их основе механизмы могут быть радикально разными для разных белков.Здесь, чтобы оценить общность путей слияния, мы сосредоточились на альфавирусе E1 и HA гриппа, белках класса II и класса I, которые резко различаются по своим начальным конформациям, но при активации возвращаются к сходным конечным конформациям. Чтобы охарактеризовать ранние промежуточные продукты в слиянии E1, мы замедлили и/или остановили слияние, используя субоптимальный рН и ингибиторы слияния. Мы обнаружили, что E1 создает тот же набор промежуточных продуктов слияния, что и HA (LAS, переходные гемифузионные соединения, RH и UH, а также небольшую, а затем расширяющуюся пору слияния; рис.7). Единственным фенотипом слияния, специфичным для слияния E1, является ZnAS. Хотя ГК гомотримерен уже в исходной форме, Е1 образует функциональные гомотримеры только после подкисления. Zn, ингибитор этой гомотримеризации (Corver et al., 1997), ингибирует слияние E1 и не влияет на слияние HA.

Для слияния E1, как и для слияния, опосредованного HA, требуется менее кислый pH и, следовательно, меньше активируемых низким pH слитых белков для гемифузии мембран, а не для открытия расширяющихся пор слияния.Это открытие указывает на то, что слитые белки обоих классов (I и II) управляют всем путем слияния, а не просто катализируют слияние контактирующих монослоев двух мембран.

LAS в слиянии E1 предшествует слиянию мембран и следует за всеми стадиями, зависящими от низкого pH, включая ZnAS. В зависимости от концентрации и условий LPC может оказывать различное влияние на биологический синтез. LPC ингибирует многие реакции слияния, противодействуя искривлению монослоя, которое доминирует в раннем стебельообразном локальном интермедиате гемислияния (для обзора см. Chernomordik and Kozlov, 2003).Альтернативно, LPC может блокировать взаимодействие белков слияния с мембраной-мишенью и последующую реструктуризацию белка, необходимую для слияния (Stiasny and Heinz, 2004). Наши результаты подтверждают прежний механизм ингибирования стебля в нашей системе и согласуются с открытием лаборатории Wilschut, что LPC блокирует фактическое слияние мембран при слиянии E1, а не гомотримеризацию E1 (Wilschut, J., личное сообщение).

Важно отметить, что LPC, добавленный к контактирующим мембранным монослоям, блокировал не только их слияние и, как следствие, перемешивание липидов, но и перемешивание содержимого.Это открытие предполагает, что полуслияние является стадией продуктивного пути слияния, дающей расширяющуюся пору слияния, а не побочным продуктом реакции; а также указывает на то, что слияние E1, как слияние HA, происходит через полуслияние, а не через полностью белковую пору слияния.

Подобно более ранним исследованиям слияния ГК (Черномордик и др., 1998; Лейкина, Черномордик, 2000), E1 образует интермедиаты RH и UH.Последнее было задокументировано ранее с использованием электрофизиологического подхода к слиянию между клетками, экспрессирующими аппарат слияния SFV, и плоским липидным бислоем (Samsonov et al., 2002). Мы обнаружили, что как RH, так и UH-соединения при слиянии E1, как и при слиянии HA, диссоциируют со временем. Таким образом, до тех пор, пока число активированных E1 не станет достаточно высоким, чтобы образовать расширяющуюся пору (поры) слияния, промежуточные продукты слияния остаются энергоемкими и зависят от белкового механизма для их стабилизации.

Как и в случае HA, предварительная обработка гликопротеинов альфавируса при низком pH в отсутствие мембраны-мишени вызывает инактивацию механизма слияния. Ограниченное время жизни RH и UH указывает на то, что конформационная энергия E1 постепенно разряжается даже в присутствии мембраны-мишени. Однако в этом случае инактивация происходит медленнее. Обработанные низким pH пары E1-клетки/эритроциты, слияние которых ингибируется либо LPC, либо Zn, сохраняют свой фузогенный потенциал в течение десятков минут. Вставка FL E1 в мембрану эритроцитов может замедлить переход гомотримера E1 из расширенной конформации с FL в мембране-мишени в разряженную низкоэнергетическую форму, в которой FL и трансмембранный домен закреплены в одной и той же мембране. (Гиббонс и др., 2003, 2004б).

Долгоживущие конформации E1 в LAS не нуждались в дополнительном применении с низким pH для обеспечения слияния после удаления LPC. Напротив, для ZnAS мономеры E1 с FL, вставленными в мембрану-мишень (Corver et al., 1997), после удаления Zn нуждаются во втором импульсе с низким pH для слияния, что позволяет предположить, что тримеризация E1 ниже по течению от введения мономера все еще зависит от низкого pH. .

Ряд важных заболеваний человека, включая лихорадку Денге, вызываются вирусами, которые проникают в клетки с помощью слитых белков класса II.Здесь мы сообщаем, что эти белки катализируют путь слияния мембран, подобный тому, который управляется HA вируса гриппа класса I. Слияние может быть механически связано с переходом слитых белков из «растянутой» конформации индивидуальной гомотримерной формы, заякоренной в обеих мембранах, в форму шпильки после слияния, и/или оно может быть связано с латеральными взаимодействиями между соседними слитыми белками, которые уже могут добились формы шпильки. Латеральные взаимодействия между слитыми белками действительно были задокументированы, и возможная важность этих взаимодействий в слиянии обсуждалась (Blumenthal et al., 1996; Даниэли и др., 1996; Годен и др., 1996; Плонски и Циммерберг, 1996; Черномордик и др., 1998; Маркович и др., 1998, 2001; Бенц, 2000; Козлов, Черномордик, 2002; Рош и Годен, 2002 г. ; Черномордик, Козлов, 2003; Гиббонс и др., 2003, 2004b). Взаимодействия между активированными слитыми белками, собранными вокруг сайта слияния, могут объяснить ограничение смешивания липидов при RH (Cernomordik et al., 1998; this paper). Гипотеза о том, что слияние зависит от энергии, высвобождаемой при взаимодействии между реструктурированными белками, могла бы объяснить фузогенную активность большого полипептида на основе эктодомена HA2, который имеет конформацию, сходную с конформацией после слияния субъединицы HA2 HA (Epand et al., 1999; Лейкина и др., 2001). Эта гипотеза также согласуется с недавним открытием, что мутации HA, которые, как ожидается, влияют только на последние стадии реструктуризации HA, ингибируют промежуточные продукты раннего слияния (Park et al., 2003).

