Метод пцр что это как берется у мужчин: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Лаборатория ДНК-Диагностики — ПЦР-исследования из урогенитального тракта у мужчин

В материале даны общие рекомендации по взятию материала из урогенитального тракта у мужчин для исследований методом ПЦР. Просим тщательно соблюдать данные рекомендации для повышения точности исследования.

Для диагностики урогенитальных инфекций у мужчин используют соскобы из уретры, первую порцию мочи, эякулят и секрет предстательной железы.

• Для диагностики уретритов используют соскобы из передней уретры.

• При хронических вялотекущих воспалениях или при простатите дополнительно исследуется секрет простаты или первая порция мочи после массажа простаты.

• Эякулят исследуется при диагностике мужского бесплодия.

• При массовом скрининге ИППП удобно и целесообразно использовать материал, полученный неинвазивным путём — первую порцию мочи.

Соскоб из уретры

В большинстве случаев оптимальным материалом в диагностике урогенитальных инфекций у мужчин является соскобное отделяемое передней уретры.

Рекомендуемый инструмент для взятия материала — зонд универсальный ЗГУ-ЦМ для взятия материала из уретры и цервикального канала.

Перед взятием соскоба головку полового члена в области наружного отверстия мочеиспускательного канала обрабатывают стерильным физиологическим раствором, затем производят массаж уретры. Зонд вводится в мочеиспускательный канал на глубину 1-2 см, после чего несколькими вращательными движениями производится соскоб клеток уретры.

Зонд с собранным материалом переносится в пробирку с транспортной средой ЭДЕМ. Рабочую часть зонда обламывают в области насечки и оставляют в пробирке с транспортной средой, пробирку закрывают. Если на зонде нет насечки, рабочую часть зонда погружают в среду, после чего прижимают её к внутренней стенке пробирки и вращают 5-10 секунд, после чего инструмент удаляют, а пробирку плотно закрывают и маркируют.

Первая порция мочи

Для анализа методом ПЦР используют первую порцию утренней мочи в количестве 15-30 мл. Также возможно исследование первой порции мочи, полученной через 2 и более часов после предыдущего мочеиспускания.

Рекомендуемый контейнер для сбора мочи — сухая стерильная ёмкость из пластика объёмом до 60 мл, снабжённая герметично завинчивающейся крышкой. После сбора мочи контейнер плотно закрывают и маркируют.

Первая порция утренней мочи при диагностике урогенитальных инфекций у мужчин является адекватным клиническим материалом, альтернативным соскобу из уретры, главные преимущества — неинвазивный способ получения и простота взятия.

Эякулят и секрет предстательной железы

Секрет простаты или эякулят используют для диагностики инфекций верхних отделов органов репродукции.

Перед получением секрета простаты головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном. Секрет простаты собирают после предварительного массажа простаты через прямую кишку. Массаж проводится врачом, посредством энергичного надавливающего движения от основания к верхушке железы.

После окончания массажа простаты выделившийся секрет собирают в сухой стерильный контейнер объёмом до 60 мл или в сухую стерильную пластиковую пробирку объёмом 2 мл. Контейнер герметично закрывают крышкой и маркируют.

тестирование — что это такое, как работает метод ПЦР, показания, подготовка к проведению ПЦР-теста, как проводится ПЦР-анализ, результаты теста

Опубликовано: 10.02.2021 13:07:00    Обновлено: 18.02.2021   Просмотров: 257885

ПЦР – высокоточный метод диагностики и одно из самых главных открытий в области биологии за последние десятилетия. ПЦР-анализ применяется уже почти 40 лет и считается наиболее точным и чувствительным способом диагностики инфекционных заболеваний.

ПЦР – уникальный и универсальный метод, тест используется не только в клинической лабораторной диагностике, но также в биологии, криминалистике, археологии и многих других научных областях. Все, что нужно для проведения анализа – небольшое количество любого биоматериала пациента.

Суть метода ПЦР

ПЦР – полимеразная цепная реакция. Метод основан на обнаружении даже небольших концентраций искомого элемента диагностики. Для определения изначально крайне малых концентраций РНК или ДНК, которые необходимо определить в процессе проведения основного этапа исследования, используется метод искусственного увеличения количества РНК или ДНК. А поскольку они специфичны и строго индивидуальны для каждого микроорганизма или живого существа за счет уникальности последовательности нуклеотидов во фрагментах, ошибка в определении целевого ДНК или РНК исключена.

