Лейкоплакия голосовых связок: Лейкоплакия голосовых связок| Wohlt Voice Medicine Worldwide

KTP-лазерное лечение дисплазии голосовых связок в операционной – хирургические результаты через гибкий ларингоскоп, который вводят через нос пациента, его также можно использовать в кабинете для лечения дисплазии голосовых связок. Пациенты, которых лечат таким образом, находятся в полном сознании и не нуждаются в общей анестезии. Кроме того, время лечения значительно сокращается по сравнению с операционной. Лазерная хирургия KTP в кабинете позволяет лечить ограниченные рецидивы дисплазии голосовых связок на ранней стадии , когда в противном случае проведение полной микроларингоскопии в операционной было бы излишним. За счет уменьшения площади поверхности пораженной голосовой связки, которую лечат, с помощью этого метода также можно оптимизировать голосовые исходы.

Различия в профиле экспрессии генов между лейкоплакией голосовых связок и нормальной слизистой оболочкой гортани с помощью генного чипа | Журнал отоларингологии — Хирургия головы и шеи

• Оригинальная исследовательская статья
• Открытый доступ
• Опубликовано: 12 февраля 2018 г.

• Jianhua Peng ¹ ,
• He Li ¹ ,
• Jun Chen ¹ ,
• Xianming Wu ¹ ,
• Tao Jiang ² &
• …
• Xiaoyun Chen ¹

Журнал отоларингологии — Хирургия головы и шеи том 47 , номер статьи: 13 (2018) Процитировать эту статью

• 1856 доступов

• 3 Цитаты

• 1 Альтметрика

• Сведения о показателях

Abstract

История вопроса

Длинные некодирующие РНК (днРНК) играют важную роль в онкогенезе. Лейкоплакия голосовых связок является предраковым поражением в отоларингологической практике. До настоящего времени паттерны экспрессии и функции lncRNAs при лейкоплакии голосовых связок не были хорошо изучены. В этом исследовании мы использовали микрочипы для исследования аберрантно экспрессируемых днРНК и мРНК при лейкоплакии голосовых связок и прилегающих неопухолевых тканях.

Методы

Генная онтология и анализ путей были выполнены для определения важной функции и путей дифференциально экспрессируемых мРНК. Для дальнейшей проверки экспрессии выбранных днРНК и мРНК при лейкоплакии голосовых связок была проведена qRT-PCR.

Результаты

В нашем исследовании было идентифицировано 170 дифференциально экспрессируемых днРНК и 99 дифференциально экспрессируемых мРНК, в том числе 142 днРНК с повышенной экспрессией и 28 днРНК с подавленной экспрессией, а также 54 мРНК с повышенной экспрессией и 45 мРНК с подавленной экспрессией. Среди них XLOC_000605 и DLX6-AS1 были наиболее аберрантно экспрессируемыми днРНК. Кроме того, мы идентифицировали антисмысловую днРНК (LOC100506801), энхансероподобную днРНК (AK057351) и три длинные межгенетические некодирующие РНК, включая XLOC_008001, XLOC_0119.89 и XLOC_007341.

Выводы

Наши результаты показали, что многие lncRNAs по-разному экспрессировались в тканях лейкоплакии голосовых связок и в нормальных тканях, что позволяет предположить, что они могут играть ключевую роль в онкогенезе лейкоплакии голосовых связок.

История вопроса

Лейкоплакия — это термин, описывающий белые пятна или бляшки на слизистой оболочке, которые трудно соскоблить. Лейкоплакия голосовых связок — распространенное предраковое поражение в отоларингологической практике. Ежегодная заболеваемость в США оценивается в 10,2 на 100 000 мужчин и 2,1 на 100 000 женщин. Комплексный метаанализ лейкоплакии гортани, проведенный Isenberg et al. выявили, что в 8,2% случаев произошла злокачественная трансформация в течение периода наблюдения, который варьировался от 1 до 233 месяцев между различными исследованиями. В целом 3,7% недиспластических, 10,1% легких и умеренных диспластических и 18,1% тяжелых диспластических случаев подверглись злокачественным изменениям [1]. Исследования определили курение и употребление алкоголя в качестве основных причин, а также имеется достаточно доказательств участия гастроэзофагеального рефлюкса и вируса папилломы человека в патогенезе заболевания [2].

Лейкоплакия голосовых связок имеет клиническое значение из-за возможности злокачественной трансформации. Различные маркеры пролиферации, циклинкиназы, онкопротеины, опухолевые супрессоры, мутации, микросателлитная потеря гетерозиготности (LOH), параметры ядерного изображения и плоидность ДНК были исследованы при дисплазиях гортани, что позволило понять молекулярный механизм канцерогенеза [3,4]. ,5]. Бартлетт и др. также идентифицировали несколько генов, включая IGF-1, EPDR1, MMP-2, S100A4, которые по-разному экспрессировались между лейкоплакией голосовых связок и нормальными тканями голосовых связок [6]. Несмотря на многочисленные исследования, точный механизм онкогенеза лейкоплакии голосовых связок остается неясным.

Недавно было обнаружено, что новый класс некодирующих РНК, называемых длинными некодирующими РНК (днРНК), часто нарушается при различных заболеваниях. LncRNAs представляют собой транскриптные молекулы РНК длиной более 200 нуклеотидов, которые не кодируют белок и находятся в ядре или цитоплазме [7]. Аберрантная экспрессия lncRNAs может привести к аномалиям экспрессии генов и онкогенезу. Измененная экспрессия lncRNAs является признаком многих типов рака и, как было показано, способствует развитию, инвазии и метастазированию опухолей с помощью различных механизмов [8]. Исследования показали, что lncRNAs играют важную роль в развитии плоскоклеточного рака гортани (LSCC). Шен и др. сообщили, что AC026166.2–001 была наиболее подавленной днРНК и RP11-169.D4.1-001 была наиболее экспрессируемой lncRNA в ткани LSCC по сравнению с нормальной тканью гортани [9]. Также сообщалось, что некоторые другие lncRNAs коррелируют с онкогенезом и прогрессированием LSCC [10,11,12,13,14]. Однако роль lncRNAs в онкогенезе лейкоплакии голосовых связок остается неясной.

В этом исследовании мы использовали анализ генных микрочипов для измерения паттернов экспрессии днРНК и мРНК в образцах лейкоплакии голосовых связок и сравнили их с соответствующими паттернами в образцах соседних неопухолевых тканей (NT). Некоторые из дифференциально экспрессируемых днРНК оценивали с помощью SYBR RT-PCR в 100 парах образцов тканей. Наши результаты показывают, что нарушение регуляции lncRNAs может играть важную роль в онкогенезе лейкоплакии голосовых связок.

Методы

Образцы пациентов

Образцы лейкоплакии голосовых связок и контрольные образцы слизистой оболочки нормальных голосовых связок были взяты у 103 пациентов отделения отоларингологии Первого дочернего госпиталя Медицинского университета Вэньчжоу, Китай, с июня 2015 г. по июнь 2016 г. Три образца были использованы для микрочипового анализа днРНК, и 100 были использованы для проверки количественной ПЦР (Q-PCR). Клинические характеристики пациентов с лейкоплакией по сравнению с нормальной тканью (контроль), использованные в генном микрочипе, показаны в таблице 1. Диагноз лейкоплакии голосовых связок был основан на истории болезни и результатах ларингоскопии в белом свете и дополнительно подтвержден гистопатологическим диагнозом паракератоза и легкой или легкой степени. выраженная дисплазия. Образцы лейкоплакии голосовых связок и соответствующие нормальные образцы слизистой оболочки голосовых связок были быстро заморожены в жидком азоте сразу после резекции. Это исследование было одобрено Институциональным наблюдательным советом по этике Первой аффилированной больницы Медицинского университета Вэньчжоу, и все пациенты предоставили письменное информированное согласие на это исследование.

Полноразмерная таблица

Экстракция РНК ларингоскопия в белом свете. Тотальную РНК экстрагировали с использованием реагента Trizol (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) в соответствии с протоколом производителя.