Реакции слияния E1 и HA имеют общие переходные промежуточные продукты полуслияния, которые предшествуют необратимому завершению слияния. Мы предполагаем, что ранняя стадия оболочечной вирусной инфекции включает эти промежуточные звенья.Количество активированных вирусных слитых белков внутри эндосомы, вероятно, постепенно увеличивается при прогрессирующем закислении содержимого эндосомы (Roederer et al., 1987). Поскольку для открытия поры слияния требуется больше белков слияния, чем для гемислияния, условия для гемислияния должны развиваться раньше, чем условия для пор слияния, что позволяет предположить, что промежуточные продукты гемислияния присутствуют в зоне контакта с мембраной во время открытия первой поры слияния. . Как обсуждалось выше, взаимодействия с мембраной-мишенью замедляют инактивацию белков, что позволяет дополнительным белкам слияния присоединяться к белкам, собранным вокруг развивающегося сайта слияния.В этом сценарии увеличение количества активированных белков и, следовательно, увеличение конформационной энергии, которую они могут высвобождать при слиянии, приводит к переходу от гемислияния к расширяющейся слитой поре.

Наши данные подтверждают гипотезу о том, что окончательная структура шпилек, общая для различных белков слияния вирусов, более важна для слияния, чем исходные метастабильные конформации этих белков. Поскольку белки, участвующие во внутриклеточном слиянии, собираются в сходные шпилечные структуры (Weber et al., 1998), наши результаты имеют важное значение для продолжающихся дебатов о пути внутриклеточного слияния (Cernomordik and Kozlov, 2003; Han et al., 2004; Szule and Coorssen, 2004). Несколько исследований пришли к заключению, что внутриклеточное слияние, в отличие от HA-опосредованного слияния, начинается с открытия полностью белковой поры слияния (Peters et al., 2001; Han et al., 2004). Альтернативная гипотеза стебель-пор предполагает, что внутриклеточное слияние как HA-опосредованное слияние и др. биологические реакции слияния происходят через интермедиаты полуслияния (для обзора см. Chernomordik and Kozlov, 2003). Эта гипотеза подтверждается сходством эффектов небислойных липидов на внутриклеточное слияние, вирусное слияние и слияние безбелковых липидных бислоев (Cernomordik et al., 1993; Vogel et al., 1993), а также исследованиями экзоцитотического слияния. у дрожжей (Grote et al., 2000) и экзоцитоз гранул инсулина в панкреатических островках (Takahashi et al., 2002). Наше открытие, что непохожие вирусные слитые белки катализируют путь слияния через гемислияние, указывает на универсальность этого механизма биологического слияния.Т.о., путь слияния, выделенный здесь для E1-опосредованного слияния, может быть общим для несоизмеримых реакций слияния, запускаемых различными белками с принципиально сходными конечными шпилечными структурами.

Мы метили эритроциты человека, свежевыделенные из цельной крови, флуоресцентным липидом РХ36 (Sigma-Aldrich) и водными красителями CF, FFD и RFD (Invitrogen) (как описано в Melikyan et al. , 1997b; Chernomordik et al. ., 1998). Эритроциты были дважды помечены PX36 и CF; или с ПХ36 и ФФД; или с CF и RFD. Ни один из этих зондов не изменил эффективности слияния по сравнению с контролем без данного зонда.

клетки HAb2, экспрессирующие A/Japan/305/57 HA (Doxsey et al., 1985), и клетки BHK21 (American Type Culture Collection, Rockville, MD) выращивали в DME, содержащем 10% FCS, 10 мМ Hepes, пенициллин и стрептомицин. при 37°С.

HA экспрессируется в клетках HAb2 в незрелой форме HA0 HA. HA0, хотя и способен опосредовать связывание с сиаловыми кислотами на поверхности эритроцитов, приобретает фузогенную активность только в том случае, если расщепляется трипсином до зрелой формы HA1-HA2. Если не указано иное, в этом исследовании мы отказались от обработки трипсином клеток HAb2, чтобы оставить HA в неспособной к слиянию форме HA0.

В нескольких экспериментах, направленных на изучение слияния HA, клетки HAb2 обрабатывали 10 мкг/мл трипсина (Fluka) в течение 10 минут при 22°C, чтобы расщепить HA0 в его способную к слиянию форму HA1-S-S-HA2.

Сырье SIN штамма TE хранили при -80°C и использовали для инфицирования клеток BHK21 с низкой множественностью для размножения рабочих штаммов вируса с титром от 10 ⁸ до 10 ⁹ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/ мл. Рабочие штаммы вируса хранили при температуре 4°С менее двух недель. Клетки HAb2 и BHK21 инфицировали SIN из рабочих запасов вируса с множественностью 50–100 БОЕ на клетку, чтобы гарантировать инфицирование всех клеток.Клетки использовали через 7–8 ч после инфицирования.

Плазмида pCB3 (Lu et al. , 2001), подарок доктора Маргарет Килян (Медицинский колледж Альберта Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк), кодирует все структурные белки SFV, капсид, p62, 6K и E1. Для кратковременной экспрессии белков SFV в клетках HAb2 клетки высевали при ~70% слиянии на 35-мм планшеты и трансфицировали 2 мкг плазмидной ДНК с использованием LipofectAMINE 2000 (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя.Клетки использовали для анализа слияния через 30 ч после трансфекции.