Генетическая информация любого живого организма записывается в ДНК. Эта молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Некоторые вирусы (например, COVID-19) хранят свой код в РНК – одной нити нуклеотидов.

Для каждого организма, включая вирусы, бактерии и грибки, последовательность нуклеотидов уникальна. Ее можно сравнить с отпечатком пальца или сканом сетчатки глаза человека. Укороченные последовательности нуклеотидов, характерные для каждого вида патогена (возбудителя опасных заболеваний), хранятся в базах научных лабораторий в виде праймеров – отдельных участков ДНК, типичных для только конкретного возбудителя. Эти участки значительно короче любой молекулы ДНК. Такие праймеры присоединяются к ДНК возбудителя в пробе и под действием катализаторов многократно воспроизводят свои дубли. Этот процесс называются «репликация» – многократное увеличение, дублирование искомого участка до тех пор, пока он не станет доступен для определения. Процесс репликации возможен только при наличии в пробе ДНК возбудителя.

Преимущества метода ПЦР

1. Высокая специфичность. Метод ПЦР определяет заданную последовательность нуклеотидов, присущую конкретному патогену. Таким образом, специфичность теста стремится к 100%. Исключен риск ложноположительных результатов.
2. Чувствительность. Для ПЦР достаточно всего несколько молекул ДНК патогена (или даже уже неактивных – разрушенных вирусных частиц, сохранивших специфические участки ДНК в достаточном количестве), чтобы он был обнаружен в ходе исследования.
3. Скорость проведения. Лаборатория получает результат ПЦР-теста через несколько часов, клиент – уже на следующий день. Скорость диагностики имеет принципиально важное значение для своевременного лечения. Например, при диагностике бактериальных инфекций классический посев занимает от нескольких дней, а с ПЦР-анализом пациент сможет принять меры и начать лечение уже через сутки.
4. Универсальность. Для исследования подходит любой биоматериал: кровь, моча, сперма, мокрота, гной, жидкости из абсцессов и пр. Кроме этого, ПЦР применяется в самых разных областях науки и медицины, работая даже там, где другие методы бессильны.
5. Диагностика латентных инфекций. ПЦР-диагностика определяет возбудителя инфекции даже в инкубационном периоде и при скрытом течении заболевания.

Какие есть недостатки

Единственный серьезный недостаток, связанный с методом полимеразной цепной реакции, — его высокая технологичность. Исследования ПЦР требуют строжайших соблюдений правил и серьезной оснащенности лабораторного комплекса. Не каждая лаборатория может позволить себе все необходимое оборудование.

Показания к проведению ПЦР-анализа

ПЦР – один из наиболее востребованных способов диагностики в медицине, и применяется он в самых разных областях:

• Диагностика инфекционных заболеваний (гепатит, ВИЧ, TORCH-инфекции и огромное множество других видов патогенов).
• Урогинекология (диагностика инфекций, передающихся половым путем: хламидиоз, уреаплазма, микоплазма, кандиды, гарднерелла, герпесвирусы). Важное значение для женского и мужского здоровья играет ВПЧ – вирус папилломы человека. Доказано, что у женщин онкогенные штаммы этого вируса способны вызывать рак шейки матки.
• Неонатология. Существует целый ряд инфекций, способных поражать плод еще в материнской утробе. Среди них вирусы герпеса, токсоплазмы, краснухи. ПЦР-диагностика позволяет правильно определить тактику ведения и риски внутриутробной инфекции.
• Респираторные заболевания. Диагностика методом ПЦР стала в 2020 году актуальной как никогда и продемонстрировала свою незаменимость и эффективность. ПЦР-анализ – главный тест и «золотой стандарт» диагностики коронавирусной инфекции Sars-Cov-2 (COVID-19), ставшей причиной самой масштабной пандемии последних десятилетий.
• Генетика. Наследственные заболевания и отцовство также диагностируются при помощи метода ПЦР.

ПЦР-тесты применяются везде, где нужен быстрый, точный и надежный результат.

Подготовка к проведению ПЦР-теста

Еще одно немаловажное преимущество ПЦР-анализов – это отсутствие специфической подготовки к проведению тестов. Достаточно следовать стандартным рекомендациям специалиста:

• Анализ сдается утром натощак. При этом ряд генетических исследований проводится в произвольное время, удобное пациенту.
• При сдаче анализа по мазку из ротоглотки необходимо выдержать интервал с приемом пищи и воды в 3-4 часа перед тестом.
• Перед анализом на венерические инфекции необходимо воздержаться от половой активности в течение суток.
• Перед анализом нельзя использовать никакие противовирусные препараты.