Микрочип и вычислительный анализ

Для анализа микрочипов использовалась платформа Agilent Array (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). Анализ микрочипов проводили, как описано нашими коллегами [15]. Вкратце, подготовка образцов и гибридизация микрочипов выполнялись на основе стандартных протоколов производителя с небольшими изменениями. Вкратце, мРНК очищали от тотальной РНК после удаления рРНК с использованием набора для выделения эукариотической мРНК только для мРНК (Epicentre Biotechnologies, USA). Затем каждый образец амплифицировали и транскрибировали во флуоресцентную кРНК по всей длине транскриптов без смещения 3′ с использованием метода случайного праймирования. Меченые кРНК гибридизовали с массивом днРНК человека версии 3. 0 (8 × 60 K; Arraystar), который был разработан для 30 586 днРНК и 26 109 днРНК.кодирование расшифровок. ДнРНК были тщательно сконструированы с использованием наиболее уважаемых общедоступных баз данных транскриптомов (RefSeq, UCSC Known Genes, GENCODE и т. д.), а также основных публикаций. Каждый транскрипт был точно идентифицирован специфическим зондом экзона или соединения сплайсинга. Положительные зонды для генов домашнего хозяйства и отрицательные зонды также были напечатаны на матрице для контроля качества гибридизации. После промывания предметных стекол матрицы сканировали с помощью сканера Agilent G2505C, а полученные изображения матриц анализировали с помощью программного обеспечения Agilent Feature Extraction (версия 11.0.1.1). Квантильную нормировку и последующую обработку данных проводили с помощью пакета программ GeneSpring GX v12.0 (Agilent Technologies). Работа с микрочипом была выполнена KangChen Bio-tech, Шанхай, Китайская Народная Республика.

Функциональный групповой анализ

Мы использовали анализ онтологии генов (GO: http://www. geneontology.org) и анализ путей для определения функции и путей дифференциально экспрессируемых мРНК в тканях лейкоплакии голосовых связок по сравнению с соседними контрольными голосовыми связками. ткани. Значение P обозначает значимость обогащения GO Term в списке дифференциально экспрессируемых мРНК ( P  < 0,05 считалось статистически значимым). Анализ путей дифференциально экспрессируемых мРНК проводили на основе последней Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG: http://www.genome.ad.jp/kegg/). Этот анализ позволил нам определить биологические пути, для которых существовало значительное обогащение дифференциально экспрессируемыми мРНК (9).0553 P  < 0,05 считалось статистически значимым).

Количественная ПЦР

Тотальную РНК экстрагировали из замороженных тканей лейкоплакии голосовых связок с использованием реагента TRIzol (Invitrogen), а затем подвергали обратной транскрипции с использованием набора реагентов RT (Thermo Scientific) в соответствии с инструкциями производителя. Экспрессию LncRNAs в тканях лейкоплакии голосовых связок измеряли с помощью количественной ПЦР с использованием SYBR Premix Ex Taq и прибора ABI 7000. Некоторые днРНК-кандидаты были проверены с помощью ПЦР SYBRP, праймеров этих генов в исследовании для Q-ПЦР. Тотальную РНК (2 мг) транскрибировали на кДНК. ПЦР проводили в общем реакционном объеме 20 мкл, включая 10 мкл SYBR Premix (2×), 2 мкл матрицы кДНК, 1 мкл прямого праймера для ПЦР (10 мМ), 1 мкл обратного праймера для ПЦР (10 мМ). и 6 мкл бидистиллированной воды. Количественная реакция ПЦР в реальном времени включала начальную стадию денатурации продолжительностью 10 минут при 95°С; 40 циклов по 5 с при 95 °С, 30 с при 60 °С; и заключительный этап удлинения в течение 5 мин при 72 °C. Все эксперименты были выполнены в трех повторах, и все образцы были нормализованы по GAPDH. Медиану в каждой тройке использовали для расчета относительных концентраций днРНК (△Ct = Ct медиана днРНК — Ct медиана GAPDH), и рассчитывали кратность изменения экспрессии [16].

Статистические методы

Все результаты представлены в виде среднего ± стандартного отклонения. Статистический анализ проводили для сравнения двух групп на микрочипе, а дисперсионный анализ для множественных сравнений выполняли по критерию Стьюдента с использованием программного обеспечения SPSS (версия 17.0 SPSS Inc.). Значение p  < 0,05 считали статистически значимым.

Изменение кратности и критерий Стьюдента использовались для анализа статистической значимости результатов микрочипа. Частота ложных открытий (FDR) была рассчитана для корректировки значения P . Пороговое значение, используемое для обозначения дифференциально экспрессируемых днРНК и мРНК, представляло собой кратное изменение ≥2,0 или ≤0,5 ( P  < 0,05).

Результаты

Обзор профилей днРНК

Чтобы изучить потенциальные биологические функции днРНК при лейкоплакии голосовых связок, мы исследовали профили экспрессии днРНК и мРНК при лейкоплакии человека с помощью микрочипового анализа (рис. 1 и 2). В этом исследовании авторитетные источники данных, содержащие более 30 586 днРНК, использовались для изучения потенциальных биологических функций профилей экспрессии днРНК и мРНК при лейкоплакии голосовых связок с помощью анализа микрочипов. Наши результаты показали, что имеется 170 дифференциально экспрессируемых днРНК (кратность изменения ≥2,0 или ≤0,5; P  < 0,05) между лейкоплакией голосовых связок и нормальными образцами голосовых связок. Среди них было обнаружено, что 142 днРНК имеют повышенную регуляцию в группе с лейкоплакией голосовых связок по сравнению с группой с нормальной слизистой оболочкой голосовых связок, в то время как 28 днРНК были подавлены между этими двумя группами (в таблице 2 показаны 10 наиболее часто дифференциально экспрессируемых днРНК). Среди них XLOC_000605 была днРНК с наиболее значительным повышением активности, а DLX6-AS1 — с наиболее значительным подавлением.

a – b Графики рассеяния, показывающие различия в экспрессии днРНК ( a ) и мРНК ( b ) между лейкоплакией голосовых связок и нормальными массивами ткани голосовых связок. Значения осей X и Y на точечной диаграмме представляют собой усредненные нормализованные значения в каждой группе (в масштабе log2). ДнРНК над верхней зеленой линией и под нижней зеленой линией соответствуют  > 3-кратному изменению экспрессии между двумя тканями

Полноразмерное изображение

Тепловая карта и иерархическая кластеризация профиля днРНК сравнение образцов лейкоплакии голосовых связок и нормальных образцов голосовых связок. Красный цвет указывает на чрезмерную экспрессию, а зеленый цвет указывает на низкую экспрессию. Каждый столбец представляет собой образец ткани, а каждая строка представляет собой зонд днРНК. C представляет ткани лейкоплакии, а N представляет соседние нормальные ткани

Полноразмерное изображение

Полный размер таблицы

Классификация LncRNAs и анализ подгрупп

Дифференциально экспрессируемые антисмысловые lncRNAs и близлежащие кодирующие гены

Геномы млекопитающих кодируют многочисленные естественные антисмысловые транскрипты. Исследования функциональной валидации показывают, что антисмысловые транскрипты не являются единой группой регуляторных РНК, а вместо этого принадлежат к нескольким категориям с некоторыми общими чертами. Недавние данные указывают на то, что антисмысловые транскрипты часто функциональны и используют различные механизмы регуляции транскрипционных и посттранскрипционных генов для выполнения широкого спектра биологических ролей [17]. В этом исследовании LOC100506801 была единственной дифференциально экспрессируемой антисмысловой днРНК (кратность изменения ≥2,0, P  < 0,05) между лейкоплакией голосовых связок и нормальными образцами голосовых связок. Он был значительно активизирован, как и его соседний ген ECE19 (кратность изменения   =   1,70, P   =   0,001).

Анализ путей активации мРНК при лейкоплакии голосовых связок. Было идентифицировано пять активирующих путей, включая первичный иммунодефицит, глиому, меланому, секрецию желчи, сигнальные пути клеточного цикла

Изображение полного размера

Дифференциально экспрессируемые энхансероподобные днРНК и близлежащие кодирующие гены

Ørom UA и др. обнаружили энхансероподобную функцию набора lncRNAs в клеточных линиях человека. Истощение этих lncRNAs приводило к снижению экспрессии соседних генов, кодирующих белки [18]. В этом исследовании мы идентифицировали днРНК с энхансероподобными функциями днРНК, используя аннотацию GENCODE. Наши результаты показывают, что AK057351 была единственной дифференциально экспрессируемой энхансероподобной днРНК (кратность изменения ≥2,0, P  < 0,05) между этими двумя группами. Он был активирован, и его соседний ген был EFHA1. EFHA1 сам по себе активировался подобно энхансероподобной днРНК (кратность изменения = 2,43, P  = 0,03).

