Мощный иммуностимулятор: Иммуностимуляторы — список препаратов от врача-эксперта

Содержание

Иммуностимуляторы натуральные недорогие: лучшие иммуностимуляторы

За последний год каждый человек убедился, насколько важно и нужно заботиться о здоровье и укреплять свой иммунитет. Люди по-новому взглянули на витамины и минералы, стали чаще и дольше гулять на свежем воздухе, заниматься спортом и пересмотрели свой подход к ежедневному питанию.

shutterstock.com

Все чаще мы слышим слово «иммуностимуляторы», но не особо понимаем, кому и зачем они нужны. Разбираемся вместе с Анной Дробышевой, нутрициологом, экспертом международного маркетплейса iHerb.

Что такое иммуностимуляторы

Иммуностимуляторы — вещества, которые влияют на иммунную систему, усиливают ее работу. Синтетические, искусственно созданные иммуностимуляторы продаются в аптеках, могут иметь противопоказания, негативно влиять на организм. Природные средства используются с древних времен, положительно влияют на иммунитет и практически не имеют противопоказаний.

shutterstock.com

Куркума

Многолетнее растение семейства имбирных. Приправа готовится из корня куркумы, который видом напоминает имбирь и обладает насыщенным ярко-рыжим цветом. Ее целебные свойства известны несколько тысяч лет, а известный напиток из куркумы называют «золотым молоком».

В куркуме содержится куркумин — желто-оранжевый пигмент, который ценится за многочисленные полезные для здоровья качества. За последние 30 лет более 8 тысяч исследований посвящены изучению его свойств и влияния на различные механизмы, происходящие в нашем организме.

shutterstock.com

Куркумин оказывает антиоксидантное, противовоспалительное и антивозрастное действие. Он также воздействует на клеточный белковый баланс, восстанавливая функцию клеток после того, как они подвергаются воспалению и повреждению. Также куркумин защищает мозг от старения. В 2017 году ученые из Калифорнийского университета провели исследование, в котором в течение 18 месяцев тестировали 40 человек от 51 до 84 лет с нарушением внимания и памяти. Ученые-медики использовали высокобиодоступную форму куркумина — теракурмин или плацебо. Результаты исследования показали значительное улучшение памяти и концентрации внимания, а также общего состояния и настроения у тех, кто принимал куркумин. Еще одно исследование показало: куркумин улучшает здоровье суставов, делает их более выносливыми.

Куркуму можно употреблять в качестве приправы к различным блюдам, добавлять порошок в чаи и соки, полоскать теплой водой с куркумой воспаленное горло. Единственным противопоказанием может быть аллергическая реакция на куркуму, поэтому специалисты рекомендуют проверить наличие аллергии на специю. Если хотите принимать куркумин в таблетках и пищевых добавках, лучше проконсультироваться с врачом или нутрициологом, чтобы определить необходимую дозировку и курс приема.

shutterstock.com

Эхинацея

Когда говорят об эхинацее для здоровья, обычно имеют в виду эхинацею пурпурную. Обыкновенный с первого взгляда симпатичный розовый цветок обладает составом, который ценился и использовался индейцами доколумбовой Америки. Свойства и воздействие эхинацеи на иммунитет и на организм человека активно исследуются до сих пор.

В зелени эхинацеи содержатся полисахариды, эфирные масла, флавоноиды, оксикоричные кислоты, дубильные вещества, сапонины, полиамины, эхинацин, эхинолон, эхинакозид, органические кислоты, смолы, фитостерины. А корни и корневища имеют в своем составе инулин, глюкозу, эфирные и жирные масла, фенолкарбоновые кислоты, бетаин, смолы. Все части растения содержат ферменты, калий, кальций, селен, кобальт, серебро, молибден, цинк, марганец и многое другое.

shutterstock.com

Эхинацея играет роль мощного природного иммуностимулятора, влияя одновременно на врожденный и на приобретенный иммунитеты. Исследования показывают: растение способно уменьшить вероятность развития респираторных заболеваний и их продолжительность. Эхинацея обладает антиоксидантным действием, выводя вредные токсины из организма, защищая клетки от разрушения, а также антибактериальным свойством, подавляя рост бактерий, грибов и вирусов. Эхинацея активизирует синтез интерферонов и повышает иммунитет, регулирует содержание сахара в крови.

Сегодня на рынке можно найти капли, настойки, порошки, сушеную траву для отваров, а также различные таблетки и капсулы. Основными противопоказаниями для применения является беременность и кормление грудью, наличие у человека системных заболеваний. Перед приемом рекомендуется проконсультироваться со специалистом, поскольку это растение сильно влияет на иммунитет — лучше убедиться, что действие его будет правильное.

shutterstock.com

Прополис

Смолистое вещество, которым пчелы замазывают щели в улье, а также используют в качестве дезинфекции. Они собирают клейкое вещество с весенних почек ольхи, березы, тополя и обрабатывают своими ферментами. Так получается прополис.

В состав входит 16 органических веществ и более 200 органически активных соединений. Этот «клей» содержит витамины, минералы и микроэлементы, которые необходимы человеку.

Прополис укрепляет иммунитет и повышает способность организма противостоять инфекциям. Его задача в улье — защищать пчел от вирусов, бактерий и других микроорганизмов. Вне улья он продолжает свою работу, уже внутри нашего организма, повышая его противомикробную сопротивляемость.

shutterstock.com

Прополис способен стимулировать иммунную систему. Исследования показывают, что он обладает антиоксидантными свойствами, защищает печень и обладает противовоспалительным действием. Он сокращает продолжительность заболеваний и оказывает защитное действие на верхние дыхательные пути. Его рекомендуют принимать при простудных заболеваниях, желудочно-кишечных инфекциях, для общего укрепления иммунной системы, при разного вида воспалениях и грибковых заболеваниях.

shutterstock.com

Прополис можно найти в натуральном виде или в форме капсул, настоек, капель, спреев и таблеток. Как перед приемом любой добавки, рекомендуется консультация нутрициолога или другого специалиста, чтобы корректно подобрать дозировку и определить длительность курса. Одним из основных противопоказаний называют аллергические реакции на мед и любые продукты пчеловодства. Поэтому важно убедиться, что продукт безопасен для взрослого или ребенка.

Канал про ЗОЖ в телеграме! Подписывайся

какие продукты помогают укрепить иммунитет

Защитить себя и своих близких от вирусных заболеваний – это основная задача на сегодняшний день. Помогают ли природные иммуномодуляторы справиться с этой задачей? Об этом в эфире телеканала "Россия 1" рассказала доктор медицинских наук Светлана Трофимова.

"Все мы знаем, что имеются такие вещества, как иммуномодуляторы. Но существуют и иммуностимуляторы, иммунодепрессанты. Это абсолютно разные вещества", – рассказала Трофимова. Она пояснила: иммуномодуляторы регулируют функцию иммунной системы, не подавляя и не активируя чересчур ее работу. Иммуностимуляторы же, наоборот, могут активизировать работу нашей иммунной системы и вызвать нарушение функций организма.

Все эти вещества могут иметь растительное, животное или синтетическое происхождение. Важно подобрать препараты, которые "комплиментарны" организму. Для этого надо проконсультироваться с врачом-иммунологом. Неправильный подбор препарата чреват последствиями: так, синтетические иммуностимуляторы могут "подстегнуть" развитие аутоиммунных заболеваний.

"Например, артрит, бронхиальная астма. Иммуностимуляторы могут провоцировать возникновение или активацию этих процессов", – пояснила Трофимова. Все зависит от состояния иммунитета человека, от возраста, от того, какими заболеваниями он страдает, от дозировки препаратов.

 

Некоторые иммуномодуляторы мягко стимулируют те или иные звенья нашей иммунной системы. Среди них – мед и пчелиное маточное молочко.

"Препараты из меда обладают противовирусным действием, – отметила Трофимова. – В частности, и маточное молочко, и мед подавляют активность простого герпеса".

Также мощной биологической активностью обладают тимьян, розмарин и куркума. Мощнейшими природными антибиотиками являются чеснок, хрен и имбирь. В состав чеснока, например, входит такое вещество, как аллицин. Его концентрация в чесноке не так велика, как в таблетке или в капсуле, но для здорового человека этого достаточно. Еще один растительный иммуномодулятор – экстракт эхинацеи. Этот препарат поможет в профилактике вирусных и острых респираторных заболеваний.

В каких случаях нужно прибегнуть к иммуномодуляторам? У ослабления иммунитета может быть целый ряд признаков, например, ухудшение кровообращения и как результат – холодные руки и ноги. Еще один признак – апатия и постоянное чувство усталости и слабости. Все это – поводы обратиться к иммунологу.

Ранее врач-инфекционист Елена Цыганова рассказала, кому не стоит есть чеснок. По ее словам, чеснок может сильно навредить при гастрите, язве желудка или двенадцатиперстной кишки.

AHCC - мощный иммуностимулятор

Описание

AHCC—Active Hexose Correlated Compounds — Активный Гемицеллюлозный Компонент (что примерно означает: активный грибной состав).   

 AHCC - это уникальный, очень дорогой компонент, который изготавливается одной единственной компанией в мире, находящейся в Японии ( г. Саппоро), и в данный момент AHCC входит в число самых перспективных средств для повышения иммунных функций при онкологических заболеваниях, а также при гепатитах В и С.

Процесс изготовления AHCC  представляет собой культивирование гибрида из грибов шиитаке, майтаке и рейши. Выращивается этот гибрид в жидкой питательной среде, основа которой - неочищенный (коричневый) рис. Грибы выделяют ферменты в эту жидкую среду, с их помощью переваривают находящиеся там питательные вещества и поглощают их. В ходе этого процесса целлюлоза риса, полисахарид с высоким молекулярным весом, расщепляется ферментами грибов на мелкие фрагменты – олигосахариды. В определенный момент вот из этих продуктов ферментации и самого мицелия (грибницы) получают этот интересный компонент AHCC. Таким образом,

AHCC – это смесь высокомолекулярных полисахаридов из самой грибницы (70%) и мелких олигосахаридов (20%) из продуктов ферментации. Эти мелкие олигосахариды обладают высокой биодоступностью, и благодаря им продукт приобретает принципиально новые свойства, в отличие от обычных смесей лечебных грибов. Следствие - мощная стимуляция иммунной системы.

 Показания к применению АНСС:

- Доброкачественные и злокачественные новообразования.

- Иммунодефицит.

- Гепатиты В и С.

- Диабет.

- Герпес.

- Кожные вирусные заболевания.

- Атопические дерматиты.

- Синдром хронической усталости.

 

Воздействие полисахаридов АНСС на рецепторы:

 

1. Воздействие полисахаридов АНСС на рецепторы и их поглощение макрофагами ведет к тому, что макрофаги:

- активируют Т-хелперы;

- выделяют интерлейкин-12, который направляет развитие Т-хелперов на обеспечение клеточного звена иммунитета, а также резко усиливает активность натуральных киллеров, основных борцов с опухолевыми клетками.

- секретируют другие цитокины: интерлейкины 1, 6, фактор некроза опухолей альфа, которые усиливает воспалительные реакции и интегрируют защитные реакции всего организма.

2. Активированные Т-хелперы:

- начинают выделять интерлейкин-2, который приводит к размножению и активации Т-хелперов, а также Т-киллеров, макрофагов и натуральных киллеров, которые усиливают свою цитотоксичность по отношению к опухолям.

- воздействуют на макрофаги интерфероном-гамма и фактором некроза опухолей-альфа, в результате чего макрофаги приобретают противопухолевые свойства (способность перерабатывать опухолевые антигены, выделение факторов некроза опухолей альфа и бета, прямое разрушение опухолевых клеток и др.)

- с помощью интерлейкина-3 и колоний-стимулирующих факторов усиливают процессы кроветворения.

Есть все основания полагать, что низкомолекулярные компоненты AHCC оказывают прямое митогенное (стимулирующее размножение) действие на Т-хелперы.

3. Активированные натуральные киллеры резко усиливают свое противоопухолевое действие и выделяют интерферон-гамма, который активирует макрофаги.

Можно также предполагать, что низкомолекулярные компоненты оказывают прямое стимулирующее действие на натуральные киллеры.

4. Прямое противоопухолевое действие AHCC.

 Некоторые компоненты AHCC оказывают прямое противоопухолевое действие, ингибируя рост опухолей и нейтрализуя факторы опухолей, подавляющие иммунную систему (типа трансформирующего фактора роста-бета).Возникновение опухолевого процесса происходит при ослаблении иммунной системы. Большинство опухолей, в силу того, что они происходят из собственных тканей организма, обладают слабой иммуногенностью. Злокачественный рост всегда сопровождается значительным ослаблением иммунных функций. Особенно резко уменьшается число Т-хелперов 1 типа, которые являются организаторами иммунного ответа со стороны клеточного звена иммунитета. А именно Т-киллеры, натуральные киллеры, К-клетки, макрофаги играют главную роль в противоопухолевом иммунитете. Кроме того, иммунная система резко ослабляется после операций, радиотерапии и химиотерапии.

5. Защитное действие АНСС в отношении печени.

АНСС обладает выраженным защищающим действием в отношении печени, что важно не только при лечении гепатитов, то также обеспечивает общие способности организма к детоксикации, а также обеспечивая его различными биомолекулами, синтез которых происходит в печени.

6. Антиоксидантное действие АНСС.

АНСС оказывает выраженное антиоксидантное действие, что важно при комплексной терапии злокачественных заболеваний, реабилитации после радио- и химиотерапии.

 

Экстракт AHCC признан одним из самых мощных известных иммунных стимуляторов.

АНСС - является дополнением к медицинским показаниям для уменьшения тошноты, рвоты, болей, подавления аппетита, предупреждения повреждения печени, выпадения волос, и противодействие подавлению иммунитета у пациентов, подвергающихся химиотерапии. Доказано, что применение AHCC приводит к улучшению качества жизни и общей выживаемости.

Препарат AHCC сертифицирован как на территории Японии так и на территории РФ, и имеет Свидетельство о государственной регистрации.

Способ употребления

Принимать по 1-3 пакетика в день.

В упаковке 33 пакетика. Действующего вещества в 1 пакетике - 900 mg !

Противопоказания

Индивидуальная непереносимость компонентов продукта.

Во время беременности, в период лактации, приеме лекарств необходимо проконсультироваться с лечащим врачом.

Не является лекарственным средством.

35 рецептов для повышения иммунитета

В этих рецептах использованы только натуральные продукты, так сказать, народные средства. Изучайте, выбирайте наиболее подходящий для вас рецепт. Если есть сомнения, проконсультируйтесь со специалистами. Повышайте, поднимайте, укрепляйте иммунитет и… Будьте здоровы!!!

1. 300 г очищенных грецких орехов, 300 г кураги, 300 г изюма и 3 лимона с цедрой пропустите через мясорубку и добавьте 1 ст. ложку меда. Принимайте по 1 столовой (взрослым) и 1 чайной (детям) ложке в день. Лучше утром натощак или перед обедом, за час до еды. Можно принимать и на ночь. Храните в холодильнике.

Есть и такой вариант: Взять по 1 стакану грецких орехов, изюма и кураги и 1 лимон (можно без кожуры). Все перекрутить на мясорубке и добавить 1 стакан меда, перемешать. Кто то добавляет еще и инжир по вкусу.

2. Смешайте 100 г очищенных молотых грецких орехов, 100 г протертых очищенных яблок, сок 2 лимонов, 1 ст. ложку меда. Принимайте состав по столовой ложке (чайной для детей) 2-3 раза в день перед едой. Храните в холодильнике.

3. Весной в течение 3 недель принимайте любые свежевыжатые соки красного цвета: свекольный, вишневый, ежевичный, клубничный, виноградный, гранатовый, клюквенный. В первую неделю рекомендуется принимать по 1/2 стакана 3 раза в день, во вторую — 2 раза, в третью — 1 раз а промежутках между приемами пищи.
Через 10 дней курс можно повторить.

4. Протереть 1 кг ягод черноплодной рябины с 1, 5 кг сахара. Употреблять можно 3 недели по 1 ст. ложке, утром и вечером.

Можно сделать настой: 1 ст. ложку ягод в 1 стакане кипятка настаивать в термосе 4-5 часов. После того как содержимое настоится 20 минут, закрыть термос пробкой.

5. Размять 0,5 кг клюквы, добавить стакан ядер грецкого ореха и 2-3 зеленых (лучше зимних сортов) яблока с кожурой, порезанных кубиками. Добавить 0,5 стакана воды и 0,5 кг сахара, варить на слабом огне, пока не закипит, выложить в банки. Принимать по 1 ст. ложке утром и вечером , запивая чаем.

6. 2 ст. ложки сушенных ягод рябины обыкновенной залить 2 стаканами кипятка, настоять 20 минут, процедить. Пить по 0,5 стакана 3-4 раза в день до еды. Принимать лучше с медом, который усиливает целебные свойства рябины.

7. Защитные силы организма можно повысить витаминным компотом, который рекомендуется пить не менее 0,5 литра в день.

Взять травы: мелиссу, мяту, цветы каштана, иван-чай, заварить по 5 ст. ложек в 1 л воды и оставить настаиваться 2 часа.

Взять клюкву, черную смородину, калину, вишню, клубнику, любые другие местные фрукты (можно сухие или замороженные), сварить из них компот в 2 литрах воды в течение 10 минут.

Добавить к компоту процеженный отвар трав, довести до кипения, добавить мед по вкусу.

8. Растереть ягоды калины, брусники, добавить мед по вкусу, хорошо перемешать, добавить немного горячей воды, подождать, пока смесь настоится. Пить смесь по 1/2 стакана 3 раза в день в период сезонных заболеваний.

9. Отличным помощником для иммунной системы является шиповник. Его плоды используют как витаминное средство при авитаминозах, для профилактики инфекционных заболеваний, в качестве мочегонного, желчегонного, противовоспалительного, ранозаживляющего средства.

Рецепт напитка: залить 8 ст. ложек сухих плодов 4 стаканами кипятка, добавить 4 ст. ложки сахара и кипятить 10 минут. Настаивать в течение 4 часов, затем процедить и разлить в бутылки.

10. 2-3 головки лука среднего мелко нарезать и смешать с 200 г сахара. Добавить 0,5 л воды и варить на тихом огне не менее полутора часов. Когда масса охладится, добавить в нее 2 ст. л меда. Процедить и прелить в стеклянную посуду. Принимать по 1 ст. ложке 3-5 раз в день.

Используется не только для укрепления иммунитета, но и для профилактики простудных заболеваний.

11. Поднимает иммунитет и является прекрасным профилактическим средством против сезонных вирусных заболеваний настой такого состава: плоды шиповника, калины, взятые примерно поровну, пропорционально добавьте травы — мелиссу и шалфей. 2,5 ст. ложки смеси залить 0,5 л крутого кипятка, настаивать 2 часа в термосе, охладить. Перед употреблением добавить 2 капли облепихового масла.

12. Раз в день за 30 минут до еды принимать по 1 ст. ложке профилактической смеси, приготовленной из среднего размера головки чеснока. Чеснок должен быть измельчен, к нему добавить половину мелко нарезанного лимона вместе с цедрой. Залить смесь холодной кипяченной водой (0,5 л) и дать возможность настояться 4-5 дней в темном месте. Как профилактическое средство можно употреблять до самой весны.

Можно просто съедать по зубчику чеснока ежедневно или через день. Наружное средство: 2-3 зубчика мелко нарезанного чеснока залить стаканом кипятка, после того как средство настоится в течение часа, можно капать по 4-5 капель в нос, а так же полоскать горло.

13. 1 ст. ложку хвоща залить стаканом кипятка, настоять 30 минут и процедить.
Принимать по 1 ст. ложке 3-4 раза в день.

14. Грецкий орех является абсолютным чемпионом по содержанию аскорбиновой кислоты. Ее в нем в 8 раз больше, чем в черной смородине и в 50 раз больше,чем в цитрусовых.
2 ст. ложки листьев грецкого ореха залить 0,5 л кипятка, подержать на водяной бане 2 часа, пить по 1/4 стакана в день. Можно просто съедать 5-6 ядер грецкого ореха в течение месяца.

15. 1 ст. ложку листьев березы белой с почками залить 1,5 стаканами крутого кипятка. Настоять 15-20 минут, пить по 1/4 стакана 3-4 раза в день до еды.

16. 1 ст. ложку шишек хмеля залить стаканом кипятка, настоять 15-20 минут, процедить. Пить по 1/4 стакана 3-4 раза в день до еды.

17. Чайную ложку сухой травы чистотела залить стаканом кипятка, охладить. Принимать в теплом виде по 1/3 стакана 3 раза в день.

18. Очень полезен чай из семян фенхеля, также можно использовать семена, которые продаются в аптеках. Прекрасный эффект дает регулярное употребление тыквы, кабачков, патиссонов, цуккини, петрушки, сельдерея и любой зелени.

19. Мелисса, корень валерианы, шишки хмеля, цветы липы, трава душицы, пустырник и семя кориандра берутся примерно в равных частях. Сбор заваривается из расчета 1 ст. ложка сбора на 0,5 л крутого кипятка. Сбор поставить настаиваться на ночь, к утру он готов. Объем настоя рассчитан на день, применять в 2-3 приема.

20. В зеленый чай добавить шиповник, красную рябину, мелиссу, иван-чай, лист земляники, зверобой, лист черной смородины, лепестки роз. Такой чай будет сильным укрепляющим средством, стимулирующим иммунитет.

21. Эхинацея пурпурная содержит биологически активные вещества, применяют ее в виде отвара или настойки.

Рецепт отвара: 2 ст. ложки травы поместить в эмалированную посуду, залить 200 мл горячей кипяченой воды, закрыть крышкой. Кипятить 30 минут на водяной бане при частом помешивании. Охладить, процедить, добавить охлажденной кипяченой воды до 200 мл.
Принимать внутрь по 1 ст. ложке 3 раза в день за 20-30 минут до еды. Отвар считается пригодным к употреблению не более двух суток при хранении в прохладном месте.

Рецепт настойки: 50 г сырья залить 0,5 л водки, настаивать 6 дней в темном прохладном месте, процедить. Принимать по 20 капель 3 раза в день за 20-30 минут до еды, разводя небольшим колличеством воды. Полный курс лечения 2-3 недели. После перерыва в 5-7 дней его можно повторить.

22. Болиголов пятнистый - сильнодействующий иммуностимулятор, активирующий защитные силы организма.

Болиголов не применяется как профилактическое средство, он помогает в тех случаях, когда болезнь уже наступила и иммунная система значительно ослаблена. Это растение надо применять только по назначению врача и строго соблюдать дозировку.