Все эксперименты проводились при 22°C. После двух промывок PBS клетки HAb2 инкубировали в течение 10 мин с 1 мл взвеси эритроцитов (гематокрит 0,01%). Клетки HAb2 с 0–2 связанными эритроцитами на клетку трижды промывали PBS для удаления несвязанных эритроцитов.

Чтобы инициировать слияние, клетки E1-HAb2 со связанными эритроцитами инкубировали в PBS, оттитрованном цитратом до кислого pH, в течение 5 минут, если не указано иное. Импульс низкого pH заканчивали заменой кислого раствора на PBS. Слияние определяли количественно как отношение перераспределенных красителем связанных эритроцитов к общему количеству связанных эритроцитов (Черномордик и др., 1998). Чтобы охарактеризовать относительную частоту фенотипа УГ для разных рН, мы нормализовали количество пар клеток, которые демонстрировали смешение ПКх36 без смешения КФ, к общему числу пар клеток, которые демонстрировали смешение ПКх36. Точно так же для NEP мы нанесли на график разницу между количеством пар клеток, которые продемонстрировали передачу CF и FD, нормализованную по количеству пар клеток, которые продемонстрировали передачу CF.

SIN-инфицированные клетки BHK21 не связывают эритроциты. Чтобы изучить слияние между этими клетками, мы сначала позволили эритроцитам осесть и свободно прикрепиться к клеткам BHK21. Затем мы осторожно и медленно заменяли PBS раствором с низким pH или накладывали нормальный PBS предварительно оттитрованным кислым раствором.

Даже когда слияние ингибировано, низкое pH-зависимое встраивание E1 FL в мембрану-мишень обеспечивает эффективный механизм связывания между мембраной, экспрессирующей E1, и мембраной-мишенью (Corver et al., 1997). Чтобы изучить это связывание, SIN-инфицированные клетки BHK21 и эритроциты обрабатывали импульсом низкого pH в присутствии LPC. Несвязанные эритроциты удаляли тремя интенсивными промываниями PBS. Мы провели скрининг не менее 200 клеток в шести случайно выбранных областях каждого планшета. Для каждого планшета среднее количество эритроцитов, связанных с клетками BHK21, нормализовали по количеству эритроцитов, свободно связанных с клетками до промывания (примерно 300 эритроцитов).

Степень слияния достигала окончательных уровней в течение 1–2 минут после применения низкого pH и оценивалась путем анализа собранных видеомикроскопических изображений, полученных с использованием микроскопа (модель IX70; Olympus) и камеры CCD (Photometrics CoolSNAP-fx; Roper Scientific). как отношение перераспределенных красителем связанных эритроцитов к общему количеству связанных эритроцитов (Cernomordik et al., 1998). Во всех экспериментах, за исключением показанных на рис. 2, мы исследовали синтез уже после ренейтрализации. Представленные данные были усреднены по крайней мере из трех экспериментов.

В нашем анализе моделей смешивания липидов, чтобы установить завершение смешивания липидов, мы оцифровали записанное видео флуоресцентной микроскопии и количественно определили флуоресцентную область для каждой отдельной пары клеток RBC/E1-HAb2 в каждый момент времени.Фенотипы полного и частичного смешивания липидов легко классифицировать на глаз (рис. 2). Различные закономерности распространения липидного зонда в фенотипах полного и частичного смешивания липидов были подтверждены анализом сканирования поверхности пяти пар E1-клеток/эритроцитов для каждого фенотипа. Поскольку пиковое значение пикселя конечного изображения, деленное на пиковое значение пикселя исходного изображения для полного смешивания липидов, составляет 55,01 ± 9,32% по сравнению с 95,35 ± 7,41 % для частичного смешивания липидов, мы делаем вывод, что, хотя для частичного смешивания липидов самая высокая интенсивность в Эритроциты соответствуют таковым исходных эритроцитов, самая высокая интенсивность для пар клетка-эритроциты, оцененная как полное смешивание липидов, значительно снижается за счет распространения липидного зонда. Кроме того, хотя для клеток, оцененных как полное смешение липидов, ни один пиксель в конечном изображении не имел значения в пределах 80% от пикового значения пикселя исходного изображения, для частичного смешения 56,67 ± 28,77% пикселей в конечном изображении имели значение в пределах 80% от пикового значения пикселя исходного изображения. максимальная интенсивность пикселей исходного изображения ( n = 5 для каждого фенотипа). Анализ только конечных изображений для полного и частичного смешивания липидов подтверждает, что первый фенотип представляет гораздо более широкое распространение липидного зонда в E1-клетке. Процент пикселей в пределах 80% от максимальной интенсивности флуоресценции в конечном изображении (количество пикселей в пределах 80% от максимальной интенсивности пикселей в конечном изображении, деленное на общее количество пикселей в конечном изображении), составлял 19.53 ± 13,04 при полном смешивании липидов и 1,97 ± 0,88 при частичном смешивании липидов.

70 мкМ и 5 мкМ растворы лауроил LPC и стеароил LPC (Avanti Polar Lipids, Inc. ) соответственно в PBS были приготовлены свежеприготовленными. В экспериментах с лауроил LPC PBS, омывающий прикрепленные к пластику клетки E1-HAb2 со связанными эритроцитами, заменяли 1 мл PBS с добавлением лауроила LPC (Cernomordik et al., 1997). Через 5 минут мы инициировали слияние, применяя буфер с низким pH, дополненный той же концентрацией липида.После 5-минутной инкубации буфер с низким pH заменяли на PBS с «нормальным» pH с той же концентрацией LPC. Чтобы изучить обратимость ингибирования лауроил LPC, мы промывали клетки, обработанные низким pH, три раза в течение 15 минут с помощью PBS с нормальным pH без LPC.