Дифференциально экспрессируемые lincRNAs и ассоциированный кодирующий ген

Длинные межгенетические некодирующие РНК (lincRNAs) транскрибируются из тысяч локусов в геномах млекопитающих и могут играть широко распространенную роль в регуляции генов и других клеточных процессах [19]. В этом исследовании мы идентифицировали 3 дифференциально экспрессируемых lincRNA и связанные с ними кодирующие мРНК (кратность изменения ≥2,0, P  < 0,05): XLOC_008001, XLOC_011989 и XLOC_007341. Все они были активированы, как и связанные с ними мРНК, MSN (кратность изменения = 1,63, P  = 0,01), RRAD (кратность изменения = 2,69, P  = 0,04) и TPM2 (кратность изменения = 1,68, P  = 0,007) соответственно.

Обзор профилей мРНК

Было обнаружено, что 99 мРНК по-разному экспрессируются между лейкоплакией голосовых связок и нормальной тканью слизистой оболочки голосовых связок (кратность изменения ≥2,0, P  < 0,05). Среди них 54 имели повышенную регуляцию, а 45 — пониженную (в таблице 3 показаны 10 наиболее дифференциально экспрессируемых мРНК).

Полноразмерная таблица

GO-анализ

GO-анализ — это функциональный анализ, который связывает дифференциально экспрессируемые мРНК. Категории GO были получены с веб-сайта Gene Ontology (www.geneontology. org) и состояли из 3 структурированных сетей: биологические процессы, клеточные компоненты и молекулярные функции. Согласно инструменту аннотации GO, гены, соответствующие мРНК с пониженной экспрессией, включают 455 генов, участвующих в биологических процессах, 73 гена, участвующих в клеточных компонентах, и 60 генов, участвующих в молекулярных функциях. Гены, соответствующие мРНК с повышенной экспрессией, включали 109гены, участвующие в биологических процессах, 12 генов, участвующих в клеточных компонентах, и 21 ген, участвующий в молекулярных функциях.

Анализ путей

Мы провели анализ путей на основе последней базы данных Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG). Этот анализ был использован для определения биологических путей, связанных с наиболее дифференциально экспрессируемыми мРНК при лейкоплакии голосовых связок. Наши результаты выявили 5 путей с повышающей регуляцией (включая первичный иммунодефицит, глиому, меланому, секрецию желчи, сигнальные пути клеточного цикла) (рис. 3) и 14 путей с пониженной регуляцией (включая взаимодействие ECM-рецептор, фокальную адгезию, регуляцию актинового цитоскелета). , Протеогликаны при раке, сигнальный путь TGF-бета, молекулы клеточной адгезии и сигнальные пути PI3K-Akt) (рис. 4).

Анализ путей подавления мРНК при лейкоплакии голосовых связок. Было идентифицировано пятнадцать путей подавления, включая взаимодействие ECM-рецептор, фокальную адгезию, регуляцию актинового цитоскелета, протеогликаны при раке, сигнальный путь TGF-бета, молекулы клеточной адгезии и сигнальные пути PI3K-Akt

Полноразмерное изображение

Количественный анализ в реальном времени ПЦР-подтверждение

На основании характеристик дифференциально экспрессируемых днРНК, таких как кратность, локус генов и близлежащие кодирующие гены, для дальнейшего анализа был выбран ряд интересных днРНК-кандидатов (включая XLOC_000605, RP11-187O7.3, XLOC_011403, XLOC- 011401, SACS-AS1, FAM86FP, DLX6-AS1, KRT17P2). Мы проверили экспрессию этих днРНК с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени, используя GAPDH в качестве эталонного гена и рассчитав 2 ^-△△CT значений. Результаты показали, что результаты микрочипов для выбранных днРНК согласуются с результатами ОТ-ПЦР (рис. 5).

Сравнение данных генного чипа и результатов количественной ПЦР. XLOC_000605, RP11-187O7.3, XLOC_011403, XLOC-011401, SACS-AS1, FAM86FP, DLX6-AS1, KRT17P2, которые, как определено, дифференциально экспрессируются в образцах лейкоплакии голосовых связок по сравнению с образцами NT у трех пациентов с помощью микрочипа, были подтверждены с помощью количественной ПЦР. Высота столбцов на диаграмме представляет логарифмически преобразованные медианные изменения кратности (T/N) экспрессии у трех пациентов для каждой из четырех проверенных днРНК. Результаты проверки 8 днРНК показали, что данные микрочипов хорошо коррелируют с результатами количественной ПЦР

Полноразмерное изображение

Обсуждение

В последние годы исследователи сосредоточили свое внимание на анализе транскриптов, кодирующих белок, для характеристики паттернов и потенциальных функциональных ролей. Развитие технологии секвенирования следующего поколения привело к открытию нового класса транскриптов некодирующих РНК, днРНК. Многочисленные исследования предполагают, что lncRNAs выполняют ключевые регуляторные функции в ремоделировании хроматина и экспрессии генов во многих биологических процессах, включая инактивацию Х-хромосомы, импринтинг генов и поддержание стволовых клеток [20, 21]. Кроме того, lncRNAs являются важными факторами контроля экспрессии генов при раке [22], и было показано, что lncRNAs, такие как HOTAIR, играют значительную роль в развитии и прогрессировании опухолей [8]. Также было продемонстрировано, что lncRNAs по-разному экспрессируются в нормальных клетках и опухолевых клетках. Поскольку lncRNAs составляют важный класс регуляторных факторов экспрессии генов, их аберрантная экспрессия неизбежно приведет к аномальным уровням экспрессии генов, что может привести к онкогенезу. Промоторы связываются со многими факторами транскрипции с помощью таких механизмов, как хромосомные перестройки и перенос элементов [23]. Однако профиль и биологическая функция lncRNAs при лейкоплакии голосовых связок остаются неизвестными.

До сих пор не было сообщений, описывающих профили экспрессии днРНК при лейкоплакии голосовых связок, и не было исследований связи экспрессии днРНК с клиническими характеристиками и исходами лейкоплакии голосовых связок. В этом исследовании мы проанализировали профили экспрессии днРНК в тканях лейкоплакии голосовых связок, чтобы раскрыть потенциальную роль днРНК в патогенезе ее опухолевого генеза. Методы высокопроизводительного микрочипа выявили набор дифференциально экспрессируемых lncRNAs, в том числе 142, которые регулировались с повышением, и 28, которые регулировались с понижением в ткани лейкоплакии голосовых связок по сравнению со слизистой оболочкой нормальной голосовой связки. Кроме того, мы идентифицировали несколько подгрупп днРНК, включая антисмысловые днРНК, энхансероподобные днРНК и линкРНК. Энхансеры классически определяются как cis -действующие последовательности ДНК, способные повышать транскрипцию генов. Как правило, они функционируют независимо от ориентации и на различных расстояниях от промотора-мишени (или промоторов) [24]. Ором и др. также обнаружили некоторые lncRNAs с энхансероподобными функциями в клетках человека [18]. В этом исследовании мы идентифицировали значительно повышающую регуляцию подобную энхансеру днРНК AK057351 и связанный с ней ген EFHA1. Антисмысловые lncRNAs являются еще одной подгруппой lncRNAs, которые могут индуцировать эпигенетические изменения хроматина и ДНК, таким образом влияя на экспрессию смысловой мРНК. В этом исследовании мы идентифицировали активную антисмысловую днРНК LOC100506801 и связанный с ней ген ECE19.. LincRNA представляют собой длинные некодирующие последовательности, расположенные между генами, кодирующими белок. К настоящему времени в геноме млекопитающих описано более 3500 lincRNAs, которые участвуют в физиологических процессах посредством регуляции экспрессии генов. Аберрантная экспрессия lincRNAs была обнаружена как в солидных опухолях, так и в лейкемии. Однако роль lincRNAs остается неясной. В этом исследовании мы идентифицировали 3 lincRNAs со значительной активацией и связанные с ними кодирующие мРНК. Это были XLOC_008001, XLOC_011989 и XLOC_007341, а связанные мРНК были MSN, RRAD и TPM2 соответственно.

Для исследования функции целевого гена днРНК к целевому генофонду днРНК применяли GO-анализ и аннотацию пути KEGG. Анализ GO показал, что количество генов, соответствующих мРНК с пониженной регуляцией, было больше, чем количество генов, соответствующих мРНК с повышенной регуляцией. Аннотация KEGG показала, что существует 5 путей с повышающей регуляцией (включая метаболизм этанола, вирусный канцерогенез, трансдукцию РНК и пути клеточного цикла) и 14 путей с понижающей регуляцией (включая пути метаболизма пропионата и метаболизма жирных кислот). Эти пути могут играть важную роль в онкогенезе лейкоплакии голосовых связок. Для проверки этой гипотезы необходимо провести дальнейшие исследования. 8 днРНК, идентифицированных в анализе микрочипов, были подтверждены с помощью ОТ-ПЦР как аберрантно экспрессированные в тканях лейкоплакии голосовых связок. Среди этих lncRNAs XLOC_000605 была наиболее значительно активирована, а DLX6-AS1 была наиболее значительно подавлена. До сих пор мало что было известно о функции этих двух lncRNAs. Эти результаты могут обеспечить потенциальную стратегию для различения ткани лейкоплакии голосовых связок и нормальной ткани голосовых связок. Наши результаты предполагают, что эти две lncRNAs могут способствовать онкогенезу лейкоплакии голосовых связок. Для подтверждения этой потенциальной связи потребуются дальнейшие исследования биологической функции XLOC_000605 и DLX6-AS1.