23. Сабельник болотный — мощный иммуностимулятор.

Рецепт настойки: 60 г сабельника высыпать в полулитровую посуду, залить водкой, закрыть крышкой и настаивать 7-8 дней в темном месте. Настойку пить по 1 ст. ложке 3 раза в день до еды. Для профилактических целей достаточно 1 л настойки.

24. Прекрасно повышают иммунитет перепелиные яйца. Их следует выпивать утром натощак, начиная с 2 до 7-8 штук.

25. Из хвои получаются прекрасные витаминные настои и напитки, которые оказывают общеукрепляющее действие на организм. Они несложны в приготовлении.

Нарезать 3-4 стакана хвои как можно мельче, залить 4 стаканами холодной воды, добавить немного лимонной кислоты, дать настояться 3 дня в прохладном месте. Процедить, добавить лимонного сока, принимать по половине стакана 2 раза в день.

26. Можно приготовить такой напиток: взять 2 ст. ложки хвои, промыть ее в холодной воде, залить стаканом кипятка, кипятить 20 минут, настоять 30 минут и процедить. Перед употреблением добавить мед и лимонную кислоту по вкусу и пить по стакану в день в 2-3 приема.

27. Анис обыкновенный. Отвар плодов аниса: 4 г плодов залить стаканом кипятка, кипятить 6-7 минут, процедить, принимать по 2 ст. ложки в день.

28. Арника горная. 1 часть мелко нарезанных цветков залить 10 частями 70-% спирта, настоять 7 дней, процедить, принимать внутрь по 30-40 капель 3 раза в день для профилактики гриппа, укрепления иммунитета.

Или: 1 ч ложку цветков залить 1 стаканом кипятка, настаивать 1-2 часа, процедить. Принимать настой внутрь по 1 ст. ложке 3-4 раза в день после еды.

29. Астрагал. 10 г измельченных сухих корней залить 200 мл кипятка, прокипятить 6-7 минут на слабом огне, настоять 3 часа, процедить, добавить кипяченой воды до исходного количества. Принимать по 1/4 стакана 3 раза в день.

30. Береза. 4 ч ложки сухих листьев березы залить 2 стаканами кипятка, настоять 2 часа, процедить. Пить по 1/2 стакана 3-4 раза в день.

Или: 2 ч ложки березовых почек залить 2 стаканами кипятка, варить на слабом огне 10-12 минут, настоять 25 минут, процедить. Пить по 1/2 стакана 3-4 раза в день.

31. Вахта. 2 ч ложки измельченных листьев залить 1 стаканом кипятка, настоять 20 минут, процедить. Пить по 1/4 стакана за полчаса до еды.

32. Зверобой. 10 г травы заварить в стакане кипятка, настоять. Принимать по 1 ст. ложке 3-4 раза в день после еды.

Или: 15-20 г сухой травы настоять в 200 мл спирта или водки. Принимать по 25 капель с водой 3 раза в день после еды.

33. Золотая розга (золотарник обыкновенный). 2 ч. ложки травы настоять 4 часа в стакане кипяченной воды, процедить. Принимать по 1/4 стакана 4 раза в день до еды.

34. Крапива. 2 ст. ложки листьев крапивы залить 0,5 литра кипятка, настоять 2 часа, процедить. Пить по 1/3 стакана 3 раза в день.

35. Полезен рыбий жир, который не только способствует повышению иммунитета, но и нормализует обменные процессы в организме. Рыбий жир рекомендуется принимать с осенних месяцев до середины весны по 1-2 чайной ложки в день.

Почему не надо поднимать иммунитет

Пора осенне-зимних простуд неотвратимо приходит к каждому из нас ежегодно. Особую озабоченность это вызывает у мам, дети, которых пошли в садики. И началось: в аптеках тоннами скупаются иммуномодуляторы – препараты, поднимающие иммунитет. Надо ли принимать такие лекарства, а особенно давать их детям? И как же поднять иммунитет?

Владимир Мищенко, врач-терапевт

Для начала – что такое иммунитет? Официальное определение: иммунитет (от лат. Immunitas - освобождение, избавление от чего-либо) – это невосприимчивость организма, сопротивляемость его инфекционным агентам (в том числе болезнетворным микроорганизмам и чужеродным веществам), способность организма противостоять изменению его нормального функционирования под воздействием внутренних и внешних факторов.

Говоря проще, иммунитет – это способность организма справляться с инфекциями, новообразованными злокачественными клетками (у всех людей такие клетки постоянно образуются, но иммунная система убивает их еще до того, как они начнут размножаться) и неблагоприятными факторами внешней среды.

У кого, говорят, плохой иммунитет?

Речь идет не о здоровых детях, которые болеют ОРЗ (дошкольники могут болеть ОРЗ каждый месяц-два, и это норма). И не о взрослых, которые простужаются и страдают насморком 2–3 раза в год. Это здоровые люди.

Иммунитет низкий:

у детей с настоящим врожденным иммунодефицитом. Это дети, которые имеют генетическую поломку, вследствие которой организм не может защищаться от возбудителей болезней. И это не 5–6 раз за год ОРЗ. Это тяжелые бактериальные инфекции в первый год жизни, гнойные осложнения, туберкулез;

у всех возрастных групп с ВИЧ-инфекцией. Но далеко не у всех ВИЧ-положительных. Многие из этих людей благодаря наблюдению и лечению живут обычной жизнью, рожают детей, и все у них хорошо;

если человек получает или получал иммунодепрессивное лечение – химиотерапию, преднизолон/метипред, иммунодепрессанты. Такое лечение показано при опухолях; некоторых других заболеваниях, например, тяжелом ревматоидном артрите; пересадке органов и в ряде других случаев;

если у человека декомпенсированный сахарный диабет.

Если вы или ваш ребенок не имеют таких болезней, то не надо тратить деньги на бессмысленные иммунологические обследования и иммуномодуляторы. Все иммуномодуляторы, продающиеся в России, не прошли качественных исследований эффективности и безопасности, и нигде в европейских странах вы не найдете врача, который назначает такие препараты. К детским соплям там относятся гораздо спокойнее, чем у нас. Природа умнее человека и, создавая человека, снабдила его достаточно сильными механизмами защиты для того, чтобы выжить почти в любых условиях без сомнительной фармакологической поддержки.

Несколько советов родителям, дети которых пошли в садик и начали болеть

Частые ОРЗ в начальный период посещения детского сада – это нормальная реакция организма ребенка на первый выход в коллектив. Дело в том, что в популяции циркулирует определенное (впрочем, достаточно небольшое) количество вирусов, с которыми организм ребенка должен «познакомиться». «Знакомство» протекает в форме острой респираторной инфекции. Приходя в садик, ребенок инфицируется незнакомыми штаммами и… увы, болеет. Этот путь проходит каждый ребенок. К уровню иммунитета проблема не имеет никакого отношения.

Если дети подружки или соседки пошли в сад и таких проблем у них не было – значит к моменту выхода в садик уже перенесли основное количество инфицирований – в транспорте, в кино, от знакомых. В принципе, чем более активен ребенок (точнее, его родители), тем раньше он проходит этот путь. Ребенок, запертый в четырех стенах, естественно, реже контактирует с вирусами.

Некоторые родители задумываются: а отдавать ли ребенка в сад? Как воспитывать ребенка – дома или в дошкольных учреждениях, каждая семья решает самостоятельно. Но при домашнем воспитании проблема будет отнесена на первый класс. Избежать ее, скорее всего, не удастся.

Чем же помочь ребенку, имея в виду, что иммуномодуляторы – пустая трата денег. Только разумным отношением, отсутствием паники и метаний, прогулками и играми на воздухе, разумным закаливанием. То есть лучшие иммуномодуляторы – это солнце, воздух и вода!

В момент заболевания ОРЗ не стоит давать ребенку весь ассортимент близлежащей аптеки. Допустимо некоторое ограничение подвижности (не стоит до умопомрачения носиться во дворе), но, как правило, нет необходимости в постельном режиме; обильное вкусное питье – чем больше, тем лучше, вкусная, любимая ребенком пища, чуть больше, чем обычно, родительского внимания, ласки и заботы. Что касается лекарственных препаратов, то ни антибиотики, ни витамины проблему не решат.

Антибиотики не нужны при ОРЗ ни в коем случае – они не действуют на вирусы, в дополнительных витаминах при полноценном питании необходимости нет. При необходимости ваш участковый педиатр назначит нужные препараты. Самолечение недопустимо. Без назначения врача ребенку любого возраста можно дать только жаропонижающее и в крайнем случае закапать в нос сосудосуживающие капли (в возрастной дозировке и только 2 раза в день).

А вот мнение подружек, бабушек, соседок, радиопрограмм, газеты «ЗОЖ», телевизионных передач и прочего… мы с вами всерьез обсуждать не будем. Медицина – это наука, которая в наше время развивается бурными темами и ее практические разработки строятся на фундаментальных исследованиях и знаниях человеческого организма, а не на досужих домыслах.

Взрослые проблемы, или ипохондрия с анемией

Коммерческие обследования «на иммунитет» приобрели невиданный доселе размах. Множество взрослых людей делают тысячи исследований – так называемых «иммунограмм». Исследование стоит больших денег, содержит очень много параметров, и, как правило, в одном-двух показателях бывают незначительные отклонения. Все эти обследования делаются на фоне «слабости, усталости, плохой памяти» и прочих жалоб, которые вроде бы и работать не очень мешают, ну а жизнь осложняют. К сожалению, доступность коммерческих анализов, особенно в крупных городах, сыграла свою отрицательную роль – многие люди воспринимают врача только как «расшифровщика анализов», а на самом деле это вовсе не так. Очень многое можно понять при осмотре пациента, иногда 1–2 простых и недорогих анализа скажут больше, чем длинная простыня экзотических тестов. Очень часто исследуют антитела к вирусам герпеса, цитомегаловируса и вирусу Эпштейна-Барра. Как правило, у подавляющего числа людей находят антитела класса G, с которыми потом страдальцы ходят по врачам, получают препараты с недоказанной эффективностью, которые, разумеется, не помогают. На самом деле такие антитела – всего лишь свидетельство встречи организма с этими вирусами. Они неопасны для всех, кроме больных ВИЧ-инфекцией и пациентов, перенесших пересадку органов или принимающих лекарства, подавляющие иммунитет. Как правило, у женщин самой частой причиной слабости и плохой работоспособности является железодефицитная анемия, а у мужчин – ипохондрия, то есть общий несколько депрессивный настрой по отношению к жизни. Анемия прекрасно лечится препаратами железа, а от ипохондрии помогают хорошие психотерапевты.

Поэтому не надо думать, что корнем всех зол со здоровьем является иммунитет, и назначать себе анализы, а уж тем более лечение самостоятельно.

Комментарии специалиста клиники «Будь здоров»

Врач-терапевт, ревматолог.

Как помочь иммунитету?

Здоровье – это драгоценный дар, который человек получает от природы. И сохранить его помогает иммунитет – самая надежная защита от болезней, заложенная в нас самих. Иммунитет представляет собой очень сложную структуру. Снижение иммунитета приводит к тому, что человек начинает быстро уставать и много болеть. Существует такое понятие, как иммунодефицит. Это такое состояние организма, при котором нарушено нормальное функционирование иммунной системы. Некоторые периоды жизни человека характеризуются как периоды физиологического «иммунодефицита». К таким периодам относятся: раннее детство, пожилой и старческий возраст, период беременности у женщин. Возрастные «иммунодефициты» у детей и беременных женщин носят транзиторный, то есть преходящий, характер.

Факторыриска. Выполняя свою основную физиологическую функцию защиты организма, иммунная система сама становится мишенью действия многих повреждающих факторов, которые понижают иммунитет. Такими факторами являются вредные привычки, неполноценное питание, гиподинамия, недосыпание, физические перегрузки, стрессы. Вот почему так важно и нужно повышать свой иммунитет, укреплять свои защитные силы.

Не переусердствуйте в помощи. Есть различные методы воздействия на иммунную систему, призванные привести ее деятельность в норму. Один из таких методов – иммунокоррекция, когда иммунитет повышают либо без лекарственных препаратов (немедикаментозная), либо с их помощью (медикаментозная). К медикаментозной иммунокоррекции относят применение иммунокорректоров (иммуномодуляторов), которые помогают восстановить и нормализовать работу иммунной системы, но использовать их нужно с осторожностью. Пожалуй, наибольшей популярностью пользуются иммуномодуляторы, получаемые из растений. Из всего разнообразия представленных препаратов можно выделить некоторые, отличающиеся особой эффективностью: эхинацея пурпурная, настойка женьшеня, настойка лимонника китайского, экстракт элеутерококка. Следует помнить, что существуют определенные группы иммуномодуляторов, которые может назначать только врач после проведения ряда анализов для получения полной иммунограммы. Использование иммуномодуляторов без консультации врача может нанести серьезный вред организму!

Питание. Что же подразумевается под немедикаментозной коррекцией? Речь идет о контроле за питанием, это первоочередная задача. Нашему организму для нормальной жизнедеятельности требуются в достаточном количестве белки, углеводы, микроэлементы, витамины. Дефицит этих компонентов негативно сказывается на иммунной системе. Каждый человек должен регулярно употреблять полезные продукты: нежирное мясо, рыбу, молочные продукты, фрукты и овощи, богатые витаминами А, В, С, Е.Особенно полезны для иммунитета продукты, богатые цинком, железом, витамином С: лимоны, фасоль,шиповник, капуста, черная смородина, лук, чернослив и яблоки. Англичане говорят: «Одно яблоко в день – гони болезнь в дверь».

Физические нагрузки.Огромное значение придается физическим нагрузкам. Больше двигайтесь! Держите себя в хорошей физической форме. Если есть возможность, занимайтесь в спортзалах, ходите в бассейн, гуляйте на свежем воздухе. Пешие прогулки в течение 20–30 минут каждый день обогащают кровь кислородом, снимают эмоциональное напряжение и укрепляют нервную систему, тем самым помогая нам противостоять болезням. Бодрым и активным вирусы не страшны.

Закаливание.Мощным фактором в укреплении иммунитета является закаливание. Древнегреческий врач Гиппократ – основоположник античной медицины – утверждал, что «холодные дни укрепляют тело, делают его упругим и удобоподвижным». Таким образом, еще на заре цивилизации закаливанию организма отводилась особая роль в укреплении здоровья. Абу Али ибн Сина, известный в Европе под именем Авиценны, жил около 980– 1037 г. н. э. В своем научном труде, посвященном методам оздоровления организма, он описал основные правила закаливающих процедур. Так, он считал, что начинать закаливание лучше летом, используя при этом воду.

Несмотря на то что времена Авиценны давно прошли, для современного человека закаливание остается актуальным по сей день.

Закаливание основано на том, что человек может адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды. При закаливании на организм воздействуют различные факторы внешней среды (такие, как воздух, вода, солнечная энергия). Начинать закаливать свой организм можно в любом возрасте. Чем раньше начинать закаливание, тем лучше будут результаты.

Необходимо помнить, что при подборе вида и режима закаливания врач руководствуется состоянием здоровья человека, его возрастом и наличием индивидуальных особенностей организма. Так, моржевание не рекомендуется начинать в возрасте после 50 лет, его нельзя проводить при некоторых заболеваниях сердечно-сосудистой системы и органов дыхания (при гипертонической болезни, атеросклерозе, бронхиальной астме), а также детям до 18 лет.

А вот закаливание детей можно начинать сразу же после рождения. При этом надо учитывать тот факт, что многие органы и системы организма в детском возрасте еще незрелые, защитные реакции выражены слабо, поэтому ответная реакция на закаливающие процедуры вырабатывается постепенно, в течение длительного времени. При неумелом закаливании может произойти так называемый срыв адаптации, при котором здоровье и самочувствие ребенка вместо того, чтобы улучшаться, резко ухудшаются.

Поэтому возникают негативные эмоции по отношению к закаливающим процедурам. Как правило, в таком случае бывает очень сложно снова начать все сначала. Чтобы этого не произошло, необходимо начинать закаливание, только если ребенок абсолютно здоров, интенсивность процедур увеличивать постепенно и проводить закаливание последовательно и систематически.

Повышение иммунитета актуально для каждого. Люди с ослабленным иммунитетом чаще всех страдают от аллергических реакций, ведь аллергия наступает. Для взрослых и детей иммунитет представляет собой основную преграду на пути аллергии, вирусов, микробов. Нет ничего более важного, чем иммунитет человека. Только от нас зависит эффективность работы иммунной системы. И значит, наше здоровье – в наших руках.

удобрение огурцов весной

удобрение огурцов весной

Поисковые запросы: удобрение hb 101 применение для рассады, где купить удобрение огурцов весной, Где в Ростове-на-Дону купить биоудобрение агроплант.

удобрение огурцов весной

удобрение для цветов фаско инструкция, агроплант, удобрения для малины весной для увеличения, престиж удобрение для картофеля, фосфорсодержащие удобрения для рассады

бананы для цветов как удобрение для роз

престиж удобрение для картофеля Распродажа саженцев, семян, товаров для сада и дома. Новинки 2021. Доставка в регионы. Оперативная доставка. Свыше 10тыс сортов семян. Все для сада и огорода. Собственное производство. Любая сумма покупки. Гарантия качества Распродажа саженцев, семян, товаров для сада и дома. Новинки 2021. Доставка в регионы. Оперативная доставка. Свыше 10тыс сортов семян. Все для сада и огорода. Собственное производство. Любая сумма покупки. Гарантия качества фосфорсодержащие удобрения для рассады удобрение джой для рассады отзывы покупателей престиж удобрение для картофеля инструкция

скачать удобрение комнатным цветам бананы для цветов как удобрение для роз удобрение здравень турбо для комнатных цветов удобрение hb 101 применение для рассады Где в Ростове-на-Дону купить биоудобрение агроплант удобрение для цветов фаско инструкция агроплант удобрения для малины весной для увеличения

Для каждого типа растений нужно свое количество удобрения. На упаковке есть подробная инструкция и указаны дозировки. Самостоятельно готовить ничего не нужно. Гранулы помещаются либо целиком в почву, либо крошатся в порошок и разбрасываются по поверхности грядок. Редакция журнала Obzoroff.info надеется, что этот обзор удобрения будет полезен вам, а мы будем ждать отзывов и комментариев о Ваших успехах в использовании Agroplant. Это удобрение будет полезно при ведении приусадебного хозяйства, так как дает большой прирост урожайности. Удобрение для растений именно это использовала в прошлом сезоне, в этом купила уже другое. Сейчас объясню почему же я так сделала. Понравилось в нем многое, а особенно, что подходит и для овощей и для фруктов, ягод. Что состав нормальный и нет никаких нитратов. Но от вредителей не увидела особой защиты, это меня заставило задуматься и поменять средство на какое-то более качественное. Усиливает иммунную систему растения, обеспечивает питание растений микроэлементами, способствует приживаемости растений и рассады при пересадке. Препарат применяется в виде рабочего раствора. Универсальное удобрение для овощных культур. Успользлва для увеличения урожая овощей. Покупала Флорист Микро в цветочном магазине, выбрала специально универсальное, что бы можно было подкармливать и садовые и домашние растения. Зеленый флакончик объемом 120 мл и яркой этикеткой, стоил около. Универсальное УДОБРЕНИЕ для всех видов растений ФЛОРИСТ - МИКРО компании СИЛА ЖИЗНИ показалось мне. Балкона у меня нет, поэтому рассаду выращиваю на окнах, смотрящих на запад. Сажаю рассаду как овощей, так и цветов, после 15 марта. Подсвечиваю её. Казалось бы все предпосылки для. Массовая доля элементов питания рассчитана на сухое вещество. Удобрение для питания растений доступной формой микроэлементов Флорист МИКРО, 120 мл. Крепыш Удобрение минеральное водорастворимое для рассады, 50 г. ХИТ. новинка. Флорист – микро подходит для всех видов растений, мощный иммуностимулятор. Подходит для составления баковой смеси, совместим с большинством пестицидов, кроме цинксодержащих. Внесение удобрений можно осуществлять внекорневым способом, добавлять препарат при поливе, использовать для. Комплексное органоминеральное удобрение Флорист-МИКРО 120мл (концентрат). В избранное. Применяется для полноценного питания рассады овощных культур, а также для цветов в домашнем растениеводстве и открытом грунте.

удобрение огурцов весной

удобрение здравень турбо для комнатных цветов

Удобрение не только положительно сказывается на урожайности, но и ведет борьбу с вредителями и болезнями растений. Подходит как для сельскохозяйственных культур, так и для цветов, ягод. Защищает растения от холода, повышенной влажности и засухи. Удобрение также положительно влияет на плодородность почвы, так что может быть использовано на любых участках. Н.Н. Терещенко БИОУДОБРЕНИЯ НА ОСНОВЕ. МИКРООРГАНИЗМОВ. Учебное пособие. основе агрономически важных групп микроорганизмов, способствующих улучшению азотного и фосфорного питания растений, а также повышающих устойчивость растений к неблагоприетным условиям внешней среды. Интернет-магазин – Скидки до 30%. Более 75 товаров для здоровья. Узнайте про акции! Подарочные наборы. Наличие сертификатов. Консультация специалиста. Доставка в любой город. Работаем с 1991 года. Более 250 видов продукции Продавец: ООО Биостимул. Адрес: 49100, Респу удобрение огурцов весной. удобрение джой для рассады отзывы покупателей. Отзывы, инструкция по применению, состав и свойства. Правила внесения подкормки в грун. Для удобрения комнатных цветов был. Для продолжения цветения и роста зелёной массы в зимний период, растению. После пересадки растению требуются запасы сил для наращивания побегов и развития. Применяется для наращивания зеленоватой массы растений весной. Водорастворимое минеральное удобрение для овощей, цветов и рассады, содержит все нужные элементы питания: азот, фосфор, калий и микроэлементы, от недочета которых могут желтеть листья и утончаться стебель. Используя натуральные удобрения для цветов, можно добиться отличных результатов, ведь на первый взгляд такие обычные. Дрожжи помогают растениям быстрее набирать зеленую массу, повышают активность почвенной микрофлоры. Благодаря богатому составу они насыщают клетки растений. Удобрение для цветов. Ухаживая за домашними цветами, не стоит забывать про подкормки. 1 Подкормка для цветов. Комнатные растения должны развиваться в условиях, приближенных. карбонат кальция увеличивает зеленую массу растения Крепыш стимулирует развитие корневой системы, способствует наращиванию зеленой массы рассады, в том числе. Удобрение для подкормки цветов и рассады Здравень Турбо восполняет недостаток питательных веществ в почве, помогает вырастить крепкую, качественную рассаду, с хорошо развитой. Какие готовые жидкие удобрения использовать для цветов. Гранулированные подкормки для цветов, как разводить и использовать. Не содержит хлорных добавок, не стимулирует рост зеленой массы. Использование минеральных удобрений для комнатных цветов. Гранулированные подкормки для цветов, как разводить и использовать. У комнатных растений в теплое время года усиленно развивается зеленая масса. Удобрения для роста растений. ; Азот обеспечивает сильный рост. Признаки недостатка азота — пожелтение листвы. Их состав специально подобран для определенной цели: для стимуляции роста корней, для увеличения зеленой массы и т. д. ; Аммофос — сложное комплексное удобрение, в котором. Подкормка комнатных цветов спитым кофе. Отличное удобрение для всех домашних (и не только) цветов — спитой кофе, тем. Для того чтобы растение зимой продолжало наращивать зеленую массу и цвести, используют комплексные удобрения с азотом, фосфором и калием. Подходят и домашние. Сейчас, когда на подоконниках вовсю подрастает рассада, самое время задуматься о подкормках, выбрать самую эффективную. На ранней стадии выращивания растеньицам ещё не требуется подкормка, и более того. Обзор стимуляторов и регуляторов роста домашних комнатных растений. Как заставить растение дать корни? Как заставить зацвести и как восстановить после стресса? Минеральные удобрения для горшечных цветов выпускают обычно в жидкой и сухой формах (гранулы, порошок. Также органика насыщает почву азотом, который отвечает за рост зеленой массы. Особенно хорошо такие удобрения повлияют на крупные и быстрорастущие культуры: пальмы, комнатные розы. Когда необходимо подкармливать и поливать комнатные растения. Вносить удобрения для растительных культур нужно в период активной вегетации. В это время наблюдается рост корневой системы и соцветий.