Подробную инструкцию по правилам подготовки к каждому анализу вы всегда можете получить у лечащего врача или у консультантов на нашей горячей линии.

Как проводится ПЦР-анализ

С 1983 года, когда был изобретен данный метод, прошло много времени, и технологии не стоят на месте. Сегодня существует несколько различных методик для проведения ПЦР-теста:

1. С обратной транскрипцией. Самый распространенный способ идентификации известной последовательности РНК, включающий амплификацию, определение патогена и его идентификации среди образцов, хранящихся в научной картотеке.
2. Вложенная ПЦР (или «гнездовая») — используется для снижения количества неспецифичных продуктов реакции и имеет две стадии с использованием двух видов праймеров.
3. Изотермические методы – не требуют повторяющихся температурных циклов, менее энергозатратны.
4. Инвертированная ПЦР — применяется, если имеется только короткий фрагмент известной последовательности, но необходимо определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
5. ПЦР в реальном времени — метод, позволяющий определить не только присутствие целевой нуклеотидной последовательности в образце, но и измерять количество ее копий после каждого цикла амплификации, что дает возможность для проведения тестов с количественным результатом

Это далеко не все существующие на сегодняшний день разновидности ПЦР-технологий. Ученые активно развивают эту важную и перспективную область лабораторной диагностики, совершенствуют методы ПЦР, оттачивают техники и изобретают новые подходы.

Результаты ПЦР-теста

Результаты анализов, проведенных методом ПЦР, известны уже через один день. Иногда возможно проведение экстренного теста – его часто используют при оказании срочной медицинской помощи при госпитализации. Тогда срок готовности результата сокращается до считанных часов.

Результаты ПЦР-теста дадут точную информацию о том, какая инфекция была обнаружена. При количественном тестировании анализ определит также вирусную или бактериальную нагрузку на организм. В этом случае в результатах будет значиться титр обнаруженного патогена (его количество в одном миллилитре пробы). Количественный анализ особенно важен при диагностике заболеваний, спровоцированных условно-патогенными микроорганизмами, которые присутствуют в норме практически у каждого человека. Такие микроорганизмы представляют угрозу только при большой численности, а в остальных случаях мирно сосуществуют с носителем.

Быстрое определение пола с помощью метода ПЦР по сравнению с классической цитогенетикой

Int J Health Sci (Qassim). 2008 г., январь; 2(1): 49–52.

, ^{1, 3 , 2 , 1 и 1}

Авторская информация об авторских правах и лицензионной информации Отказ от ответственности

Фон:

Фретал. оплодотворение в гонадный пол и соматический пол по мере развития. В случаях неконгруэнтности хромосомного, гонадного и соматического пола у младенцев и детей первостепенное значение имеет быстрое установление диагноза и осуществление медикаментозного и хирургического лечения, поскольку гендерная идентичность так важна для психологического благополучия на протяжении всей жизни. .

Цель:

Эта работа была выполнена для того, чтобы проверить ценность метода ПЦР для быстрого определения пола по сравнению с классическим цитогенетическим методом.

Методы:

Включено 20 субъектов, включая 10 новорожденных с аномалиями гениталий, 2 взрослых женщин с задержкой полового созревания и 8 взрослых мужчин с бесплодием, в дополнение к 20 нормальным младенцам обоих полов в качестве контрольной группы. Диагноз пола был предпринят с помощью осмотра, цитогенетического исследования, ультрасонографии, биопсии гонад и гормонального анализа, в дополнение к амплификации ПЦР для обнаружения локусов генов SRY и ATL1 на Y и X хромосомах соответственно.

Результаты:

У четырех новорожденных была диагностирована частичная тестикулярная феминизация с положительными полосами Y и X хромосом и кариограммой 46/XY. Трое новорожденных были диагностированы как истинные гермафродиты, показали положительную амплификацию как Y, так и X хромосом с мозаичной кариограммой 46, XX / XY. У троих новорожденных был диагностирован адреногенитальный синдром с положительной амплификацией только Х-хромосомы и кариограммой 46/ХХ. У одной из двух взрослых женщин был диагностирован синдром Тернера с положительной амплификацией Х-хромосомы и кариограммой 45/ХО; другой был диагностирован как полная тестикулярная феминизация, имел положительную амплификацию X- и Y-хромосом и кариограмму 46/XY. У 8 взрослых мужчин с бесплодием выявлена ​​положительная амплификация Х- и Y-хромосом и кариограмма 47/XXY (синдром Клайнфельтера) в 7 случаях и дисгенезия гонад 46/XY в одном случае.