Выводы

В заключение, наше исследование выявило набор днРНК с дифференциальной экспрессией при лейкоплакии голосовых связок по сравнению с нормальной слизистой тканью гортани, а также выявило несколько подгрупп днРНК, таких как антисмысловые днРНК, энхансер-подобные днРНК и днРНК. Более того, мы обнаружили, что XLOC_000605 и DLX6-AS1 были значительно нарушены, и эти две lncRNAs могут способствовать онкогенезу лейкоплакии голосовых связок. Одним из ограничений этого исследования является небольшой размер выборки, которого может быть недостаточно для обнаружения каждого действительно дифференциально экспрессируемого гена. Кроме того, мы не исследовали функцию дифференциально экспрессируемых генов, которые были идентифицированы. Дальнейшие исследования, направленные на lncRNAs и mRNAs, идентифицированные выше, потребуются, чтобы раскрыть их биологические функции и их связь с онкогенезом лейкоплакии голосовых связок.

Сокращения

GO:

Генная онтология

БОЧКА:

Киотская энциклопедия генов и геномов

линкРНК:

длинная межгенная некодирующая РНК

днРНК:

длинная некодирующая РНК

НТ:

неопухолевая ткань

Ссылки

1. «>

   Изенберг Дж.С., Крозье Д.Л., Дейли С.Х. Институциональный и всесторонний обзор лейкоплакии гортани. Энн Отол Ринол Ларингол. 2008;117(1):74–9.

   Артикул пабмед Google ученый

2. Сингх И., Гупта Д., Ядав С. Лейкоплакия гортани: обновление обзора. Джей Ларингол Голос. 2014;4:39–44.

   Артикул Google ученый

3. Джиннон Дж.П., Сомс Дж.В., Астон В., Стаффорд Ф.В., Уилсон Дж.А. Молекулярные маркеры при дисплазии гортани: экспрессия ингибиторов циклинзависимых киназ р21, р27 и гена опухолевого супрессора р53 в прогнозировании онкологического риска. Clin Otolaryngol Allied Sci. 2004; 29: 698–704.

   Артикул пабмед Google ученый

4. Иоахим Э., Пешос Д., Гусия А., Миттари Э., Харалабопулос К., Майкл М. и др. Паттерны экспрессии циклинов D1, E при поражениях эпителия гортани: корреляция с другими регуляторами клеточного цикла (p53, pRb, Ki-67 и PCNA) и клинико-патологические особенности. J Exp Clin Cancer Res. 2004; 23: 277–83.

   КАС пабмед Google ученый

5. Forastiere A, Koch W, Trotti A, Sidransky D. Рак головы и шеи. N Engl J Med. 2001;345(26):1890–900.

   КАС Статья пабмед Google ученый

6. Бартлетт Р.С., Хекман В.В., Изенберг Дж., Тибо С.Л., Дэйли С.Х. Генетическая характеристика поражений голосовых складок: лейкоплакия и карцинома. Ларингоскоп. 2012;122(2):336–42.

   Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

7. Понтинг С.П., Оливер П.Л., Рейк В. Эволюция и функции длинных некодирующих РНК. Клетка. 2009;136(4):629–41.

   КАС Статья пабмед Google ученый

8. Гупта Р.А., Шах Н., Ван К.С., Ким Дж., Хорлингс Х.М. , Вонг Д.Дж. и др. Длинная некодирующая РНК HOTAIR перепрограммирует состояние хроматина, способствуя метастазированию рака. Природа. 2010;464(7291): 1071–106.

   КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

9. Shen Z, Li Q, Deng H, Lu D, Song H, Guo J. Профилирование длинной некодирующей РНК при плоскоклеточном раке гортани и его клиническое значение: потенциальные биомаркеры для LSCC. ПЛОС Один. 2014;9(9):e108237.

   Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

10. Фэн Л., Ван Р., Лянь М., Ма Х., Хе Н., Лю Х. и др. Комплексный анализ профиля экспрессии длинных некодирующих РНК и мРНК при прогрессирующем плоскоклеточном раке гортани. ПЛОС Один. 2016;11(12):e0169232.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

11. «>

    Guan GF, Zhang DJ, Wen LJ, Xin D, Liu Y, Yu DJ и др. Сверхэкспрессия lncRNA h29/miR-675 способствует онкогенезу при плоскоклеточной карциноме головы и шеи. Int J Med Sci. 2016;13(12):914–22.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

12. Ву Т., Цюй Л., Хе Г., Тянь Л., Ли Л., Чжоу Х. и др. Регуляция прогрессирования плоскоклеточного рака гортани с помощью днРНК h29/миР-148а-3п/ДНМТ1 ось. Онкотаргет. 2016;7(10):11553–66.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

13. Zhang C, Gao W, Wen S, Wu Y, Fu R, Zhao D, et al. Потенциальные ключевые молекулярные корреляции при плоскоклеточном раке гортани, выявленные с помощью комплексного анализа профилей микрочипов мРНК, микроРНК и днРНК. Новообразование. 2016;63(6):888–900.

    КАС Статья пабмед Google ученый

14. «>

    Wang P, Wu T, Zhou H, Jin Q, He G, Yu H и др. Длинная некодирующая РНК NEAT1 способствует плоскоклеточному раку гортани посредством регуляции пути miR-107/CDK6. J Exp Clin Cancer Res. 2016;35:22.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

15. Xu G, Chen J, Pan Q, Huang K, Pan J, Zhang W и др. Профили экспрессии длинной некодирующей РНК аденокарциномы легкого, установленные с помощью анализа микрочипов. ПЛОС Один. 2014;9(8):e104044.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

16. Ren S, Peng Z, Mao JH, Yu Y, Yin C, Gao X и др. Анализ РНК-секвенций рака предстательной железы у китайской популяции выявляет повторяющиеся слияния генов, ассоциированные с раком длинные некодирующие РНК и аберрантные альтернативные сплайсинги. Сотовый рез. 2012;22(5):806–21.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

17. «>

    Faghihi MA, Wahlestedt C. Регуляторные роли естественных антисмысловых транскриптов. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(9):637–43.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

18. Ørom UA, Дерриен Т., Берингер М., Гумиредди К., Гардини А., Буссотти Г. и др. Длинные некодирующие РНК с энхансероподобной функцией в клетках человека. Клетка. 2010;143(1):46–58.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

19. Улицкий И., Бартель Д.П. lincRNAs: геномика, эволюция и механизмы. Клетка. 2013;154(1):26–46.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

20. Mercer TR, Dinger ME, Mattick JS. Длинные некодирующие РНК: понимание функций. Нат Рев Жене. 2009;10(3):155–9.

    КАС Статья пабмед Google ученый

21. «>

    Ван К.С., Чанг Х.И. Молекулярные механизмы длинных некодирующих РНК. Мол Ячейка. 2011;43(6):904–14.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

22. Хачане А.Н., Харрисон П.М. Добыча данных транскриптов млекопитающих для функциональных длинных некодирующих РНК. ПЛОС Один. 2010;5(4):e10316.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

23. Loh YH, Wu Q, Chew JL, Vega VB, Zhang W, Chen X и др. Транскрипционная сеть Oct4 и Nanog регулирует плюрипотентность эмбриональных стволовых клеток мыши. Нат Жене. 2006;38(4):431–40.

    КАС Статья пабмед Google ученый

24. Pennacchio LA, Bickmore W, Dean A, Nobrega MA, Bejerano G. Enhancers: пять основных вопросов. Нат Рев Жене. 2013;14(4):288–95.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

Ссылки на скачивание

Благодарности

Неприменимо.

Этическое одобрение и согласие на участие

Это исследование было одобрено Институциональным наблюдательным советом по этике Первой дочерней больницы Медицинского университета Вэньчжоу, и информированное согласие было получено для нашего исследования от всех участвующих пациентов.