В экспериментах со стеароилом LPC мы предварительно обрабатывали клетки E1-HAb2 LPC, а затем удаляли несвязанные липиды тремя промываниями PBS, не содержащим LPC. Затем клетки приводили в контакт с необработанными эритроцитами.Слияние запускали 5-минутным нанесением буфера, не содержащего LPC, pH 6,0.

CPZ (Sigma-Aldrich) готовили в виде 0,5 мМ раствора в PBS. Клетки E1-HAb2 со связанными эритроцитами обрабатывали буфером с низким pH, возвращали к нейтральному pH и немедленно или через 40 мин подвергали воздействию раствора, содержащего CPZ, в течение 60 с. Анализ слияния проводили в PBS, не содержащем CPZ.

Рабочий раствор 5 мМ ZnCl ₂ готовили из 1 М раствора в буфере HNE (25 мМ Hepes, 150 мМ NaCl и 0.1 мМ ЭДТА) и титруют лимонной кислотой до нормального или кислого рН. Для удаления Zn клетки промывали HNE с добавлением 6 мМ EDTA в течение 1 мин и заменяли его PBS.

Мы очень благодарны д-ру М. Киляну за подарок конструкции SFV и д-ру Дж. Уилшуту за сообщение результатов перед публикацией. Мы в долгу перед докторами. Е. Лейкина, М. Козлов, Х. Деланоэ, К. Меликов, Г. Меликян, Э.Зайцеву и Дж. Циммербергу за комментарии к рукописи.

DE Гриффин признателен за финансовую поддержку гранта Национального института здравоохранения NS18596.

границ | Вычислительная нейробиология — полезный инструмент трансляционной неврологии: пример атаксии

Введение

Нейробиология вычислительных систем (Brown et al., 2012) может использоваться для понимания нейронных систем на основе использования информации, полученной из клинических отчетов, исследований на животных и моделирования in vitro .Результаты вычислительной нейробиологии можно использовать для разработки дополнительных экспериментов на животных и клетках, которые в конечном итоге могут быть переведены в клиническую практику, то есть в трансляционную неврологию. Одним клиническим состоянием, которое может выиграть от этого брака, является спиноцеребеллярная атаксия (SCA) (рис. 1). Атаксия относится к нарушению координации движений (Goetz, 2003). В этой статье мы используем SCA в качестве примера, чтобы продемонстрировать, как вычисления и перевод потенциально могут быть сплетены вместе для расширения наших знаний о функциях клеток.

Рисунок 1. Трансляционная неврология: атаксия . Наблюдения SCA за мышами и результаты SCA человека включены в вычислительную структуру набора моделирования SCA. Модели помогают интерпретировать экспериментальные и клинические результаты. Модели также предсказывают взаимодействия между белками и возникающие свойства, которые могут быть подтверждены в новых экспериментах на мышах. Результаты лабораторных и клинических наблюдений можно использовать для проверки, опровержения или настройки вычислительных моделей.Результаты экспериментов на мышах также могут быть в конечном итоге перенесены в исследования на людях, что приведет к клиническим испытаниям для проверки терапевтических средств. Завершающим этапом трансляционной неврологии на примере атаксии является внедрение итерационных результатов в уход за пациентами. Сплошные квадратные скобки выделяют компоненты, непосредственно рассматриваемые нейробиологией вычислительных систем (Brown et al., 2012; Brown and Loew, 2012).

Наиболее распространенными SCA являются спиноцеребеллярная атаксия 1 (SCA1), спиноцеребеллярная атаксия 2 (SCA2), спиноцеребеллярная атаксия 3 (SCA3) и спиноцеребеллярная атаксия 6 (SCA6) (дополнительный материал, таблица S1) (Jacobi et al., 2012; Орр, 2012; Мусова и др., 2013). Они вызваны расширенными полиглутаминовыми (polyQ; CAG) повторяющимися мутациями в генах, которые кодируют атаксин 1, атаксин 2, атаксин 3 и кальциевый канал CACNA1A соответственно (дополнительный материал, таблица S1) (Gispert et al., 1993; Orr et al., 1993; Kawaguchi et al., 1994; Pulst et al., 1996; Zhuchenko et al., 1997; Tonelli et al., 2006; Bürk et al., 2014).

Ряд мутаций, вызывающих SCA или эпизодическую спиноцеребеллярную атаксию (EA), также происходит в генах, непосредственно участвующих в передаче сигналов кальция и возбудимости плазматической мембраны, которые имеют решающее значение для функции нейронов Пуркинье мозжечка (Kim et al. , 1997; Юэ и др., 1997; Жученко и др., 1997; Гуида и др., 2001; Алонсо и др., 2005 г.; Иваки и др., 2008 г.; Беккер и др., 2009 г.; Альвинья и Ходахах, 2010 г.; Kasumu and Bezprozvanny, 2012) (дополнительный материал, таблица S1). Ряд этих генов влияет на сигнальный путь фосфоинозитола (дополнительный материал, рисунок S1A; таблица S1) (Aiba et al., 1994; Kim et al., 1997; Alonso et al., 2005; van de Leemput et al., 2007). ). Этот путь важен для высвобождения кальция из гладкой эндоплазматической сети (sER) в цитоплазму нейронов Пуркинье мозжечка.Многие другие мутации затрагивают ионные каналы кальция и калия (EA2, SCA6, EA1, EA5, SCA13, SCA19, SCA22) (дополнительный материал, таблица S1) (Yue et al., 1997; Zhuchenko et al., 1997; Lin et al. , 2000; Guida et al., 2001; Imbrici et al., 2003; Sausbier et al., 2004; Tonelli et al., 2006; Bürk et al., 2014), которые важны для регуляции скорости поступления кальция в клетки. . спиноцеребеллярная атаксия 14 (SCA14) включает мутацию в гене, кодирующем протеинкиназу C (PKC), которая также важна для гомеостаза кальция (дополнительный материал, рисунок S1A; таблица S1) (Alonso et al. , 2005; Уэда и др., 2013 г.; ван Гаален и др., 2013 г.; Джи и др., 2014). спиноцеребеллярная атаксия 15 (SCA15) и спиноцеребеллярная атаксия 16 (SCA16) у людей и мышей вызываются делециями и миссенс-мутациями в гене рецептора инозитол-1,4,5-трифосфата типа 1 (IP3R1), кальциевого канала на sER (Desaiah et al., 1991; Street et al., 1997; Zecevic et al., 1999; Lin et al., 2000; Storey et al., 2001; Serra et al., 2004; van de Leemput et al. , 2007; Чен и др., 2008; Чоу и др., 2008; Хара и др., 2008; Иваки и др., 2008 г.; Лю и др., 2009 г.; Ди Грегорио и др., 2010 г.; Новак и др., 2010a,b; Хуанг и др., 2012).