Заключение:

Мы пришли к выводу, что ПЦР как простой, быстрый и надежный метод может дополнять, а также подтверждать цитогенетические исследования при диагностике пола в случаях нарушений половых хромосом.

Ключевые слова: ПЦР, Пол, Интерсекс, Амбигированные гениталии

Половая дифференциация плода основана на трансляции хромосомного пола, установленного при оплодотворении, в гонадный пол и соматический пол по мере развития. В случаях неконгруэнтности хромосомного, гонадного и соматического пола у младенцев и детей первостепенное значение имеет быстрое установление диагноза и осуществление медикаментозного и хирургического лечения, поскольку гендерная идентичность так важна для психологического благополучия на протяжении всей жизни. ^[1] . Установлено, что ген SRY необходим и достаточен для определяющей пол функции Y-хромосомы у млекопитающих ^[2] .

В настоящее время большинство методов генотипического определения пола используют обнаружение Y-хромосомы у мужчин. Цитогенетический анализ является традиционным методом не только определения пола, но и выявления других хромосомных аберраций. Это неинвазивный, недорогой и быстрый метод, но ему не хватает надежности и способности выявлять мозаицизм, а также другие хромосомные аномалии ^[3] .

До тех пор, пока не была разработана преимплантационная генетическая диагностика Х-сцепленных заболеваний, для быстрого и надежного определения пола использовалось большое количество методов, т. е. нерадиоактивная гибридизация in situ, флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) и метод мечения с грунтовкой на месте (PRINS) ^[4] . Эти методы были выполнены путем обнаружения Y-хромосомы в интерфазных или метафазных ядрах. Кроме того, сообщалось об определении пола с помощью анализа ДНК, то есть дот-блот-гибридизации и полимеразной цепной реакции (ПЦР) 9 .0005 [5] .

Определение пола на основе ПЦР по наличию (самцы) или отсутствию (самки) гена SRY уже было описано. Этот метод должен иметь внутренний контроль для проверки отсутствия гена SRY из-за сбоя амплификации ПЦР ^[6] .

В этом исследовании мы будем использовать локус ATL1 в качестве внутреннего контроля. ATL1 представляет собой последовательность гена FMR1, расположенного на длинном плече Х-хромосомы ^[7] .

Субъекты были в форме 20 случаев, включая 10 новорожденных с двойственными гениталиями, 2 взрослых женщин с задержкой полового созревания и 8 взрослых мужчин с бесплодием, в дополнение к 20 нормальным младенцам обоих полов в качестве контрольной группы. Эти случаи были переданы в отделение генетики детской больницы Университета Мансура, Египет, для оценки половых хромосом. Информированное согласие было получено от всех взрослых субъектов, а также от опекунов неонатальных и младенческих случаев. Эти эксперименты также получили признание университетского научного и этического комитетов.

Диагноз пола был предпринят с помощью осмотра, цитогенетического исследования ^[8] , УЗИ, биопсии гонад и гормонального анализа, в дополнение к амплификации ПЦР для обнаружения локусов генов SRY и ALT1 на Y и X хромосомах соответственно ().

Открыть в отдельном окне

Фотография продуктов электрофореза ПЦР, показывающая полосу размером 254 п.н. для SRY (Y-хромосома) и полосу размером 300 п. н. для ATL1 (Х-хромосома). На дорожках 1, 2 и 7 показаны положительные полосы как для X-, так и для Y-хромосом, тогда как дорожка 5 показывает только полосу положительного контроля для Y-хромосомы, а дорожки 3, 4 и 6 представляют собой отрицательные контроли без ДНК.

Выполнена экстракция ДНК. Амплификацию ПЦР и интерпретацию результатов проводили до получения результатов цитогенетики.