NOW Immune Renew 90 кап.

Иммун Ренью - мощный иммуностимулятор, который содержит стандартизированный экстракт астрагала и высокую концентрацию бета-глюканов, полученную из уникальной комбинации 8 типов органических грибов.

Бета-глюканы - естественные полисахариды, содержащиеся в клеточных стенках дрожжей (Saccharomyces cerevisie) и обладающие противоопухолевыми и иммуностимулирующими свойствами.

В восточной медицине грибы применяют уже более 3 тысяч лет. Сейчас используется только несколько десятков, это т. н. «медицинские грибы».

Эти грибы были отобраны, т.к. обладают исключительными лечебными свойствами: антиоксидантными, противоопухолевыми, иммуномодулирующими, радиопротекторными. Они помогают адаптироваться к стрессам и воздействию вредных экологических факторов, обладая выраженным антистрессовым действием.

Основным компонентом грибов, определяющим их лечебные свойства, являются β-глюканы.

β-глюканы – это удивительные соединение, которые были обнаружены в грибах 30 лет назад. Они были изучены в таких научных учреждениях как Тулейнский университет Луизианы, Гарвард, японских университетах – Гифу, Токийском, Нагойском, Осакском. Для иммунологии роль β-глюканов так же важна, как роль пенициллина среди антибиотиков.

При нарушении баланса иммунной системы β-глюканы оказывают мощное воздействие в нескольких направлениях:

В научных исследованиях было доказано, что они обладают способностью поддержать врожденную и адаптивную неприкосновенность организма, врожденный и приобретенный иммунитет. Формируют сильную, приспосабливаемую иммунную систему, создают защиту от канцерогенов, вирусов, грибков, бактерий, паразитов и др.
В отличие от других иммуностимуляторов β-глюканы повышают иммунитет, контролируя его, и не приводят к возникновению чрезмерных иммунных реакций.
Увеличивают скорость созревания клеток иммунной системы, активируют их, а также существенно увеличивают продолжительность их жизни до созревания новых клеток. При ослабленном же иммунитете жизненный срок защитных клеток короткий, а новые клетки при этом не успевают созреть, чтобы сменить старые.
Многие исследования показали, что β-глюканы имеют значительный эффект в борьбе со злокачественными опухолями. Они активируют выхождение фактора некроза опухоли (ФНО) и стимулируют образование иммунных клеток в костном мозге. Этим усиливается противоопухолевый иммунитет, ослабление которого при доброкачественных опухолях приводит к их переходу в злокачественные.
β-глюканы, как и акулий хрящ, тормозят развитие кровеносных сосудов в опухоли, блокируя сосудистый фактор роста, который выделяет опухоль и т. о. питание опухоли прекращается, замедляется метастазирование.
β-глюканы стимулируют выброс веществ, называемых цитокинами, которые очень важны для иммунной системы и секретируются клетками, называемые макрофагами. Макрофаги буквально «съедают» бактерии, опасные для нас.
Бета-глюканы снижают содержание LDL-холестерина ("плохой" холестерин) и повышают уровень HDL-холестерина ("хорошего" холестерина).

Помогают ускорить исцеление при кожных заболеваниях, ранах и старении кожи.

Обладают ободряющим и стимулирующим эффектами, способствуя укреплению функции надпочечников.

Астрагал активизирует обмен веществ, обеспечивая энергией при усталости и длительном стрессе. Он полезен при простуде, гриппе и проблемах, связанных с иммунодефицитом, при СПИДе и опухолях.

Китайская традиционная медицина рекомендует астрагал при отсутствии "чи" - стремления к жизни. Астрагал также снижает токсические побочные эффекты химиотерапии.

ИЗГОТОВИТЕЛЬ:

США.

Иммуностимуляторы - обзор | ScienceDirect Topics

Иммуностимуляторы

Иммуностимуляторы можно определить как природные или химические компоненты, которые способствуют активации специфических и / или неспецифических защитных механизмов (Anderson and Jeney, 1992; Ganguly et al. , 2010). Было показано, что эти компоненты подходят для использования в аквакультуре (Sakai, 1999) для улучшения привеса, эффективности корма и / или устойчивости к болезням (Bricknell and Dalmo, 2005). Примерами иммуностимуляторов являются β-глюканы (Chettri et al., 2013; Rodriguez et al., 2009), лактоферрин (Kumari et al., 2003) и левамизол (Hang et al., 2014; Maqsood et al., 2009). В этом разделе больше внимания будет уделено β-глюкану, поскольку он, вероятно, является наиболее широко используемым и известным иммуностимулятором для рыб, а также для растущего использования лекарственных растений в аквакультуре. Хотя β-глюкан также может быть классифицирован как пребиотик, здесь мы решили рассматривать β-глюкан как иммуностимулятор, поскольку было показано, что он действует двумя разными способами для улучшения здоровья животных: во-первых, как типичный пребиотик, стимулирующий полезные желудочно-кишечные бактерии и, во-вторых, напрямую стимулируют иммунную систему за счет абсорбции в тонком кишечнике. Следовательно, признание β-глюканов грибком запускает каскад событий, приводящих к иммуностимуляции, как недавно обсуждалось Oliveira et al. (2019).

В одном из первых исследований с тропическими рыбами Саху и Мукерджи (2001) кормили здоровых и ослабленных иммунитетом Labeo rohita в течение семи дней 0,1% β-глюкана и показали, что β-глюкан усиливает врожденный и адаптивный иммунитет и защиту. против бактериальной инфекции в обеих группах рыб по сравнению с контролем.Влияние β-глюкана на врожденный иммунный ответ и выживаемость также изучалось на pacu, экспериментально инфицированных A. hydrophila (Biller-Takahashi et al., 2014). Авторы показали более высокую выживаемость у рыб, получавших β-глюкан. Монтойя и др. (2017) подвергали матринкса стрессорному и бактериальному заражению после кормления β-глюканом и наблюдали, что β-глюкан модулирует ответ кортизола до и после стрессора, увеличивая количество и активность лейкоцитов. Более того, кортизол оказался эффективным модулятором как гуморальной, так и клеточной врожденной иммунной системы за счет увеличения активности лизоцима и комплемента, а также популяций нейтрофилов и моноцитов. Кроме того, Montoya et al. (2018) исследовали влияние двух молекул β-глюкана на иммунный ответ матринкса до и после заражения A. hydrophila и показали, что оба β-глюкана влияют на ответы рыб, модулируя профиль кортизола до и после острая инфекция, вызванная A. hydrophila , и повышенная мобилизация и активность лейкоцитов после заражения. Рационы с добавлением β-глюкана также тестировались по показателям стресса у морских карандашей ( Nannostomus trifasciatus ) во время транспортировки.β-глюкан улучшил ионный баланс во время транспортировки (Abreu et al., 2014). Ионный баланс считается важным индикатором стресса во время транспортировки рыб. Шагас и др. (2013) кормили тамбаки, важный вид в северном регионе Бразилии, рационом с добавлением β-глюкана (0,1%, 0,2%, 0,4% и 0,8%) в течение 60 дней, а затем экспериментально заразили рыбу A. гидрофила . Результаты продемонстрировали более высокую выживаемость рыб, получавших 0,1% β-глюкана.

Hisano et al. (2018) кормили паку β-глюканом (0,0%, 0,1%, 0,2%, 0,4% и 0,8%) в сочетании с маннанолигосахаридами (MOS) в течение 30 дней и обнаружили, что включение 0,2% β-глюканов и MOS способствует лучшей реакции роста, эффективности корма и морфологии кишечника. Кроме того, паку, получавший диету, содержащую 0,2% и 0,4% β-глюканов и MOS, демонстрировал значительно более высокие значения красных кровяных телец, чем контроль. Тот же продукт и концентрации (глюкан-МОП; 0,1%, 0,2%, 0,4% и 0,8%) были протестированы в паку Soares et al.(2018), которые показали, что диеты 0,2% и 0,4% были достаточны для увеличения респираторного выброса лейкоцитов, активности лизоцима и количества тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов в крови после стрессового обращения и бактериального заражения. Кроме того, сниженная реакция на стресс проявлялась снижением уровней кортизола и глюкозы по сравнению с контролем. Cerozi et al. (2017) протестировали синбиотическую комбинацию β-глюкана и B. subtilis на рост и иммунный ответ pacu. Хотя симбиотическое лечение стимулировало небольшие улучшения в микроворсинках кишечника, не было никакого эффекта на рост или иммунные ответы в pacu.

Еще одним иммуностимулятором, который был успешно использован, является левамизол, синтетическое антигельминтное соединение, широко используемое у млекопитающих, которое оказывает мощное стимулирующее действие на врожденную иммунную систему рыб (Kiron, 2012). Pahor et al. (2017) скармливали кормом паку, содержащим левамизол (100, 150, 300 и 500 мг на кг - 1 ) в течение 15 дней, а затем подвергали рыбу воздействию воздуха и инокуляции A.гидрофила . Левамизол в дозе 100 мг / кг - 1 увеличивал респираторный выброс лейкоцитов и активность системы комплемента после инъекции A. hydrophila . Биллер-Такахаши и др. (2016) также продемонстрировали положительное влияние диетического левамизола (125 и 250 мг на кг - 1 ) на иммунную систему паку, питавшегося в течение семи дней, и дополнительно продемонстрировали, что левамизол может использоваться для усиления адъювантных эффектов во время иммунизации A. hydrophila вводили внутрибрюшинно.Кроме того, Zanon et al. (2014) оценили влияние диетического левамизола в течение 60 дней на рост и иммунологические параметры полосатого сурубима ( P. reticulatum ), и, хотя левамизол положительно влиял на концентрацию лизоцима, никаких различий в параметрах роста не наблюдалось.

Ввиду большого количества недавних обзоров все большее внимание также уделяется использованию лекарственных растений (семян, корней, цветов и листьев) для борьбы с болезнями в аквакультуре (Awad and Awaad, 2017; Bulfon et al., 2013; Карбоне и Фаджио, 2016; Читарасу, 2010; Дугенси и др., 2003; Галина и др., 2009; Хай, 2015б; Харикришнан и др., 2011; Maqsood et al., 2011; Ньюадж-Физул и Остин, 2014; Reverter et al., 2014; Ринго и Сонг, 2016; Валлехос-Видал и др., 2016; Васихаран и Тайя, 2014; Wang et al., 2017). Биомедицины на травах могут предоставить новые возможности для индустрии аквакультуры (Citarasu, 2010), поскольку они имеют экологическую ценность из-за их способности к биоразложению (Yin et al. , 2009). Кроме того, их легко получить, они не дороги и действуют против широкого спектра патогенов (Galina et al., 2009). Кроме того, они также могут действовать как стимулятор роста, являются антистрессовыми, стимуляторами аппетита и использовались для замены животного белка в рыбной муке (Awad and Awaad, 2017).

Несколько исследований с использованием лекарственного растения Алоэ вера было проведено на неотропических пресноводных видах, таких как matrinxã и pacu. Алоэ вера хорошо известно во всем мире благодаря своим косметическим и лечебным свойствам (Javed and Attaur, 2014). Он содержит более 75 биологически активных соединений с множеством биологических активностей, таких как заживление ран, а также антибактериальными, противовирусными, противогрибковыми, противодиабетическими и иммуномодулирующими свойствами (Akhtar et al., 2012; Чой и Чанг, 2003; Кристаки и Флору-Панери, 2010 г .; Хамман, 2008; Рейнольдс и Двек, 1999). Алоэ вера , добавленное к воде (0,02, 0,2 и 2 мг порошка L - 1 ) во время транспортировки матринкса, увеличивало респираторную активность лейкоцитов в зависимости от концентрации (Zanuzzo et al. , 2012). Кроме того, авторы наблюдали на in vitro более высокую респираторную активность лейкоцитов паку, инкубированных с растительным экстрактом. Купание с алоэ вера также улучшило физическую и гуморальную защиту племенного стада после индуцированного нереста в матринхе.В целом, у рыб, купанных с A. vera , было более высокое количество бокаловидных клеток эпидермиса и улучшенная скорость заживления ран по сравнению с контрольной группой после индуцированного нереста (Zanuzzo et al., 2015). Недавно Зануццо и др. (2017) продемонстрировали, что питание A. vera в течение 10 дней до транспортировки и заражения убитыми нагреванием A. hydrophila улучшало иммунный ответ у pacu. В частности, A. vera предотвращает снижение как респираторного выброса лейкоцитов, так и гемолитической активности системы комплемента, вызванной транспортом.Кроме того, у рыб, которых кормили A. vera , также наблюдался значительно более высокий респираторный выброс лейкоцитов, концентрации лизоцима в сыворотке и активность системы комплемента в зависимости от дозы через 24 часа после бактериальной инокуляции. Как упоминалось ранее, еще одно известное лекарственное растение с иммуномодулирующими свойствами - чеснок. Включение в рацион чеснока (0, 1, 1,5 и 2 г, - 1 ) в течение 15 дней снижало количество паразитов в жабрах паку, инфицированных A. penilabiatus (Monogena: Dactylogyridae), а после 45 дней он увеличивал количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, одновременно повышая гематокрит и концентрацию гемоглобина (Martins et al., 2002).

Abdel-Tawwab et al. (2018) кормили африканского сома ( Clarias gariepinus) в течение 12 недель гвоздичным базиликом, Ocimum gratissimum , растением, произрастающим в Африке, которое растет в тропических и субтропических регионах. Экстракт гвоздичного базилика значительно увеличивал длину ворсинок кишечника, ширину ворсинок и площадь абсорбции в зависимости от дозы, а вес рыбы сильно коррелировал с этими параметрами. Кроме того, у рыб, которых кормили экстрактом гвоздики и базилика, значительно снизились уровни глюкозы и холестерина в крови, в то время как общий белок, альбумин и глобулин значительно увеличились. Кроме того, антиоксиданты и переменные иммунитета были значительно усилены добавлением экстракта гвоздики и базилика, а смертность рыб была значительно ниже у рыб, которых кормили экстрактом дозозависимым образом после бактериального заражения.

В заключение следует отметить, что преимущества иммуностимуляторов важны для развития устойчивой и экологически чистой аквакультуры. Однако эффективность этих компонентов зависит от их дозы / концентрации, продолжительности действия и пути введения, и необходимы исследования для определения наилучшего протокола, чтобы оптимизировать преимущества и избежать иммуносупрессии.Хотя некоторые исследования показали четкий и прямой стимулирующий эффект лекарственных растений, зависящий от концентрации / дозы, механизм распознавания лиганда, состав экстракта и активация иммунных ответов рыб остается фрагментированным.

Понимание механизма действия иммуностимуляторов в зависимости от их фармакологической активности. Влияние имидазохинолинов на TLR8

Abstract

Имидазохинолины являются мощными иммуностимуляторами (IMMS), которые действуют через Toll-подобные рецепторы, особенно TLR7 и TLR8. Помимо усиления иммунного ответа, IMMS также действуют как противоопухолевые препараты и адъюванты вакцин. Эти небольшие соединения демонстрируют почти одинаковую молекулярную структуру, за исключением некоторых случаев, когда атом в положении 1 изменяется и изменяет характеристики имидазола. Вариабельная ациклическая боковая цепь также всегда присоединяется к атому в положении 2, в то время как другая цепь может быть присоединена к атому в положении 1. Эти структурные различия изменяют иммунные ответы, такие как выработка фактора регуляции интерферона и ядерного фактора-κB (IRF- NFκB).В этой работе методы квантовой механики и вычислительной химии были применены для изучения физико-химических свойств кристаллического сайта связывания TLR8 в комплексе со следующими шестью молекулами IMMS: Hybrid-2, XG1-236, DS802, CL075, CL097 и R848 (резиквимод ). Идентификаторы PDB кристаллов были: 4R6A, 4QC0, 4QBZ, 3W3K, 3W3J и 3W3N соответственно. Таким образом, были рассчитаны полная энергия, энергия сольватации, энергия взаимодействия (вместо свободной энергии) системы и энергия взаимодействия полярной области IMMS. Кроме того, среди прочего оценивались дипольный момент, электростатический потенциал, полярная поверхность, атомные заряды, водородные связи, полярные и гидрофобные взаимодействия. Вместе эти свойства выявили важные различия между шестью комплексами TLR8-иммуностимулятор, которые отражаются в разных энергиях взаимодействия и, следовательно, в разных электростатических условиях и энергиях связывания. Примечательно, что энергия взаимодействия определенной полярной области, состоящей из сильно поляризованных атомов N3, N5 и аминогруппы N11, действовала как полярный фармакофор, который напрямую коррелирует с сообщенной иммунофармакологической эффективностью шести комплексных молекул.На основании этих результатов был сделан вывод, что точный физико-химический анализ сайта связывания кристаллов может выявить энергию связывания (измеренную как энергия взаимодействия) и связанный молекулярный механизм действия между IMMS и TLR8. Эти результаты могут облегчить разработку и конструирование улучшенных малых молекул со свойствами IMMS, которые нацелены на систему TLR и обладают повышенной фармакологической эффективностью и пониженной токсичностью.

Образец цитирования: Кубли-Гарфиас С., Васкес-Рамирес Р., Трехо-Муньос С., Бербер А. (2017) Понимание механизма действия иммуностимуляторов в зависимости от их фармакологической эффективности.Влияние имидазохинолинов на TLR8. PLoS ONE 12 (6): e0178846. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846

Редактор: Чандра Верма, Институт биоинформатики, СИНГАПУР

Поступила: 3 октября 2016 г .; Принята к печати: 19 мая 2017 г .; Опубликовано: 5 июня 2017 г.

Авторские права: © 2017 Kubli-Garfias et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все данные содержатся в статье.

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования на эту работу.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Открытие интерферона Айзексом и Линдерманом [1] стало важной вехой в иммунологии. Этот цитокин вырабатывается и высвобождается в ответ на вредное воздействие вирусов, бактерий и паразитов, а также других чужеродных или инвазивных клеток.Однако интерферон не был очищен и, таким образом, доступен для терапии и исследований только 20 лет спустя [2]. Следовательно, эти открытия подтолкнули к поиску модуляторов иммунной системы, способных индуцировать синтез интерферона. Интересно, что нуклеозиды оказались хорошими кандидатами для активации продукции интерферона и, соответственно, иммунной системы. Примечательно, что ранняя работа с использованием производных пиримидина показала явную антибактериальную активность, в частности, соединений тимина и пурина [3].

Было разработано несколько противовирусных соединений на основе нуклеозидов для активации иммунного ответа. Среди оригинальных модифицированных нуклеозидов, положивших начало современной иммунофармакологии, были следующие: нуклеозид йододезоксиуридин [4], трифторированный урацил нуклеозид трифлуридин [5] и йодированное соединение 5-йод-2-дезоксиуридин под названием Видарабин [6]. Производное гуанозина гидроксиэтоксиметилгуанин (ацикловир) синтезировано Elion et al . в 1977 году [7] может быть лучшим примером успешного противовирусного агента на основе пурина.

На основе молекулы аденина были разработаны соединения имидазохинолина (IMZQ) также с целью борьбы с вирусными инфекциями. Помимо молекулы аденина, структура IMZQ включает третье кольцо, дающее хинолиновый фрагмент, присоединенный к пятичленному ароматическому гетероциклическому имидазольному кольцу. Одним из первых синтезированных IMZQ было соединение S-25059, за которым в 1983 году последовал имиквимод (S-26308, R837) [8]. Позже был синтезирован и выпущен аналог резиквимода (S-28463, R848), а также противовирусное соединение [9].Индукция интерферона имиквимодом была продемонстрирована в ранних исследованиях [10], и, следовательно, как имиквимод, так и резиквимод были классифицированы как иммуномодуляторы [11]. В настоящее время принято считать, что IMZQ способен изменять иммунный ответ для индукции противовирусной и противоопухолевой активности, в основном за счет продукции цитокинов, например, индукции интерферона-α, частично опосредованной активацией NF-κB, которая, в свою очередь, стимулирует врожденный иммунный ответ и приобретенный иммунитет. иммунитет [8, 11].

Однако важной проблемой является активация иммунного ответа Toll-подобными рецепторами (TLR), индуцированными IMZQ, особенно TLR7 и TLR8, которые действуют в иммунных ответах против вирусных инфекций [12].Таким образом, структурная основа механизма действия IMZQ и, следовательно, IMMS была раскрыта в большей степени благодаря ценным исследованиям с применением рентгеновской кристаллографии. В связи с этим были кристаллизованы несколько аналогов IMMS, демонстрирующих связывание, в частности, с TLR8 и показывающих, что IMMS образуют мост между двумя молекулами TLR. На основании этих результатов мы выбрали шесть IMMS в комплексе с TLR8: Hybrid-2 [13], XG1-236, DS802 [14], CL075, CL097 и R848 [15]. Цель состояла в том, чтобы изучить энергию связывания, рассчитываемую как энергию взаимодействия, а также характеристики связывания, связанные с их фармакологической активностью.Для достижения этой цели мы изучили связывающее ядро ​​шести комплексов IMMS-TLR8 из представленных рентгеновских структур. Эти ядра были изучены сравнительно на основе их электронной структуры и молекулярных свойств. Для сравнения представлены два несвязанных антагониста IMMS (соединения 15 и 16), описанные Shukla et al . [16] также были исследованы для характеристики их молекулярных и электронных свойств.