Данные экспериментов на мышах и клинических наблюдений были включены в вычислительные модели SCA (Brown and Loew, 2015). Модели разрабатываются с использованием инструментов компьютерной инженерии и программного обеспечения, такого как Virtual Cell (Moraru et al., 2008; Slepchenko and Loew, 2010) и NEURON (Hines and Carnevale, 2001). Эти моделирующие платформы основаны на математических уравнениях для физических принципов, таких как реакции, диффузия, потоки и градиенты концентрации (Hines and Carnevale, 1997; Schaff et al. , 2000; Коуэн и др., 2012). Модели имитируют физиологические взаимодействия между внутриклеточными реакциями, молекулярной диффузией и геометрией клеток и дают представление о том, как эти клеточные процессы работают вместе как эффективная система (Brown et al., 2008; Brown and Loew, 2012). Моделирование помогает прояснить наблюдаемые явления и предложить будущие эксперименты, чтобы помочь выяснить механизмы заболевания и потенциальные методы лечения.

Эксперименты подтверждают предсказания модели

Существует несколько нейробиологических и электрофизиологических вычислительных моделей, относящихся к IP3R1-ассоциированным атаксиям (Brown and Loew, 2012), подробно описанных в следующих подразделах.

Нейробиологическое моделирование и симуляция

Сигнализация PIP2 перед IP3R1

Во-первых, была разработана модель передачи сигналов фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2) выше IP3R1 в клетках нейробластомы (Xu et al., 2003) (дополнительный материал, рисунок S1A). Модель предсказала стимулированный синтез PIP2 в дополнение к гидролизу PIP2, когда шип нейрона Пуркинье активируется параллельными волокнами, чтобы произвести опосредованное IP3R1 высвобождение кальция. Впоследствии лабораторные эксперименты подтвердили результаты моделирования на клеточной линии нейробластомы мыши (Xu et al., 2003).

Сигнализация IP3R1 после PIP2

Во-вторых, были созданы модели передачи сигналов, связанных с IP3R1, ниже PIP2 в нейронах Пуркинье мозжечка (Doi et al., 2003; Hernjak et al., 2005). Одна модель рассматривала высокую распространенность и низкую чувствительность IP3R1 в клетках Пуркинье (Hernjak et al., 2005). Эта модель качественно воспроизвела экспериментально наблюдаемые кальциевые транзиенты во время одновременной активации шиповидного дендрита Пуркинье (Wang et al., 2000).

Источники достаточного количества PIP2 для сигнализации, опосредованной IP3R1

В-третьих, были разработаны количественные модели шиповидных дендритов нейронов Пуркинье (Brown et al., 2008, 2011; Браун и Лоу, 2012). Была оценена локальная секвестрация PIP2 (с более низким коэффициентом диффузии, чем у несвязанного PIP2) на внутреннем листке отростков нейронов Пуркинье мозжечка (McLaughlin et al., 2002; Golebiewska et al., 2008) (дополнительный материал, рисунок S1B). Результаты моделирования подтвердили эффективность локальной секвестрации как средства обеспечения достаточного количества PIP2 для высвобождения кальция, опосредованного IP3R1. Полученные данные коррелируют с предыдущими экспериментальными результатами (Wang et al., 2000) (таблица 1). Компьютерное моделирование предсказало временное окно, в течение которого могла произойти совпадающая активация позвоночника Пуркинье другими типами клеток (Brown et al., 2008). Это временное окно было независимо подтверждено в лабораторных экспериментах на срезах мозжечка крыс (Sarkisov and Wang, 2008) (таблица 1).

Таблица 1. Примеры вклада нейробиологии вычислительных систем в трансляционную неврологию .

Сигнализация после IP3R1

В-четвертых, предсказания кинетических взаимодействий между PKC и рецепторами глутамата подтипа α-амино-3-гидрокси-5-метилизоксазол-4-пропионовой кислоты (AMPAR) в нейронах Пуркинье были подтверждены экспериментально (Ogasawara et al., 2008) (табл. 1). Эти молекулы находятся ниже высвобождения кальция, опосредованного IP3R1, поскольку кальций коактивирует ПКС.

Возможное использование результатов нейробиологической модели

Используя результаты этих вычислительных моделей, можно разработать лекарства, препятствующие локальной секвестрации или другим этапам сигнального пути фосфоинозитола у мышей или крыс, и потенциально могут быть переданы людям со сверхчувствительным IP3R1 для лечения SCA1-3 и SCA14 (дополнительный материал). , Таблица S1).

Нейроэлектрофизиологическое моделирование

Прогнозирование кальциевых и калиевых каналов нейронов Пуркинье

Также была смоделирована нормальная электрофизиология нейрона Пуркинье (De Schutter and Bower, 1994a,b; Miyasho et al., 2001). Были предсказаны новые свойства электрофизиологии нейронов Пуркинье, требующие вклада калиевых каналов D-типа и кальциевых каналов класса E, о которых ранее не было известно, что они влияют на электрофизиологию нейронов Пуркинье (дополнительный материал, рисунок S1A).Предсказания были подтверждены экспериментальными моделями крыс (Miyasho et al., 2001) (таблица 1).