Каждая 15 мкл реакции ПЦР включала 100 нг ДНК, 1,5 мкл 10X буфера II (Perkin Elmer), 1 мкл 25 ммоль dNTP, 1,5 мМ MgCl2, 1 пмоль каждого из праймеров SRY и ATL1 и 0,25 единицы Taq ДНК-полимеразы. Все реакции ПЦР проводили в термоциклере (Perkin Elmer 480) при 94°C (2 мин) для начальной денатурации ДНК, после чего проводили 35 циклов по 94°С (15 с) для денатурации ДНК, 65°С (20 с) для отжига праймеров и 72°С (20 с) для удлинения праймеров, с финальным удлинением цикла при 72°С в течение 10 мин. Амплифицированные продукты ПЦР разделяли на 2,5% агарозных гелях, окрашивали бромистым этидием и визуализировали в УФ-трансиллюминации. Последовательности олигонуклеотидных праймеров: 5’-CAT GAA CGC ATT CAT CGT GTG GTC-3’; и 5′-CTG CGG GAA GCA AAC TGC AAT TCT T-3′ для SRY ^[9] ; и 5′-CCC TGA TGA AGA ACT TGT ATC TC-3′; и 5′-GAA ATT ACA CAC ATA GGT GGC ACT-3′ для ATL1 ^[10] .

Что касается неонатальных случаев с неоднозначными гениталиями, четыре показали положительную ПЦР-амплификацию как для X-, так и для Y-хромосом и кариограмму 46/XY. УЗИ органов малого таза не выявило структур мюллеровых протоков. Уровень 17ОН прогестерона не повышен. Их половые железы были семенниками. Поэтому им был поставлен диагноз частичной тестикулярной феминизации. У трех новорожденных была обнаружена положительная амплификация Y- и X-хромосом с мозаичной кариограммой 46, XX/XY; и внутренние органы, свидетельствующие о наличии структур мюллеровых протоков. Их гонады имели форму овитетестов. Они были диагностированы как настоящие гермафродиты.

У трех новорожденных наблюдалась положительная амплификация только Х-хромосомы, а кариограмма 46/ХХ. Внутренние структуры производных мюллеровых протоков были предложены, и у них был повышен уровень прогестерона 17ОН. У них был диагностирован адреногенитальный синдром. У одной из двух взрослых самок была обнаружена положительная амплификация Х-хромосомы и кариограмма 45/ХО, подтверждающая диагноз синдрома Тернера, а у другой – положительная амплификация Х- и Y-хромосом и кариограмма 46/ХУ со слепым синдромом. влагалище, отсутствие матки и неопущение тестикулярных гонад диагностировали как полную тестикулярную феминизацию. У 8 взрослых мужчин с бесплодием выявлена ​​положительная амплификация Х- и Y-хромосом и кариограмма 47/XXY в 7 случаях с диагнозом синдрома Клайнфельтера и 46/XY в одном случае с диагнозом дисгенезии гонад.

Половые хромосомы играют решающую роль в этиологии нормального полового развития. Для бипотенциальной гонады требуется по крайней мере две Х-хромосомы, чтобы превратиться в яичник. Альтернативно, при наличии гена SRY, расположенного на Y-хромосоме, развивается семенник. Несоответствие между хромосомным полом и внешним видом наружных половых органов может привести к половой двойственности. В случае сексуальной двойственности пациент может быть как истинным гермафродитом, так и псевдогермафродитом. У первых присутствуют и яичник, и семенники, а у вторых обе гонады либо отсутствуют, либо присутствует только одна из них.0005 [11] .

Результаты настоящего исследования продемонстрировали полезность микросателлитных маркеров X- и Y-хромосом в определении пола лиц с неоднозначными гениталиями. Положительная амплификация Y-хромосомы подтвердила цитогенетическую картину мозаицизма XX/XY, XXY (синдром Клайнфельтера) и дисгенезии гонад XY. Точно так же отрицательная амплификация Y-хромосомы полезна в случаях синдрома Тернера, чтобы исключить мозаицизм низкого уровня, который может потребовать кастрации в качестве профилактического шага против развития злокачественных новообразований гонад. Это также было полезно для подтверждения диагноза адреногенитального синдрома у женщин с неоднозначными гениталиями.

Фактически, ПЦР имеет большое значение в случаях мужского пола 46,ХХ, который характеризуется развитием яичек у субъектов, имеющих две Х-хромосомы, но не имеющих нормальной Y-хромосомы, которая иногда транслоцируется на одну из аутосом ^[12]. .