Методы

Агонисты и антагонисты IMMS

Мы оценили и сравнили молекулярные свойства кристаллических структур следующих агонистов IMMS: Hybrid-2 (1- (4-амино-2-бутил-1H-имидазо [4, 5-c] хинолин-1-ил) -2-метилпропан-2-ол), XG1-236 (2-бутил-2H-пиразоло [3, 4-c] хинолин-4-амин), DS802 (2-бутил [1, 3] оксазоло [4, 5-c] хинолин-4-амин), CL075 (2-пропил [1,3] тиазоло [4, 5-c] хинолин-4-амин), CL097 (2- (этоксиметил) -1H-имидазо [4, 5-c] хинолин-4-амин) и R848 (1- [4-амино-2- (этоксиметил) -1H-имидазо [4, 5-c] хинолин-1- ил] -2-метилпропан-2-ол). Все они были в комплексе с TLR8 и извлечены из банка данных по белкам (PDB ID: 4R6A, 4QC0, 4QBZ, 3W3K, 3W3J и 3W3N соответственно) [17]. Комплексы IMMS-TLR8 имеют димерную форму (два мономера TLR; A и B) и два лиганда. Каждый лиганд был извлечен из рецептора, и его общая энергия была рассчитана, что позволило использовать только мономер IMMS с наименьшей энергией для всего физико-химического исследования. Аналогичным образом, среднеквадратичное отклонение (RMSD) для каждой пары одних и тех же молекул IMMS было измерено с использованием программы VMD [18].Дополнительно оценивали два антагониста IMMS: , соединение 15, (1- (4-амино-2 - ((этиламино) метил) -3H-имидазо [4, 5-c] хинолин-3-ил) -2-метилпропан- 2-ол) и соединение 16 (2 - ((этиламино) метил) -3H-имидазо [4,5-c] хинолин-3-ил) -2-метилпропан-2-ол) [16]. Кристаллическая структура соединения 16 была взята из Кембриджского центра структурных данных (номер доступа: CDC 718787) [19] и была использована для моделирования соединения 15 путем добавления аминогруппы у C4. Добавленная аминогруппа в положении 11 была локально оптимизирована с помощью теории функций плотности (DFT) с использованием функции ωB97X-D и уровня базисного набора 6-31G * с ограничениями в других атомах для предотвращения изменений кристаллической конформации новой молекулы. .Наконец, энергии и физико-химические свойства агонистов и антагонистов оценивали в одноточечном вычислении с помощью DFT с использованием функции ωB97X-D и уровня базового набора 6-31G *. Звездочка (*) указывает, что базис поляризован. Изучаемые молекулярные свойства были следующими: полная энергия, энергия сольватации, энергия высшей занятой молекулярной орбитали (ВЗМО) и наименьшей незанятой молекулярной орбитали (НСМО), твердость, электроотрицательность, поляризуемость, электростатические заряды, дипольный момент (DM), площадь полярной поверхности, электростатический потенциал (EP), площадь и объем молекулы.

Анализ взаимодействия комплекса IMMS-TLR8

Были проанализированы взаимодействия между кристаллическими структурами Hybrid-2, XG1-236, DS802, CL075, CL097 и R848 в комплексе с TLR8. Было включено только первое ядро ​​остатков, принадлежащих связывающему карману TLR8, и расстояние отсечения между IMMS и рецептором было установлено равным 4 Å. Включенные аминокислоты варьировались от 9 до 12 среди всех комплексов TLR8-IMMS. Остатки, демонстрирующие гидрофильные (полярные) взаимодействия, достигли расстояния примерно 3.3 Å, а с гидрофобными взаимодействиями - 4 Å по отношению к атомам IMMS. Для этой оценки использовалась программа Ligand Explorer. Геометрические параметры (Å) были установлены следующим образом: водородные связи: 3,3, водородные мостиковые связи: 3,3 и гидрофобные взаимодействия: 4,0 [20]. Таким образом, были изучены важные связывающие взаимодействия, а именно: водородные связи, водородные мостиковые связи, гидрофобные взаимодействия (ван-дер-ваальсовы) и электростатические заряды атомов агонистов, взаимодействующих с этими атомами в аминокислотах рецептора.Количество и тип молекулярных взаимодействий комплекса TLR8-агонист и расчет энергии взаимодействия каждого комплекса позволили оценить энергию взаимодействия рецептор-лиганд, которую считали показателем степени связывания.

Рассчитаны два значения энергии взаимодействия; полная энергия взаимодействия включала молекулу IMMS, все соседние остатки связывающего кармана и молекулы воды (гидрофильные и гидрофобные взаимодействия), а также энергию взаимодействия выбранной полярной области, которая включала аминогруппу N3, N5 и N11, а также атом C4 Соединение IMMS (эта область была определена как полярный фармакофор), тогда как со стороны TLR были включены два остатка Asp543 и Thr574, а также фиксированная молекула воды.На рис. 1 показаны номера атомов и положения агониста и антагониста IMMS.

Рис. 1. Молекулярная структура и нумерация исследуемого ИММС.

Соединения расположены от наивысшей до самой низкой фармакологической активности. Предлагаемый полярный фармакофор агонистов образован атомами N3 и N5, аминогруппой N11 и атомом C4. Указаны различные атомы в положении 1 и боковые цепи. Соединения-антагонисты 15 и 16 различаются полярным фармакофором, имеющим боковую цепь N3, а соединение 16 не имеет аминогруппы N11.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g001

Упрощенная процедура расчета энергии взаимодействия обеспечивается следующей формулой: где IE - энергия взаимодействия связывания, RLW - энергия комплекса, образованного рецепторными аминокислотами, лигандом и энергиями воды, R - энергия аминокислот TLR8, L - энергия агониста лиганда, а Вт, - энергия молекул воды.

Энергии связующего взаимодействия определялись одноточечными расчетами с использованием DFT с функцией ωB97X-D и уровнем базисного набора 6-31G *. Аналогичным образом объем полостей связывающих карманов каждого димера TLR8 был рассчитан с использованием программы Swiss-Pdb Viewer [21]. Все ab initio расчеты проводились с использованием программы Spartan'14 [22]. Компьютер состоял из восьмиъядерного процессора AMD с тактовой частотой 4,0 ГГц. Линейный регрессионный и корреляционный статистический анализ, сравнивающий значения натурального логарифма активности агониста TLR8 и значения энергии взаимодействия фармакофоров, рассчитывали с помощью Origin 8 Pro (OriginLab, Northampton, MA, USA).

Результаты

Исследуемые молекулы агонистов были следующими: Гибрид-2 (I) [13], XG1-236 (II), DS802 (III) [14], CL075 (IV), CL097 (V) и R848 (VI). ) [15]. Антагонистами были соединение 15 (VII) и соединение 16 (VIII) [16]. Римские цифры были добавлены для облегчения идентификации изучаемого IMMS. Все соединения имели три кольца, образующие плоскую систему, включающую имидазолхинолиновый фрагмент. Атом C4, атомы N3 и N5 и аминогруппа N11 можно рассматривать как полярный фармакофор.

Атом в положении 1 может быть C (XG1-236), O (DS802) или S (CL075). Аналогичным образом, аминогруппа (CL097) или боковая цепь 2-метилпропан-2-ола может находиться в положении 1 (гибрид-2 и R848). В положении 2 обнаруживаются различные боковые цепи, а именно бутил (I и III), N2-бутил (II), пропил (IV) и этоксиметил (V и VI). Молекулы антагонистов 15 и 16 имеют атом азота в положении 1, боковую цепь этиламинометила в положении 2 и боковую цепь 2-метилпропан-2-ола в положении N3. Очевидно, что структура антагониста существенно модифицирует полярную фармакофорную область из-за стерического объема боковой цепи N3 в обеих молекулах антагониста и отсутствия аминогруппы N11 в соединении 16. Эффективность агонистов IMMS, а также антагонистических IMMS, по-видимому, связана с химической структурой и соответствующими физико-химическими свойствами. На рис. 1 показаны химические структуры как агониста, так и антагониста IMMS.

Иммуностимулирующая активность факторов транскрипции IRF-NFκB

Исследуемые IMMS демонстрируют различную степень стимуляции транскрипционным фактором IRF-NFκB TLR7 и TLR8. Таким образом, данные EC 50 показывают различную фармакологическую эффективность TLR7 и TLR8 в одном и том же IMMS.Однако фармакологическая эффективность агонистов Hybrid-2 [13] и XG1-236 [14] действует первым и вторым как в TLR7, так и в TLR8, соответственно.

Для стимуляции IRF-NFκB, XG1-236 [14], DS802 [14] и CL075 [23] более эффективны для TLR8, тогда как Hybrid-2 [13], CL097 [24] и R848 [25] более эффективны для TLR7. Включенные соединения-антагонисты 15 и 16 [16] проявляют свой антагонистический эффект при более высоких и более низких дозах ЕС 50 соответственно. В таблице 1 показаны фармакологические свойства агонистов TLR7 и TLR8.Также включены ЕС 50 соединений-антагонистов 15 и 16.

Кристаллические структуры IMMS

Шесть агонистов IMMS, выделенных из кристаллов TLR8, содержат два мономера, а именно A и B. Пары мономеров для каждого агониста сравнивали путем измерения среднеквадратичного отклонения (RMSD) положений атомов. Наибольшая разница RMSD была обнаружена в паре CL097-A и B из-за 2-этоксиметильной боковой цепи, которая принимает две противоположные конформации, которые переплетаются при наложении.На рис. 2 показаны значения наложения IMMS и RMSD.

Рис. 2. Значения RMSD и наложенные изображения мономеров A и B агониста IMMS.

Наложение соединения CL097, показывающее переплетенную 2-этоксиметильную боковую цепь, которая заметно увеличивает значение RMSD. Основные различия связаны с боковыми цепями, потому что одна пятисторонняя кольцевая система показывает значительно более низкие значения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g002

Оценка физико-химических свойств IMMS

Молекулярные и физико-химические свойства кристаллических мономеров A и B были рассчитаны с помощью одноточечных расчетов ab initio.Мономеры с наибольшей энергией отбрасывали, оставляя для дальнейшего анализа только мономеры с наименьшей энергией. Физико-химические значения как агонистов, так и антагонистов показывают некоторые различия из-за различного замещения атомов и присущих им боковых цепей. Свойства твердости (η) и электроотрицательности (χ) рассчитывались следующим образом: η = ( εLUMO - εHOMO ) / 2 и χ = - ( εLUMO + εHOMO ) / 2 соответственно.

Были изучены оба антагониста; однако кристалл соединения-антагониста 15 не был доступен. Таким образом, соединение 15 было смоделировано с использованием кристалла соединения 16 в качестве модели и добавления аминогруппы в положение 11. В таблице 2 показаны значения электронных и физико-химических свойств конформеров IMMS с наименьшей энергией из одноточечных расчетов ab initio. Также включены молекулярные свойства антагонистов.

Тремя агонистами с более низкой полной энергией были соединения I, IV и VI из-за наличия атома серы в соединении IV и большого количества атомов в I, IV и VI.Помимо самой низкой энергии, CL075 (IV) также имеет самую низкую площадь, объем, поляризуемость, полярную поверхность, твердость, HOMO и LUMO, а также самую высокую энергию сольватации и электроотрицательность. Молекулярные свойства следовали примерно трем тенденциям; одна тенденция включает общую энергию, HOMO и LUMO, исключая соединение I. Вторая тенденция включает большинство следующих свойств: площадь, объем, площадь полярной поверхности, DM, поляризуемость и, в некоторой степени, твердость. Наконец, третья тенденция согласуется с энергией сольватации и электроотрицательностью.

Интересно, что антагонист соединения 16, лишенный аминогруппы N11, более эффективен, чем его родственное соединение 15. По совпадению, соединение 16 имеет 7 из 11 физических и электронных свойств с более низкими значениями: площадь, объем, полярная поверхность, HOMO, LUMO, твердость и поляризуемость. Из-за большого количества атомов соединение 15 имеет более высокую общую энергию и энергию сольватации, что приводит к большему DM и повышенной электроотрицательности. На рис. 3 показаны коррелированные кривые молекулярных свойств IMMS.

Рис. 3. Наложенные кривые, изображающие молекулярные свойства с аналогичными тенденциями.

Соединения имеют маркировку от I до VIII. Тенденция к общей энергии показывает наименьшее значение для IMMS IV, за которым следуют VI и I. Ясно, что атом S в CL075 (IV) дает самые низкие или самые высокие значения для всех свойств, за исключением DM. Сходные структуры соединений I и VI дают заметное сходство свойств. Из-за небольших различий между молекулами и свойствами, в большинстве случаев тенденции, кажется, довольно хорошо коррелируют.Антагонисты (VII и VIII) демонстрируют сходные тенденции, в обоих случаях в некоторой степени исключая общую энергию и полярную поверхность. Свойства кривых окрашены, а соединения отмечены для облегчения идентификации.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g003

Отображение и сравнение электростатических потенциалов IMMS

Все IMMS имеют очень похожий EP в полярной фармакофорной области. Таким образом, атомы N3 и N5 показывают интенсивный отрицательный EP и выраженный положительный EP в аминогруппе N11.Напротив, EP антагонистов демонстрирует иную картину, особенно соединение 16, в котором отсутствует аминогруппа N11. Действительно, пятичленное кольцо EP является наиболее универсальным из-за его атомного разнообразия в положении 1 и заметных различий в присоединенных боковых цепях. Молекулы I и VI отличаются только одним атомом углерода, в котором кислород заменен в боковой цепи, присоединенной к атому в положении 2. Эта особенность создает дополнительный отрицательный EP в VI и несколько снижает величину дипольного момента и ранжирование направлений для второе значение по сравнению с соединением I, которое имеет наибольшую DM среди шести IMMS. Кроме того, молекулы I и VI представляют гидроксильную группу боковой цепи, присоединенную к атому в положении 1, находятся в противоположном положении. Эти различия, однако, достаточны для того, чтобы относить эти соединения к наиболее и менее сильным, соответственно.

Молекулы от II до V имеют очень похожий паттерн EP с переменным значением DM, но аналогичное направление. EP антагонистов больше, чем у агонистов, и также сильно различаются в полярной области фармакофоров, также показывая желтую область в бензольном кольце хинолинового фрагмента, что указывает на тенденцию к отрицательному заряду.Примечательно, что антагонисты имеют более высокие значения DM и указывают на противоположный агонист VI. На фиг.4 показаны векторы EP и DM исследуемых агонистов и антагонистов IMMS.

Рис. 4. Карты EP и векторы DM агониста и антагониста IMMS.

EP закодированы в томе Ван-дер-Ваальса, демонстрируя почти аналогичные паттерны агонистов в полярной области фармакофоров. Оставшаяся часть молекулы варьируется в зависимости от атомов, занимающих атомную позицию 1, и различных присоединенных боковых цепей (нумерацию атомов см. На рис. 1).Стрелки DM пересекают молекулу от атома в положении 2 к атому в положении 5 (соединения II-IV) или указывают прямо на полярную область фармакофоров с наибольшими значениями (соединения I и VI). Примечательно, что DM антагонистов указывает на противоположный полярному фармакофору. Значения DM выше для антагонистов, благоприятствующих соединению 16. Значения EP были отсечены при -200 и 200 кДж / моль.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g004

Анализ взаимодействия кристалла IMMS-TLR8

Кристаллы шести комплексов IMMS-TLR8 демонстрируют сходные паттерны связывания, которые включают как мономеры А, так и В рецептора, образуя димер, соединенный двумя молекулами лиганда.Примечательно, что один мономер TLR8 связывает лиганд с полярными остатками, а второй мономер устанавливает в основном гидрофобные контакты с хинолиновой кольцевой системой и боковыми цепями. Для второй молекулы лиганда происходит обратное; следовательно, расположение атомов и задействованные остатки одинаковы в обоих лигандах. На рис. 5 показан типичный пример димера TLR8, включая область между двумя молекулами CL075 (PDB ID: 3W3K).

Рис. 5. Пример связывающего мостика между CL075 (IV) и димером TLR8.

Два мономера TLR8 окрашены по-разному, чтобы показать их взаимосвязь с двумя лигандами CL075 между ними. На вставках показано увеличенное изображение, которое включает две молекулы лиганда, связанные с остатками Asp543 и Thr574. (Синие) атомы N3 и N5 и аминогруппа N11, составляющие полярный фармакофор, во всех случаях образуют водородные связи с атомами кислорода (красные) двух остатков (нумерацию атомов см. На рис. 1). Лиганды явно находятся в перевернутом положении по отношению к двум мономерам TLR8.Отмеченные углы показывают разницу во вращении лигандов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g005

Площадь и объем переплетного кармана

Каждый из двух IMMS, связанных с димером TLR8, заключен в полость, которая образует карман для связывания. Таким образом, был рассчитан объем каждого связывающего кармана исследуемых агонистов TLR8. Некоторые полости показали важные различия между шестью IMMS, особенно соединениями IV и VI. Однако объем IMMS у них был примерно одинаков.Однако, как и ожидалось, соединения I и VI имели наибольший объем из-за дополнительной боковой цепи. Два примера формы и положения связывающего кармана для каждого димера TLR8 показаны на рисунке 6, а значения объема связующего кармана и физических свойств IMMS показаны в таблице 3.

Рис. 6. Форма и положение связывающего кармана, соединяющего два мономера TLR8 молекул IMMS.

Показаны связующие карманы, в которых находятся соединения I и VI. Связывающий карман соединения VI явно самый большой.Остаток Asp543 показан для справки.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g006

Устройство внутренней оболочки комплекса IMMS-TLR8

Оболочка взаимодействующих остатков в связывающем кармане, разделяемом двумя мономерами комплекса TLR8-IMMS на расстоянии 4 Å, показывает семь общих остатков в шести изученных агонистах. Таким образом, в соединениях I, II и IV четыре из них находятся в мономере A (Tyr348, Tyr353, Val378 и Phe405), а остальные три (Asp543, Asp545 и Thr574) находятся в мономере B.В соединениях III, V и VI происходит обратное. Кроме того, среди связывающих карманов, связанных с IMMS, обнаружено семь остатков в различной степени: Phe346; Глицины 351, 376 и 572; Ser352; Arg429 и Val573. Таким образом, соединения II, IV и VI связаны с девятью, соединения I и III с 11 и соединение V с 12 остатками соответственно. В таблице 4 показано распределение остатков по мономерам для изученных димеров TLR8.

Во всех комплексах IMMS-TLR8 две полярные аминокислоты Asp543 и Thr574 взаимодействуют с атомами N3, N5 и N11 полярного фармакофора.Важно напомнить, что один мономер TLR8 взаимодействует со своими полярными остатками, связывающими полярный фармакофор лиганда, а второй мономер TLR8 взаимодействует с тем же лигандом, в основном с гидрофобными остатками за счет сил Ван-дер-Ваальса. Второй лиганд взаимодействует противоположным образом, аналогично образуя мостик между обоими мономерами TLR8. На рис. 7 показано взаимодействие на расстоянии 4 Å трех типичных комплексов IMMS-TLR8. Остатки окрашены, чтобы их можно было различить по мономерам.

Рис. 7. Полярные и гидрофобные взаимодействия между TLR8 и IMMS.

Количество взаимодействующих остатков несколько варьируется между шестью IMMS. Представленные примеры представляют собой Hybrid-2, XG1-236 и CL097 с 11, 9 и 12 взаимодействующими остатками соответственно. Остатки Asp543 и Thr574 явно близки к атомам N фармакофоров и принадлежат одному мономеру TLR8, тогда как остальные остатки, которые вызывают в основном гидрофобные взаимодействия, принадлежат мономеру-аналогу TLR8.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0178846.g007

Электростатический потенциал комплекса IMMS-TLR8

EP-карты комплекса IMMS-TLR8 на расстоянии 4 Å показывают важные различия в полярной области, в основном из-за разного количества фиксированных молекул воды, образующих сеть водородных связей. Наблюдались две картины ВП; одна картина встречается в IMMS I, III и V с двумя фиксированными молекулами воды и 11, 11 и 12 остатками, соответственно. Вторая картина появляется в IMMS II, IV и VI, с одной, четырьмя и двумя фиксированными водами и девятью остатками в каждой.Первый шаблон включает Val573. Разнообразие атомов в положении 1 несколько изменяет картину ВП в соседних атомах имидазольного кольца.

Сходства наблюдаются для различных боковых цепей IMMS. Кроме того, гидрофобные взаимодействия демонстрируют важные различия из-за различий в количестве взаимодействующих остатков. Однако наиболее гидрофобная область (хинолон-бензольное кольцо) показывала низкие вариации во всех случаях. Примечательно, что была идентифицирована аккуратная и хорошо определенная высокополярная фармакофорная область IMMS, которая включала аминогруппу N3, N5 и N11 и атом C4.В этой области Asp545 и Thr574 образуют во всех изученных димерных комплексах IMMS-TLR8 замечательный образец водородных связей с одной фиксированной молекулой воды. Фиг. 8 показывает изображения EP-срезов обоих паттернов димерного комплекса IMMS-TLR8.

Рис. 8. Виды карты срезов EP из комплекса IMMS-TLR8.

Hybrid-2 (I) и XG1-236 (II) показаны для шаблона один и шаблона два, соответственно. Аналогичным образом показана вставка полярной области XG1-236. Наблюдается четкое определение как полярных, так и гидрофобных областей, включая совпадение анионных и катионных групп некоторых остатков с молекулой IMMS.На вставке - сеть из шести водородных связей. Четыре водородные связи образуют кольцо между фиксированной молекулой воды (W), Asp543 и Thr574 и двумя атомами водорода аминогруппы N11. Эти же остатки образуют еще две водородные связи с N5 и N3 соответственно (нумерацию атомов см. На рис. 1). Энергия ЭП терялась от -200 до 200 кДж / моль.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g008

Гидрофобные взаимодействия IMMS в связывающем кармане TLR8

Комплекс IMMS-TLR8 имеет от семи до десяти гидрофобных остатков, но только пять из них являются общими для всех IMMS.Однако количество гидрофобных контактов одного и того же остатка может варьироваться в зависимости от взаимодействующих IMMS. Ароматические остатки вступают в многочисленные и разнообразные контакты, особенно с имидазольным бензольным кольцом. Таким образом, число ван-дер-ваальсовых взаимодействий варьируется от 32 до 37. Фиг. 9 показывает три примера гидрофобных взаимодействий IMMS с их соответствующими взаимодействующими остатками из кармана связывания димера TLR8. Кроме того, в таблице 5 показаны взаимодействующие остатки и количество гидрофобных взаимодействий.