Редукция нейронов Пуркинье

Впоследствии был разработан метод картирования реалистичных нейронов в эквивалентные уменьшенные модели при сохранении высокой точности изменений мембранного потенциала во время синаптических входов с прямыми связями с экспериментальными наблюдаемыми (Marasco et al., 2012).

Возможное использование результатов нейроэлектрофизиологической модели

Приведенные примеры показывают, что итеративное компьютерное моделирование может дать представление о нормальной и патологической нейрофизиологии.Нейроэлектрофизиологические модели можно использовать для экономической оценки воздействия новых терапевтических средств в исследованиях и разработках до проведения исследований на мышах или крысах. Манипуляции в виртуальной системе позволили бы точно контролировать ввод и просматривать выходные данные в реальном времени с изменениями в динамике возбуждения нейрона Пуркинье. Это облегчило бы обнаружение детерминант и петель обратной связи (Brown and Loew, 2015) и других взаимодействий, которые иначе было бы невозможно отслеживать на срезах мозга в тот же период времени.Идеи потенциально могут быть перенесены на людей с различными SCA, особенно такими, как SCA6, SCA13, SCA19 и SCA22, которые связаны с нарушением электрофизиологии мембран (дополнительный материал, таблица S1).

Моделирование интерпретирует наблюдаемые фенотипы

Сверхнормальная чувствительность IP3R1 в SCA 1-3

Источник патологии, вызванной повторами polyQ (Orr et al., 1993; Kawaguchi et al., 1994; Koide et al., 1994, 1999; Trottier et al., 1994; Pulst et al., 1996; David et al. др., 1997; Nakamura et al., 2001) обусловлен взаимодействием мутантного белка с IP3R1 (Безпрозванный, 2011). В SCA2 (Liu et al., 2009) и SCA3 (Chen et al., 2008) мутантный Атаксин-2 и Атаксин-3, соответственно, напрямую связываются с С-концом IP3R1 и облегчают получение индуцированных IP3 кальциевые реакции. Сообщалось об ассоциации мутантного Ataxin-1 с IP3R1 (Liu et al., 2009), но сверхчувствительность у этих мышей еще не тестировалась. Результаты моделирования SCA предполагают, что сверхчувствительность IP3R1 при SCA1 необходима (Brown and Loew, 2012) для выявления наблюдаемых сверхнормальных транзиентов кальция (Inoue et al., 2001).

Понижающее регулирование IP3R1 обеспечивает частичную компенсацию в SCA 1-3

Исследования на мышах с SCA1 и SCA2, а также на мышах и людях с SCA3 выявили снижение уровня IP3R1, метаботропного глутаматного рецептора (mGluR) и других кальциевых сигнальных и глутаматергических белков (Lin et al., 2000; Vig et al. , 2001; Serra et al., 2004; Chou et al., 2008; Hansen et al., 2013) (дополнительный материал, рисунок S1). Снижение экспрессии IP3R1 и кальциевой АТФазы саркоэндоплазматического ретикулума (SERCA) также было подтверждено у пациентов с SCA1 (Lin et al., 2000). Такие находки были также обнаружены в нейронах Пуркинье в мышиных моделях HD (Datta et al., 2011; Euler et al., 2012). Моделирование SCA интерпретирует подавление этих ключевых сигнальных белков кальция как частичное компенсирование сверхчувствительного IP3R1 (Brown and Loew, 2012). Дальнейшим подавлением этих глутаматергических сигнальных белков можно манипулировать, чтобы отсрочить симптоматическое заболевание на моделях мышей и, в долгосрочной перспективе, у людей в предсимптоматическом состоянии (Brown and Loew, 2015).

Гомер и Миосин В.А. Ассоциация с IP3R1 в SCAs

Homer 3 является частью сигнального комплекса со сниженной экспрессией у мышей SCA1 (Serra et al., 2004) (Дополнительный материал, Регламент сигнального комплекса S1). Homer 3 локализуется преимущественно в шипиках нейронов Пуркинье (Shiraishi et al., 2004) и может ассоциироваться с mGluR и IP3R1 in vivo (Tu et al., 1998; Sandonà et al., 2003). Уровни миозина Va также снижаются при SCA1 (Serra et al., 2004). Предполагается, что и Homer, и Myosin Va направляют sER (sER) в шипы, поскольку шипы формируются из дендритных стержней (Wagner and Hammer, 2003). Соответственно, мыши с нокаутом Myosin Va атаксичны с шипами, лишенными sER и IP3R1 (Takagishi et al., 1996). Результаты моделирования SCA предполагают, что уменьшенный объем sER шипа из-за подавления Homer 3 и Myosin Va в SCA1 частично компенсирует сверхчувствительность IP3R1 (Brown and Loew, 2012). Это подтверждает результаты эксперимента, в котором подавление Homer 1b/c ослабляло IP3R1-опосредованное высвобождение кальция в нейронах коры головного мозга крыс (Chen et al., 2012). Экспрессией Homer потенциально можно управлять, чтобы дополнительно компенсировать сверхчувствительность IP3R1 при атаксиях полиQ, которые также включают SCA7 (David et al., 1997), SCA17 (Nakamura et al., 2001) и дентаторубро-паллидолуизовой атрофии (DLPRA) (Koide et al., 1994). Моделирование SCA может определить терапевтическое окно для экспрессии Гомера, чтобы избежать гиперкомпенсации. В качестве примера, хотя и с совершенно другим механизмом, каркасный белок Homer 3 был задействован в качестве аутоиммунной мишени при подострой мозжечковой атаксии. Эта атаксия не является наследственной и возникает после инфекции или как паранеопластический процесс у некоторых пациентов с лимфомой Ходжкина (Zuliani et al., 2007). Предположительно, нарушение строительных лесов Homer 3 за пределами терапевтического окна или в отсутствие сверхчувствительного IP3R1, как при аутоиммунной подострой мозжечковой атаксии, прерывает формирование сигнального комплекса и связанных с ним клеточных процессов (дополнительный материал, регуляция сигнального комплекса S1).