Случай с нормальной картиной 46/XY и бесплодием может быть объяснен McElreavey et al. которые сообщили о мутациях в SRY-ORF у -20% субъектов с полной дисгенезией гонад 46,XY. Мутации группируются в последовательностях, кодирующих домен HMG молекулы. Поскольку SRY отвечает за первичный этап детерминации семенников, можно ожидать, что мутации в SRY-ORF полностью блокируют формирование семенников ^[13] .

Интересно, что для точного определения пола плода можно использовать обычный анализ материнской плазмы методом гнездовой ПЦР. Результат был подтвержден рутинным анализом ткани плода, полученной инвазивным методом, или обследованием новорожденных после родов. Результат полностью согласовывался с обычным анализом тканей плода и обследованием новорожденных после родов ^[14] .

Тем не менее, Rajender et al. сообщили о случае SRY-негативного XX мужчины с полной маскулинизацией, но бесплодием. У пациента были полностью зрелые мужские гениталии с опустившимися, но маленькими яичками и без признаков недостаточной вирилизации. ПЦР-анализ генов SRY, ZFY, амелогенина, AZFa, AZFb, AZFc, пары праймеров из гетерохроматиновой области и шести Y-STR показал отсутствие какого-либо материала, происходящего от Y-хромосомы. Отсутствие гена SRY было подтверждено тремя независимыми ПЦР для каждого из двух наборов праймеров, покрывающих возрастающую длину гена 9.0005 [15] .

[1] Федерман Д.Д., Донахью П.К. Неоднозначные гениталии: этиология, диагностика и терапия. Adv Endocrinol Metab. 1995; 6: 91–116. [PubMed] [Google Scholar]

[2] Hawkins JR. Хум Мол Жене. 1994. Определение пола; стр. 1463–7. 3 Spec No. [PubMed] [Google Scholar]

[3] Macia Bobes C, Alonso Troncoso I, Botas Cervero P, Castano Fernandez G, Fau Cubero C. Клинико-генетическое исследование мужчины 46, XX с оккультным мозаицизмом. Арка Эсп Урол. 2002 г., октябрь; 55 (8): 952–4. [PubMed] [Академия Google]

[4] Делханти Д.Д., Гриффин Д.К., Хэндисайд А.Х., Харпер Дж., Аткинсон Г.Х., Питерс М.Х., Уинстон Р.М. Обнаружение анеуплоидии и хромосомного мозаицизма у эмбрионов человека во время преимплантационного определения пола с помощью флуоресцентной гибридизации in situ, (FISH) Hum Mol Genet. 1993 г., август; 2 (8): 1183–1185. [PubMed] [Google Scholar]

[5] Kao SM, Tang GC, Hsieh TT, Young KC, Wang HC, Pao CC. Анализ периферической крови беременных женщин на наличие специфичных для Y-хромосомы плода последовательностей дезоксирибонуклеиновой кислоты гена ZFY. Am J Obstet Gynecol. 1992 марта; 166 (3): 1013–109. [PubMed] [Google Scholar]

[6] Сантос Ф.Р., Пандья А., Тайлер-Смит С. Надежность ДНК-тестов на определение пола. Нат Жене. 1998 февраля; 18 (2): 103. [PubMed] [Google Scholar]

[7] Gunter C, Paradee W, Crawford DC, Meadows KA, Newman J, Kunst CB, Nelson DL, Schwartz C, Murray A, Macpherson JN, Sherman SL, Warren ST. Повторное исследование факторов, связанных с экспансией повторов CGG, с использованием однонуклеотидного полиморфизма в FMR1. Хум Мол Жене. 1998 ноябрь; 7 (12): 1935–46. [PubMed] [Академия Google]

[8] Ellaithi M, Gisselsson D, Nilsson T, Abd El-Fatah S, Ali T, Elagib A, Ibrahim ME, Fadl-Elmula I. A del(X) (p11), несущий последовательности SRY у младенца с неоднозначным гениталии. БМС Педиатр. 2006 г., апрель; 4: 6–11. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

[9] Cui KH, Warnes GM, Jeffrey R, Matthews CD. Определение пола предимплантационных эмбрионов с помощью амплификации генов, определяющих семенники человека. Ланцет. 1994 г., 8 января; 343 (8889): 79–82. [PubMed] [Google Scholar]