Рис. 9. Три примера гидрофобных взаимодействий IMMS с димерным комплексом TLR8.

Соединения I, III и VI имеют 9, 9 и 7 остатков с 33, 37 и 32 гидрофобными взаимодействиями соответственно. Во всех случаях присутствуют остатки Tyr348, Tyr353, Val378, Phe405 и Asp545. Asp545 принадлежит к противоположному мономеру TLR8. Остатки Tyr353 и Phe405 взаимодействуют в кольцо с хинолоновым фрагментом, демонстрируя наилучшие взаимодействия Ван-дер-Ваальса. Tyr 348, в частности, устанавливает гидрофобные контакты с боковой цепью IMMS, которая берет начало в атоме в положении 2.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g009

Атомные заряды комплекса IMMS-TLR8

Заряды на атомах были рассчитаны в несвязанных и связанных условиях как для IMMS, так и для соответствующих атомов остатков связывающего кармана. В несвязанном состоянии атомные заряды атомов N 3, 5 и аминогруппы N11, которые образуют полярный фармакофор, сильно отрицательны, особенно атома N11. Напротив, два атома H аминогруппы N11 и соседний атом C4 очень положительны.Как и ожидалось, между шестью IMMS наблюдаются различия в атомной поляризации. Атомы в положении 1 имеют различные значения заряда из-за разнообразия атомов в этом положении; то же самое происходит с его смежными числами 2, 9a и 10 атомов. Остальные атомы хинолиновой части имеют либо отрицательный (от C6 до C9), либо положительный заряд (C3a и C5a). Связывание атомов IMMS с остатками TLR8 поляризует атомы бензольного кольца хинолина, а также полярные атомы фармакофоров, за исключением атомов N11-H, которые остаются почти неизменными.

Напротив, взаимодействующие карбоксильные атомы кислорода (O-δ1 и O-δ2) Asp543 демонстрируют разную степень поляризации, которая способствует взаимодействию атома с атомом N5 хинолиновой группы. Однако атомные заряды NH, O и O-δ1 Thr574 практически не изменяются. Атомы кольца Phe405 были наиболее взаимодействующими с хинолин-бензольным кольцом, показывая тесное гидрофобное взаимодействие кольца с кольцом. На рис. 10 показаны тенденции кривых для групп атомов в IMMS и атомов остатков TLR8 как в несвязанных, так и в связанных условиях.

Рис. 10. Различия в зарядах между взаимодействующими атомами IMMS-TLR8 в связанных и несвязанных условиях.

Большинство атомов IMMS (левая панель) были поляризованы в процессе связывания, увеличивая и уменьшая их значения заряда. Таким образом, полярные фармакофорные атомы N3, N5 и N11, наряду с C4 и C5a, показали высокую поляризационную характеристику. Следует отметить, что атом в позиции 1 (C, N, S и O) демонстрирует широкий разброс заряда, но пониженную поляризацию. Углероды 6, 7, 8 и 9 бензольного кольца показали важные изменения заряда в некоторых IMMS.На стороне TLR8 (правая панель) только атом O-δ2 Asp545 был модифицирован за счет связывания с атомом N5 IMMS полярного фармакофора. Напротив, кольцевые атомы Phe405 наиболее поляризованы гидрофобными взаимодействиями в соединениях II и III. Несвязанные и связанные разницы в зарядах показаны полосами. Молекулярные и атомные данные показаны для ясности.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g010

Энергетическая оценка взаимодействия комплекса IMMS-TLR8

Была рассчитана полная энергия взаимодействия для каждого из шести комплексов IMMS-TLR8, а также энергия взаимодействия фармакофоров (полярная область).Энергия взаимодействия полярных остатков IMMS-фармакофор-TLR8 была рассчитана с учетом следующих систем: C4, N3, N5 и аминогруппа N11 IMMS в качестве фармакофора и одновременные остатки Thr574 и Asp543 TLR8 с одной фиксированной водой. молекула (см. рис. 8). Примечательно, что тенденция кривой полярной энергии взаимодействия фармакофоров противоположна тенденции полной энергии взаимодействия. Интересно, что кривая энергии взаимодействия, вызванная шестью комплексными полярными фармакофорами, во многом напоминает кривую, образованную экспериментальной фармакологической эффективностью IMMS.Фактически, линейный регрессионный и корреляционный анализ для обеих кривых показал линейный тренд со статистически значимыми значениями r = 0,838 и p = 0,037 (для значений фармакологической активности использовался их натуральный логарифм). На фиг.11 показаны две кривые энергии взаимодействия, рассчитанные для связывающего кармана комплекса IMMS-TLR8 и взаимодействий полярный фармакофор-TLR8 -Thr574 и Asp543. Кроме того, для корреляции включена эффективность кривой стимуляции активности агониста IMMS по отношению к факторам транскрипции IRF-NFκB (значения см. В таблице 1).На панели D показана линейная регрессия активности агониста TLR8 (значения ln) и энергии взаимодействия фармакофоров. Соответствующие данные для обоих расчетов энергии взаимодействия показаны в Таблице 6.

Рис. 11. Кривые полной и полярной энергии взаимодействия фармакофоров комплекса IMMS-TLR8.

Обе кривые энергии взаимодействия (A и B) показывают почти противоположные тенденции. Однако третья кривая (C) , которая показывает значения активности агониста TLR8, довольно хорошо коррелирует с энергией взаимодействия фармакофоров, наблюдаемой в D , где корреляция обеих кривых показывает значения r = 0.838 и p = 0,037. Кривая и координаты были скорректированы для отображения самых высоких значений.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178846.g011

Обсуждение

Химическая структура исследуемого IMMS очень похожа, показывая лишь небольшие различия в боковых цепях, прикрепленных к атомам в положениях 1 и 2 имидазольного кольца. Аналогичным образом, атом в положении 1 также отличается в некоторых случаях, показывая следующие тенденции фармакологической эффективности, а именно: C

Интересно, что некоторые физико-химические свойства в значительной степени коррелировали; например, картина полной энергии молекул IMMS напоминает кривую полной энергии взаимодействия. Обе кривые показывают более низкие значения для соединений I, IV и VI. Кроме того, кривая энергии взаимодействия подчеркивает, что среда связывающего кармана различается для каждого комплекса IMMS-TLR8. Аналогичным образом, кривые энергии сольватации и электроотрицательности имитируют кривую энергии полярного фармакофорного взаимодействия, предполагая, что свойства напрямую связаны с этой фармакофорной активностью.

Напротив, энергия пограничной орбиты (HOMO и LUMO) показала обратную тенденцию по сравнению с энергией полярного фармакофора. Площадь полярной поверхности достаточно хорошо коррелирует с площадью полярного фармакофора, за исключением соединения CL075 (IV), которое имеет атом серы в положении 1 [15]. Фактически, из-за своих физико-химических свойств атом S изменяет общие свойства соединения IV. Примечательно, что атомы полярного фармакофора были наиболее поляризованными: N3, N5 и N11, за которыми следуют C5a и C4 в меньшей степени, что подчеркивает важность полярного фармакофора.Что касается остатков в связывающем кармане, только несколько атомов углерода Phe405 и один атом кислорода Asp843 были слабо поляризованы. Тем не менее, эти остатки, по-видимому, необходимы для активации NF-κB [15].

Согласно нашему анализу механизма действия IMMS, энергия взаимодействия (связывание) полярного фармакофора является основной проблемой, связанной с фармакологической эффективностью в шести изученных кристаллах IMMS-TLR8. Полярный фармакофорный регион несколько отличается от модели с четырьмя регионами, предложенной Musmuca et al. .[26] для молекулы IMMS и родственных иммуномодуляторов. В интересном трехмерном QSAR-анализе 156 агентов, индуцирующих интерферон, эти авторы описали фармакофорную модель с четырьмя областями, включая адениновый фрагмент с двумя областями: область HA и поляризованная область, в которой эти авторы предположили наличие водородных связей. и полярные взаимодействия. Обе области совпадают с аминогруппой N3, N5 и N11 IMMS, которую мы обозначаем как полярный фармакофор, который также включает сеть водородных связей с фиксированной молекулой воды и два полярных остатка связывающего кармана TLR8.Две другие фармакофорные области, предложенные Musmuca и др. . [26] представляют собой заполняемый стерический карман и гидрофобную зону.

Два изученных антагониста IMMS, соединения 15 и 16 [16], имеют важные молекулярные модификации, особенно в полярной фармакофорной области. Таким образом, обе молекулы содержат атом N3, ковалентно связанный с большой боковой цепью 2-метилпропан-2-ола. Кроме того, соединение 16, наиболее эффективный антагонист, не имеет фармакофорной аминогруппы N11.Эти молекулярные изменения, которые блокируют или удаляют полярную область, ясно показывают, что эта область важна для активации иммунного ответа через комплекс IMMS-TLR. Следовательно, молекулярный механизм антагониста, вероятно, обусловлен отсутствием фиксированной молекулы воды, отсутствием сети водородных связей и нулевым или низким вкладом остатков Asp545 и Thr574. Однако оба соединения-антагониста способны занимать связывающий карман и взаимодействовать, вероятно, за счет увеличения сил Ван-дер-Ваальса на их двух боковых цепях.Кроме того, два антагониста имеют вектор DM, направленный к гидрофобной области; вектор соединения 15 немного короче, и оба обладают высокой энергией сольватации, что подразумевает низкую сольватацию. Эти особенности, по-видимому, способствуют гидрофобности и, вероятно, из-за особого электронного окружения, приводят к эффекту антагониста. Напротив, соединения I и VI имеют вектор DM к полярной области, уменьшая энергию сольватации и, следовательно, увеличивая сольватацию молекулы.В этом отношении соединение I имеет самую низкую энергию сольватации и наибольшую DM, направленную в сторону N5. Аналогичным образом, сравнение соединений II и III показывает, что соединение II имеет самую низкую энергию сольватации и более высокую DM, тогда как соединение III имеет самую короткую DM. Все эти данные достаточно хорошо коррелируют с фармакологической эффективностью этих соединений.

Анализ фармакологической активности IMMS показывает почти одинаковую тенденцию активации как TLR7, так и TLR8. Однако соединения I, V и VI явно более способны стимулировать TLR7 при более низких дозах.Напротив, TLR8 лучше реагирует на соединения II, III и IV. Это различие происходит независимо от близкого филогенетического родства TLR7 и TLR8 с одним и тем же подсемейством TLR [27], показывая высокий уровень гомологии последовательностей [28, 29]. Фактически, теоретическая модель предсказывает разные остатки для сайта связывания TLR7 по отношению к TLR8 [30]. Таким образом, различия в эффективности IMMS могут быть связаны с внутренними структурными различиями между связывающими карманами TLR7 и TLR8, которые приводят к функциональным различиям для обоих рецепторов, как ранее было предложено Gorden et al .[23]. Кроме того, из-за различных гидрофобных боковых цепей IMMS может обладать селективностью к TLR, аналогичной селективности, описанной для R837 (имиквимод), который специфически активирует TLR7 [15].

Небольшие лиганды IMMS активируют как TLR7, так и TLR8 аналогично естественным патогенам, вызывая каскад биохимических событий, которые первоначально стимулируют несколько типов клеток, таких как моноциты и NK / NKT, T, B, тучные и опухолевые клетки. Большинство этих клеток, в свою очередь, претерпевают миграцию, пролиферацию и апоптоз, наряду с выработкой значительного количества интерферонов, интерлейкинов и факторов некроза опухолей, среди прочего [31].Подтверждено, что биохимические реакции иммунной системы, вызываемые IMMS, эффективны против вирусных инфекций [32]. Фактически, TLR7 и TLR8 воспринимают одноцепочечную вирусную РНК [33]. Плейотропные характеристики IMMS, которые запускают иммунный ответ, также играют важную роль в улучшении терапии рака, относительно этого см., Например, [31] и важный обзор Schön и Schön [34]. Кроме того, IMMS проявляют эффект ингибирования ангиогенеза [35] и, вероятно, действуют как адъюванты вакцины [36].По нашим данным, все эти фармакологические эффекты могут быть в значительной степени коррелированы с региональной энергией взаимодействия IMMS. Мы также подтверждаем полезность анализа кристаллов в качестве инструмента для получения новых данных, которые могут быть использованы для улучшения конструкции молекулы IMMS для получения лучших иммуностимулирующих реакций за счет снижения токсичности и повышения эффективности.

Выводы

Настоящие результаты показывают, что применение теории квантовой механики и методов вычислительной химии для анализа кристаллической структуры TLR8, взаимодействующего с различными небольшими синтетическими IMMS, уделяя особое внимание сайту связывания рецептора и атомным взаимодействиям IMMS, позволило выяснить молекулярных свойств и расчета энергии взаимодействия комплекса IMMS-TLR8, которая достаточно хорошо коррелирует с иммунофармакологической активностью.

Молекулы IMMS явно несут определенную полярную область, которая действует как региональный фармакофор, который, по-видимому, имеет переменную селективность в отношении TLR7 и TLR8. Это открытие может облегчить рациональный дизайн и разработку новых агонистов и антагонистов IMMS, которые действуют специфически или избирательно в системе TLR или по отношению к другим рецепторам, способным обнаруживать патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP), улучшая терапевтическую модуляцию естественного иммунитета и терапевтическую эффективность. к инфекционным и опухолевым заболеваниям.

Вклад авторов

  1. Концептуализация: CKG AB.
  2. Обработка данных: RVR CTM.
  3. Формальный анализ: CKG RVR CTM AB.
  4. Получение финансирования: CKG AB.
  5. Расследование: ЦКГ РВР.
  6. Методология: CKG RVR CTM AB.
  7. Администрация проекта: ЦКБ.
  8. Ресурсы: RVR CTM.
  9. Программное обеспечение: RVR CTM.
  10. Надзор: CKG AB.
  11. Подтверждение: CKG RVR CTM AB.
  12. Визуализация: RVR CTM.
  13. Написание - первоначальный эскиз: CKG RVR CTM AB.
  14. Написание - просмотр и редактирование: CKG AB.

Ссылки

  1. 1. Айзекс А., Линденманн Дж. Вирусное вмешательство I. Интерферон. Proc R Soc Lond. 1957; 147: 258–267. pmid: 13465720
  2. 2. Пестка С.Интерфероны: через 50 лет после их открытия предстоит еще многое узнать. J Biol Chem. 2007; 282: 20047–20051. pmid: 17502369
  3. 3. Хитчингс Г. Х., Фалько Э. А., Шервуд МБ. Влияние пиримидинов на рост Lactobacillus casei . Наука. 1945; 102: 251. pmid: 17817366
  4. 4. Prusoff WH. Синтез и биологическая активность йоддезоксиуридина, аналога тимидина. Biochim Biophys Acta. 1959; 32: 295–296. pmid: 13628760
  5. 5.Хайдельбергер С, Парсонс Д., Реми, округ Колумбия. Синтезы 5-трифторметилурацила и 5-трифторметил-2’-дезоксиуридина. J Amer Chem Soc. 1962; 84: 3597–3598.
  6. 6. Privat-de-Garilhe M, de-Rudder J. Эффект деукснейклеозидов арабинозы на размножение вируса герпеса и вакцины в клеточной культуре. CR Acad Sc Paris. 1964; 239: 2725–2728.
  7. 7. Элион, Б. Б., Фурман П. А., Файф Дж. А., де Миранда П., Бошан Л., Шеффер Г. Дж. Избирательность действия противогерпетического средства 9- (2-гидроксиэтоксиметил) гуанина.Proc Natl Acad Sci USA. 1977; 74: 5716–5720. pmid: 202961
  8. 8. Миллер Р.Л., Имберстон Л.М., Рейтер М.Дж., Герстер Дж.Ф. Лечение первичной инфекции вируса простого герпеса у морских свинок имиквимодом. Antiviral Res. 1999; 44: 31–42. pmid: 10588331
  9. 9. Миллер Р.Л., Томай М.А., Харрисон С.Дж., Бернштейн Д.И. Иммуномодуляция как стратегия лечения генитального герпеса: обзор доказательств. Int Immunopharmacol. 2002; 2: 443–451. pmid: 11962724
  10. 10. Weeks CE, Reiter MJ.Противовирусный / иммуномодулятор R-837 индуцирует альфа-интерферон у мышей. J Invest Dermatol. 1989; 93: 584.
  11. 11. Докрелл Д. Х .; Кингхорн Г. Р. Имиквимод и резиквимод как новые иммуномодуляторы. J Antimicrob Chemother. 2001, 48, 751–755. pmid: 11733457
  12. 12. Лестер С.Н., Ли К. Толл-подобные рецепторы в противовирусном врожденном иммунитете. J Mol Biol. 2014; 426: 1246–1264. pmid: 24316048
  13. 13. Ганапати Л., Ван Харен С., Доулинг Д. Д., Бергельсон И., Шукла Н. М., Маллади С. С. и др.Гибрид-2, агонист имидазохинолинового Toll-подобного рецептора-7/8, сильно индуцирует продукцию цитокинов лейкоцитами новорожденных и взрослых людей. PLoS One. 2015; 10: e0134640. pmid: 26274907
  14. 14. Ю Э, Салунке Д.Б., Сил Д., Го Х, Салер АКД, Хермансон М. и др. Детерминанты активности на человеческих Toll-подобных рецепторах 7 и 8: количественное соотношение структура-активность (QSAR) различных гетероциклических каркасов. J Med Chem. 2010; 57: 7955–7970.
  15. 15. Танджи Х, Ото У, Шибата Т, Мияке К., Симидзу Т.Структурная реорганизация димера Toll-подобного рецептора 8, индуцированная агонистическими лигандами. Наука. 2013; 339: 1426–1429. pmid: 23520111
  16. 16. Шукла Н.М., Кимбрелл М.Р., Маллади СС, Дэвид С.А. Зависимый от региоизомерии агонизм TLR7 и антагонизм имидазохинолина. Bioorg Med Chem Lett. 2009; 19: 2211–2214. pmid: 19285861
  17. 17. Bernstein FC, Koetzle TF, Williams GJ, Meyer EE, Brice MD, Rodgers JR, et al. Банк данных о белках. J Mol Biol. 1997; 112: 535–542.
  18. 18. Хамфри В., Далке А., Шультен К. VMD - визуальная молекулярная динамика. J Mol Graph.1996; 14: 33–38. pmid: 8744570
  19. 19. Жених К.Р., Бруно Дж., Лайтфут МП, Уорд СК. Кембриджская структурная база данных. Acta Cryst. 2016; B72: 171–179.
  20. 20. Морленд Дж. Л., Грамада А., Бузко О. В., Чжан К., Борн П. Е.. Набор инструментов молекулярной биологии (MBT): модульная платформа для разработки приложений молекулярной визуализации. BMC Bioinformatics. 2005; 6:21.pmid: 15694009
  21. 21. Guex N, Peitsch MC. Swiss-Model и программа просмотра Swiss-Pdb: среда для сравнительного моделирования белков. Электрофорез, 1997; 18: 2714–2723. pmid: 9504803
  22. 22. Спартанский’14. Wavefunction Inc. Ирвин, Калифорния, США, 2014.
  23. 23. Горден К.Б., Горски К.С., Гибсон С.Дж., Кедл Р.М., Кипер В.К., Цю Х и др. Синтетические агонисты TLR обнаруживают функциональные различия между человеческими TLR7 и TLR8. J Immunol. 2005; 174: 1259–1268. pmid: 15661881
  24. 24.InvivoGen [Интернет]. Соединение имидазохинолина - лиганд TLR7 / 8. Каталог tlrl-c97, tlrl-c97-5. [цитируется 31 августа 2016 г.]. http://www.invivogen.com/PDF/CL097_TDS.pdf
  25. 25. Ши К., Чжэнмин Х, Читтепу П., Олдрич С.К., Олфест-младший, Фергюсон Д.М. Открытие имидазохинолинов с независимой индукцией цитокинов от Toll-подобного рецептора 7/8. ACS Med Chem Lett. 2010; 3: 501–504.
  26. 26. Musmuca I, Simeoni S, Caroli A, Ragno R. Низкомолекулярные индукторы интерферона.К пониманию молекулярных детерминант с помощью подходов на основе лигандов. Модель J Chem Inf. 2009; 49: 1777–1786. pmid: 19499914
  27. 27. Roach JC, Glusman G, Rowen L, Kaur A, Purcell MK, Smith KD, et al. Эволюция Toll-подобных рецепторов позвоночных. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102: 9577–9582. pmid: 15976025
  28. 28. Чуанг Т.Х., Улевич Р.Дж. Клонирование и характеристика подсемейства человеческих Toll-подобных рецепторов: hTLR7, hTLR8 и hTLR9.Eur Cytokine Netw. 2000; 11: 372–378. pmid: 11022120
  29. 29. Белл JK, Mullen GE, Leifer CA, Mazzoni A, Davies DR, Segal DM. Богатые лейцином повторы и распознавание патогенов в Toll-подобных рецепторах. Trends Immunol. 2003; 24: 528–533. pmid: 14552836
  30. 30. Вэй Т., Гонг Дж., Джамицки Ф., Хекл В.М., Старк Р.В., Россле СК. Гомологическое моделирование Toll-подобных рецепторов человека TLR7, 8 и 9 лиганд-связывающих доменов. Protein Sci. 2009; 18: 1684–1691. pmid: 19521997
  31. 31.Смитс Э. Дж. М., Понсартс П., Бернеман З. Н., Ван Тенделоо VFI. Использование лигандов TLR7 и TLR8 для усиления иммунотерапии рака. Онколог. 2008; 13: 859–875. pmid: 18701762
  32. 32. Докрелл Д.Х., Кингхорн Г.Р. Имиквимод и резиквимод как новые иммуномодуляторы. J Antimicrob Chemother. 2001; 48: 751–755. pmid: 11733457
  33. 33. Хайль Ф., Хемми Х., Хохрайн Х., Ампенбергер Ф., Киршнинг С., Акира С. и др. Видоспецифическое распознавание одноцепочечной РНК через toll-подобные рецепторы 7 и 8.Наука. 2004; 303: 1526–1529. pmid: 14976262
  34. 34. Schön MP, Schön M. TLR7 и TLR8 как мишени в терапии рака. Онкоген. 2008; 27: 190–199. pmid: 18176600
  35. 35. Majewski S, Marczak M, Mlynarczyk B, Benninghoff B, Jablonska S. Имиквимод является сильным ингибитором ангиогенеза, индуцированного опухолевыми клетками. Int J Dermatol. 2005; 44: 14–19. pmid: 15663652
  36. 36. Василакос JP, Томай MA. Использование агонистов Toll-подобного рецептора 7/8 в качестве адъювантов вакцины.Экспертные ревакцины. 2013; 12: 809–819. pmid: 23885825

Иммуностимулирующие моноклональные антитела для лечения рака

Иммунная система регулируется очень сложным балансом сигналов, передаваемых стимулирующими и ингибирующими рецепторами. Более чем любое другое открытие, моноклональные антитела (mAb) 1 позволили нам как идентифицировать, так и манипулировать этими молекулами, обеспечивая новый важный класс иммуностимулирующих терапевтических средств, которые могут дополнять низкомолекулярные терапевтические средства, находящиеся в стадии активной разработки 2 .Специфическое распознавание mAb позволило идентифицировать цитокины и молекулы клеточной поверхности, участвующие в гуморальных (опосредованных антителами) и клеточных иммунных ответах. Более того, mAb обладают специфичностью в отношении своих молекул-мишеней и способностью либо активировать (агонистические mAb), либо подавлять (антагонистические mAb) молекулярную функцию мишени. Иммуностимулирующие mAb можно определить как агенты, усиливающие текущие иммунные ответы. Как таковые, они обладают потенциалом для усиления иммунного ответа на опухоли, который подавляется у многих онкологических больных с помощью различных механизмов 3,4 .