Перекрестная передача сигналов между биохимической и электрофизиологической дисрегуляцией в SCAs

Эти и другие формы биохимической дисрегуляции предшествуют электрофизиологическим нарушениям в модели мышей SCA2, при этом частота возбуждения нейронов Пуркинье снижается через 6 недель по сравнению с диким типом (Hansen et al., 2013) и ухудшается с возрастом мышей (Kasumu et al., 2012b). Это согласуется с синхронизацией электрофизиологических изменений в модели мышей SCA1 (Hourez et al., 2011) и у мышей с нокаутом кальций-активируемых потенциалзависимых калиевых каналов (BK) с большой проводимостью (Sausbier et al., 2004). Затем за этими изменениями следует начало двигательной дискоординации через 8 недель у мышей SCA2 (Hansen et al., 2013) и через 6-8 недель у мышей SCA3 (Shakkottai et al., 2011). Время начала атаксии у этих мышей идентично таковому у мышей, гетерозиготных по делеции IP3R1 (Ogura et al., 2001). Эти результаты указывают на общую патофизиологию, ведущую к сходному фенотипу: биохимическая дисфункция и последующие электрофизиологические аберрации, ведущие к атаксии. Набор для моделирования SCA также предсказал измененное возбуждение нейронов Пуркинье, возникающее в результате перекрестных помех между передачей сигналов кальция и электрофизиологией мембран (Brown and Loew, 2012) (Table 1). Будущие итерации набора для моделирования могут дополнительно включать активируемые кальцием калиевые каналы (SK) малой проводимости, которые, как было показано, помогают опосредовать влияние передачи сигналов кальция на электрофизиологию мембран в SCA2 и EA, а также были предложены в качестве потенциального терапевтического средства. мишени (Альвинья и Ходахах, 2010; Kasumu et al., 2012а).

Клинический перевод

Вычислительные модели являются клинически информативными для SCA

Мозжечок консервативен у всех видов позвоночных (Kandel et al., 2000). Таким образом, комбинация компьютерных моделей и моделей на мышах клинически информативна для SCA человека. Было разработано несколько моделей мышей SCA (Burright et al., 1995; Huynh et al., 2000; van de Leemput et al., 2007; Colomer Gould, 2012; Kelp et al., 2013). По мере создания нейронов виртуальной модели детали вычислительных моделей проверяются путем сравнения с экспериментальными данными на этих мышах (Xu et al., 2003; Marasco et al., 2012), с прекращением трансляции для человека (рис. 1).

Применение ICpeptide

in vivo для СЦА и других полиQ заболеваний Было создано

пептида, напоминающих части С-конца IP3R1 (пептиды IC) (дополнительный материал, рисунок S1B) (Tang et al., 2003b, 2009; Tu et al., 2004). Результаты модели SCA предполагают, что применение IC-G2736X (пары оснований IP3R1 D2590-G2736) (дополнительный материал, рисунок S1B) восстанавливает нормальные переходные процессы кальция при полиQ-атаксиях (Brown and Loew, 2012).IC-пептиды можно использовать для разработки более селективных терапевтических средств, которые затем можно тестировать на животных и, если это перспективно, на пациентах. Моделирование также показало, что лечение мышей SCA15/16 IC4 (пары оснований IP3R1 Q2714-A2749) нормализует высвобождение кальция за счет терапевтического повышения чувствительности IP3R1 к IP3 для противодействия гаплонедостаточности IP3R1 (Brown and Loew, 2012). IC4 конкурентно связывается с протеинфосфатазой 1 альфа (PP1α; фосфатаза, снижающая чувствительность к IP3R1).

Другое полиQ-расстройство, болезнь Гентингтона (БХ), иногда фенотипически путают с ВСС, если выражена атаксия (Tang et al., 2003а; Безпрозванный и Хейден, 2004; Безпрозванный, 2007; Чжан и др., 2008 г.; Донг и др., 2013 г.; Родригес-Кирога и др., 2013). В то время как при атаксиях в первую очередь проявляется двигательная дискоординация, БГ представляет собой нейродегенеративное гиперкинетическое двигательное расстройство, поражающее базальные ганглии (Безпрозванный, 2011). Хотя молекулярные взаимодействия в нейронах Пуркинье отличаются от таковых в медиальных нейронах полосатого тела, polyQ SCA имеют общую патофизиологию, лежащую в основе HD с участием сверхчувствительного IP3R1 (Bezprozvanny, 2011).Применение пептида IC10 (пары оснований IP3R1 F2627-A2749) (дополнительный материал, рисунок S1B) в медиальных полосатых нейронах у мышей с HD восстанавливало нормальный кальциевый ответ (Tang et al., 2009). Эти мыши были в значительной степени избавлены от нейротоксичности, с улучшенной координацией движений (Tang et al., 2009). Таким образом, IC-пептиды представляют собой альтернативный шаг к размышлениям о новых терапевтических средствах для полиQ-расстройств.

Подавление IP3 в SCA

После этого моделирования (Brown and Loew, 2012) было продемонстрировано, что сверхэкспрессия инозитол-1,4,5-фосфатазы (5PP) для хронического подавления IP3R1-опосредованного высвобождения кальция улучшает координацию движений у мышей SCA2 (Kasumu et al., 2012б). Фермент 5PP превращает IP3 в неактивную форму инозитол-1,4-бисфосфатазы (дополнительный материал, рисунок S1A), уменьшая общее количество IP3, воспринимаемое IP3R1. Это продемонстрировало, что подавление высвобождения кальция, опосредованного IP3R1, может иметь терапевтическую пользу для SCA, что подтверждается прогнозами моделирования SCA (рис. 1).