Финансирование

Это исследование было поддержано грантом № 2013C33241 от Фонда исследований в области государственных технологий Министерства науки и технологий провинции Чжэцзян и Y2011009.0 от Фонда муниципального бюро науки и технологий Вэньчжоу.

Наличие данных и материалов

Данные предоставляются по запросу, связавшись с соответствующим автором.

Информация об авторе

Авторы и организации

1. Отделение отоларингологии, Первая дочерняя больница Медицинского университета Вэньчжоу, Вэньчжоу, Чжэцзян, 325000, Китай

2. Институт переводческой медицины, Первая дочерняя больница Медицинского университета Вэньчжоу, Вэньчжоу, Чжэцзян, 325000, Китай

   Тао Цзян

Авторы

1. автор в PubMed Google Scholar

2. He Li

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

3. Jun Chen

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

4. Xianming Wu

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

5. Tao Jiang

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

6. Сяоюнь Чен

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Вклады

PJ, LH, CJ, WX, JT и CX участвовали в разработке концепции и дизайна исследования, анализе и интерпретации данных, составлении и/или пересмотре рукописи и одобрили рукопись как представлено.

Автор, ответственный за переписку

Сяоюнь Чен.

Декларации этики

Информация об авторах

Все авторы связаны с Первой дочерней больницей Медицинского университета Вэньчжоу.

Согласие на публикацию

Все авторы согласились опубликовать эту статью в Journal of Otolaryngology-Head & Neck Surgery.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение, и воспроизведение на любом носителе, при условии, что вы укажете автора(ов) оригинала и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Отказ от права Creative Commons на общественное достояние (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Связь рака гортани с лейкоплакией голосовых связок и сопутствующими факторами риска у 1184 пациентов, диагностированных в оториноларингологической практике в Германии

Целью настоящего исследования был анализ связи между раком гортани и лейкоплакия голосовых связок в большой общенациональной базе данных практики. В выборку исследования вошли 1184 пациента в возрасте от 18 до 90 лет из 113 оториноларингологических клиник Германии, у которых в период с 2007 по 2014 год была диагностирована лейкоплакия голосовых связок. Были проанализированы частота выявления рака гортани в течение 5 лет и связанные с ним факторы риска. В течение 6 месяцев после первоначальной диагностики лейкоплакии голосовых связок у 11 % пациентов был диагностирован рак гортани. В сроки от 7 мес до 5 лет после установления диагноза лейкоплакия рак гортани был диагностирован у 7,6% больных. В целом в течение 5 лет после установления диагноза лейкоплакия у 18,6% больных был диагностирован рак гортани (у 26,1% мужчин и 6,3% женщин; в возрасте старше 65 лет — у 16,1% больных в возрасте 50–65 лет и у 7,6% больных в возрасте 65 и 65 лет). у лиц в возрасте 50-65 лет был более высокий риск диагностирования рака гортани [отношение шансов (ОШ) = 4,90 и 2,55 соответственно]. Кроме того, риск диагностирования рака гортани был выше у мужчин по сравнению с женщинами (ОШ = 4,09). В настоящем реальном анализе частота рака гортани, лежащего в основе лейкоплакии голосовых связок, при первом диагнозе оказалась выше по сравнению со скоростью вторичной злокачественной трансформации, возникающей позже в ходе заболевания. Факторами риска рака гортани были пожилой возраст и мужской пол.

Введение

Клинический и описательный термин «лейкоплакия» обозначает белое пятно на поверхности слизистой оболочки, идентифицируемое на макроскопическое исследование. Основная патология включает в себя различные поражения, такие как плоскоклеточная гиперплазия с кератозом или без него, эпителиальная дисплазия различной степени тяжести, карцинома в situ (CIS) или инвазивная карцинома. Поэтому биопсия и гистологическое исследование необходимо для получения окончательного диагноз (1,2). Наиболее важные этиологические факторы развития предраковых поражений гортани, а также злокачественная трансформация в инвазивную карциному, табак и злоупотребление алкоголем. В последние годы гастроэзофагеальный рефлюкс также Считается, что они играют причинную роль (3). Другими возможными этиологическими факторами являются профессиональные вредности (например, асбест), дефицит питательных веществ, злоупотребление вокалом, хронические инфекции и гормональные нарушения (4,5).

Ассоциация лейкоплакии голосовых связок с Рак гортани был предметом многочисленных клинических исследований. исследования и метаанализы за последние десятилетия, которые в основном на основе данных из больниц (3,6,7). Частота карциномы, лежащей в основе лейкоплакия при первом диагнозе и при вторичном злокачественном скорость трансформации в более позднем течении болезни широко варьирует между исследованиями, что связано с заметной выборкой или случаем систематическая ошибка отбора в больничных исследованиях по сравнению с общей популяции, выбирая более тяжелые случаи и выше коэффициенты трансформации в специализированных центрах (6). Единственное популяционное исследование вокала лейкоплакия пуповины и рак гортани с предположительно менее предвзятым данные включали ограниченное число случаев, только 108 за период 49лет (8). Текущие данные из Немецкая система здравоохранения по лейкоплакии голосовых связок и ее связи с раком гортани еще не опубликованы.

Состояние оториноларингологической практики в в частности, с их ролью первых диагностических привратников, еще предстоит изучить. Таким образом, целью настоящего исследования было исследовать текущий эпидемиологический статус голосовых связок лейкоплакия и ее связь с раком гортани у практики оториноларингологии в Германии, по данным большая и репрезентативная общенациональная база данных практики.

Материалы и методы

База данных

База данных анализатора заболеваний (QuintilesIMS, Франкфурт, Германия) собирает рецепты на лекарства, диагнозы и основные медицинские и демографические данные, полученные непосредственно и в анонимный формат из компьютерных систем, используемых в практики (9). Диагнозы (МКБ-10), предписаний [Анатомо-терапевтико-химическая (АТХ) классификация System], а качество сообщаемых данных контролируется QuintilesIMS на основе ряда критериев, таких как полнота документирование и связь между диагнозами и назначениями, среди прочих.

В Германии методы отбора проб, используемые для выбор врачебной практики считался подходящим для получение репрезентативной базы данных о такой практике (9). Метод отбора проб на заболевание База данных анализатора основана на сводной статистике со всех врачей в Германии, публикуемый ежегодно Немецким медицинским Ассоциация. IMS использует эту статистику для определения дизайн в соответствии с группой специалистов, федеральная земля Германии, категория размера сообщества и возраст врача. Эта панель дизайн формирует основу для выбора практик, включенных в Анализатор болезней. План отбора проб подразделяется на 8 географические регионы, которые представляют собой группы 16 немецких федеральных состояния. Эта стратификация приводит к 176 клеткам, полученным из сводная статистика для областей специализации, и пропорциональна к сводной статистике по федеральным землям Германии. В пределах в каждом регионе и области специализации должно быть не менее 7 врачей. выборка, позволяющая получить оценки по каждому региону у специалиста полевой уровень. База данных уже использовалась в нескольких исследованиях. сосредоточение внимания на раке (10–12).

Исследуемая популяция

В выборку исследования вошли пациенты в возрасте 18–90 лет, из 113 оториноларингологических практик, которым был поставлен диагноз лейкоплакия голосовых связок (МКБ-10: J38.3, плюс оригинальное примечание врач, содержащий термин «лейкоплакия») в период с января 2007 г. и декабрь 2014 г. (дата индекса). Пациенты наблюдались в течение максимум 5 лет. Для того, чтобы гарантировать точность оценка прогрессирования лейкоплакии в рак гортани, пациенты с документально подтвержденным диагнозом рака (C00-C99) до дата индекса была исключена.

Результат исследования и независимый переменные

Первичным показателем исхода была частота при подтвержденном диагнозе злокачественного новообразования гортани, в том числе злокачественное новообразование голосовой щели (С32.0), злокачественное новообразование перекрывающихся участков гортани (С32.8) и неуточненное злокачественное новообразование гортани (С32.9). Злокачественные новообразования надгортанный (С32.1), подсвязочный (С32.2) и гортанный хряща (С32.3) были исключены. Независимые переменные включали возраст и секс.

Статистический анализ

Описательный анализ был проведен для всех переменных и среднее значение ± стандартное отклонение (SD) рассчитывали для нормально распределенные переменные. Кривые Каплана-Мейера использовались для анализа процент пациентов, у которых развился рак гортани с течением времени в разных половозрастных групп. Наконец, многомерный Кокса модели регрессии (зависимая переменная, заболеваемость раком диагноз) использовались для определения риска рака гортани, когда с поправкой на возраст и пол. Значения P<0,05 считались указывают на статистически значимые различия. Анализы были выполняется с использованием программного обеспечения SAS, версия 9.4 (Институт САС, Инк., Кэри, Северная Каролина, США).

Результаты

Характеристики пациентов

Социально-демографические данные, относящиеся к отдельным лицам включенные в настоящее исследование, показаны в Таблице I. В общей сложности 1184 пациента в 113 практики были доступны для анализа. Средний возраст составил 58,2 года. (SD, 14,0 лет), а 61,8% пациентов были мужчины.

Диагностика рака гортани по возрасту и пол

Кривые Каплана-Мейера для диагностики заболеваний гортани рака показаны на рис. 1 и 2. В течение 6 месяцев после первоначального диагноз лейкоплакия голосовых связок, 11% пациентов были диагностирован рак гортани. От 7 месяцев до 5 лет после диагноз лейкоплакия, рак гортани диагностирован у 7,6% пациенты. В целом, в течение 5 лет после постановки диагноза лейкоплакия У 18,6% больных был диагностирован рак гортани (26,1% мужчин и 6,3% женщин; log-rank P-value<0,001, рис. 1). При этом 31,3% лиц в возрасте > 65 лет, 16,1% лиц в возрасте 50–65 лет и 7,6% у лиц в возрасте до 50 лет был диагностирован рак гортани. (логарифмическое значение P<0,001, рис. 2). Аналогичные тенденции наблюдались для трех разных возрастных групп. среди мужчин (38,4, 21,7 и 14,7% соответственно; log-rank P-значение <0,001) и женщины (14,5, 4,4 и 0,9).%, соответственно; логарифмический ранг P-значение <0,003).

Рисунок 2. Кривые Каплана-Мейера для времени диагностика рака гортани у больных с лейкоплакией голосовых связок по возрастной группе.

Среди больных, у которых развился рак гортани, 46,6% диагностировано злокачественное новообразование голосовой щели (МКБ-10: С32.0), 1,5% со злокачественным новообразованием перекрывающихся участков гортань (МКБ-10: C32.8) и 51,9% с неуточненными злокачественными новообразование гортани (С32.9). Результаты регрессии Кокса модели представлены в таблице II. У пациентов старше 65 лет и в возрасте 50–65 лет риск диагностирования рака гортани (OR=4,90 и 2,55, соответственно). Кроме того, риск развития рака гортани был выше у мужчин по сравнению с женщинами (ОШ=4,09).

Обсуждение

Использование данных крупной общенациональной практики базе данных, настоящее исследование проанализировало связь ларингеальной рак с лейкоплакией голосовых связок у 1184 пациентов из 113 оториноларингологической практики в Германии. В течение 6 месяцев после первоначальный диагноз лейкоплакия голосовых связок, 11,0% пациентов был диагностирован рак гортани, в то время как между 7 месяцами и 5 лет после первоначальной диагностики лейкоплакии 7,6% пациентов был диагностирован рак гортани. Мужской пол и старший возраст были являются факторами риска для диагностики рака гортани у эти пациенты.

Связь между лейкоплакией гортани и Рак был предметом многочисленных клинических исследований и метаанализы последних десятилетий. Терминология и классификация этот спектр поражений заметно изменился с течением времени. Пока в ранних исследованиях термин «кератоз» использовался как клинический термин. взаимозаменяемо с лейкоплакией (6), в современной терминологии «кератоз» строго зарезервировано для гистологического обнаружения кератинового слоя на плоский эпителий (3). Более того, гистологический спектр предраковых поражений гортани лежащие в основе клинических признаков лейкоплакии голосовых связок. классифицируются с использованием различных систем классификации на протяжении многих лет. Рано классификации подразделяют гистологию на кератоз без атипии (KWOA) по сравнению с кератозом с атипией (KWA) или на степени I, II и III по Кляйнсассеру (гиперплазия без атипии, гиперплазия с атипией и CIS соответственно) (13–17). Другие гистологические системы классификации, например, для плоскоклеточного интраэпителиальная неоплазия (SIN) или гортанная интраэпителиальная неоплазии (LIN), впоследствии развились (18,19). наиболее часто используемыми классификациями сегодня являются система SIN, Люблянская классификация плоскоклеточных интраэпителиальных поражений (SIL) и, в частности, система дисплазии ВОЗ с подразделением на гиперплазия, легкая, умеренная и тяжелая дисплазия и CIS (20–23).

В 1991 г. Буко и Гнепп опубликовали обзор исследования частоты злокачественных трансформаций различных отделов гортани. предраковые поражения: кератоз гортани (лейкоплакия по терминология авторов), KWOA против KWA и CIS гортани (6). Исследования выявили злокачественные коэффициент трансформации 0,6–390,7% для кератоза гортани, 0,0–16% для KWOA, 5,6–40,0% для KWA и 3,5–90,0% для ларингеального CIS.

В 2008 г. Isenberg et al. рассмотрели 15 клинических исследования лейкоплакии голосовых связок между 1960 и 2005 годами и включали собственные данные 136 пациентов (7). Всего было включено 3107 случаев. При гистологическом исследовании у 53,6% дисплазии не выявлено, от легкой до умеренная дисплазия в 33,5% и CIS в 15,2% биоптатов. злокачественная трансформация поражений без дисплазии, легкая к умеренной дисплазии и КИС — 3,7, 10,1 и 18,1%, соответственно. Общая скорость злокачественной трансформации (все поражений из всех исследований) составил 8,2%.

В 2009 г. Гейл и др. рассмотрели 9 клинических исследования с различными гистологическими классификациями между 1982 и 2003 гг. (n=2841 пациент) и добавили свои данные за 25 лет (n=1268 пациентов) (4). Соответствующие оценки различных системы классификации были объединены, и следующие злокачественные наблюдались показатели трансформации: Группа плоскоклеточной гиперплазии и KWOA, 0–4,1%; группа легкой дисплазии, SIN I, LIN I и базально-парабазальная гиперплазия 0–11,5%; группа умеренной дисплазии, SIN II и LIN II, 4-24%; и группа тяжелой дисплазии, SIN III, LIN III, атипическая гиперплазия и CIS, 9. 3–57%. Общая коэффициент трансформации всех сортов вместе колебался от 2,3% в собственные данные авторов до 21,4% в исследовании Blackwell et al. (24). Собственные данные авторов представляет собой крупнейшее исследование по этой теме на сегодняшний день, и сообщается скорость трансформации значительно ниже, чем у предыдущие исследования: 1,1% при плоскоклеточной гиперплазии и базальной/парабазальной гиперплазии клеточной гиперплазии, 9,5% при атипической гиперплазии и 2,3% при всех оценки объединены.

При анализе вышеупомянутых клинических исследований скорость злокачественной трансформации различных предраковых поражений с известной гистологией, перспектива первичной медико-санитарной помощи поставщиков в повседневной оториноларингологической практике основывается на населения с лейкоплакией изначально неизвестной гистологии. В качестве лейкоплакия — это просто описательный клинический термин без какой-либо гистологические или прогностические последствия, важно учитывать Имейте в виду, что определенный процент этих лейкоплакий уже содержат карциному во время первого проявления. Надежный и непредвзятые данные о частоте рака голосовых связок лейкоплакия при первом поступлении в отличие от вторичного злокачественная трансформация в позднем течении болезни мало в литературе. В 1991, Буко и др. опубликовали первое популяционное исследование кератоза гортани (лейкоплакия по терминологии авторов) и гортани рак в литературе (8). Гистологическое исследование выявило основной инвазивный рак в 12% случаев. (карцинома при постановке диагноза), в то время как вторичное злокачественное скорость трансформации (карцинома после постановки диагноза) составила всего 1%. В сравнение с 10 предыдущими исследованиями с больничными данными из 1953–1983 гг., в которых сообщалось о карциноме при постановке диагноза в 3,5–66,7% и рак после постановки диагноза у 0,0–42,0% больных, показатели настоящего исследования находились в нижней части спектра, что может быть объяснено минимальной погрешностью выборки/отбора случаев в популяционное исследование по сравнению с госпитальными исследованиями.

Результаты настоящего немецкого исследования репрезентативная общенациональная база данных практики соответствует результаты популяционного исследования Буко. Каплан-Мейер Кривые показали резкое увеличение числа диагнозов рака гортани. в течение 6 мес после первоначальной диагностики лейкоплакии, с последующим устойчивым увеличением к концу периода исследования. Первоначальное резкое увеличение, скорее всего, представляет собой случаи с карцинома, лежащая в основе начальной лейкоплакии (карцинома в диагноз), в то время как более поздний плоский рост представляет тех, у кого злокачественная трансформация при позднем течении болезни (рак после постановки диагноза). Общий показатель гортани Диагноз карциномы резко увеличился до 11,0% в течение 6 месяцев после лейкоплакия, в то время как она увеличилась всего на 7,6% за через 4,5 года, что сопоставимо с величиной популяционное исследование Bouquot et al (8). Наши данные указывают на аналогичную тенденцию, но с более высокой оценочной долей вторичных злокачественных трансформации, что можно объяснить увеличением среднего возраста участники нашего исследования по сравнению с исследованием Bouquot et al (58 против 50 лет соответственно). По сравнению с Изенбергом объединенная скорость злокачественной трансформации 8,2%, наша расчетная скорость 7,6% находились в том же диапазоне (7).

Доля пациентов мужского пола с голосовыми связками лейкоплакия в настоящем исследовании составила 61,8%, что находится на конец спектра по сравнению с результатами предыдущих исследований (6,25,26). В Кроме того, настоящее исследование определило пожилой возраст как риск Фактор для диагностики рака гортани у пациентов с лейкоплакия голосовых связок. Это можно легко объяснить задержкой прогрессирование от предраковых поражений до инвазивного рака, и согласуется с результатами предыдущих исследований (8,27).

Наше исследование имело несколько ограничений. Первый, точная дифференциация между раком при постановке диагноза и карциному после установления диагноза было невозможно, так как данные были основаны исключительно по кодам МКБ, тогда как клиническая информация и гистологические результаты не были включены в базу данных. Кроме того, нет была доступна информация о статусе или стадии TNM. Более того, хотя новообразования надгортанной, подсвязочной и гортанной хряща были исключены, невозможно установить, были ли диагностированные виды рака развились из ранее диагностированных лейкоплакия или, возможно, из другого участка гортани. Для того же причина, диагностические процедуры не были стандартизированы и достоверность диагнозов проверить не удалось. Окончательно, информацию о ранее существовавших заболеваниях и факторах риска, включая курение, употребление алкоголя и гастроэзофагеальный рефлюкс отсутствовал. Кроме того, другие важные параметры, такие как качество голоса или качество жизни, не удалось получить.

Преимуществом дизайна исследования является презентация большой и актуальной выборки рутинных демографических данных из Немецкая система здравоохранения (реальные данные), которая позволяет определенная достоверность результатов и ассоциаций. В меру насколько нам известно, это первый раз, когда ассоциация вокальных проанализирована лейкоплакия пуповины при раке гортани систематическое использование репрезентативной общенациональной базы данных о практике. По сравнению с предыдущими исследованиями с больничными данными, погрешность выборки или выборки случаев, скорее всего, снижается за счет настоящий дизайн исследования.

В заключение, это репрезентативное общенациональное исследование практики оториноларингологии в Германии выявили, что примерно у 1 из 5 пациентов с лейкоплакией голосовых связок либо карцинома при постановке диагноза, либо злокачественная трансформация в течение 5 годы. В пожилом возрасте требуется высокий уровень подозрительности со стороны врачей. пациентов, особенно у мужчин. Тщательное наблюдение за пациентами с высоким риском пациентам рекомендуется, даже если результаты первичной биопсии были отрицательными.

Благодарности

Не применимо.

Финансирование

Финансирование не получено.

Наличие данных и материалов

Наборы данных, использованные и/или проанализированные в течение текущего исследование доступно у соответствующего автора на разумных запрос.

Вклад авторов

К.К. внес существенный вклад в концепцию, дизайн и интерпретация данных и критически пересмотрел рукопись для важного содержания. DUS, AS и MK критически переработаны рукопись для важного содержания. ЖЖ поспособствовал анализ и интерпретация данных и составление рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную версию рукопись для публикации.

Одобрение этики и согласие на участие

Неприменимо.

Согласие на публикацию

Законодательство Германии разрешает использование анонимных электронных медицинские записи для исследовательских целей при определенных условиях. Согласно этому законодательству, нет необходимости получать информированное согласие пациентов или одобрение медицинской этики комитет для этого типа обсервационного исследования, который не содержит непосредственно идентифицируемые данные. Поэтому никакого отказа от этических одобрение было получено от Институционального наблюдательного совета или этического комитет. Авторы не имели доступа к какой-либо идентифицирующей информации. в любой момент анализа данных.

Конкурирующие интересы

Все авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов интересы.

Каталожные номера

Лейкоплакия и новообразования гортани | Ento Key

26

Steven Bielamowicz и Lauren C. Cunningham

Голосовое общение является важным элементом человеческого взаимодействия. Голос производится за счет координации выдоха и закрытия голосовых складок. На голосовых складках желеобразная поверхностная собственная пластинка позволяет лежащей выше слизистой оболочке плавно вибрировать, в то время как выдыхаемый воздух проходит над ней, производя периодическую акустическую энергию, при этом глотка действует как резонансная камера. Мы распознаем эту акустическую энергию как человеческий голос. Поражения, начинающиеся на слизистой оболочке голосовых складок, отрицательно сказываются на вибрации, так как нарушается периодичность акустической энергии.

Вибрация голосовых связок создает ритмичные волны давления в воздухе за счет взаимодействия «крышки» голосовых складок и воздушного потока. Теория вибрации голосовых связок «оболочки тела» утверждает, что нижележащие ткани, глубокий соединительнотканный слой собственной пластинки, голосовая связка и голосовая мышца относительно статичны, тогда как поверхностная собственная пластинка и слизистая оболочка открыты и открыты. близко, чтобы позволить воздуху проходить между противоположными поверхностями слизистой оболочки. Слизистая оболочка движется колебательно, так что движение одного тяжа является зеркальным отражением другого. Волна слизистой оболочки возникает в нижне-медиальной части эпидермиса голосовых связок и распространяется рострально с экспираторным потоком воздуха. Когда поверхности ростральных связок расходятся во время волнового движения слизистой оболочки, выдыхаемый воздух проходит между голосовыми складками. Отрицательное давление, возникающее при прохождении воздуха между связками, как описано в эффекте Бернулли, вызывает сближение нижней части голосовых складок с последующим закрытием ростральной части связок. Поток прекращается до тех пор, пока нарастание подсвязочного давления не преодолеет сопротивление сомкнутых голосовых складок, и цикл начинается снова.

Эффективное смыкание голосовых складок и уникальные вязкоупругие свойства поверхности слизистой оболочки и поверхностной собственной пластинки необходимы для формирования волны слизистой оболочки. Поражения голосовых складок могут препятствовать симметричному закрытию голосовых складок или изменять вязкоупругие свойства тканей и прерывать волновую функцию слизистой оболочки. В результате голос становится хриплым с уменьшением вокального диапазона. В этой главе мы анализируем гистопатологию предраковых и злокачественных опухолей голосовых связок на ранней стадии и возникающие в результате аномалии вибрации голосовых складок по данным видеостробоскопии.

Гистопатология

Лейкоплакия гортани определяется как белое пятно на голосовой связке и, как сообщается, имеет потенциал злокачественной трансформации от 1 до 40% ( рис. 26.1 ). ¹ Лейкоплакия является результатом клеточных изменений в вышележащем эпителии голосовых складок и должна быть дифференцирована от кандидозной инфекции голосовых складок ( рис. 26.2 ). Лейкоплакия может проявляться в виде равномерно гладкого поверхностного поражения, поражающего часть одной или обеих голосовых складок, или в виде утолщенной, шероховатой области голосовой складки (9). 0359 Рис. 26.3 ). Некоторые из этих поражений распространяются через переднюю спайку (, рис. 26.4, ). Другие включают пятнистое распределение по голосовым связкам (90–359, рис. 26.5, 90–360). В редких случаях лейкоплакия может поражать надгортанные структуры, черпаловидное тело и межчерпаловидную область (90–359, рис. 26.6, 90–360). Некоторая лейкоплакия связана с эритемой, и используется термин эритролейкоплакия ( рис. 26.7 ). Эритролейкоплакия является наиболее вероятным злокачественным новообразованием. ^2,3

Рис. 26.1 Очаг лейкоплакии с вовлечением одной голосовой складки различной толщины.

Рис. 26.2 Лейкоплакию необходимо дифференцировать от кандидозной инфекции голосовых складок. Этот пациент получил лучевую терапию по поводу рака гортани 3 года назад. Несмотря на то, что обследование вызывает беспокойство в отношении рецидива карциномы, эти поражения разрешились с помощью противогрибковой терапии.

Рис. 26.3 Лейкоплакия может проявляться как пятнистое поражение различной толщины, а также пятнистый белый мусор, который легко смещается с поверхности голосовых складок, как показано на передней комиссуре этого изображения.

Рис. 26.4 Лейкоплакия может распространяться через переднюю комиссуру.

Рис. 26.5 Очаговая природа некоторых лейкоплакических поражений гортани может поражать истинные голосовые связки, а также желудочковые складки.

Лейкоплакия голосовых связок представляет собой широкий спектр патологии с множеством соответствующих злокачественных потенциалов. Лейкоплакия без окружающей эритемы может представлять собой доброкачественную трансформацию, называемую гиперкератозом или паракератозом. Эти поражения ограничены слизистой оболочкой голосовых связок и имеют утолщенное, но упорядоченное клеточное созревание от базального слоя к поверхности и, таким образом, не демонстрируют какой-либо степени дисплазии. С другой стороны, очень похожая лейкоплакия голосовых складок может свидетельствовать о нарастающем нарушении процесса клеточного созревания от базального слоя к поверхностному и представлять собой легкую, умеренную или тяжелую дисплазию, в зависимости от степени аномалии. Риск злокачественной трансформации увеличивается по мере увеличения тяжести дисплазии. ⁴ Поражения, диагностированные как легкая дисплазия, трансформируются в 2–12% случаев, а умеренная дисплазия трансформируется в 7–27% случаев. Карциному in situ диагностируют, когда диспластические изменения выражены, но поражение не проникает через базальную мембрану. Инвазивная карцинома возникает, когда аномальные эпителиальные клетки проникают в ткани ниже базальной мембраны ( рис. 26.8 и 26.9 ).

Рис. 26.6 Редкий случай лейкоплакии межартериально-теноидной области. Голосовые связки в верхней части изображения скрыты ларингоскопом.

Рис. 26.7 На этом изображении выявляется очаговая эритролейкоплакия.

Видеостробоскопическая оценка лейкоплакии

Оценка пациентов с лейкоплакией с помощью видеостробоскопии дает ценную информацию. Этот метод позволяет задокументировать географическое распространение лейкоплакии с течением времени. У многих пациентов распределение лейкоплакии остается стабильным с течением времени, и когда распространение лейкоплакии увеличивается по длине голосовых складок, следует заподозрить злокачественную трансформацию. Использование видеостробоскопии для оценки и наблюдения за пациентами с лейкоплакией имеет большое значение. У пациентов с тонкой поверхностной лейкоплакией картина вибрации голосовых связок может оставаться полностью неизменной с нормальной фазой вибрации, амплитудой, периодичностью и закрытием голосовой щели. В этой группе пациентов малигнизация крайне маловероятна. У пациентов с изолированной толстой лейкоплакией пораженные голосовые связки могут вибрировать с нормальной амплитудой, периодичностью и фазой колебаний; однако толстое поражение может повлиять на закрытие голосовой щели. Кроме того, область толстой лейкоплакии часто демонстрирует адинамический сегмент в пределах слизистой оболочки голосовых складок. Некоторые из этих изолированных поражений могут быть доброкачественными, тогда как другие могут быть злокачественными. Таким образом, эти поражения могут потребовать хирургического иссечения с узким краем резекции и максимальным сохранением нижележащего поверхностного слоя собственной пластинки.

Рис. 26.8 Инцизионная биопсия латеральной поверхности левой голосовой складки была выполнена по поводу пупковидного поражения латеральной поверхности голосовой складки после микроинфузии. Эта биопсия показала плоскоклеточный рак.

Рис. 26.9 Этот пациент лечился от изолированной лейкоплакии, затрагивающей свободный край голосовой складки, с иссечением поражения и сохранением поверхностного слоя собственной пластинки в надежде сохранить голосовую функцию. При патологоанатомическом исследовании выявлена ​​карцинома in situ.

У больных с двусторонней лейкоплакией и диффузной лейкоплакией вибрационный характер голосовых складок резко нарушен, а периодический характер вибрации голосовых складок настолько ненормальен, что при видеостробоскопии вибрация голосовых складок отсутствует. Апериодический характер основной частоты препятствует тому, чтобы плата фильтра в видеостробоскопическом блоке обеспечивала светоотдачу, асинхронную с вибрацией голосовых связок. Без надлежащего отслеживания сигнала источника звука видеостробоскопия малопригодна. В этих ситуациях вибрационные характеристики, перечисленные выше, не могут быть оценены. Высокоскоростная визуализация может обеспечить значительное улучшение оценки этих диффузных поражений и их влияния на вибрацию голосовых связок. Кроме того, у больных с диффузной лейкоплакией во время голосового репродукции используется значительная надгортанная компрессия. Надгортанная компрессия часто настолько сильна, что визуализация вибрирующих поверхностей голосовых складок во время произношения голоса чрезвычайно ограничена. Точно так же у пациентов с воспалительным заболеванием голосовых складок характер вибрации ограничен по амплитуде по всей длине голосовых связок. Это открытие наблюдается у пациентов с односторонней эритроплакией.

При сравнении гиперкератоза, паракератоза и различных степеней дисплазии видеостробоскопия может не дать существенных различий. Все эти доброкачественные поражения затрагивают эпителий голосовых складок и не распространяются на поверхностную собственную пластинку. Теоретически можно определить, имеет ли место более глубокое проникновение поражения голосовых связок, наблюдая за степенью, в которой поражение изменяет вибрационные характеристики голосовых связок. Из того, что известно о биомеханике вибрации голосовых складок, предполагается, что поражения, которые кажутся вибрирующими на поверхности поверхностного слоя собственной пластинки пластинки, наряду с нормальной вибрацией окружающих тканей, подразумевают минимальные изменения микроструктуры голосовых складок и более вероятно, будут доброкачественными. Точно так же можно ожидать, что поражения, которые затрагивают поверхностный слой собственной пластинки (инвазивная карцинома), выявляют большую степень стробоскопической аномалии. Ожидается, что при очень поверхностно инвазивных поражениях вибрационная аномалия будет ограничена самим поражением. По мере увеличения степени инвазии видеостробоскопия может показать генерализованную потерю вибрации голосовых связок в месте лейкоплакии, которая распространяется на окружающую слизистую оболочку голосовых складок (9).0359 Видеоклип 35 ). К сожалению, ожидаемые изменения вибрации при увеличении степени инвазии тканей не являются клинически достоверными. В слепом исследовании предраковых и злокачественных изменений голосовых складок на ранней стадии Colden et al. продемонстрировали, что вибрационные характеристики двух групп поражений не всегда различимы экспертами-оценщиками. ⁵

По мере увеличения стадии плоскоклеточного рака можно наблюдать фиксацию голосовых связок или нарушение движения голосовых связок. При видеостробоскопии выявляются изменения не только слизистой оболочки голосовых складок, но и изменения, обусловленные неполным смыканием голосовой щели, сопровождающиеся парезом или параличом голосовых связок. Потеря закрытия голосовой щели часто связана с гиперфункцией контралатеральной желудочковой складки в качестве стратегии компенсации. ⁶ Это может ограничить общий обзор волны слизистой оболочки во время стробоскопического анализа. Когда у этих пациентов можно увидеть волну слизистой оболочки, часто встречается тяжелая апериодичность из-за ограничения податливости слизистой оболочки голосовых складок.

Дальнейшее обследование для окончательного диагноза

Поскольку считается, что степень дисплазии является наиболее надежным прогностическим фактором злокачественной трансформации лейкоплакии гортани, всегда необходимо проводить оценку патологии. Глубокая биопсия голосовых складок дает четкое представление о глубине поражения, но может привести к рубцеванию слизистой оболочки голосовых складок и поверхностной собственной пластинки, что приводит к аномалиям вибрации в месте биопсии с разрушительными результатами фонации. Поэтому биопсии следует выполнять с использованием микроларингеальных методов, которые максимально сохраняют нормальные структуры.

Изучена возможность использования щеточной биопсии вместо биопсии ткани для определения риска злокачественной трансформации при лейкоплакии. Ву указывает на 87% положительную прогностическую ценность щеточной биопсии с использованием эксцизионной или пункционной биопсии в качестве стандарта. ⁷ Простота выполнения щеточной биопсии в качестве офисной процедуры более привлекательна для пациента и потенциально позволяет врачу внимательно следить за прогрессированием этих поражений. Основное преимущество щеточной биопсии заключается в том, что этот метод не представляет риска повреждения здоровых тканей, поэтому функциональные изменения, связанные с биопсией, встречаются редко.

Ссылки

1. Bouquot JE, Gnepp DR. Предрак гортани: обзор литературы, комментарий и сравнение с лейкоплакией полости рта. Head Neck 1991;13:488–497

2.