Стимулирование иммунитета у онкологических больных

Отторжение опухолевых клеток требует организованного набора событий, опосредованных несколькими типами лейкоцитов, включая CD4 + и CD8 + Т-лимфоциты, дендритные клетки (DC) и естественные киллерные (NK) клетки (рис. 1). В лимфатических узлах, дренирующих опухоль, каждый Т-лимфоцит со своим эксклюзивным Т-клеточным рецептором (TCR) имеет возможность сканировать поверхности DC на предмет специфического антигенного пептида в комплексе с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I или класса II.Передача сигналов от TCR является основным триггером управляемого антигеном деления лимфоцитов, выживания и дифференцировки в эффекторные Т-лимфоциты или Т-лимфоциты памяти (рис. 2), но, как ни парадоксально, это также может привести к толерантности. Толерантность опосредуется либо устранением антиген-специфических Т-клеток посредством индукции апоптоза (клональная делеция), либо функциональным параличом антиген-специфических Т-клеток (анергия) 5 . Опасное решение инициировать или прекратить клеточный иммунный ответ в основном зависит от врожденного обнаружения антигенпрезентирующими ДК биомолекул, которые указывают на опасность 6 в форме присутствия микробов, стрессовой гибели клеток или воспаления 7 .Межклеточная коммуникация для инициирования, подавления или тонкой настройки клеточного иммунного ответа опосредуется растворимыми цитокинами и множеством пар рецептор-лиганд на поверхности соседних лейкоцитов (рис. 2).

Рисунок 1: Схематическое изображение точек вмешательства с иммуностимулирующими моноклональными антителами.

Отторжение опухолевых клеток - это организованный набор событий, опосредованный несколькими типами лейкоцитов. Молекулярные и клеточные сети, определяющие интенсивность ответа, могут быть искусственно изменены с помощью mAb, которые действуют на указанные поверхностные гликопротеины.Считается, что оптимальный иммунный ответ инициируется активированной и / или зрелой дендритной клеткой (ДК), представляющей оптимальные уровни антигена в лимфоидной ткани. Противоопухолевые эффекторные лимфобласты CD4 + и CD8 + образуются строго регулируемым образом, который устанавливает порог активации, предотвращает чрезмерную активацию системы и ограничивает размер клональной экспансии. Клетки-естественные киллеры (NK) могут способствовать противоопухолевому ответу, способствуя воспалению, активируя ДК и лизис опухоли, которые могут обеспечивать остатки злокачественных клеток для перекрестной презентации ДК.Иммунный ответ на опухолевые антигены организован в лимфоидной ткани (обычно лимфатических узлах), которая дренирует ткань, в которой расположена опухоль, и затем активированные лимфоциты могут потенциально проникать в опухолевую ткань, опосредуя разрушение опухолевых клеток. Это ограничено несколькими супрессивными механизмами, которые опосредуются регуляторными Т-клетками (клетки T Reg ), миелоидными клетками, присутствующими в очаге опухоли, и растворимыми факторами, такими как трансформирующий фактор роста-β (TGFβ), интерлейкин 10 (IL10) и сосуды. фактор роста эндотелия (VEGF).Молекулярные мишени для иммуностимулирующих mAb обозначены антителом, указывающим на название каждой молекулы. С фармакодинамической точки зрения иммуностимулирующие mAb можно разделить на следующие категории, обозначенные цветами: (красный) mAb, которые способствуют функции рецептора лимфоцитов (агонистов), участвующего в иммунной активации; (синий) mAb, которые препятствуют функции рецептора лимфоцитов, участвующего в ингибировании или регулировании иммунного ответа; (зеленый) mAb, которые способствуют функции профессиональных антигенпрезентирующих клеток (APC), таких как DC, которые представляют антиген Т-лимфоцитам; (пурпурный) mAb, которые мешают ингибирующим молекулам, экспрессируемым опухолью, или клеткам в микроокружении опухоли, которые способствуют уклонению от иммунитета.

Рисунок 2: Костимулирующие и коингибирующие молекулы, нацеленные на иммуностимулирующие mAb.

Схематическое изображение поверхностных ко-сигнальных молекул на Т-клетках, релевантных для иммунотерапии рака, взаимодействующих с их лигандами на антигенпрезентирующей клетке (APC). Эти поверхностные молекулы принадлежат к семействам рецепторов фактора некроза опухолей (TNF) и иммуноглобулинов, и их стимуляция или ингибирование может использоваться для усиления клеточного иммунного ответа против рака.Сверхактивация костимулирующих сигналов и инактивация коингибиторных функций может быть искусственно достигнута с помощью моноклональных антител (mAb) к агонистам и антагонистам. Некоторые из этих поверхностных молекул лимфоцитов являются конститутивными (например, CD28), некоторые конститутивно экспрессируются на одних клетках и индуцируются на других (таких как CD27 и CD40), тогда как другие индуцируются только после праймирования антигена (например, цитотоксические Т-лимфоциты). ассоциированный белок 4 (CTLA-4), 4-1BB, OX40, CD40L, BTLA и GITR) и поэтому избирательно экспрессируются на отвечающих лимфоцитах.Мишени индуцируемой экспрессии, вероятно, более избирательны и с меньшей вероятностью вызывают системные воспалительные синдромы.

После полной активации Т-лимфоциты достигают периферических тканей, отдавая предпочтение областям с воспалительным эндотелием сосудов. Активированные CD8 + Т-клетки, однажды загруженные цитолитическим аппаратом, убивают клетки-мишени, которые экспрессируют антиген-мишень в комплексе с небольшим количеством молекул MHC класса I. Активированные CD4 + Т-клетки могут также опосредовать разрушение опухолевых клеток, способствовать воспалению, взаимодействовать в индукции цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) CD8 + и помогать В-клеткам вырабатывать разрушающие клетки противоопухолевые антитела.

Опухоли используют широкий спектр регуляторных механизмов иммунной системы для предотвращения или подавления иммунного ответа. 3,4 . К ним относятся специализированные подмножества Т-клеток, которые подавляют клеточный иммунитет (регуляторные Т-клетки; клетки T Reg ) и множество растворимых факторов, таких как интерлейкин 10 (IL10), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и трансформирующий фактор роста-α ( TGFα) (рис.1). Фактически, успешный уход от иммунного надзора считается одним из необходимых признаков рака. 8 .

Рассматривается ряд стратегий использования иммунной системы в борьбе с раком (иммунотерапия рака), включая иммуностимулирующие и ингибирующие mAb, противораковые вакцины 9 , иммуностимуляторы для повышения иммуногенности опухолевых клеток и адаптивный перенос культивируемых активированных Т-лимфоциты (адоптивная Т-клеточная терапия) 10 900 26.

Преимущества иммуностимулирующих моноклональных антител

mAb IgG - это большие сложные белки, устойчивые к разложению в сыворотке крови и обладающие молекулярными особенностями, которые обеспечивают их сохранение в кровотоке в течение длительного периода. 11 .Однако преимущество длительного периода полувыведения сопровождается проблемой медленного обращения токсичности после лечения; удаление моноклональных антител из кровотока затруднено и требует сложных процедур, таких как повторный плазмаферез.

Чтобы избежать внутренней иммуногенности mAb грызунов, эти биомолекулы в настоящее время генетически сконструированы для замены иммуногенных последовательностей мыши на человеческие (что приводит к антителу, которое составляет ~ 95% человеческих) 11,12 , полученных из фаговых библиотек человеческих mAb или продуцируется у мышей, трансгенных по локусам иммуноглобулина человека 13,14 .Такие терапевтические антитела отличаются от эндогенного иммуноглобулина только по их антигенсвязывающему сайту (идиотопу), поэтому количественные анализы для оценки их фармакокинетики должны основываться на иммуноанализе с использованием рекомбинантного антигена, адсорбированного на пластиковых чашках, или специфических антиидиотипических моноклональных антител, если они доступны. Появление технологии гуманизации или производства полностью человеческих антител произвело революцию в терапии mAb, сделав возможным повторное дозирование без индукции иммунного ответа против антител у пациента, что было невозможно с исходными антителами грызунов.

Дозы для людей обычно составляют около 2–20 мг на кг (массы тела), и большинство схем включают повторение с интервалом в 2–8 недель. Следовательно, для контроля качества, токсикологии и клинических испытаний требуются дорогостоящие партии по 100–200 г, соответствующие надлежащей производственной практике (GMP).

Двухвалентность антигенсвязывающих сайтов mAb, вместе с возможностью гипер-перекрестного связывания рецепторами Fc на соседних лейкоцитах, обеспечивает способность сшивать белки, такие как рецепторы клеточной поверхности (часто связанные с агонистическими антителами), препятствовать белок-белку узнавание или индуцирование конформационных изменений в связанном целевом белке.MAb часто связываются со своими антигенами с аффинностью в несколько раз выше, чем природные лиганды. Эти молекулярные механизмы наделяют mAb различными функциональными возможностями в качестве агонистов или антагонистов передачи сигналов иммунной системы, опосредованной их белками-мишенями 15 .

Хотя новые mAb иногда могут обладать сильной иммуностимулирующей активностью и вызывать сильные противоопухолевые ответы, такая эффективность может иметь свою цену: токсичность. Описаны два типа токсичности, связанной с мишенью; генерализованная системная индукция провоспалительных медиаторов (индукция цитокинового шторма), которые могут вызывать опасный для жизни системный воспалительный синдром или синдром высвобождения цитокинов (вставка 1), а также органоспецифический аутоиммунитет, который до сих пор был временным и обратимым при клиренсе антител .

МА, увеличивающие костимуляцию

Т-клетки активируются, когда они связывают антиген, представленный антигенпрезентирующими клетками (APC), через их комплекс TCR-CD3. Т-клетки также экспрессируют несколько ко-сигнальных молекул, обычно гликопротеинов клеточной поверхности, которые направляют, модулируют и точно настраивают сигналы TCR 16 (рис. 1, 2). Как следствие, эти мембранные молекулы положительно и отрицательно контролируют праймирование, рост, дифференцировку и функциональное созревание Т-клеточного ответа.Функциональные эффекты на активацию Т-клеток классифицируют сопутствующие сигнальные молекулы как костимуляторы или коингибиторы. Молекулы, передающие совместные сигналы, задействуют свои лиганды в организованных участках межклеточного взаимодействия между Т-клетками и APC, называемыми иммунологическими синапсами 17 . Большинство определенных ко-сигнальных молекул принадлежат либо к суперсемейству иммуноглобулина 16,18 , либо к суперсемейству рецепторов фактора некроза опухоли (TNFR) 19,20 (рис. 2).

CD28 .Двухсигнальная модель активации Т-клеток постулирует существование двух типов сигналов: антиген-зависимые сигналы, опосредованные TCR, называются сигналом 1, а антиген-независимые костимулирующие сигналы называются сигналом 2. Классический сигнал 2 доставляется посредством молекула CD28 (экспрессируемая Т-клеткой) при связывании с лигандами CD80 (также известными как B7-1) или CD86 (также известными как B7-2) на APC. Комбинация сигналов 1 и 2 считается решающей для эффективной активации Т-клеток 21,22 .CD28 является членом суперсемейства иммуноглобулинов, конститутивно экспрессирующимся на мембране большинства покоящихся Т-лимфоцитов CD4 + и примерно на половине CD8 + Т-клеток 21 . После взаимодействия со своим лигандом CD28 индуцирует сигнальные каскады, которые увеличивают пролиферацию, усиливают секрецию цитокинов, повышают экспрессию антиапоптотических генов и повышают энергетический метаболизм для поддержки активации лимфобластов 21,22 .

Опухолевые клетки, трансфицированные кассетами экспрессии CD80 или CD86, проявляют повышенную иммуногенность, что приводит к регрессии и вакцинации против исходных опухолевых клеток, которые не трансфицированы ни одним из лигандов. 23,24 .Известно, что антитела против CD28 усиливают противоопухолевый иммунитет в сочетании с биспецифическими антителами, которые связывают как поверхностный опухолевый антиген, так и комплекс TCR-CD3 25 . В общем, лигирование CD28 без вовлечения TCR не влияет на Т-клетки, определяя его как костимулирующий рецептор. Однако некоторые антитела против CD28, называемые суперагонистическими антителами, связываются с конкретным эпитопом в CD28 и могут активировать Т-клетки без сопутствующего взаимодействия с TCR. Механизм активации Т-клеток этими суперагонистами неясен, но включает перекрестное связывание CD28 и может включать неспецифическое взаимодействие компонентов TCR вместе с взаимодействием CD28 через сайт связывания антигена.Использование суперагонистических анти-CD28 антител in vivo приводит к быстрому размножению клеток T Reg 26 , и экспериментальные данные на грызунах предполагают, что они обладают потенциалом для лечения аутоиммунных состояний 27 и реакции трансплантат против хозяина 28 . Клетки множественной миеломы также экспрессируют CD28, что указывает на то, что эти антитела могут оказаться полезными для лечения этого заболевания 29 . Однако первоначальное клиническое испытание суперагонистических антител против CD28 привело к резкой клинической токсичности (вставка 1).

Применение ex vivo агонистических моноклональных антител против CD28 человека клинического уровня представляет собой устойчивое распространение в культуре Т-клеток для адоптивной терапии 30 . Этот подход может быть использован для крупномасштабного размножения культур Т-клеток после того, как специфичность была установлена ​​с помощью первоначальных методов культивирования, основанных на антигенах 31 .

4-1BB . Суперсемейство рецепторов TNF включает несколько членов, которые доставляют костимулирующие сигналы Т-клеткам 19,20,32 (рис.2). 4-1BB, также известный как CD137, экспрессируется на активированных Т-клетках (CD8 + , CD4 + , включая клетки T Reg и NKT-клетки) 33 , цитокин-активированные NK-клетки 34 , активированные DC 35 , эозинофилы, тучные клетки и, что интересно, эндотелиальные клетки в некоторых метастатических опухолях 19 . Существует единственный охарактеризованный лиганд (4-1BBL, также известный как CD137L) 36 , экспрессируемый на активированных DC, B-клетках и макрофагах. После связывания со своим лигандом 4-1BB доставляет костимуляторный сигнал, который может функционировать независимо от CD28 (Ref.37). Передача сигналов 4-1BB индуцирует повышенную регуляцию антиапоптотических генов BCL2, BCL-XL и BFL1, которые обеспечивают защиту от индуцированной активацией гибели Т-клеток (AICD) 19,38 . В соответствии с его функцией костимулятора активации Т-клеток, 4-1BB нулевые мыши и 4-1BBL нулевые мыши имеют менее устойчивый CTL-ответ против вирусов, таких как лимфоцитарный хориоменингит и грипп 39,40 . Недавние данные указывают на то, что 4-1BB необходим для стабильной дифференцировки CTLs и создания долгоживущих CTL памяти 41 .

Сингенные саркомы, мастоцитомы и лимфомы, экспрессирующие трансфицированный 4-1BBL, редко могут приживаться у сингенных мышей. Совместная экспрессия 4-1BBL и CD80 или CD86 в этих опухолях синергетична в предотвращении приживления 42,43 . Опухолевые клетки, экспрессирующие 4-1BBL, являются митогенными для предварительно активированных CD8 + и CD4 + Т-клеток. In vitro трансфекция 4-1BBL в клетки K562, которые используются в качестве искусственных APC, вместе с mAb против CD28 улучшила рост культур Т-клеток человека 44 .В отличие от опухолевых клеток, которые экспрессировали CD80, клетки мастоцитомы P815 и B-клеточной лимфомы, которые экспрессировали 4-1BBL, неэффективно ингибировали рост соответствующих нетрансфицированных опухолевых клеток. Однако одноцепочечное антитело против 4-1BB, закрепленное на клеточной поверхности клеток меланомы, функционировало как мощная вакцина против нетрансфицированных клеток меланомы мыши. Терапевтическая эффективность этой вакцины основывалась в основном на способности NK-клеток и CD4 + Т-клеток, поскольку их молекулы 4-1BB предположительно взаимодействуют с искусственным лигандом с более высоким сродством на мембране клеток меланомы 45 .

Активирующие (агонистические) mAb, которые связывают 4-1BB (ссылка 46), вызывают полную регрессию многих типов установленных опухолей, происходящих из сингенных линий опухолевых клеток мыши 47 . Считается, что этот противоопухолевый эффект включает активацию наивных Т-клеток, которые специфичны для опухолевых антигенов, перекрестно презентируемых DC. Следовательно, циркулирующие антитела против 4-1BB будут совместно стимулировать праймированные Т-клетки 4-1BB + везде, где они мигрируют по телу (рис. 2). Регрессия опухоли требует активности CD8 + Т-лимфоцитов 47 и NK-клеток 34 , тогда как CD4 + Т-клетки необходимы в некоторых, но не во всех моделях трансплантированных опухолей (рис.1). Отторжение опухоли сопровождается сильными ответами CTL со специфической цитолитической активностью и секрецией интерферона-γ (IFNγ). Слабо иммуногенные опухоли, которые были устойчивы к mAb против 4-1BB, были ликвидированы при комбинировании с пептидными вакцинами против экспериментальных опухолевых антигенов, таких как E7 вируса папилломы человека-16 или протеин 2, родственный тирозиназе, в результате повышенного CTL-ответа на эти ранее игнорированные антигены 48 . В этом отношении вакцинация ДК, пульсирующая лизатами опухолей, также привела к синергическому и успешному лечению двух опухолей, устойчивых к 4-1BB-mAb 49 .

В контексте адоптивной Т-клеточной терапии Т-клетки, которые экспрессируют 4-1BB и которые вводятся одновременно с моноклональными антителами против 4-1BB, обладают сильным синергическим эффектом у мышей, как сообщается, благодаря ингибированию AICD в адоптивно перенесенных лимфоцитах 50 . Лечение анти-4-1BB также имеет потенциал для профилактической вакцинации против вирусных антигенов гриппа и вируса гепатита С 51,52 . И опухолевые антигены, и вирусные антигены при хронических инфекциях вызывают гипореактивность в результате анергии или истощения Т-клеток, специфичных для высокой авидности.Было показано, что лечение mAb 4-1BB отменяет толерантность Т-клеток CD8 + в моделях опухолей 53 . Интересно, что лигирование 4-1BB приводит к образованию Т-клеток CD8 + , которые имеют тенденцию сохраняться в виде более многочисленной популяции Т-клеток памяти.

Разработаны гуманизированные mAb против 4-1BB (BMS-663513), и начато клиническое испытание фазы I с увеличением дозы у 60 пациентов с метастатическими или местно-распространенными солидными опухолями (база данных клинических испытаний Национального института здравоохранения NCT00309023) .

Как ни парадоксально было показано, что mAb против 4-1BB, характеризующиеся их противоопухолевой активностью, предотвращают или улучшают различные аутоиммунные состояния у мышей 54 . Кроме того, экспериментальные данные показывают, что они могут подавлять гуморальный иммунитет, возможно, из-за интерференции с CD4 + Т-хелперными клетками 1 55 . Эти противоположные эффекты могут объясняться несколькими механизмами, включая повышенную активность клеток T Reg , вмешательство в активацию Т-клеток CD4 + и IFNγ-зависимую индукцию иммуносупрессивного фермента 2,3-индоламиндиоксигеназы (IDO) 54 .В качестве возможного исключения из положительного воздействия mAb против 4-1BB на аутоиммунитет исследования на мышах показали, что mAb против 4-1BB могут вызывать легкие мультифокальные воспалительные инфильтраты в печени, хотя клиническое значение этого наблюдения неясно 56 .

OX40 . OX40, также известный как CD134 и TNR4, является членом семейства TNFR, который экспрессируется на активированных, но не покоящихся CD4 + и CD8 + Т-клетках 19,20 .Его основная роль заключается в том, чтобы функционировать как поздний костимуляторный рецептор для CD4 + и CD8 + Т-лимфоцитов 32 (рис. 1, 2). Его лиганд, OX40L, экспрессируется на активированных APC (DC, B-клетки и макрофаги), а также может экспрессироваться на активированных T-клетках и эндотелиальных клетках 19 . Лигирование OX40 костимулирует пролиферацию и выживание Т-клеток 32 , и хотя OX40 и 4-1BB, по-видимому, перекрываются во внутриклеточных сигналах, существуют различия 57 , возможно, связанные с тем фактом, что эти молекулы могут гетеродимеризоваться в плазме. мембрана 58 .Искусственная совместная стимуляция CD4 + и CD8 + Т-клеток посредством активации OX40 увеличивает пролиферацию, выживаемость и секрецию цитокинов. Соответственно, дефицит OX40 или OX40L у мышей приводит к более слабому CD4 + Т-хелперный иммунный ответ 59,60 .