Упреждающая терапия СЦА

В настоящее время не существует прямого способа лечения наследственных атаксий. Больных можно лечить симптоматически, с помощью физиотерапии и логопедии, а также вспомогательных приспособлений для ходьбы (Schöls et al., 2004). Если моделирование SCA может помочь нам понять, как изменения в передаче сигналов кальция и электрофизиологии мембран могут быть восстановлены в SCA, это может повысить наши шансы на инженерную терапию атаксии. В эпоху геномного тестирования SCA (Smeets and Verbeek, 2014) упреждающая терапия была бы полезна преимущественно у пациентов в предсимптоматическом состоянии (Brown and Loew, 2015). Например, если ICпептиды применяются до того, как у мышей появятся симптомы, это может уменьшить возникновение симптомов, отсрочить начало, замедлить прогрессирование и максимизировать выход из неповрежденной ткани.Таким образом, моделирование SCA будет интегрировано с геномным тестированием, рассмотрением семейного анамнеза, а также досимптомным обследованием и лечением. Пресимптоматическое тестирование часто проводится при тяжелых нейродегенеративных заболеваниях с поздним началом, включая ВСС (Guimarães et al., 2013; Schuler-Faccini et al., 2014). Даже без генетического тестирования другие ранние клинические признаки заболевания (продромы) обнаруживаются до начала атаксии и могут использоваться для определения сроков лечения (Velázquez-Pérez et al., 2014a,b).Такой перевод, после обширных лабораторных исследований, может улучшить качество жизни и облегчить экономическую, социальную и профессиональную нагрузку на пациентов, а также членов их семей и лиц, осуществляющих уход.

Примеры использования для моделирования SCA

В вычислительных моделях различные параметры в мозжечковом нейроне Пуркинье могут быть преднамеренно нарушены, и результаты будут проверены, чтобы увидеть, соответствуют ли какие-либо из этих возмущений тем, которые обнаруживаются у людей с различными мозжечковыми расстройствами. Это может помочь установить связь между субклеточной дисфункцией и фенотипическими проявлениями.В дополнение к пониманию патофизиологии модели можно использовать для скрининга лекарств, исследования побочных эффектов и изучения последствий генетических замен и нокаутов.

Существуют и другие вычислительные модели, которые можно использовать для иллюстрации потенциала моделей SCA. Экспериментальное вычислительное моделирование, аналогичное SCA, включая использование индивидуализированной трехмерной реконструкции in vivo изображений компьютерной томографии (КТ) нескольких пациентов, показало, что пиковое напряжение стенки рассчитано in vivo для аневризмы брюшной аорты (ААА). в момент разрыва был более предсказателен для разрыва, чем обычная оценка диаметра аорты (Fillinger et al., 2002; Раут и др., 2013; Суда и др., 2013). Точно так же Caroli et al. использовали компьютерное моделирование для создания компьютерных моделей сосудистой сети для конкретных пациентов (Caroli et al., 2013). Эти модели прогнозировали кровоток через 6 недель после хирургического создания артериовенозных фистул (АВФ) для длительного гемодиализа (Caroli et al., 2013). Модель была проверена в многоцентровом проспективном клиническом исследовании, и ожидается, что она уменьшит недостаточность или дисфункцию АВФ и связанную с этим заболеваемость пациентов. Также был создан ряд вычислительных моделей для сравнения различных способов фармакологической доставки доксорубицина, химиотерапевтического препарата, используемого для лечения различных видов рака.Модели предсказывали оптимальную противоопухолевую эффективность при защите от побочных эффектов с помощью термочувствительных липосом или с протоколом введения, использующим увеличенную продолжительность инфузии с более высокими дозами по сравнению с обычной болюсной инъекцией (Reich et al., 1979; El-Kareh and Secomb, 2000, 2005; Evans et al., 2009; Zhan and Xu, 2013).

Системная биология в трансляционной медицине

Представлен ряд научных результатов компьютерного моделирования (таблица 1), которые расширяют наше понимание SCA.Вычислительные модели более экономичны, воспроизводимы и целесообразны, чем эксперименты на животных. Однако компьютерные модели зависят от данных исследований на животных и клинических наблюдений и объединяют их. В результате на рисунке 1 показано, что эксперименты на животных и модели SCA работают вместе, чтобы многократно объяснять и прогнозировать патофизиологию. Кроме того, компьютерные прогнозы были сделаны с помощью биоинформатического скрининга для идентификации транскриптов, которые взаимодействуют с полиQ SCA и имеют функции, относящиеся к polyQ SCA (Spence and Wallihan, 2012).Следующие шаги в трансляционной системной биологии будут включать добычу и моделирование сетевых мотивов при атаксии и рассмотрение их функциональных последствий (Alon, 2007; Brown and Loew, 2015). Результаты таких трансляционных исследований могут быть использованы для разработки новых лекарств или стратегий лечения (Matilla-Dueñas et al., 2014), предполагая, что вычислительная нейробиология играет роль в трансляционной неврологии (рис. 1). Расширение взаимодействия между этими связанными исследованиями и медицинскими сообществами (De Schutter, 2008) откроет эру, которая может обеспечить расширенную поддержку трансляционной медицины и, в частности, неврологии.

Вклад авторов

Шерри-Энн Браун задумала, проанализировала, спроектировала, разработала, критически пересмотрела, одобрила и согласилась нести ответственность за представленную работу. Луиза Д. Маккалоу задумала, критически отредактировала, одобрила и согласилась нести ответственность за эту представленную работу. Лесли М. Лоу проанализировала, критически отредактировала, одобрила и согласилась нести ответственность за представленную работу.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: http://www.frontiersin.org/journal/10.3389/fnins.2015.00001/abstract

Каталожные номера

Айба А., Кано М., Чен С., Стэнтон М., Фокс Г., Херруп К. и др. (1994). Дефицитная мозжечковая длительная депрессия и нарушение двигательного обучения у мышей с мутацией mGluR1. Сотовый 79, 377–388. дои: 10.1016/0092-8674(94)

-4