[10] Gunter C, Paradee W, Crawford DC, Meadows KA, Newman J, Kunst CB, Nelson DL, Schwartz C, Murray A, Macpherson JN, Sherman SL, Warren ST. Повторное исследование факторов, связанных с экспансией повторов CGG, с использованием однонуклеотидного полиморфизма в FMR1. Хум Мол Жене. 1998 ноября; 7 (12): 1935–46. [PubMed] [Google Scholar]

[11] Султан С., Пэрис Ф., Жандель С., Лумброзо С., Галифер Р.Б. Неоднозначные гениталии у новорожденного. Семин репрод мед. 2002 авг.; 20 (3): 181–8. [PubMed] [Google Scholar]

[12] Fechner PY, Marcantonio SM, Jaswaney V, Stetten G, Goodfellow PN, Migeon CJ, Smith KD, Berkovitz GD, Amrhein JA, Bard PA, et al. Роль гена Y определяющей пол области в этиологии мужского пола 46,XX. J Clin Endocrinol Metab. 1993 г., март; 76 (3): 690–5. [PubMed] [Академия Google]

[13] McElreavey K, Vilain E, Barbaux S, Fuqua JS, Fechner PY, Soulereau N, Doco-Fenzy M, Gabriel R, Quereux C, Felloous M, Berkovitz GD. Потеря последовательностей 3’ к гену, определяющему семенники, SRY, включая псевдоаутосомную границу Y, связанную с частичной детерминацией семенников. Proc Natl Acad Sci, США. 1996 г., 6 августа; 93 (16): 8590–4. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

[14] Tungwiwat W, Fucharoen G, Ratanasiri T, Sanchaisuriya K, Fucharoen S. Неинвазивное определение пола плода с использованием обычного гнездового ПЦР-анализа ДНК плода в материнской плазме . Клин Чим Акта. 2003 г., август; 334 (1–2): 173–7. [PubMed] [Академия Google]

[15] Rajender S, Rajani V, Gupta NJ, Chakravarty B, Singh L, Thangaraj K. SRY-отрицательный мужчина 46, XX с нормальными гениталиями, полной маскулинизацией и бесплодием. Мол Хум Репрод. 2006 г., май; 12 (5): 341–6. [PubMed] [Google Scholar]

Что такое ПЦР-тест и как он работает?

Тест полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет обнаружить генетический материал из образца патогена или аномальной клетки. Способы сбора образцов включают мазок из носа, мазок слюны или взятие образца крови.

ПЦР-тестирование позволяет исследователям делать множество копий небольшого участка ДНК или РНК в процессе, который некоторые называют «молекулярным фотокопированием».

Этот метод имеет множество применений. Эксперты в области здравоохранения могут использовать ПЦР-тесты как быстрый и точный способ диагностики инфекционных заболеваний, выявления генетических изменений, которые могут вызывать заболевания, и выявления небольшого количества раковых клеток.

В этой статье мы более подробно рассмотрим, что такое тесты ПЦР, в том числе как они работают и как врачи интерпретируют результаты.

Поделиться на PinterestJulian Stratenschulte/picture Alliance через Getty Images

Американский биохимик доктор Кэри Маллис разработал метод ПЦР в 1983 году. Это быстрый и недорогой способ копирования небольших сегментов генетического материала.

Обычно для молекулярного и генетического тестирования необходимы большие количества ДНК, но метод ПЦР позволяет ученым создавать миллионы копий из очень небольшого количества ДНК.

ПЦР является распространенным методом в медицинских и биологических исследовательских лабораториях, и существует множество приложений.

Однако «тест ПЦР» обычно относится к быстрому и точному диагностическому тесту на ранние признаки инфекционного заболевания. Например, это один из способов тестирования на SARS-CoV-2, вирус, вызывающий COVID-19.

Из-за пандемии COVID-19 многие люди познакомились с термином «ПЦР-тест». Но этот метод имеет множество медицинских применений, помимо тестирования на COVID-19.

Эксперты в области здравоохранения также могут использовать тест ПЦР для обнаружения небольшого количества раковых клеток и генетических изменений, которые могут вызвать заболевание. ПЦР-тесты также могут обнаруживать другие патогены, вызывающие такие заболевания, как:

• грипп
• туберкулез
• ВИЧ
• Эбола
• гепатит С

ПЦР-тест амплифицирует последовательности ДНК. Он включает в себя праймеры ДНК, основания ДНК, ферменты, буферный раствор и термоциклирование, чтобы помочь воспроизвести эти последовательности.

Первый шаг — взять образец у человека, проходящего тест. Мы опишем допустимые типы образцов ниже.

Затем исследователь лаборатории использует специальную машину для нагрева образца. Это разделяет ДНК внутри на две части одноцепочечной ДНК. Затем реакционная смесь охлаждается, чтобы праймеры могли прикрепиться к последовательностям матричной ДНК. Затем он снова нагревается, позволяя ферменту, известному как Taq-полимераза, добавлять основания ДНК к матрицам. Этот процесс дублирует исходный образец ДНК, создавая две нити.

Машина может автоматизировать весь этот процесс и повторять его столько раз, сколько необходимо для создания множества точных копий исходного сегмента ДНК.

В диагностическом тесте ПЦР машина может обнаружить присутствие патогена после репликации генетического материала. Однако некоторые вирусы, в том числе SARS-CoV-2, состоят из РНК, а не из ДНК. Для этих вирусов РНК подвергается процессу, называемому ПЦР с обратной транскрипцией (rtPCR). Это превращает РНК в ДНК перед ее копированием.

Время, необходимое для получения результатов теста ПЦР, может варьироваться от нескольких минут до нескольких дней. Анализатор на месте дает быстрые результаты. Получение результатов может занять больше времени, когда врачи отправляют образцы в стороннюю лабораторию из-за задержек обработки.

ПЦР-тесты надежно обнаруживают наличие SARS-CoV-2. Систематический обзор и метаанализ 2021 года показали, что тесты на этот вирус были точными в 97,2% случаев.

В зависимости от причины проведения ПЦР-теста положительный результат может свидетельствовать о наличии возбудителя, раковых клеток или генетических изменений. Отрицательный результат говорит об их отсутствии.

На примере COVID-19 положительный результат ПЦР указывает на то, что тест обнаружил в образце SARS-CoV-2. Это говорит о том, что у человека может развиться COVID-19. У некоторых людей вирусная инфекция протекает без развития симптомов заболевания.

Отрицательный результат теста указывает на отсутствие SARS-CoV-2 в образце. Однако ложноотрицательный результат может возникнуть, если в образце было недостаточно вирусного материала, чтобы тест мог его обнаружить. Это может произойти, если человек проходит тест слишком рано после контакта с вирусом.

Типы ПЦР-тестов различаются в зависимости от используемого образца. К распространенным типам относятся:

• Мазок из носа: Это включает взятие мазка для взятия образца из задней части носа и горла.
• Мазок со средней носовой раковины: Часто называемый мазком NMT, он включает взятие образца из глубины ноздри.
• Слюна: При сдаче этого образца слюна выплевывается в пробирку.
• Кровь: Для некоторых типов ПЦР-тестов требуется образец крови, взятый из вены.

Сдача образца для ПЦР-теста обычно занимает всего несколько минут и не требует подготовки. Человеку может потребоваться заполнить форму, указав, например, свое имя и дату рождения.

Следующие шаги зависят от типа образца, который требуется для теста. Например, медицинскому работнику может потребоваться ввести длинный тампон в ноздрю человека, или человек может сделать это самостоятельно. Человек, берущий образец, вращает тампон в ноздре в течение 10–15 секунд, прежде чем вынуть его и сделать то же самое во второй ноздре.

ПЦР-тесты обычно представляют небольшой риск, если таковой имеется.

Побочные эффекты могут зависеть от типа пробы. Например, после сдачи крови могут появиться небольшие боли или кровоподтеки, но они, как правило, быстро проходят.

Мазок из носа, горла или того и другого может вызвать легкий кашель, дискомфорт и легкое рвотное ощущение. Они должны быть легкими и временными.

С помощью ПЦР можно проверить наличие патогена, например вируса, раковых клеток или генетических изменений.

Во время продолжающейся пандемии COVID-19 человек может пройти тест ПЦР, чтобы проверить наличие основного вируса SARS-CoV-2.

Текущие рекомендации предполагают, что человек должен пройти тест на SARS-CoV-2, если у него есть:

• симптомы COVID-19, даже после вакцинации
• он имел тесный контакт с человеком, у которого был положительный результат теста
• принимал участие в мероприятиях которые повышают риск развития инфекции
• вас попросили пройти обследование у медицинского работника или в отделе здравоохранения

Многие тесты позволяют выявить наличие патогенов, включая SARS-CoV-2.