Агонистические моноклональные антитела против OX40

, как сообщалось, обращают вспять толерантность Т-клеток к CD4 + , изменяя анергическое состояние, вызванное воздействием на Т-клетки CD4 + антигена (в форме растворимого белка) в условиях не- воспалительные состояния 61 900 26.Лигирование OX40 с агонистическими антителами или с химерным белком OX40L – Ig повышает иммунитет опухоли против различных трансплантируемых сингенных опухолей 62,63 . Более того, экспрессия экзогенного OX40L опухолевыми клетками увеличивает их иммуногенность, и они отторгаются через CD4 + Т-хелперные клетки 1 (Th2) и ответы CTL 64 .

Аутоиммунитет как побочный эффект, вызванный стимуляцией OX40, еще не зарегистрирован, хотя его нельзя исключать, поскольку OX40 был обнаружен на лимфоцитах CD4 + , инфильтрирующих рассеянный склероз и воспалительные заболевания кишечника.Фаза I клинических испытаний с использованием мышиных моноклональных антител против OX40 человека была начата на пациентах с запущенным раком множественного тканевого происхождения (В. Урба, личное сообщение), хотя возможность введения повторных доз этого ксеногенного антитела пациентам будет ограничена из-за на иммунный ответ, который будет возникать против мышиных последовательностей антитела.

МА, которые препятствуют совместному ингибированию

Совместное ингибирование можно определить как активность, опосредованную рецепторами клеточной поверхности, которые подавляют активацию лимфоцитов и / или эффекторную функцию 18,23 .Интересно, что ко-ингибиторные пары рецептор-лиганд превосходят по численности пары костимулирующих в суперсемействе иммуноглобулинов (Рис. 2), указывая тем самым, что аутоиммунитет и системное воспаление были сильным селективным давлением во время эволюции. Альтернативная возможность, предложенная J.P. Allison, заключается в том, что коингибирующие молекулы динамически регулируют порог активации Т-клеток, чтобы сдерживать Т-клетки с наиболее активными TCR и разрешать активацию Т-клеток с более низким сродством 65 . Получающийся в результате поликлональный (мультиспецифический) иммунный ответ будет менее подвержен неудаче из-за потери или мутации эпитопа.

CTLA-4 . Цитотоксический белок 4, связанный с Т-лимфоцитами (CTLA-4, также известный как CD152), гомологичен костимулирующему рецептору CD28, и они способны связывать те же лиганды. Однако авидность CTLA-4 в отношении CD80 и CD86 в 100–1000 раз выше, чем у CD28 (ссылки 18, 66). Экспрессия белка CTLA-4 индуцируется, когда комплекс TCR взаимодействует с антигеном и, хотя и сохраняется во внутренних компартментах везикулярных Т-клеток, выходит в иммунный синапс при последующих встречах с антигеном 66 .CTLA-4 снижает активацию Т-клеток как за счет конкуренции с CD28 за связывание лиганда, так и за счет привлечения тирозина и сериновых или треониновых фосфатаз 66 . Наиболее важной молекулярной функцией CTLA-4, по-видимому, является ингибирование костимуляции CD28, о чем свидетельствует CD28-зависимый 18 неконтролируемый лимфопролиферативный и аутоиммунный синдром, наблюдаемый у CTLA-4 нулевых мышей 67,68 .

Важно отметить, что CTLA-4 конститутивно экспрессируется на CD4 + CD25 high forkhead box P3 + (FOXP3 + ) T Reg клеток 4 и, по-видимому, действует как костимулятор. их подавляющей функции in vitro .Возможно, что CTLA-4, экспрессируемый клетками T Reg , участвует в индукции толерантности в CD80-экспрессирующих DC за счет обратной передачи сигналов 69 . Действительно, адоптивный перенос CTLA-4 нулевых Т-клеток нормальным мышам не повторяет аутоиммунный синдром, наблюдаемый у донорских мышей 69 , что предполагает, что CTLA-4 функционирует не только для регулирования активации эффекторных Т-клеток, но также вовлекает активность, осуществляемую доминирующим образом супрессорными клетками 18,70 .Однако роль CTLA-4 в функции клеток T Reg еще предстоит окончательно доказать, поскольку пациенты, получавшие анти-CTLA-4 mAb, не показывают значительных изменений в количестве или функции циркулирующих клеток T Reg 71 , хотя эффекты на клетки T Reg в опухолях или тканях пролеченных пациентов не оценивались.

Моноклональные антитела, которые ингибируют функцию CTLA-4 (рис. 1), способны увеличивать терапевтический иммунный ответ CD8 + и CD4 + против многих трансплантируемых сингенных опухолей мыши с сильным терапевтическим эффектом, хотя и противоопухолевым. Эффекты одноэлементных моноклональных антител против CTLA-4 обычно ограничиваются иммуногенными опухолями, способными примировать Т-клетки 72,70 .Тот факт, что CTLA-4 экспрессируется только после предварительной активации на эффекторных лимфоцитах, объясняет, почему эффекты in vivo анти-CTLA-4 и анти-CD28 mAb различны, хотя основной функцией CTLA-4, по-видимому, является контроль CD28-опосредованной активации 18 . Кроме того, поскольку CTLA-4 индуцируется на примированных клетках, потенциальный синергизм с противоопухолевой вакцинацией казался правдоподобным, и, хотя лечение анти-CTLA-4 само по себе оказывало незначительное влияние на слабо иммуногенную меланому B16, оно эффективно синергизировало с опухолевыми клетками, экспрессирующими гранулоцитарные макрофаги. колониестимулирующий фактор (GMCSF) для устранения установленных поражений меланомы B16 с сопутствующим аутоиммунным витилиго 73 .Точно так же лечение моноклональными антителами против CTLA-4 в синергии с вакцинацией против простатоспецифического антигена для индукции противоопухолевых эффектов в трансгенной модели спонтанного рака простаты (мыши TRAMP) с доказательством деструктивного воспаления в доброкачественной ткани простаты 74 . Также продемонстрирована синергия с синтетическим пептидом и вакцинами DC 70,75,76,77,78,79 .

Противоопухолевые эффекты этих антител, вероятно, не опосредуются их действием на клетки T Reg , поскольку лечение mAb против CTLA-4 синергетически с истощением клеток T Reg 80 и in vivo. Функция клеток T Reg , по-видимому, не подавляется обработкой анти-CTLA-4 71 .Следовательно, основным механизмом действия, по-видимому, является предотвращение связывания CTLA-4 с CD80 или CD86. Трансплантируемые опухолевые клетки мышей, по-видимому, экспрессируют низкие уровни CD80, что указывает на то, что блокирование этого взаимодействия может предотвратить опосредованную CD80 активацию CTLA-4 на цитотоксических Т-клетках, которые инфильтрировали опухоль 81 .

Клиническая разработка mAb против CTLA-4 . Клинически два различных гуманизированных моноклональных антитела, направленных к человеческому CTLA-4, в настоящее время независимо тестируются в клинических испытаниях фазы III для пациентов с метастатической меланомой 70 .Оба агента показали клинические терапевтические реакции в соответствии с критериями оценки ответа при солидных опухолях (RECIST), некоторые из которых имеют длительную продолжительность, что нечасто у пациентов с запущенным заболеванием, включенных в исследования фазы III. Неблагоприятные аутоиммунные эффекты были временными и обратимыми.

Неблагоприятные явления в форме аутоиммунитета чаще всего включают зудящую кожную экзему с генерализованной сыпью и воспалительные синдромы кишечника с умеренной и тяжелой диареей 82 .Патологическое исследование кожных и желудочно-кишечных поражений показывает инфильтраты CD4 + и CD8 + Т-клеток. Реже наблюдались случаи воспаления гипофиза (гипофизита), вызывающего гипопитуитаризм, воспаление увеального слоя глаза (увеит) и гепатит 82,83,84,85,86 . Следует отметить, что, хотя эти побочные эффекты объясняются индукцией аутоиммунитета, ответа на определенные аутоантигены еще не установлено.Следовательно, возможно, что некоторые из них, особенно синдромы воспалительного кишечника, могут представлять собой несоответствующие реакции на комменсальную флору. Лечение этих побочных эффектов потребовало стероидной терапии, которая предположительно противодействует противоопухолевым эффектам анти-CTLA-4, хотя есть случаи продолжающихся объективных ответов опухоли во время стероидной терапии 87 . Смягчение аутоиммунной и / или гипериммунной токсичности, вызванной моноклональными антителами против CTLA-4, также наблюдалось у пациентов, получавших лечение ингибирующими антителами против TNFα (S.Розенберг, личное сообщение).

Первое опубликованное клиническое испытание mAb против CTLA-4 включало однократную дозу 3 мг на кг (массы тела) пациентам с меланомой или раком яичников. Хотя это не были объективные ответы, было несколько признаков усиленных воспалительных реакций, один из них - метастаз злокачественной меланомы в мозжечок. Однако это поражение настолько воспалилось, что пациент умер от внутричерепной гипертензии 88 . Было отмечено, что пациенты в этом испытании, которые ранее лечились вакциной DC или аутологичными опухолевыми клетками, которые экспрессируют экзогенный GMCSF (GVAX), имели более сильные патологические признаки воспаления и некроза в своих опухолях 78,88 .Клиническое испытание с участием 36 пациентов со злокачественной меланомой сочетало болюсную инъекцию IL2 с возрастающими дозами mAb против CTLA-4. 22% пролеченных пациентов показали общий ответ, с 3 полными ответами, и не было доказательств аддитивной токсичности 89 . В настоящее время проводится обширная серия исследовательских клинических испытаний фазы II, в которых моноклональные антитела против CTLA-4 комбинируются с принятыми протоколами химиотерапии.

Данные, собираемые в настоящее время в клинике, касаются пациентов в основном со злокачественной меланомой или почечно-клеточным раком, хотя есть пациенты с различными солидными опухолями, которые были включены в различные клинические испытания.Результаты более всесторонних исследований у пациентов со злокачественной меланомой показали несколько вещей. Во-первых, дозировка и режим максимальной эффективности не установлены, хотя клинический ответ редко наблюдается при дозах менее 3 мг на кг (масса тела). Улучшение реакции и повышение иммунной токсичности чаще наблюдаются при применении нескольких доз. Во-вторых, для появления клинических ответов требуются недели, если не месяцы, что требует необычно длительного временного окна для оценки эффективности 85 .В-третьих, аутоиммунные реакции четко коррелируют с клинической эффективностью 86,87 . В-четвертых, стойкие иммунные инфильтраты в очагах поражения могут длиться месяцами, и поэтому критерии ответа, основанные только на методах визуализации, могут не полностью определять эффективность. В-пятых, в испытании, объединяющем ранее описанную пептидную вакцину gp100 90 , mAb против CTLA-4 не увеличивало частоту Т-клеток, отвечающих на этот антиген даже в случаях с объективными ответами, вопреки ожиданиям исследований на мышах 83 , 87 .В-шестых, количество и функция клеток T Reg в периферической крови существенно не затрагиваются у пролеченных пациентов 71 . В-седьмых, пока нет какого-либо полезного иммунного параметра, который коррелировал бы с эффективностью, кроме инфильтрации опухоли клетками иммунной системы 91 . И, наконец, до сих пор неясно, усиливают ли антитела против CTLA-4 латентный, слабый ранее существовавший ответ Т-лимфоцитов или способствуют активации наивных Т-клеток. Действительно, нет сообщений об антигенной специфичности Т-клеток, инфильтрирующих опухоли пациентов, которые реагируют на это лечение.

ПД-1 и В7-h2 . PD-1 (ссылка 92) является другим коингибиторным рецептором, который проявляет гомологию с CD28 и экспрессия которого индуцируется после активации на CD4 + и CD8 + Т-клетках, В-клетках и моноцитах 16,18 . Этот поверхностный рецептор имеет два известных лиганда, B7-h2 (также известный как PD-L1) и B7-DC (также известный как PD-L2) 16,18 . Лигирование PD-1 вызывает ингибирование активации и пролиферации Т-клеток, вызывая остановку клеточного цикла без апоптоза.Фенотип PD-1-нулевых мышей характеризуется клеточно-опосредованным органо-специфическим аутоиммунитетом 93 , что согласуется с ингибирующей функцией PD-1 в регулировании TCR – CD28-зависимой активации Т-клеток. В отличие от CTLA-4-нулевых мышей, у которых в течение 3 недель развивается летальный полиорганный аутоиммунитет или гипериммунитет, у PD-1-нулевых мышей обычно развиваются более ограниченные аутоиммунные синдромы, которые зависят от штамма и возникают только в возрасте старше 6 месяцев. Следовательно, PD-1, по-видимому, является более тонкой иммунной контрольной точкой, чем CTLA-4.

Экспрессия

B7-h2 была описана на различных опухолевых клетках человека 94 , и экспрессия этой молекулы снижает иммуногенность опухолей мыши in vivo 94 . Кроме того, экспрессия B7-h2 при злокачественных новообразованиях человека коррелирует с плохим прогнозом 95 .

B7-DC может доставлять костимулирующие или ко-ингибиторные сигналы к примированным лимфоцитам, в зависимости от условий культивирования. 96,97 . Его экспрессия ограничивается активированными DC, и считается, что он индуцирует костимуляцию Т-клеток через еще не идентифицированный контррецептор, экспрессируемый на активированных Т-клетках.

Введение mAb против PD-1 и B7-h2 вызвало CTL-опосредованные противоопухолевые эффекты у мышей 98 . B7-h2 вмешивается в эффекторную фазу CTL-опосредованных клеток, убивая 98 (рис. 1). Интерес к этой мишени подогревается открытием, что у мышей, хронически инфицированных лимфоцитарным хориоменингитом, наблюдается клональное истощение CD8 + CTL, которые распознают вирусные антигены. Истощенные клоны экспрессировали высокие уровни PD-1, и блокада как PD-1, так и B7-h2 с помощью mAb изменила этот фенотип in vivo , и мыши восстановили опосредованную Т-клетками противовирусную активность 99 .До сих пор не поступало данных об обращении клонального истощения Т-клеток у мышей с опухолями. Клинические испытания фазы I были начаты на онкологических больных с полностью человеческими mAb против PD-1, хотя пока нет доказательств того, что истощение клонов объясняет слабые Т-клеточные ответы на злокачественные опухоли человека.

Различные направления исследований показали, что поливалентные mAb человеческого IgM, направленные против B7-DC из сыворотки пациента с макроглобулинемией Вальденстрема, обеспечивают сильный сигнал созревания DC после перекрестного связывания B7-DC (рис.1), индуцируя секрецию IL12 из DC 100 . Введение этого mAb мышам вызывает зависимое от Т-клеток отторжение трансплантируемых опухолей и, таким образом, указывает на клинический потенциал 101 .

MAb, улучшающие производительность APC

Зрелые или активированные DC способны индуцировать мощную клональную экспансию Т-клеток и эффекторную дифференцировку 7 . Созревание DC 102 вызывает активацию костимулирующих молекул, таких как CD80 и CD86, и цитокинов (таких как IL2, IL12, IL15, IL23, IFNα, IFNβ и IFNγ), которые управляют полной эффекторной дифференцировкой Т- и NK-клеток.Однако в устойчивых условиях презентация антигена не полностью активированными DC вызывает анергию или истощение Т-клеток после прерванной временной активации. Неполностью активированные ДК обнаруживаются у больных раком 7 .

CD40 . Конститутивная экспрессия CD40 имеет решающее значение для функции В-клеток и DC 103 . Эта молекула принадлежит к суперсемейству TNFR. Экспрессия CD40 не ограничивается В-клетками и ДК, но также экспрессируется на макрофагах, Т-клетках и в негемопоэтических тканях, таких как эндотелий сосудов и множественный эпителий.Фактически, CD40 часто экспрессируется на поверхности клеток карциномы и лимфомы. Существует единственный лиганд, CD40L, который в основном экспрессируется на активированных Т-хелперных клетках 103,104 , хотя он также может экспрессироваться на активированных NK-клетках, тромбоцитах и ​​плазмацитоидных DC. В иммунной системе лигирование CD40 имеет решающее значение для компетентного клеточного иммунного ответа, а также для созревания аффинности и переключения классов тяжелых цепей в гуморальном иммунном ответе. Эти функции системы CD40L – CD40 поддерживаются гуморальным и клеточным иммунодефицитом, наблюдаемым у людей с мутациями в CD40L или CD40, и у мышей, у которых гены, кодирующие эти белки, нокаутированы.CD40 кажется решающим для лицензирования DCs и позволяет им управлять ответами эффекторных CTL, частично за счет индукции секреции IL12 с помощью DCs 105,106 .

МАт, специфичные для CD40, могут оказывать два типа противоопухолевых эффектов. Некоторые из них предположительно действуют на CD40-экспрессирующие опухолевые клетки посредством опосредования антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) или комплемент-зависимой цитотоксичности 104 . Кроме того, передача сигналов CD40 в некоторых карциномах и лимфомах может способствовать апоптозу опухолевых клеток 104 .

Однако на многих доклинических моделях наблюдалось, что противоопухолевые эффекты лигирования CD40 с помощью mAb требуют функциональной иммунной системы. 107 . Предлагаемые механизмы включают активацию DC и, возможно, в случае лимфомы превращение злокачественных В-клеток в эффективные APC для индукции CTL. Очевидно, что запуск CD40 может, по крайней мере, частично преодолеть потребность в помощи Т-клеток и обеспечить эффективный, длительный противоопухолевый иммунитет, как экспериментально наблюдалось после истощения Т-клеток CD4 + 108,109 .Как mAb к CD40, так и CD40L также использовали для созревания культивируемых DC in vitro перед использованием в вакцинах DC 108 , и некоторые DC были трансфицированы CD40L перед использованием 110 . Фактически, в ранней клинической работе была принята модифицированная версия этой стратегии с прямой экспрессией CD40L в клетках хронического лимфоцитарного лейкоза с использованием рекомбинантного аденовирусного вектора. Увеличение количества противоопухолевых Т-клеток и уменьшение количества циркулирующих злокачественных лимфоцитов и размера пораженных лимфатических узлов наблюдались у пациентов, которым вводили клетки хронического лимфолейкоза, экспрессирующие CD40L 111 .

В первом клиническом испытании по изучению использования растворимого триггера CD40 использовался рекомбинантный тример CD40L человека, rhuCD40L, который обладает сильной агонистической активностью 112 . Тридцать два пациента с солидными опухолями или неходжкинской лимфомой получали 5-дневный курс от 0,05 до 0,15 мг на кг (массы тела) в исследовании с увеличением дозы. Максимально переносимая доза (МПД) составляла 0,1 мг на кг (массы тела) в день, исходя из временного увеличения печеночных трансаминаз в сыворотке. Несмотря на эту относительно небольшую дозу, было зарегистрировано два ответа, один полный и один частичный, и у 12 пациентов было достигнуто улучшение в виде некоторой степени стабильного заболевания.Полный ответ был особенно интересен, потому что он произошел через долгое время после лечения. Совсем недавно компания Seattle Genetics исследовала использование гуманизированного mAb против CD40 (SGN-40) в исследовании фазы I увеличения дозы 113 . Тридцать пять пациентов, 23 с множественной миеломой и 12 с неходжкинской лимфомой, получали еженедельные дозы от 2 до 4 мг на кг (массы тела). SGN-40 на удивление хорошо переносился по сравнению с другими исследованиями, в которых использовали CD40L или анти-CD40 mAb, при этом не сообщалось о серьезных побочных эффектах.Два пациента, оба с неходжкинской лимфомой, достигли частичного ответа, один из которых сохранялся в течение нескольких месяцев. Кроме того, хотя критерии объективного ответа не были соблюдены, снижение уровня моноклонального (М) -белка, продуцируемого клетками злокачественной миеломы, было зарегистрировано у четырех пациентов, что указывает на уменьшение опухолевой нагрузки.

Наконец, Vonderheide и его коллеги недавно сообщили о клиническом испытании фазы I с использованием различных mAb против CD40 при различных типах опухолей.Это моноклональные антитела, полностью агонистические по отношению к IgG2 человека, CP-870,893 (ссылка 114). Интересно, что у пациентов со злокачественной меланомой наблюдались четыре частичных ответа, но ограничивающая дозу токсичность наблюдалась при низких дозах, таких как 0,3 мг на кг (массы тела), из-за системных воспалительных синдромов 115 . В настоящее время продолжается фаза I испытаний двух неродственных человеческих mAb против CD40 у пациентов с неходжкинской лимфомой, хроническим лимфолейкозом или множественной миеломой.

Терапевтические комбинации для повышения эффективности

Поэтапная клиническая разработка требует ранних клинических испытаний для тестирования новых агентов в качестве монотерапии.Тем не менее, считается, что комбинированная терапия обладает потенциалом создания синергетической противоопухолевой активности (рис. 3). MAb против CTLA-4 продемонстрировали доклинические синергические эффекты с несколькими формами противораковых вакцин, а также с лучевой терапией 116 и химиотерапией 117 . Наблюдается явная нехватка экспериментальной информации о том, могут ли mAb против CTLA-4 также безопасно увеличивать эффективность адоптивного переноса Т-клеток на моделях мышей.

Рис. 3. Эффективные комбинированные стратегии с использованием иммуностимулирующих моноклональных антител.

Схема комбинаторных терапевтических стратегий с иммуностимулирующими моноклональными антителами (mAb) против рака, в клинической и доклинической разработке. Состояние каждого лечения или каждой комбинации (двуглавые стрелки) обозначается цветовым кодом. α, анти.

Интересно, что недавно было сообщено о синергетическом эффекте совместного введения анти-4-1BB и анти-CTLA-4 mAb 56 . Эксперименты на человеческих CTLA-4 мышей позволили провести эти наблюдения с человеческим mAb против CTLA-4 56 , но только на модели карциномы толстой кишки MC38, а не с другими менее иммуногенными опухолями, такими как B16. меланома.Важно отметить, что совместное введение с mAb против 4-1BB, по-видимому, улучшало аутоиммунные инфильтраты, которые вызываются обработкой mAb против CTLA-4 56 .

mAb против CTLA-4 могут синергизировать с mAb против CD40 и истощением клеток T Reg в доклинической модели 80 . Размышляя о сочетании лечения с mAb против CTLA-4, следует помнить, что одновременное или последовательное манипулирование различными контрольными точками иммунной регуляции может вызвать неизлечимый аутоиммунитет в результате одновременного ослабления слишком многих иммунологических «тормозов».

mAb 4-1BB также показали повышенную эффективность в доклинических моделях в сочетании с химиотерапией. 118 . Недавно было одобрено клиническое испытание для тестирования химиотерапии и моноклональных антител против 4-1BB при раке яичников (NCT00351325). Вакцины против опухолевых антигенов обладают синергическим действием с mAb против 4-1BB и в качестве адоптивной Т-клеточной терапии 50 . Синергизм с DC-вакцинацией кажется очень эффективным и наблюдался с DC, нагруженными опухолевым лизатом 49 и внутриопухолевой инъекцией DCs, генетически модифицированных для продуцирования IL12 (Ref.119).

Очень обнадеживающее недавнее исследование подтвердило беспрецедентную эффективность у мышей, получавших комбинацию анти-CD40 и анти-4-1BB mAb 120 . Интересно, что активность увеличивалась с помощью mAb, индуцированных против рецептора смерти 5 (DR5), члена суперсемейства TNFR, которое индуцирует апоптоз опухолевых клеток 120 . Эффективность была замечательной даже против автохтонных сарком, вызванных химическим канцерогеном. Индукция гибели опухолевых клеток антителами против DR5 в сочетании с иммуностимулирующими mAb предполагает, что апоптоз опухоли опосредует высвобождение опухолевых антигенов для перекрестной презентации DC и может способствовать инфильтрации Т-клеток в опухолевые поражения.Следует изучить другие подходы, которые используют аналогичные комбинации, чтобы вызвать локальное разрушение опухолевых клеток. Лечение mAb-агонистом 4-1BB (и в меньшей степени клетками, экспрессирующими 4-IBBL) синергетически с переносом гена IL12 в опухолевые клетки, опосредуя очищение опухоли у мышей 121,122 .

Еще одна интересная область, которая до сих пор в значительной степени не исследована, - это комбинация иммуностимулирующих mAb с аллогенной или аутологичной трансплантацией костного мозга. Сообщалось, что mAb против 4-1BB усиливают как острую болезнь трансплантат против хозяина, так и связанный с ней эффект трансплантата против лейкемии у мышей 123 , тогда как mAb против 4-1BB улучшают хроническое заболевание трансплантат против хозяина 124 .

mAb против OX40 эффективно синергетически с mAb против 4-1BB в моделях мышиной опухоли и вирусной инфекции, без явных побочных эффектов 63 . Дальнейшее улучшение было очевидным, когда опухолевые клетки экспрессировали экзогенный IL12 (ссылка 63). Если вводить вместе с вакцинацией, эта комбинация может успешно лечить карциному молочной железы, развивающуюся у трансгенных мышей мыши-опухоли молочной железы (MMTV) -neu 125 .

mAb против PD-1 и против B7-h2 проявляют синергетические терапевтические эффекты с агонистическими mAb против 4-1BB против опухолевых клеток, которые экспрессируют B7-h2 в качестве механизма иммунного ускользания. 98 .Идентификация первичных механизмов иммунного ускользания для определенных классов опухолей может иметь важное значение в будущем для создания наиболее подходящих комбинаций на индивидуальной основе.

Разработка новых иммуностимулирующих mAb, нацеленных на недавно идентифицированные костимулирующие и коингибиторные молекулы (дополнительная информация S1 (вставка)), является захватывающей, но сложной областью исследований трансляции и обратного трансляции (вставка 2). Важно, чтобы любое новое иммуностимулирующее соединение тестировалось тщательно и систематически поэтапно (рис.4 и Дополнительная информация S2 (рамка)). Возможно, наиболее многообещающими являются наблюдения, указывающие на то, что методы лечения, включающие иммуностимулирующие mAb, по-видимому, обладают синергетическим эффектом (рис. 3).

Рис. 4. Путь от доклинической к клинической разработке иммуностимулирующих моноклональных антител.

Блок-схема путей открытия и разработки, изображающая прогрессирование иммуностимулирующего моноклонального антитела (mAb) в направлении клиники: от идентификации мишени до клинических испытаний (дополнительная информация S2 (рамка)).Следует иметь в виду, что иммуностимулирующие моноклональные антитела, по крайней мере в некоторых случаях, бросают вызов общепринятым парадигмам развития малых молекул при раке, потому что они часто не имеют четких эффектов доза-ответ, позднего начала положительных эффектов в некоторых случаях, непоследовательности в оценка ответа с помощью стандартных методов визуализации, иммунологических тестов, измеряющих противоопухолевый иммунитет в качестве суррогатной конечной точки, и, прежде всего, новых типов побочных эффектов.

Ящик 1 | Клиническое испытание фазы I TGN1412

13 марта 2006 г. область иммунотерапии потрясла сообщение о серьезной токсичности в когорте нормальных добровольцев в испытании фазы I с увеличением дозы моноклонального антитела к CD28 (mAb; TGN1412). с сильным «суперагонистическим» действием на Т-лимфоциты 126 .Каждому из первых шести добровольцев, получивших первую дозу (около 7 мг), потребовалась госпитализация по поводу синдрома высвобождения цитокинов, включая четыре тяжелых случая полиорганной недостаточности в контексте массивного ангионевротического отека и диссеминированного внутрисосудистого свертывания 127 . Никаких смертельных случаев не произошло благодаря подстрекательству, хотя и с задержкой в ​​несколько часов, интенсивной терапии, стероидов, плазмы и курса mAb-антагонистов рецепторов интерлейкина-2 (анти-IL2). Было обнаружено значительное увеличение концентрации нескольких воспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли-α, IL1β, IL12 и IL6) 127 .Доклинические данные у приматов, отличных от человека, которым вводили 500-кратно более высокие дозы, не предсказывали этого побочного эффекта, несмотря на очевидную реактивность CD28 приматов с TGN1412. Тщательное расследование, похоже, исключает проступки, а также ловушки производства и / или контроля качества, которые могли объяснить почти фатальный результат (согласно отчету Министерства здравоохранения Великобритании). Результат испытания TGN1412 явно повлияет на правила клинической разработки других иммуностимулирующих mAb, что потребует более осторожного первого введения людям, чтобы минимизировать риски 128 .В частности, это устранит практику болюсного введения новых mAb нескольким нормальным добровольцам без возможности прекратить инфузию при первом появлении симптомов 129 . Хотя иммуностимулирующие моноклональные антитела потенциально могут быть очень полезными агентами, они требуют очень тщательного доклинического и клинического тестирования, чтобы избежать дальнейших неудач. Особенно важно, чтобы мы не игнорировали то, что может быть полезным иммуностимулятором, просто из-за недостаточного внимания или понимания при их первоначальном тестировании.Важная рекомендация британского исследования исследования Тегенеро состоит в том, что сначала нужно пробовать стимулирующие моноклональные антитела в очень низких дозах. «Низкая» доза в испытании основана на разбавлении максимальной переносимой дозы для обезьян.

Ящик 2 | Ограничения в разработке иммуностимулирующих мАт

Препятствия для распознавания новой цели

  • Почти все эксперименты проводятся на мышах, поэтому те элементы иммунной системы, которые различаются у мышей и людей, нелегко оценить в экспериментальных опухолевых системах.

  • Трансплантируемые опухоли грызунов - несовершенные предикторы истинной потенциальной эффективности против болезней человека (даже у мышей со спонтанными или химически индуцированными опухолями).

  • Мыши - несовершенные предикторы токсичности антител против конкретной иммунной мишени.

  • Моноклональные антитела (mAb) против молекул мыши вырабатываются у крыс и хомяков, и поэтому высокогомологичные белки среди видов грызунов вряд ли будут иммуногенными для продукции mAb.Следовательно, невозможно получить высокоаффинные антитела против некоторых мышей-мишеней. Беспристрастный скрининг антител с использованием фаговых библиотек и иммунизация соответствующих мышей с нокаутом могут обойти эту проблему.

Препятствия для клинического развития

  • Затраты: зарождающаяся область технологии гуманизированных антител стоит дорого, так как требует биообработки и контроля качества партий сложного тетрамерного белка.

  • Риски: новые типы побочных эффектов, включая аутоиммунные реакции и синдромы цитокинового шторма, могут быть связаны с использованием этих моноклональных антител.

  • Комбинированные схемы, вероятно, потребуются для достижения клинически значимой эффективности.

  • Трудности в разработке надежных иммуноанализов в качестве суррогатных конечных точек биологической активности.

  • Сложные вопросы интеллектуальной собственности с участием различных владельцев, которые в конечном итоге требуют сложных деловых соглашений и, возможно, инициатив со стороны национальных или наднациональных финансовых агентств. 130 .

(PDF) Echinacea purpurea - мощный иммуностимулятор

Int.J.Pharm.Sci.Rev.Res., №14 (2), 2012; nᵒ08, 47-52  ISSN0976 – 044X

МеждународныйЖурналФармацевтическихНаучныйОбзориИсследования      Страница 951

Доступноонлайннаwww.globalresearchonline.net

5. MatthiasA, BanburyL, BoneKM, LeachDNandLehmannRP.

EchinaceaalkylamidesmodulateinducedimmuneresponsesinT -

клеток.Fitoterapia.79: 2008, 53-58.

6. Dalby-BrownL, BarsettH, LandboAK, MeyerASandMølgaardP .

Синергетическое антиоксидантное действие алкамидов, кофеиновой кислоты

производных, и  полисахаридных фракций из пурпурной  эхинацеи

на витроокисление человека липопротеины низкой плотности.«Журнал»

Сельское хозяйство «Продовольствие» Химия 53: 2005, 9413-9423.

7. МакГрегор Р.Л., «Таксономия» рода Echinacea (Compositae).

University ofKansasScience Bulletin48 (4): 1968, 113‐142.

8. BauerR, andWagnerH.Echinaceaspeciesaspotential

иммуностимулирующих препаратов. In: H. WagnerandNRFarnsworth

(eds.), Economicandmedicical plantresearch.AcademicPress, 

NewYork, 5: 1991, 253–321.

9.RedondoL, LaEquináceapurpúrea: unaalternativerealpara

оценкаelsistemainmunológicoReview.Fitoterapia1: 2000, 15-

24.

10. Эльзассер-Бейлеу, Вилленбахер, Бартч, ХХ, Галлати, Шульте,

,

, Монтинг, Дж, фон Клейст, производство цитокинов в лейкоцитарных культурах.

во время «терапии» экстрактом «эхинацеи». «Журнал» клиники »

Лаборатория« Анал, 10: »441-445. HaselenRA. ЭффективностьPrikweggelin

лечения укусов насекомых: двойное слепое, плацебо-контролируемое

клиническое испытание.PharmacyWorldScience, 18: 1996, 35-41.

12. BurgerRA, TorresAR, WarrenRP, CaldwellVDandHughesBG.

Производство цитокинов, индуцированное эхинацеей, человеческими макрофагами.

InternationalJournal ,Pharmacy, 19: 1997, 371–379.

13. ПерсивальSS.ИспользованиеEchinacea «В медицине. Биохимия»

Фармакология, №60: 1997, №155-158.

14. Линда С. Ким, Роберт Ф. Уотерс и Питер М. .BurkholderMD.

Иммунологическая активность арабиногалактана из лиственницы и эхинацеи: A

Предварительное, рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование.

АльтернативаМедицинаОбзор, 7 (2): 2002, 138-149.

15. BlumenthalM.Herbsalesdowninmainstreammarket, upin

магазина натуральных продуктов. : 

HawthornePress, 1999.

17. BarrettB.Medicinalproperties ofEchinacea: acriticalreview.

Phytomedicine, 10: 2003, 66-86 .

18. BarrettB, VohmannM, CalabreseC.«Эхинацея» для «верхних»

респираторных »инфекций.« Журнал »семейной практики, 48: 1999, 628-35.

19. ЦенLC, SegalS, PothierM , BaderAM. Alternativemedicineusein

preurgicalpatients.Anesthesiology, 93: 2000, 148‐51.

20. TsuiB, DennehyCE, Tsourounis C.Asure ofdietarysupplement

use во время беременности вакадемическоммедицинском центре.American

JournalofAbstetricsandGynecology, 185: 2001, №433-7. №

21.PlantaM, GundersenB, PetittJC.Распространенность использования трав

продуктов среди населения с низким доходом. FamilyMedicine, 32:  2000, 

252-7.

22. O'DeaJA. Потребление пищевых добавок среди

подростков: потреблениеи воспринимаемые выгоды.ЗдоровьеОбразование

Research, 18: 2003, 98-107.

23. CalaS, CrismonML, BaumgartnerJ.Asurvey ofherbalusein

детей с «Синдром дефицита внимания-гиперактивности» или

депрессия.Фармакотерапия, 23: 2003, 222-30.

24. KinscherK.Лекарственные «дикие» растения »прерия.« Этноботаника »

руководство. ofKansas.1992, 84-94.

25. MoermanDE.Лекарственныерастениякоренной Америки.Research

ReportsinEthnobotany, Contribution2.Technical Reports,

Number19, UniversityofMichiganMuseumofAnthropology, Ann

Arbor, Michigan.1986, 156-158.

26. 26. Wagner HиProkschA.Имуностимулирующиепрепаратыfungi

и высшие растения.IN:  (H.Wagneretal.Eds.) Economicand

Medicinal plantresearch.AcademicPress, NewYork, NewYork.1: 

1985, 113-153

27. WagnerH, ProkscheA, Riess-MauereI, VollmarA, OdenthalS, 

StuppnerH, Jurcie K, LeTurduM, andFangJN.Immunstimulierend

wirkendepolysaccharide (гетерогликан) aushoherenpflanzen.

Arzneimittel-Forschung35 (8): 1985, 1069-1075.

28. OttarianoSG.Medicinalherbaltherapy: взгляд фармацевта.

Portsmouth, NH: NicolnFieldsPub, 1999.

29. SeeD, BroumandN, SahlL, TillesJ.InvitroeffectsOf «Эхинацея»

и «Женьшень» на «Натуральных» убийцах и антителозависимых клетках

цитотоксичность для здоровых субъектов и хронический синдром усталости или

Приобретенный иммунодефицит. patients.

Immunopharmacology35: 1997, 229-235.

30. LewisWH.Medicalbotany: «Растения, влияющие на здоровье человека.New

York:  Уайли, 1977 год.

31. TylerVE.Честное травяное: сознательное руководствопоиспользованию трав

и связанных с ними средств.НовыйЙорк: Фармацевтика ProductsPress,

xviii: 1992, 375.

32. AwangDVCandKindackDG.HerbalMedicine: Echinacea.

CanadianPharmacyJournal, 124: 1991, 512-516.

33. BauerR.Echinacea: Biologicaleffectsatidactiveprincipals.

Phytomedicines ofEurope: Chemistryandbiologicalactivity. В: 

LawsonLD, BauerR, eds., ACSSymposiumSeries691.Washington,

DC, AmericanChemicalSociety, 1998, 140-157.

34. RiningerJA, KicknerS, Chigurupati P, McLeanA, FranckZ.

Иммунофармакологическая активность препаратов эхинацеи

после смоделированного переваривания макрофагов мочи и человека

периферической крови cells.Journal ofLeukocyteBiology, 68: 2000, 503-

510.

35. GoelV, ChangC, SlamaJV, BartonR, BauerR, GahlerR., Basu, TK.№

Эхинацея стимулирует функцию макрофагов в легком и селезенке

«нормальных» крыс. . RandolphRK, GellenbeckK, StonebrookK, BrovelliE, QianY,

Bankaitis-DavisD, CheronisJ. Регулирование человеческого генома

выражение каквлиялокоммерческисмешанный продукт эхинацеи

: Предварительные исследования.ЭкспериментальныебиологияиМедицина,

228: 2003, 1051-1056.

37. BinnsSE, HudsonJ, MeraliS, ArnasonJT.«Противовирусная» активность »

охарактеризованных« экстрактов »из« эхинацеи »(Heliantheae: 

Asteraceae) против« симплексного »вируса герпеса (HSV-1). 68: 2002a, 780-783.

38. MeraliS, BinnsS, Paulin-LevasseurM, FickerC, SmithM, BaumBR, 

Brovelli E, ArnasonJT. Противогрибковая и противовоспалительная активность of

рода Echinacea.PharmBiol41: 2003, 412-420.

39. ChenY , FuT, TaoT, YangJ, ChangY, KimL, QuLиScalzoR.

Макрофаги, активирующие эффекты  новых алкамидов из корней

видов эхинацеи. Журнал Natural Product, 68: 2005, 773-776.

40. PellatiF, BenvenutiS, MelegariMandLasseigneT. Вариабельность в

Состав антиоксидантных соединений ввидах Echinacea по

HPLC.PhytochemicalAnalysis, 16 (2): 2005, 77-85.

41. SloleyBD, TywinC, CouttsRT, PangPKandShan JJ.Сравнение

химических компонентов и антиоксидантов способности различных

видов эхинацеи.«Журнал» фармацевтики, №53 (6): (

2001, 849-857.000

42. PellatiF, BenvenutiS, MargoL, MelegariMand СорагниФ.Анализ

фенольных соединений ирадикальныхпоглощающихдействий

видов эхинацеи. Журнал АптекииБиомедицинскийанализ, 

35 ( 2): 2004, 289-301.

43. GuiottoP, WoelkartK, GrabnarI, GranzottoMandBauerR.

Фармакокинетикаииммуномодуляторы эффектыof5

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку "Назад" и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

inmunoestimulante - Перевод на английский - примеры испанский

Эти примеры могут содержать грубые слова, основанные на вашем поиске.

Эти примеры могут содержать разговорные слова, основанные на вашем поиске.

ENSAYO B (Muestras): Se añade la puromicina y el inmunoestimulante natural.

Poseen propiedades antioxidantes, противовоспалительные средства y inmunoestimulante .

Cinc Este efecto inmunoestimulante de plantas Potenteazã.

Las Instrucciones de uso indican que la composición tiene un efecto antiviral e inmunoestimulante .

В инструкции по применению сказано, что состав обладает противовирусным и иммуностимулирующим действием .

Este es un aceite esencial anti-viral, inmunoestimulante y tonificación general.

Нет такого детектирования, как Actividad inmunoestimulante ni quimioterapéutica en ocho Experimentos con animales en los que se usó el modelo опухолевые мурино S-180 де саркомы.

Иммуностимулирующая или химиотерапевтическая активность не была обнаружена в восьми экспериментах на животных, в которых использовалась модель опухоли саркомы мыши S-180.

También es un inmunoestimulante y un descongestionante de la próstata.

Bacillus subtilis 60 мг закрыть 60 DRCapsTM Una cepa de бактерий probiótica con Capacidad inmunoestimulante confirmada Adultos.

Bacillus subtilis 60 мг close 60 DRCapsTM Пробиотический штамм бактерий с подтвержденной иммуностимулирующей способностью Взрослые.

La composición de este inmunoestimulante como elemento Principal es de trescientos miligramos de inmunoglobulina humana.

В состав этого иммуностимулятора в качестве основного элемента входит триста миллиграммов иммуноглобулина человека.

Ficocianina, azul profundo, es un Potente , иммуноэстимулант .

Es antibacteriano, противовирусное средство, , иммуноэстимулант , противовоспалительное средство, cicatrizante y ligeramente analgésico.

Это бактерицидное, противовирусное, иммуностимулятор , , противовоспалительное, заживляющее и легкое обезболивающее.

Бета 1,3 / 1,6 глюкан закрывает 60 капс. овощи мг Un Potente inmunoestimulante de propiedades clínicamente demostradas.

Бета 1,3 / 1,6 глюкан закрыть 60 Вег. Капс250 мг Мощный иммуностимулятор с клинически доказанными свойствами.

Es un fármaco inmunoestimulante , un medicamento que hace que el sistema inmunitario trabaje mejor.

Это иммуностимулятор , лекарство, улучшающее работу иммунной системы.

Es un inmunoestimulante y antiinfeccioso Vegetal.

El Principio activo de Neulasta, pegfilgrastim, es un inmunoestimulante que pertenece al grupo de 'factores Estimulantes decolias'.

Действующее вещество Neulasta, пегфилграстим, представляет собой иммуностимулятор , который относится к группе «колониестимулирующих факторов».

La composición de acuerdo con la presente invención posee propiedades antigripales y antioxidantes potciadas, así como una alta Capcidad inmunoestimulante .

Композиция по настоящему изобретению обладает усиленными антиоксидантными и противогриппозными свойствами, а также высокой иммуностимулирующей способностью .

La equinácea (echinácea) es un inmunoestimulante y la planta inmunomodulador pequeña, actúa en la Estimulación y Regulación del sistema inmune.

Эхинацея иммуностимулятор и иммуномодулирующее небольшое растение, он действует на стимуляцию и регуляцию иммунной системы.

Este inmunoestimulante natural puede ser administrado a animales jóvenes y Adults, mejorando la eficacia de su systema inmunológico y reduciendo notablemente la mortalidad.

Этот природный иммуностимулятор можно вводить молодым и взрослым животным, повышая эффективность их иммунной системы и значительно снижая смертность.

Fito-inmune a través de alto contenido en extracto de echinacea purpureea, tiene, además de una acción inmunoestimulante , propiedades antibacterianas y hemostático.

ФИТО-иммунный благодаря высокому содержанию в экстракте эхинацеи пурпурной, помимо иммуностимулирующего действия обладает антибактериальными и кровоостанавливающими свойствами.

Su acción farmacológica se basa en el efecto cancrostático, inmunoestimulante y citotóxico que ejercen las viscotoxinas y lecitinas de la planta.

Его фармакологическое действие основано на канцеростатическом, иммуностимуляторе и цитотоксическом эффекте, оказываемом вискотоксинами и лецитинами растения.

Citromix Экстракт семян грейпфрута 50 мл Мощный иммуностимулятор

Нажмите на изображение для галереи

CITROMIX экстракт семян грейпфрута 50 мл Мощный иммуностимулятор

Показания :

-Улучшает здоровье сердечно-сосудистой системы;

-Поддерживает иммунную систему и ее правильное функционирование;

- Благоприятно влияет на функцию желудочно-кишечного тракта и уравновешивает кишечную флору, помогает организму справляться с воспалительными и аллергическими реакциями, способствует более легкому выздоровлению от острых и хронических инфекций.

Активные ингредиенты:

Экстракт семян грейпфрута: 0,47 г

Витамин С: 20 мг

Биофлавоноиды: 6,56 мг

Витамин А: 438 мкг

Витамин D3: 5,5 мкг.

Дозировка:

Принимать по 15 капель в день, растворенных в воде, чае или соке.

  • Бренд: ВЕТПРОМ БОЛГАРИЯ
  • Код продукта: Citromix-Grapefruit-Seed-Extract-50ml-Powerful-Immunostimulant
  • Наличие: В наличии

Экспресс-доставка?

1-2 рабочих дня для всего Евросоюза за 15,99 £.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *