Наталья чекулаева: Чекулаева Наталья Петровна — 16 отзывов | Москва

29.06.197127.09.2022 alexxlab 0 Комментариев

Содержание

Чекулаева Наталья Петровна — 16 отзывов | Москва

16 отзывов

от 2100 ₽

Инфекционистдетский инфекционист16 отзывов

Стаж 38 лет

Чекулаева Наталья Петровна, Москва: детский инфекционист, инфекционист, 16 отзывов пациентов, места работы, стаж 38 лет, запись на приём ☎ (499) 500-97-23.

Обновлено 31.08.2022

Сообщить об ошибке

Профиль лечения

Опыт работы

Образование

Квалификации

Рейтинг

Отзывы

Профиль лечения

10%
Малярия
10%
Тиф сыпной
10%
Ботулизм
10%
Паротит инфекционный
10%
Коклюш
10%
Скарлатина
10%
Лихорадка жёлтая
10%
Гангрена
10%
Сальмонеллез
10%
Брюшной тиф

Опыт работы

1984 — 1986
Читинский государственный медицинский институт
Младший научный сотрудник
1986 — 1995
МСЧ г. Краснокаменска Читинской области
Врач-терапевт стационара
1995 — 1996
МСЧ г. Краснокаменска Читинской области
Врач-инфекционист
1996 — 2021
Главный военный клинический госпиталь ВВ МВД России, г. Москва
Врач-инфекционист
2013 — н. в.
Многопрофильная клиника «Чудо Доктор», г. Москва
Врач-инфекционист

Образование

1984
Читинская государственная медицинская академия (лечебное дело)
Базовое образование
1995
Уральский государственный медицинский университет (инфекционные болезни)
Циклы переподготовки
2010
Российская медицинская академия последипломного образования (РМАПО) (инфекционные болезни)
Повышение квалификации

Повышение квалификации

2012
«ВИЧ-инфекции», Центральный НИИ эпидемиологии, г. Москва

Рейтинг

Отзывы

Народный рейтинг +5.2

Обследование +1.3

Эффективность лечения +0.4

Отношение к пациенту +1.6

Информирование +1.4

Посоветуете ли врача? +1.1

Рейтинг снижен: врач не подтвердил стаж, категорию и учёную степень

Стаж38 лет

КатегорияНет

Учёная степеньНет

Отзывы

Пациент
+7-968-45XXXXX

31 августа в 12:38

-2.0 ужасно

Тщательность обследования

Эффективность лечения

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Ужасно

Никогда

Проверено (3)

Посетили в августе 2022

«Чудо-Доктор» на Школьной 46-ул. Школьная, д. 46

Пациент
+7-909-99XXXXX

17 августа в 16:10

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Эффективность лечения

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (2)

Посетили в августе 2022

«Чудо-Доктор» на Школьной 46-ул. Школьная, д. 46

Пациент
+7-925-87XXXXX

13 июля в 16:29

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (2)

Посетили в июле 2022

«Чудо-Доктор» на Школьной 46-ул.

Школьная, д. 46

Пациент
+7-925-20XXXXX

30 марта в 13:33

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (2)

Посетили в марте 2022

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-926-49XXXXX

4 марта 2021
в 19:14

-0.4 нормально

Тщательность обследования

Эффективность лечения

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Нормально

Ужасно

Отлично

Нормально

Никогда

Проверено (1)

Посетили в октябре 2020

«Чудо-Доктор» на Школьной 46-ул. Школьная, д. 46

Пациент
+7-929-50XXXXX

2 января 2021
в 15:19

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Эффективность лечения

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (1)

Посетили в январе 2020

«Чудо-Доктор» на Школьной 46-ул. Школьная, д. 46

Пациент
+7-926-41XXXXX

16 июня 2020
в 13:37

+2.0 отлично

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (2)

Посетили в июне 2020

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-926-53XXXXX

28 декабря 2019
в 23:17

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Эффективность лечения

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (1)

Посетили в декабре 2019

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-915-31XXXXX

19 ноября 2019
в 15:28

+1.8 отлично

Тщательность обследования

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Да

Проверено (2)

Посетили в ноябре 2019

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-916-70XXXXX

2 августа 2019

в 11:50

+2.0 отлично

Тщательность обследования

Отношение к пациенту

Информирование пациента

Посоветуете ли Вы врача?

Отлично

Однозначно

Проверено (2)

Посетили в августе 2019

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-985-30XXXXX

17 мая 2019
в 11:11

+2.0 отлично

Проверено (2)

Посетили в мае 2019

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-916-71XXXXX

14 декабря 2018
в 11:02

+2.0 отлично

Проверено (2)

Посетили в декабре 2018

«Чудо-Доктор» на Школьной 49-ул. Школьная, д. 49

Пациент
+7-916-99XXXXX

30 июня 2017
в 11:32

+1.0 хорошо

Проверено (2)

Посетили в июне 2017

Гость

22 июня 2017
в 13:21

+1.0 хорошо

Гость

8 февраля 2017
в 09:01

+2.0 отлично

Гость

29 августа 2016
в 10:57

+2.0 отлично

Наталья Чекулаева ВКонтакте, Череповец, Россия, id22501317

Череповец

Новости Череповца от Gorodche.ru
Современный интернет-портал Череповца. Подписывайтесь и будьте в курсе событий! Больше новостей на сайте: gorodche.ru Мы в Телеграм: t.me/gorodche Мы в Яндекс.Дзен: https://zen.yandex.

ru/gorodche.ru Мы в Одноклассниках: ok.ru/newsvolobl Мы в Яндекс.Мессенджер https://vk.cc/aufPLF

Череповецкие вести
Новости города, региона, страны 12+ Страница для пользователей старше 12 лет. тэги #ЧВ #ЛюбоДорогоГлядеть #ЛюбимыеСоседи #НеобъятнаяНашаРодина #Череповец_АФИША #Череповец_СПОРТ #АктивныйОтдыхЧереповец #Череповец #ЧВ #оНасПишут 😊 #СоветЧВ #ВотМояДеревня #НеобъятнаяНашаРодина #НачнёмСсебя #СтарыеДобрыеМультики

Traveler’s blog
С нами ты побываешь везде, где только хочешь!

M O D A
Тренды, луки, шмот. Ты же понимаешь, о чем тут речь? А еще знаменитые красотки и немного юмора.

Жильё / Аренда без посредников в Крыму
Доска объявлений для собственников и арендаторов гостевых домов, отелей и гостиниц, пансионатов, баз отдыха в Крыму, сдающих жильё отдыхающим. В нашей группе Вы можете разместить свой вариант для отдыха в Крыму. Для уточнения условий размещения Вашего варианта на стене группы пишите в личку администратору группы Андрей Невский https://vk.

com/id432085460. Уважаемые отдыхающие, прошу Вас вести переписку исключительно с авторами постов во избежание недоразумений!

БиС | Афиша | Череповец

Северсталь Авиа
ООО «Авиапредприятие «Северсталь» – регулярные авиарейсы и чартерные пассажирские перевозки, VIP сервис. Аэропорт Череповец

Аренда детской праздничной одежды AMELIA
Телефон ☎️ для связи 8-900-557-52-57. 1. Нужное Вам платьице желательно примерить и забронировать заранее, чтобы не остаться без него на нужную Вам дату. 2. В случае отказа от бронирования платья огромная просьба сообщить в лс или по телефону 8-900-557-52-57 хотя бы за 3-5 дней. 3. Минимальный срок проката – 1 сутки. Выдача и возврат производится в заранее оговоренные сроки. 4. Работаем по договору, без залога. 5. Платья обязательно проходят паровую обработку, выдаются в чистом, поглаженном и исправном виде, на вешалке, в чехле для одежды. 6. Платья категорически запрещается стирать, сдавать в химчистку, перешивать, самостоятельно ремонтировать и «подгонять» по фигуре. 7. В случае мелких загрязнений и неисправностей просьба указать на них при сдаче платья для того чтобы мы их исправили. 8. В случае возврата имущества с серьезными повреждениями (дырами на ткани, пятнами от воска, соуса, сока, жира и иными пятнами, не подлежащими химической чистке) клиент оплачивает стоимость платья.

Книги | Литература | Саморазвитие
Все о происходящем в мире Интересные факты и новости Подборки книг и литературы

Питер 🙂
Только в Питере гопники в шапках 228 пьют чудо-йогурт и переводят бабушек через дорогу. — Только в Питере знакомство с девушкой начинают так: «А вы любите Сальвадора Дали?» или «А как вы относитесь к творчеству Руссо?» — Только в Питере друзей находят по общим любимым писателям. — Только в Питере можно всю жизнь ходить по музеям — и не посмотреть и сотой части. — Только в Питере люди одновременно столь дружелюбны и отстраненны. — Только в Питере перед тобой извинятся, а не обматерят, если ты толкнул кого-то. — Только в Питере в метро читают ВСЕ. — Только в Питере любят шляпы и не считают их старомодными. — Только в Питере можно увидеть розовый дождевик со стразами. — Только в Питере шедевры мировой культуры могут стать личным кошмаром, когда каждый день ездишь из Петергофа в Смольный. — Только в Питере некоторые улицы просто пронумеровали, не заботясь о названии. — Только в Питере парни готовят лучше девушек. Питер, я тебя люблю!!! 🙂 Теги: питер, санкт-петербург, петербург, спб, spb, новости петербурга, события петербурга, афиша петербурга

Открытки Поздравления Пожелания С Днем Рождения
Наше сообщество посвящено поздравительным открыткам на все случаи жизни! Ежедневно мы готовым открытки на темы: «Доброе утро», «Хорошего дня», «Прекрасного настроения», «С Днем рождения», «Спокойной ночи» и на все основные значимые праздники в году. Выбирайте понравившиеся открытки и поздравляйте своих друзей, дарите радость и счастье! А мы будем радовать вас новым и качественным контентом.

Конюшня при Усадьбе Гальских
г. Череповец, ул. Матуринская, 28 ✔ Секция верховой езды (абонемент) ✔ Разовые занятия (прокат) ✔ Катания по кругам ✔ Фотосессии ✔ Катание в санях (зимой) Узнать подробности и записаться на занятия вы можете по телефонам: 8 921 542 96 54 (тренер по конному спорту — Мосина Светлана Альбертовна) 8 921 251 32 20 (инструктор по верховой езде — Богданова Наталия Александровна)

Литературный кайф

33 квадратных метра
+100500 идей для Вашего интерьера! Только полезный контент для уюта в Вашем доме!

Книги
История Цитаты Наука

Фабрика идей

Интересная Планета

Идеи дизайна интерьера
Дизайн не надо обсуждать, он является решением поставленной задачи. Обсуждать можно только одно: решена задача или нет.

Wow Реклама | Креатив, дизайн, творчество

Наталья Чекулаева, Москва, Россия, ВКонтакте, id411277

Многогранная красота
> Красота из разных тем и сфер жизни. > 4-5 постов в день. В меню примеры наших постов. > Есть рекламные посты. > НЕ ПИШЕМ в ЛС от имени паблика, конкурсы не проводим.

Resto_ray | Самые понятные рецепты
Дорогие друзья! Приветствую вас в моём блоге 🤩 Меня зовут Анна Рей, я фудблогер и шеф-повар. 16 лет я занимаюсь любимым делом, которое давно стало образом жизни. — [https://vk.com/video/@resto_ray|пошаговые видеорецепты] — секреты — советы — лайфхаки от шефа — [https://vk.com/app5898182_-211028584#u=1389652&s=1600845|организация туров с командой resto_ray] — [https://vk.com/market-211028584|сборники рецептов] Подписывайтесь на [https://vk.com/resto_ray|мое сообщество] и я научу вас готовить любые блюда просто, быстро и вкусно! Дома можно готовить как в ресторане, убедитесь сами 😉

Шитьё для всех
Море полезной информации по шитью: мастер-классы, идеи, полезные советы, обмен опытом. Присоединяйтесь, тут интересно!

Eda.ru
Еда.ру — свежий сайт о еде и всем, что с ней связано, — с онлайн-журналом, поварской школой и большой коллекцией проверенных рецептов.

Вкуснофф. рф — простые пошаговые рецепты
Простые и вкусные пошаговые рецепты на каждый день!

Простые рецепты daniya_alt
🍰 ПРОСТЫЕ РЕЦЕПТЫ ОТ ДАНИИ 🍛 🌮Делюсь минутными видео-рецептами с озвучкой

©ГАЛЕРЕЯ МАСТЕРОВ / Handmade/Рукоделие /Декор

Э С Т Е Т И К А • Вдохновение
Вдохновение окружает тебя со всех сторон, и в повседневной жизни его больше всего. — Мик Джаггер Предлагайте свои подборки через «Предложить новость». Выкладываются красивые подборки подписчиков сообщества — 6-7 фото хорошего качества, совпадающих по размеру, стилю и смыслу.

Куклы тильда и школа хобби MimiDo
Наше увлечение это всемирно известные куколки в стиле Тильда и другие текстильные куклы. Мы хотим поделиться своим опытом и знаниями с Вами. И чему-то научиться у Вас. ВНИМАНИЕ! Мы не продаём готовых кукол, а учим как их создавать. Сообщество создано для вдохновения и творчества.

Чудесные иллюстрации

Save moments… Вдохновение и уют.
Добро пожаловать в наш уголок! Приглашаем окунуться в наш мир атмосферных фото, тёплых цитат. Здесь каждый сможет расслабиться и отдохнуть!

Поедем, поедим!
Самые вкусные рецепты из разных уголков нашей планеты, а также полезные советы, как из простых продуктов сделать необычные и утонченные блюда – вы найдете здесь, в паблике телепрограммы «Поедем, поедим» телеканала НТВ. Но только рецептами мы не ограничиваемся. Конкурсы и закулисье трэвел-шоу! Куда поехать в отпуск, где остановиться, что поесть и как развлечься? Полезные лайфхаки для отдыха в России и за границей, проверенные на Федерико Арнальди, знойном и обаятельном ведущем из Италии! Присоединяйтесь к нашему путешествию!

Милые иллюстрации
Тут сказочные и милые иллюстрации…

Лучшие иллюстрации / Illustration best
Самые милое сообщество иллюстраторов и любителей иллюстрации. ВАЖНОЕ СООБЩЕНИЕ: Вам нравится наше сообщество? Если да, то поддержите нас, пожалуйста! Просто сделайте репост любой записи. Мы будем вам очень благодарны.

WorldFood Moscow
WorldFood Moscow — это крупнейшая в России осенняя выставка продуктов питания, главное место встречи и обмена опытом лидеров российского и зарубежного продуктового рынка. Когда: 20–23 сентября 2022 года

Косметология в Одинцово «Альтамед Beauty»
«Альтамед Beauty» — косметология по честным ценам! 🧬 Крупнейшее лицензированное отделение косметологии в Одинцово; 🧬 Сертифицированное оборудование от проверенных производителей. Все аппараты прошли испытания на качество и безопасность в РФ и имеют регистрационные удостоверения; 🧬 Квалифицированные врачи-косметологи с соответствующим образованием и многолетним опытом работы; 🧬 Каждый день нашими услугами пользуются более 100 человек; 🧬 Нам доверяют

ARAVIA Laboratories
ARAVIA Laboratories – современный и эффективный уход за кожей лица и тела, созданный экспертами индустрии красоты. ARAVIA Laboratories — это решения для широкого спектра проблем кожи, поддержания тонуса, сияния и здоровья день за днем. ARAVIA Laboratories — это богатые составы, научный подход и актуальные тренды. ARAVIA Laboratories — это ваш персональный ежедневный уход! Где мы представлены: — В интернет-магазине PROFKAshop В маркетплейсах: — Wildberries. ru — Ozon.ru В магазинах-партнерах: — goldapple.ru — market.yandex.ru

Проект о народных промыслах «Самобранка»
«Самобранка» — это мультимедийный проект медиагруппы «Комсомольская правда» о художественных промыслах России, культуре всех населяющих ее народов от Калининграда до Сахалина. Вы узнаете о традициях страны с древних времен и до наших дней, познакомитесь с современными предприятиями, которые бережно хранят наследие и успешно развивают ремесло своих регионов. Подписывайтесь!

Говорим по-русски | Русская культура
Говорим по-русски | Русская культура — это страничка для тех, кому дорог русский язык. Изучаем историю, традиции и культуру русского языка. Справочник учителя: культура речи, обычаи древней Руси и история России.

Жанна Бадоева | Zhanna Badoeva
Рада приветствовать вас в своем официальном сообществе! Здесь вы найдете свежие новости, эксклюзивные фото, видеоматериалы и много интересной информации из моей жизни! Ваша Жанна❤️

Сообщество Экспонента

вопрос
22. 09.2022

Математика и статистика, Системы управления, Изображения и видео, Робототехника и беспилотники, Глубокое и машинное обучение(ИИ), Другое

Коллеги, добрый день. Необходимо использовать corrcoef, а массивы разной длины. Как сделать кол-во элементов одинаково?

8 Ответов

вопрос
20.09.2022

Другое, Встраиваемые системы, Цифровая обработка сигналов, Системы управления

Здравствуйте!Возникла необходимость менять некоторое строчки в сишном файле автоматически, используя матлабовский скрипт. Прошерстил весь интернет, в т.ч. англоязычные форумы, не смог ничего найт…

Здравствуйте!Возникла необходимость менять некоторое строчки в сишном файле автоматически, используя матлабовский скрипт. Прошерстил весь интернет, в т. ч. англоязычные форумы, не смог ничего найт…

MATLAB

20.09.2022

Публикация
15.09.2022

Системы управления, Другое

Видел видос на канале экспоненты по созданию топливной системы. Вопрос заключается в наличии более полного описания готового примера или соответсвующее документации. Я новичок в симулинке и ещё многого не знаю. Адекватных и раскрытых пособий по созданию гидрав…

Моделирование гидравлических систем в simulink

Публикация
10.09.2022

Системы управления, Электропривод и силовая электроника, Другое

Планирую написать книгу про модельно-ориентированное программирование с автоматическим генерированием кода применительно к разработке разнообразных микропроцессорных систем управления электроприводов. В этой книге в научно-практическо-методической форме я план…

Публикация
24.08.2022

Цифровая обработка сигналов, Системы связи, Математика и статистика

&…

Здесь собрана литература по комбинированным методам множественного доступа, в которых используется разделение пользователей в нескольких ресурсных пространствах.

вопрос
23.08.2022

Математика и статистика, Радиолокация, Цифровая обработка сигналов

Есть записанный сигнал с датчика (синус с шумом). Как определить соотношение сигнал/шум?

4 Ответа

ЦОС
цифровая обработка сигналов

23.08.2022

Публикация
23.08.2022

Цифровая обработка сигналов, Системы связи, Математика и статистика

&. ..

Здесь соборана литература по методам множественного доступа с поляризационным разделением и разделением по орбитальном угловому моменту.

Публикация
16.08.2022

Цифровая обработка сигналов, Системы связи, Математика и статистика

Здесь собрана литература по методам множественного доступа с пространственным разделением.

вопрос
22.07.2022

Изображения и видео, Цифровая обработка сигналов, Математика и статистика, Биология, Встраиваемые системы, Глубокое и машинное обучение(ИИ), Автоматизация испытаний, ПЛИС и СнК, Системы управления, Другое

Здравствуйте. Мне нужно обработать большое количество файлов с похожими названиями, каждый блок файлов относится к отдельному объекту, например: file_1_1.txt file_1_2.txt file_1_3.txt file_1_4.txt fil…

2 Ответа

чтение

22.07.2022

вопрос
17.07.2022

Математика и статистика, Цифровая обработка сигналов

Уважаемые коллеги, добрый вечер! В общем, возникла проблема следующего характера. Имеется сигнал, достаточно большой объем точек, длительность порядка 35-40 секунд. Он представлят собой последовательн…

MATLAB
Signal Processing

17.07.2022

Структура министерства

Ф.И.О.	должность		служебный телефон
Костин Олег Николаевич	Заместитель Председателя Правительства области – министр здравоохранения области		67-07-02
Степченкова Елена Александровна	первый заместитель министра		67-07-04
Кенженбетова Елена Викторовна	заместитель министра		67-06-57
Грайфер Денис Александрович	заместитель министра — начальник управления по охране материнства и детства		67-06-58
Выкова Асят Мугазовна	заместитель министра		67-07-08
Колоколов Александр Валерьевич	советник министра		67-06-42
Дороничев Алексей Александрович	советник министра		67-06-23
Свистунова Ирина Александровна	советник министра		67-06-02
Гамаюнова Татьяна Вячеславовна	начальник отдела кадров		67-05-97
Овчинникова Татьяна Александровна	начальник отдела правового обеспечения		67-06-04
Кравченко Виктор Петрович	начальник отдела мобилизационной подготовки и спецработы		51-10-15
Плеханова Оксана Александровна	начальник Финансово-экономического управления		67-07-53
Орлова Татьяна Владимировна	начальник отдела планирования и исполнения бюджета		67-06-59
Галушко Ирина Александровна	начальник отдела сводного экономического анализа и медицинского страхования		67-07-26
Потапов Юрий Леонидович	Начальник управления бюджетного учёта и мониторинга деятельности учреждений		67-06-49
Лобанова Елена Васильевна	первый заместитель начальника управления — начальник отдела бюджетного учета и отчетности		67-07-28
	начальник отдела мониторинга деятельности учреждений		67-07-32
Трефилов Валерий Алексеевич	Начальник управления ресурсного обеспечения и государственных закупок		67-06-18
Соломадина Наталья Викторовна	Первый заместитель начальника управления – начальник отдела планирования государственных закупок и ведомственного контроля в сфере закупок		67-06-20
Карлов Максим Валерьевич		начальник управления организации работы министерства	67-06-00
Колесникова Светлана Сергеевна	начальник отдела организационно-методической работы и информационного обеспечения		67-06-02
Попов Дмитрий Владимирович	начальник отдела по эксплуатации зданий, капитального и текущего ремонта		67-07-36
Пупыкин Петр Павлович	заведующий административно-хозяйственной службой		67-06-26
Дудина Светлана Анатольевна	заместитель начальника управления — начальник отдела медицинской помощи матери и ребенку		98-29-78
Нагаева Елена Викторовна	начальник отдела организации профилактики, реабилитационной помощи детям и демографической политики		67-07-37
Ермолаева Олеся Васильевна	председатель комитета организации медицинской помощи взрослому населению		67-06-09
Сопырева Наталья Анатольевна	начальник отдела организации медицинской помощи взрослому населению		67-06-10
Сабаева Елена Александровна	начальник отдела профилактической медицины		67-06-30
Чекулаева Дина Гильмановна	начальник отдела организации высокотехнологичной медицинской помощи		67-06-35
Кедрова Юлия Владимировна	начальник отдела структурного анализа и мониторинга использования оборудования		67-06-14
Шкутина Марина Ивановна	начальник отдела организации лекарственного обеспечения		67-06-39
Ситдыков Рафик Кавич	начальник отдела лицензирования медицинской, фармацевтической деятельности и деятельности, связанной с оборотом наркотических средств и психотропных веществ		98-29-81

Отрицательные отзывы о спектакле «Материнское сердце» – Афиша-Театры

Отрицательные отзывы о спектакле

Купить билеты

О спектакле Расписание Отзывы (6)

Лучшие отзывы о спектакле «Материнское сердце»

- Наталия Чекулаева
  1 отзыв, 1 оценка, рейтинг 0
  1
  Для меня этот спектакль издевательство, ощущение карикатуры, но злой карикатуры. Рассказчик вообще со своим немецким языком и кривлянием да ещё и приговором «мы в театре» , типа игра все это. У мужа такое же впечатление. Не рекомендую … Возможно кто-то объяснит что за наклеенные жуткие носы у части актёров, что за приём и зачем он? Не понравилось совсем
  25 апреля 2022

Подборки «Афиши»

«Главное — твердость характера, а все страхи можно побороть». Подростки «Каскада» о своей выставке в Музее Москвы

Почему вашему ребенку новые «Звездные войны» понравятся не меньше старых

Осенний прогноз: до -40% на планы выходного дня в Питере

Осенний прогноз: до -30% на планы выходного дня в Москве

Мероприятия

Создайте уникальную страницу своего события на «Афише»

Это возможность рассказать о нем многомиллионной аудитории и увеличить посещаемость

Абакан,
Азов,
Альметьевск,
Ангарск,
Арзамас,
Армавир,
Артем,
Архангельск,
Астрахань,
Ачинск,
Балаково,
Балашиха,
Балашов,
Барнаул,
Батайск,
Белгород,
Белорецк,
Белореченск,
Бердск,
Березники,
Бийск,
Благовещенск,
Братск,
Брянск,
Бугульма,
Бугуруслан,
Бузулук,
Великий Новгород,
Верхняя Пышма,
Видное,
Владивосток,
Владикавказ,
Владимир,
Волгоград,
Волгодонск,
Волжский,
Вологда,
Вольск,
Воронеж,
Воскресенск,
Всеволожск,
Выборг,
Гатчина,
Геленджик,
Горно-Алтайск,
Грозный,
Губкин,
Гудермес,
Дербент,
Дзержинск,
Димитровград,
Дмитров,
Долгопрудный,
Домодедово,
Дубна,
Евпатория,
Екатеринбург,
Елец,
Ессентуки,
Железногорск,
Жуковский,
Зарайск,
Заречный,
Звенигород,
Зеленогорск,
Зеленоград,
Златоуст,
Иваново,
Ивантеевка,
Ижевск,
Иркутск,
Искитим,
Истра,
Йошкар-Ола,
Казань,
Калининград,
Калуга,
Каменск-Уральский,
Камышин,
Каспийск,
Кемерово,
Кингисепп,
Кириши,
Киров,
Кисловодск,
Клин,
Клинцы,
Ковров,
Коломна,
Колпино,
Комсомольск-на-Амуре,
Копейск,
Королев,
Коряжма,
Кострома,
Красногорск,
Краснодар,
Краснознаменск,
Красноярск,
Кронштадт,
Кстово,
Кубинка,
Кузнецк,
Курган,
Курск,
Лесной,
Лесной Городок,
Липецк,
Лобня,
Лодейное Поле,
Ломоносов,
Луховицы,
Лысьва,
Лыткарино,
Люберцы,
Магадан,
Магнитогорск,
Майкоп,
Махачкала,
Миасс,
Можайск,
Московский,
Мурманск,
Муром,
Мценск,
Мытищи,
Набережные Челны,
Назрань,
Нальчик,
Наро-Фоминск,
Находка,
Невинномысск,
Нефтекамск,
Нефтеюганск,
Нижневартовск,
Нижнекамск,
Нижний Новгород,
Нижний Тагил,
Новоалтайск,
Новокузнецк,
Новокуйбышевск,
Новомосковск,
Новороссийск,
Новосибирск,
Новоуральск,
Новочебоксарск,
Новошахтинск,
Новый Уренгой,
Ногинск,
Норильск,
Ноябрьск,
Нягань,
Обнинск,
Одинцово,
Озерск,
Озеры,
Октябрьский,
Омск,
Орел,
Оренбург,
Орехово-Зуево,
Орск,
Павлово,
Павловский Посад,
Пенза,
Первоуральск,
Пермь,
Петергоф,
Петрозаводск,
Петропавловск-Камчатский,
Подольск,
Прокопьевск,
Псков,
Пушкин,
Пушкино,
Пятигорск,
Раменское,
Ревда,
Реутов,
Ростов-на-Дону,
Рубцовск,
Руза,
Рыбинск,
Рязань,
Салават,
Салехард,
Самара,
Саранск,
Саратов,
Саров,
Севастополь,
Северодвинск,
Североморск,
Северск,
Сергиев Посад,
Серпухов,
Сестрорецк,
Симферополь,
Смоленск,
Сокол,
Солнечногорск,
Сосновый Бор,
Сочи,
Спасск-Дальний,
Ставрополь,
Старый Оскол,
Стерлитамак,
Ступино,
Сургут,
Сызрань,
Сыктывкар,
Таганрог,
Тамбов,
Тверь,
Тихвин,
Тольятти,
Томск,
Туапсе,
Тула,
Тюмень,
Улан-Удэ,
Ульяновск,
Уссурийск,
Усть-Илимск,
Уфа,
Феодосия,
Фрязино,
Хабаровск,
Ханты-Мансийск,
Химки,
Чебоксары,
Челябинск,
Череповец,
Черкесск,
Чехов,
Чита,
Шахты,
Щелково,
Электросталь,
Элиста,
Энгельс,
Южно-Сахалинск,
Якутск,
Ялта,
Ярославль

Оценки
Все,
Положительные

Сортировка
по дате,
по рейтингу рецензии

Mystery Trackers: Four Aces (2012) Windows credits

Mystery Trackers: Four Aces Credits

52 people

1h 25m

IMDb RATING

6. 4/10

YOUR RATING

Three-year Bubby, son of безработный, ищет на помойках всякое барахло, которое можно продать. На эти жалкие гроши вся семья вынуждена жить. Каждый день Бабби ходит «на работу» в… Читать всеТрехлетний Бабби, сын безработного, ищет на помойках всякое барахло, которое можно продать. На эти жалкие гроши вся семья вынуждена жить. Каждый день Бабби выходит «на работу» в огромных рваных ботинках старшего брата-школьника. Трехлетний Бабби, сын безработного, ищет на помойках всякое барахло, которое можно продать. На эти жалкие гроши вся семья вынуждена жить. Каждый день Бабби выходит «на работу» в огромных рваных ботинках старшего брата-школьника.

IMDb RATING

6.4/10

YOUR RATING

Director
- Margarita Barskaya
Writer
- Margarita Barskaya
Stars
- Mikhail Klimov
- Klavdiya Polovikova
- Vera Alehina

Режиссер
- Маргарита Барская
Сценарист
- Маргарита Барская
Stars
- Mikhail Klimov
- Klavdiya Polovikova
- Vera Alehina

See production, box office & company info

See more at IMDbPro

Photos20

Top cast

Mikhail Klimov

Religion teacher

Половикова Клавдия

Слепая девочка

Алехина Вера

Учитель

Чекулаева Анна

Mother

Ivan Novoseltsev

Father

Olga Bazanova

Lev Losev

Teenager

Nikolay Losev

Teenager

Vladimir Mikhaylov

Passer

Georgiy Millyar

Прохожий

Наталья Садовская

Маленькая девочка

Александр Тимонтаев

Милиционер

Vladimir Uralskiy

Konrad Wolf

Nikolai Yarochkin

Worker

Director
- Margarita Barskaya
Writer
- Margarita Barskaya
All cast & crew
Production, box office & more на IMDbPro

Сюжетная линия

Знаете ли вы

Отзывы пользователей

Будьте первым, кто оставит отзыв

Подробнее

Release date
- March 30, 1934 (United States)
Country of origin
- Soviet Union
Language
- Russian
Also known as
- Poderane cipele
Production companies
- Межрабпомфильм
- Союзкино
Другие кредиты компании на IMDbPro

Технические характеристики

Время работы
1 час 25 минут
Color
- Black and White
Sound mix
Aspect ratio
- 1. 37 : 1

Contribute to this page

Suggest an edit or add missing content

More исследовать

Недавно просмотренные

У вас нет недавно просмотренных страниц

Рейтинг IDSF Open Latin Adult в Москве

Скрыть соревнования и разделы Шоу-конкурсы и секции

Следующие результаты получены от Open IDSF, пройденного в Москве — Россия 20 марта 2011 г.

Финал

Big Fish Games
Senior Game Producer	Isaias Vallejo
Lead Game Producer	Zachary Hines (Зак Хайнс)
Ведущий продюсер	Анна Рикс
Вспомогательные продюсеры	Кристин Дэвис, Ким Бартлетт
Ведущий повествовательный дизайнер	LISA BRUNETTE
Повествовательный дизайнер	Faye Hoerauf
Games
.	Петр Ефимов
Технический директор	Дмитрий Гаязов
Гейм-дизайнер	Peter Efimov
Project Manager	Alexander Tovashov
Additional Game Design	Yan Shevchenko, Alexander Yanalov, Alexander Tovashov
Programmers	Elena Ogneva
Lead Level Designer	Ivan Suslov
Дизайнеры уровней	Пономаренко Артем, Колина Евгения
Ассистент дизайна уровней	Федосов Вадим, Мирошин Николай
Lead Artists	Darya Mosolova, Irina Pakhmutova
2D Artists	Anna Kapelkina, Elena Timakova, Ekaterina Taranenko
3D Artists	Maxim Sutov, Sergey Mozolin, Yunis Mukmenov, Vasiliy Rozhkov
Музыка	Юрий Гинцбург
Sound FX	Yuri Ginzburg
Голосовые таланты	Келли Фитцджеральд (телевизор и тревога, женщина), Chris Ackerman (Narrator), THAR SPADS Стив Войтас (Джеймс Карр), Фелиция Гринфилд (Келли Астер), Майк Дивайн (Бубновый туз, офицер-мужчина)
В ролях	Юрий Синьковский (Арчибальд Карр), Антон Типикин (Джеймс Карр), Вера Воздвиженская (Келли Астер), Ян Шевченко (Эйс), Александр Товашов (Эйс), Иван Суслов (Жертва 1), Дмитрий Белов ( Жертва 2), Артем Пономаренко (жертва 3), Елена Подузова (жертва 4)
Камераман	Вадим Кайпов
Писатели	Александр Яналов, Наталья Шекулав. 0010	Natalya Tregubova (Natalia Tregubova), Natalia Chekulaeva, Elena Polyakova
Testing	Oleg Tuzov, Maksim Kuznecov, Aleksey Sofronov, Nikolay Omelinskiy, Alexander Kovenkov
Technical Support	Sergey Raspopov, Egor Fetisov
[© 2012	Elephant Games] Эта игра была создана с использованием PlayGround SDK™. Все права защищены. Здесь указано не более 25 человек, даже если есть более 25 человек, которые также работали над другими играми. Faye Hoerauf, 70 других игр Lisa Brunette, 63 других игры Isaias Vallejo, 61 другая игра Tim Simmons, 52 других игры Peter Efimov, 31 другая игра Zachary Hines, 30 других игр Andrey Pahmutov, 26 других игр Николай Омелинский, еще 25 игр Ким Бартлетт, 23 игры Дмитрий Гаязов, 21 игра Олег Тузов, 18 игр Кристин Дэвис, 17 игр Максим Кузнецов, 17 игр Александр Яналов, 17 игр Наталья Трегубова, 17 игр Елена Огнева, 16 игр Алексей Софронов, 16 игр Дмитрий Белов, 15 игр Анна Рикс, 15 игр Сергей Распопов, 14 игр Вадим Каипов, 14 игр Максим Сутов, 10 других игр Александр Товашов, 10 других игр Артем Пономаренко, 8 других игр Юрий Гинзбург, 8 других игр Сотрудничество Люди, которые работали над этой игрой, также участвовали в создании следующих игр: Охотники за тайнами: Четыре туза (коллекционное издание), группа 51 человек Охотники за тайнами: Тихая лощина (коллекционное издание), группа 35 человек Охотники за тайнами: Тихая лощина, группа 35 человек Найдено: спрятанное Предметное приключение, группа 22 человека Химеры. Мелодия мести (коллекционное издание), группа 21 человек Рождественские истории. Щелкунчик (коллекционное издание), группа 20 человек Рождественские истории. Рождественская история (коллекционное издание) , группа 19 Искатели тайн: Призраки Рейнклиффа, группа 17 человек Отель с привидениями: Затмение, группа 17 человек Детективный квест: Хрустальная туфелька, группа 17 человек Охотники за тайнами: Черный остров, группа 16 человек Midnight Castle, группа из 15 человек Hallowed Legends: Templar (коллекционное издание), группа из 14 человек Sir Match-a-Lot, группа из 11 человек Christmas Stories: Gans Christian Andersen’s Tin Soldier (коллекционное издание), группа 11 человек Искатели тайн: Рейнклифф, группа из 10 человек Отель с привидениями: Древняя погибель, группа из 10 человек Отель с привидениями: Древняя погибель (коллекционное издание), группа из 10 человек Королевский детектив: Повелитель статуй (коллекционное издание) ), группа 10 человек Химеры: Знаки пророчества (коллекционное издание), группа 9 человек Отель с привидениями: Вечность (коллекционное издание), группа 8 человек Искатели тайн: Пустота, группа 8 человек человек Королевский детектив: Легенда о Големе, группа 6 человек 9: Темная сторона Нотр-Дама (Коллекционное издание), группа из 6 человек Grim Tales: Threads of Destiny (Коллекционное издание), группа из 6 человек Кредиты для этой игры предоставлены LepricahnsGold (142468) Broken Shoes (1933) — IMDb Original title: Rvanye bashmaki 1

93339

Рейнг	Пара	Страна	СТАРТ #	Страна	СТАРТ #
.
1.	Андрей Гусев — Elizaveta Cherevichnaya	RUS	56	70	119
2.	Valentin Voronov -Alina.0010	RUS	200	65	111
3.	Dmitry Pugachev — Elena Ziuziukina	RUS	240	60	102
4.	Yury Simachev — Anastasia Klokotova	RUS	163	55	94
5.	Armen Tsaturyan — Svetlana Gudyno	RUS	188	53	90
6.	Andrea De Angelis — Uliana Fomenko	ITA	38	50	85

6. Round

Rank	Couple	Country	Start #	Base	Points
7.	Jenya Suvorov — Tina Bazykina	LAT	174	45	77
8.	Kirill Kolpashchikov — Maria Kamenskaya	RUS	75	43	73
9.	Roman Chetvergov — Alena Estrina	RUS	31	41	70
10.	Igor Makarov — Anna Baklanova	RUS	248	39	66
11. — 12.	Ivan Raditsa — Evgenia Samoylova	RUS	0	35	60
11. — 12.	Anton Prokudin — Ekaterina Pechenik	RUS	237	35	60

5. Round

Rank	Couple	Country	Start #	Base	Points
13. — 14.	Denis Kuzenkov — Anna Zakharova	RUS	0	20	34
13. — 14.	Nikolay Mikadze — Yana Novikova	RUS	229	20	34
15.	Альберт Хадагатл — Виктория Горошко	RUS	64	20	34
16.	PAVE0010	RUS	161	20	34
17.	Ruslan Khayrullin — Anna Shadrina	RUS	66	20	34
18. — 19.	Anton Aldaev — Natalia Polukhina	RUS	0	20	34
18. — 19.	Evgeny Oreshnikov — Daria Kasparova	RUS	238	20	34
20.	Evgeny Davidenko — Natalia Tkacheva	RUS	37	20	34
21.	Viacheslav Benko — Elena Klepikova	RUS	16	20	34
22.	Anton Korolenko — Knarik Erkanian	RUS	77	20	34
23.	Anton Goncharov — Olga Andrianova	RUS	252	20	34
24.	Alexandr Muratov — Svetlana Slivinskaya	RUS	119	20	34

4. Раунд

Ранг	Пара	Страна	СТАРТ #	База	очков	.0006	25.	Mikhail Koptev — Alexandra Atamantseva	RUS	76	15	26
26.	Evgeny SHEKHOVTSOV -ATALILAY -ATALIALY -ATALIALY -ATALIALY -ATALILAY -ATALIALIANOV -ATALIALINOV -ATALIALINOV -ATALIALINOV -ATALIALINOV -ATALILAY -ATALILAYAINOV -ATALIALINOV -ATALIALINOV.
27.	Tigran Akinian — Alexandra Shapovalenko	RUS	228	15	26
28. — 31.	.0010	RUS	0	15	26
28. — 31.	Georgy Trifonov — Bella Bakarova	RUS	0	15	26
28. — 31 .	Mikhail Khmel — Dilyra Bliznuk	RUS	0	15	26
28. — 31.	Ivan Knezevic — Milena Zogovic	SRB	227	15	26
32. — 34.	Alexandr Neguliaev — Anastasia Ermishova	RUS	0	15	26
32. — 34.	Vladimir Merinov — Sofia Borisenko	RUS	0	15	26
32. — 34.	Semen Yatsenko — Anna Rozhkova	RUS	203	15	26
35.	Evgeny Shumakher — Maria Meshkova	RUS	159	15	26
36. — 38.	igor SanliakVINA -ANAKINA -ANAKINA -ANAKINA -ANAKINA -ANAKINA.	26
36. — 38.	Fuad Dadashev — Julia Gusarova	RUS	0	15	26
36. — 38.	Cristian Radvan — Tatiana Seliverstova	MDA	233	15	26
39.	Artem Kozlov — Natalia Usoltseva	RUS	81	12	20
40.	Oleg Dedegkaev — Ekaterina Kobzar	RUS	39	12	20
41.	Roman Shatrov — Svetlana Chebotareva	RUS	155	12	20
42.	Evgeny Korotonochkhkin — Карина Лапковская	Рус		12	20	9
43. 43.											0	12	20
43. — 45.	Alexandr Elagin — Julia Sidiakina	RUS	0	12	20
43. — 45.	Kirill Aliukhin — Daria Kontanistova	RUS	42		20
46.	Alexandr Shmonin –MARIANININIININININININININIININIINININIININIINININIININIININIININIININIININIININIININIINININIININIINIININIINIININIINIININ	20
47.	Evgeny Vorobiev — Olga Poletaeva	RUS	199	12	20
48.	Vadim Antsiferov — Maria Chekulaeva	RUS	7	12	20

3. Round

3 72. — 7611.7001.111.111.19.1011.19.1011.19.1011.19.1011.111.111.111.111.111.111.111.111.19.1011.19.19.

Rank	Couple	Country	Start #	Base	Points
49. — 50.	Павел Смолин — Alla Aronova	RUS	0	5	9
49. — 50.	Artem Luchin — Liubov Shatskaya 99.	0010	RUS	168	5	9
51. — 53.	Danis Sharipov — Daria Shalabina	RUS	0	5	9
51. — 53 .	Dmitry Bredikhin — Anna Efanina	RUS	0	5	9
51. — 53.	Lu Adam — Yang Angela	TPE	232	5	9
54. — 56.	Oleg Murzov — Kaleria Streltsova	RUS	0	5	9
54. — 56.	Artem Gaylit — Elizaveta Shibaeva	BLR	0	5	9
54. — 56.	Roman Kopnin — Olga Cherepanova	RUS	234	5	9
57. — 58.	Ivan Moskalev — Tatiana Raskostova	RUS	0	5	9
57. — 58.	Arturs Freimanis — Elina Muceniece	LAT	117	5	9
59. — 60.	Альфред Махмураджаев — Янина Акимова	Рус	0	5
59. -601110	.0010	RUS	223	5	9
61.	Evgeny Lazarev — Alexandra Sytina	RUS	97	5	9
62. — 64.	Evgeny Zarubin — Ksenia Kleshch	RUS	0	5	9
62. — 64.	Alexey Vlasov — Kristina Sharova	RUS	0	5	9
62. — 64.	Ilya Feldman — Irina Ivanova	RUS	207	5	9
65.	Evgeny Lazarev — Elena Chernykh	RUS	96	5	9
66. — 67.	Karols Arturs Junelis — Natalia Szypulska	LAT	0	5	9
66. — 67.	Konstantin Klimenko — Elena Likirichenko	RUS	71	5	9
68. — 69.	Roman Vasiliev — Ekaterina Gostkina	RUS	0	5	9
68. — 69.	Sergey Litvinov — Anastasia Ugarova	RUS	216	5
70. — 71.	6111111119	70. — 71.	ANTONKOV.0010	RUS	0	5	9
70. — 71.	Dmitry Ozhogin — Alina Sharonova	RUS	236	5	9
72. — 76 .	Roman Trotsky — Karolina Usikova	RUS	0	5	9
72. — 76.	Alexandr Reva — Daria Savanova	RUS	0	5	9
72. — 76.	Алексей Панселив — Джулия Тарабрина	Рус	0	5		9
72. —		1
RUS	0	5	9
72. — 76.	Alexandr Zenkov — Anastasia Gimazova	RUS	208	5	9
77. — 78.	Иван Гориванов — Кристина Заморочко	Рус	0	5
77. — 78.	и BORDYARHUK	77. — 78.	и BORDYAKEK	77. — 78.	и BORDY.	5	9
79. — 81.	Sergey Katkov — Irina Prokhorova	RUS	0	5	9
79. — 81.	Andrey Trubaenko — Olga Чивозерцева	RUS	0	5	9
79. — 81.	Edgar Kokoev — Natalia Berendakova	RUS	214	5	9
82.	Alexandr Aleshin — Irina Aleshina	RUS	247	5	9
83. — 87.	Roman Besedin — Valeriya Dolmogombetova	RUS	0	5	9
83. — 87.	Georgii Lapinskii — Julia Skorovarova	RUS	0	5	9
83. — 87.	Alexandr Plotnikov — Vladlena Rybakova	RUS	0	5	9
83. — 87.	Mikhail Khaletsky — Julia Iniutina	RUS	0	5	9
83. — 87.	Dmitry Belov — Alena Vitsan	RUS	138	5
88. — 90.	.	5	9
88. — 90.	Roman Yakushin — Maria Novikova	RUS	0	5	9
88. — 90.	Alexey Baykov — Екатерина Тельнова	RUS	249	5	9
91.	Danil Ukhin — Svetlana Mineeva	RUS	224	5	9
92.	Ilya Matyukhin — Anna Afanasieva	RUS	226	5	9
93. — 95.	Artem Kochet — Alexandra Mateva	RUS	0	5
93. — 95.	Yury Markelov — Daria Kretova	RUS	0	5

				. RUS	108	5	9
96.	Alexandr Loginov — Maria Kiseleva	RUS	101	5	9

2. Round

11111111111111111111111111111111111111111111111111111111111311111111111111111111111111111111111113.0006 90061111111111111111111111111111111ЕСКИ и ир.00109

Rank	Couple	Country	Start #	Base	Points
97. — 99.	Evgeny Vinogradov — Julia Ganina	RUS	0	2	3
97. — 99.	Ilya Batov — Anna Shafranova	RUS	0	2	3
97. — 99.	Sultan Sultanov — Aziza Madzhidova	UZB	196
100.	Kirill Cherniaev — Valentina Raskina	RUS	29	2	3
101. — 105.	Андрей Пегин — Алена Суднитсина	RUS	0	2	3
101. — 105.	ILYA Firulev — Angelina Makienko	R.	.0010	0	2	3
101. — 105.	Alexey Alexeev — Anastasia Fedotova	RUS	0	2	3
101. — 105.	Vladimir Fetisov — Tatiana Borisenkova	RUS	0	2	3
101. — 105.	Alexandr Grinvald — Evgenia Kartavina	RUS	251	2	3
106. — 109.	Vladlen Kravchenko — Aigerim Toktarova	KAZ	0	2	3
106. — 109.	Maksim Mikhalchev — Irina Shipilova	RUS	0	2	3
106. — 109.	Roman Shvets — Polina Ledrova	RUS	0	2	3
106. — 109.	Alexey Kudinov — Natalia Sokolova	RUS	160	2	3
110.	Kirill Muromtsev — Arina Sadykova	RUS	120	2	3
111. — 113.	Evgeny Poliakov — Elizaveta Ryzhkova	RUS	0	2	3
111. — 113.	Yury Smirnov — Alexandra Pak	RUS	0	2	3
111. — 113.	Kirill Kozhevnikov — Ekaterina Mochalova	RUS	217	2	3
114.	Artem Novikov — Ekaterina Sinitsyna	RUS	212	2	3
115. — 116.	Alexandr Merkulov — Anastasia Krestianova	RUS	0	2	3
115. — 116.	Donat Motry — Arina Kiseleva	RUS	220	2	3
117.	Rustam Taghiyev — Anna Belyavtseva	AZE	177	2	3
118.	Иван Вольков — Мария Шумиева
119.	Viacheslav Cherniaev — Victoria Abramova	RUS	30	2	3
120. — 124.	IVAN SOVETOV -Eliz — — Eliz — — Eliz -oraveovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaovaveovaveovaveovaveov.	3
120. — 124.	Vitaly Matusiak — Ekaterina Kalugina	RUS	0	2	3	9
120. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. 124. — 124. 124. 124.	9
12010.0013 Филипп Элизаров — Алена Родина	RUS	0	2	3
120. — 124.	Roman Tormashev — Anastasia ostasheva
120. — 124.	Nikita Kucheriavy — Olga Mosina	RUS	250	2	3
125. — 126.
RUS	0	2	3
125. — 126.	Artem Sidorkov — Anastasia Bedrina	RUS	221	2	3
127. — 128 .	Stanislav Kravchenko — Marina Fritsler	RUS	0	2	3
127. — 128.	Vladimir Zverev — Margarita Chumutina	RUS	211	2	3
129.	Artem Valov — Kristina Murakhovskaya	RUS	191	2	3
130.	Alexandr Giss — Ekaterina Lavrova	RUS	51	2	3
131. — 135.	Vladislav Vereshchak — Maria Novikova	RUS	0	2	3
131. — 135.	Иван Хренов — Анна Малцева	RUS	0	2	3
131. -135.
.RINASHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHARSHINAINOVINAINOV -2.	0	2	3
131. — 135.	Vitaly Adam — Anastasia Podobedova	RUS	0	2	3
131. — 135.	Dmitry Lugin — Alexandra Semerina	RUS	215	2	3
136. — 138.	Danil Chuchuk — Daria Temnova	RUS	0	2	3
136. — 138.	Oleg Velikanov — Karina Diachenko	RUS	0	2	3
136. — 138.
136. — 138.	Alexand, Alexand,	136. -0010	RUS	195	2	3
139.	Rodion Fomin — Daria Belova	RUS	48	2	3
140.	Tagir Yusupov — Regina Karimova	RUS	206	2	3
141.	Pavel Savchenko — Tatiana Shirokikh	RUS	152	2	3
142.	Ivan Malkov — Anastasia Trufanova	RUS	106	2	3

1. Round

13.IINA.1311111111113. 01111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111ЕСКАЯ9.111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111ЕРС. Yudin — Daria Yuzhakova20162015

Гонка Тащить Марафон Ультра ЭльбрусМирГонка Спринт

Спринт

Итра Очки

Уровень горы

Уровень финишера

ДЕТАЛИ ГОНКИ ГОНОЧНЫЙ КУРС РЕЗУЛЬТАТЫ ГОНКИ

Rank	Couple	Country	Start #	Основание	очков
143. — 146.	Vitaly Safronov — Veronika Neliubina	RUS	0	2		0	2	0	2	0	2	0	2	0	2	0	2	.0013 3
143. — 146.	Nikita Trishkin — Maria Makarkina	RUS	0	2	3
143. — 146.	Sergey Kozaderov — Margarita Amosova	RUS	0	2	3
143. — 146.	Mikhail Karbainov — Daria Mordik	RUS	231	2	3
147. — 150.	Алексей Лаптев — Алена Крохина	RUS	0	2	3
147. — 150.	Sergey Chekanov -Anna Zuykov. 2	3
147. — 150.	Artem Kalinovsky — Diana Pol	RUS	0	2	3
147. — 150.	Boris Philippov — Anastasia Tkachenko	RUS	134	2	3
151. — 155.	Evgeny Sidorov — Zilia Galiullina	RUS	0	2	3
151. — 155 .	Alexey Metkin — Marina Alexandrova	RUS	0	2	3
151. — 155.	Roman Korolkov — Keytlin-Elizabet Kuk	RUS	0	2	3
151. — 155.	Yury Abushinov — Elena Zhikhareva	RUS	0	2	3
151. — 155.	Anton Disterov — Elena Dubinina	RUS	239	2	3
156. — 163.	Nikolay Gutenev — Ekaterina Guteneva	RUS	0	2	3
156. — 163.	Nikolay Chistov — Ekaterina Zaletova	RUS	0	2	3
156. -163.
2	3
156. — 163.	Mikhail Odegov — Maria Shcherbatykh	RUS	0	2	3
156. — 163.	Данил Тишхенко — Экатерина Котокшкикова	Рус	0	2	3
156. — 163.	Григорий Ягуда.
156. — 163.	Emil Vasiukhno — Tatiana ovechkina	RUS	0	2	3
156. -163.	.0010	RUS	235	2	3
164.	Nikita Lobach — Alena Yagodovskaya	RUS	100	2	3
165. — 167.	Alexey Shirokov — Alena Bodnarchuk	RUS	0	2	3
165. — 167.	Alexandr Kravtsov — Daria Matiunina	RUS	0	2	3
165. — 167.	Anton Buneev — Alena Posysaeva	RUS	157	2	3
168. — 170.	Evgeny Mishagin — Alexandra Kritinina	RUS	0	2	3
168. — 170.	Mikhail Agrba — Elizaveta Polokhina	RUS	0	2	3
168. — 170.	Stanislav Pavlov — Anna Antoniuk	RUS	253	2	3
171. — 178.	Andrey Kosov — Maria Romanova	RUS	0	2	3
171. — 178.	Alexey Stiazhkin — Natalia Kotelnikova	RUS	0	2	3
171. — 178.	Artem Ivanov — Elina Semka	RUS	0	2	3
171. — 178.	Konstantin Vasilenko — Valeria Litvinova	RUS	0	2	3
171. — 178.	Andrey Turenok — Ksenia tolokolnikova	Rus	0	2	3
171. — 178.	.0010	RUS	0	2	3
171. — 178.	Anton Yudaev — Ekaterina Fionkina	RUS	0	2	3
171. — 178 .	Ilya Petukhov — Alena Zheleznitskikh	RUS	245	2	3
179. — 183.	Alexandr Ivanov — Maria Usanina	RUS	0	2	3
179. — 183.	Vladimir Kuznetsov — Svetlana Sotnikova	RUS	0	2	3
179. — 183.	Alexandr Suzdaltsev — Daria Ostapets	RUS	0	2	3
179. — 183.	Vasily Chulkov — Maria Chernik	RUS	0	2	3
179. — 183.	Artemy Burdin — Inessa Avakova	RUS	246	2	3
184. — 191.	Mark Li — Tatiana Dzudtseva	RUS	0	2	3
184. — 191.	Georgy Maltsev — Anna Onufrieva	RUS	0	2	3
184. — 191.	Maxim Dolgopol — Polina Petrik	RUS	0	2	3
184. — 191.	NIKITA POPOV — DARIA EROKHINA	RUS
184. — 191.	Artem Skripko — Lilia Nedopekina	RUS	0	2	3
184. —	MKHAL0013 RUS	0	2	3
184. — 191.	Anatoly Kostoglodov — Anastasia Pronina	RUS	0	2	3
184. — 191.	Ilya Pankin — Ksenia Popova	RUS	244	2	3
192.	Sergey Yakunin — Karina Korepanova	RUS	202	2	3
193. — 196.	Ilya Lubsky — Maria Poltorak	RUS	0	2	3
193. — 196.	Alexey Supyrev — Olga Esina	RUS	0	2	3
193. — 196.	Vladimir Zorin — Natalia Beloshapko	RUS	0	2	3
193. — 196.	Marsel Avtulev — Patrisia Belikova	RUS	210	2	3
197. — 199.	Alexey Kirsanov — Anastasia Andreeva	RUS	0	2	3
197. — 199.	Vadim Chobanu — Polina Eroshevich	RUS	0	2	3
197. — 199.	Dmitry Trubenkov — Valentina Kondratieva	RUS	187	2	3
200. — 204.	Albert Rakhimgulov — Ekaterina Yakovenko	RUS	0	2	3
200. — 204 .	Kirill Petrichenko — Anastasia Petrova	RUS	0	2	3
200. — 204.	Farit Shafigullin — Irina Oleynik	RUS	0	2	3
200. — 204.	Dmitry Yakovlev — Anastasia Rumiantseva	RUS	0	2	3
200. — 204.	Igor Grigorash — Tatiana Kostina	RUS	201	2	3
205.	Alexandr Kirsanov — Margarita Surodina	RUS	69	2	3
206. — 209.	Igor Pikunov — Daria Golovashkina	RUS	0	2	3
206. — 209.	Alexandr Riazanov — Ekaterina Bushueva	RUS	0	2	3
206. — 209.	Egor Salakhutdinov — Marina Dubkova	RUS	0	2	3
206. — 209.	Oleg Bazhin — Alexandra Artemenko	RUS	151	2	3
210. — 212.	Anatoly Bogatov — Valeria Korovina	RUS	0	2	3
210. — 212.	Nikolay Bragin — Anastasia Dukhovskaya	RUS	0	2	3
210. — 212.	Alexandr Platov — Kristina Korshunova	RUS	137	2	3
213. — 216.	Igor Gorshkov — Anastasia Razheva	RUS	0	2	3
213. — 216.	Денис Кропоткин — Дарья Морва	Рус	0	2	3
213. — 216.	Эвгени.0010	RUS	0	2	3
213. — 216.	Alexandr Barsukov — Sofia Lipatova	RUS	209	2	3
217. — 220 .	Dmitry Tsitsiashvili — Angelina Medvedeva	RUS	0	2	3
217. — 220.	German Strelkov — Anastasia Tavalinskaya	RUS	0	2	3
217. — 220.	Иван Косиаков — Валентина Тулпова	Рус	0	2	3
RUS	205	2	3
221. — 226.	Konstantin Piskovatsky — Anastasia Zamalova	RUS	0	2	3
221. — 226.	Alexey Butin — Elena Smirnova	RUS	0	2	3
221. — 226.	Roman Silin — Uliana Sheremetieva	RUS	0	2	3
221. — 226.	Nikita Boenko — Julia Berezina	RUS	0	2	3
221. — 226.	Oleg Trifonov — Alfia Nevmianova	RUS	0	2	3
221. — 226.	Vladislav Fakhrutdinov — Anita Demidova	RUS	243	2	3
227.	Павел Трофимов — Полина Файн	РУС	184	2	3
4 © Copyright WDSF 2010-2022 Все права защищены \| Политика конфиденциальности \| Условия использования \| Веб-мастер Код и дизайн от JayKay-Design \| Почти действительный XHTML/CSS3 ИТРА Информация о событии Верхний Баксан, Россия с 30 июля 2021 г. по 31 июля 2021 г. Посмотреть другой выпуск 202220212020201

	Бегун	Время		Возраст	Пол	Национальность
1	БРЕГЕДА Дмитрий	2:24:13	Станьте участником ITRA за 8 евро в год, чтобы разблокировать всю свою гоночную статистику + 246;	34	ЧАС	РУС
2	МАРКОВ Евгений	2:25:35		35	ЧАС	РУС
3	БЕЛОУСОВ Егор	2:33:29		33	ЧАС	РУС
4	ЧЕРНОВ Иван	2:35:29		34	ЧАС	РУС
5	ГРИШИН Иван	2:35:32		31	ЧАС	РУС
6	САДОВИН Иван	2:35:32		25	ЧАС	РУС
7	ДЖАЧКОВ Антон	2:40:18		20	ЧАС	РУС
8	БОНДАРЕНКО Роман	2:42:13		37	ЧАС	РУС
9	ШАЙМУХАМЕТОВ Навиль	2:43:09		37	ЧАС	РУС
10	ЛАВРИК Сергей	2:55:10		30	ЧАС	РУС
11	Петрова Алиса	2:57:23		29	Ф	РУС
12	МАВЧУН Георгий	2:58:14		33	ЧАС	РУС
13	Зайцева Марина	3:03:54		38	Ф	РУС
14	ТРОШИН МАКСИМ	3:10:28		25	ЧАС	РУС
15	ЗАСЫПКИН Валентин	3:11:45		33	ЧАС	РУС
16	СУСАКИН Никита	3:13:16		31	ЧАС	РУС
17	КОСТИН Никита	3:19:13		28	ЧАС	РУС
18	Шабалин Сергей	3:22:16		35	ЧАС	РУС
19	БУРАВОВА Светлана	3:23:42		30	Ф	РУС
20	ПЕТРОВА Елена	3:24:51		34	Ф	РУС
21	Корнаухов Дмитрий	3:25:11		32	ЧАС	РУС
22	ЩЕГЛОВ Алексей	3:25:18		41	ЧАС	РУС
23	Рульков Михаил	3:28:05		47	ЧАС	РУС
24	СИЖУК Сергей	3:30:47		32	ЧАС	РУС
25	ЗЯБЛОВА ЕКАТЕРИНА	3:32:31		33	Ф	РУС
26	Ковлагин Сергей	3:35:01		33	ЧАС	РУС
27	ПЯТЫГИНА Елена	3:36:14		33	Ф	РУС
28	СИГАЕВА Елена	3:37:37		28	Ф	РУС
29	Агальцев Роман	3:37:42		38	ЧАС	РУС
30	СОРОКИН Сергей	3:38:08		31	ЧАС	РУС
31	ЧЕРНЫЙ Максим	3:38:21		29	ЧАС	БЛР
32	ТЫРИН Александр	3:43:41		42	ЧАС	РУС
33	УСАНОВ Александр	3:44:00		42	ЧАС	РУС
34	ЗАХВАТОВ Дмитрий	3:45:06		21	ЧАС	РУС
35	ОДИНЦОВА НАТАЛЬЯ	3:45:07		37	Ф	РУС
36	МЕЖУЕВ Денис	3:46:23		29	ЧАС	РУС
37	АВДЕЕВ Дмитрий	3:54:01		42	ЧАС	РУС
38	ЛОГАШОВА Ксения	3:54:03		33	Ф	РУС
39	ПРОШИНА Евгения	3:54:25		23	Ф	РУС
40	ТУЛУПОВ Павел	3:54:54		39	ЧАС	РУС
41	АНДРУСОВ ПАВЕЛ	3:55:20		50	ЧАС	РУС
42	ПОДГОРНОВ Алексей	3:55:46		32	ЧАС	РУС
43	Игнатишина Мария	3:55:50		26		РУС
44	НОВИКОВ Сергей	3:57:32		37	ЧАС	РУС
45	КУЗИК Лилия	3:58:23		23	Ф	РУС
46	НЕГРЕБЕТСКАЯ Светлана	3:58:53		40	Ф	РУС
47	РАСТОРГУЕВА Мария	4:04:27		30	Ф	РУС
48	ПАПШЕВ Евгений	4:04:51		49	ЧАС	РУС
49	ПУЧИН Сергей	4:06:29		33	ЧАС	РУС
50	СИБИРЦЕВА Мария	4:07:04		37	Ф	РУС
51	ЗОТОВ АЛЕКСАНДР	4:07:08		25	ЧАС	РУС
52	ПАПШЕВА Елена	4:07:30		42	Ф	РУС
53	КОЗЫРЕВ Олег	4:09:25		37	ЧАС	РУС
54	Ощепкова Юлия	4:10:14		31	Ф	РУС
55	ДЕМЕНТЬЕВА Татьяна	4:11:06		38	Ф	РУС
56	Алябьев Антон	4:14:55		41	ЧАС	РУС
57	ЯКУБОВСКИЙ Николай	4:15:10		31	ЧАС	РУС
58	ЕВДОКИМОВА Валерия	4:15:45		25	Ф	РУС
59	МУСТИЯЦ Ольга	4:17:16		32	Ф	РУС
60	КУРИЛЬЧИК Анна	4:17:46		38	Ф	РУС
61	БУЖИНСКИЙ Дмитрий	4:19:03		39	ЧАС	РУС
62	ОСАДЧЕНКО Сергей	4:19:30		40	ЧАС	РУС
63	Прокошин Алексей	4:19:33		42	ЧАС	РУС
64	МАКАРОВ Ростислав	4:19:35		39	ЧАС	РУС
65	ПЕТРОВ Илья	4:21:13	39	ЧАС	РУС
66	Сергеенко Елена	4:21:45	34	Ф	RU
67	СИДЕЛЬНИКОВ Георгий	4:22:38	49	ЧАС	РУС
68	ЦУКАНОВА Виктория	4:24:17	42	Ф	РУС
69	РЯБЦЕВ ФЕДОР	4:24:19	34	ЧАС	РУС
70	КРАНТОВСКИЙ Сергей	4:26:54	31	ЧАС	РУС
71	КАЛИНИЧЕНКО Мария	4:31:56	33	Ф	РУС
72	СОКОВ Григорий	4:32:45	43	ЧАС	РУС
73	ГУЛИНА Наталья	4:33:08	36	Ф	РУС
74	КУДРЕНКО Сергей	4:33:12	28	ЧАС	РУС
75	ЧЕБАНЬ Александр	4:33:59	30	ЧАС	РУС
76	ПОРТНЕНКО Дмитрий	4:34:21	29	ЧАС	РУС
77	Юрецкий Алексей	4:35:46	37	ЧАС	RU
78	МАЛЮГИНА Наталья	4:35:59	22	Ф	РУС
79	БЛИННИКОВА Ирина	4:38:37	36	Ф	РУС
80	ФАДЕЕВА Ольга	4:39:22	41	Ф	РУС
81	ШИШЛОВ Роман	4:39:49	43	ЧАС	РУС
82	КОМАР Артем	4:40:32	23	ЧАС	БЛР
83	ЭРБЕТ Натали	4:40:34	37	Ф	РУС
84	МАТВЕЕВА Алиса	4:42:40	30	Ф	РУС
85	ШАПОВАЛОВ Михаил	4:44:03	42	ЧАС	РУС
86	ДУШУТИН Павел	4:44:31	19	ЧАС	РУС
87	ВИРЯЛЧЕНКОВ Никита	4:45:34	32	ЧАС	РУС
88	ЕРДАКОВА Дарья	4:46:00	30	Ф	РУС
89	БАКЛАГИНА Татьяна	4:46:32	29	Ф	РУС
90	ПАЙМИКЕЕВА Наталья	4:46:44	34	Ф	РУС
91	ГЕРАСКИН Кирилл	4:47:19	37	ЧАС	РУС
92	ГОНЦА Андрей	4:47:26	36	ЧАС	РУС
92	ГОНЦА Андрей	4:47:26	36	ЧАС	РУС
93	Мельников Вячеслав	4:47:30	46	ЧАС	RU
94	КРЕПИС Сергей	4:48:29	46	ЧАС	РУС
95	Хитарова Лела	4:48:29	43	Ф	RU
96	ГАВРЮШИН Олег	4:48:52	50	ЧАС	РУС
97	КОСОЛАПОВ Василий	4:48:54	34	ЧАС	РУС
98	НИКИФОРОВ Алексей	4:49:43	37	ЧАС	РУС
99	ЯНГЕЛЬ Борис	4:50:11	33	ЧАС	РУС
100	ИЗЮМОВ Анатолий	4:50:13	47	ЧАС	РУС
101	МЕНШИКОВ Алексей	4:51:22	33	ЧАС	РУС
102	Дудников Сергей	4:52:16	42	ЧАС	РУС
103	КОМАРОВА Ольга	4:52:29	33	Ф	РУС
104	ФРОЛОВ Алексей	4:53:16	35	ЧАС	РУС
105	МОРОЗОВ Константин	4:54:55	33	ЧАС	РУС
106	ПЕТУХОВ Михаил	4:54:58	42	ЧАС	РУС
107	АКИМОВ Александр	4:55:31	41	ЧАС	РУС
108	Лисенков Александр	4:55:42	41	ЧАС	РУС
109	БЕРЕЗА Фёдор	4:56:00	46	ЧАС	РУС
110	БАДЯН Ануш	4:57:13	36	Ф	РУС
111	МУСТАФИН Алим	4:57:26	55	ЧАС	РУС
112	КУВАЕВА Катерина	4:57:34	31	Ф	РУС
113	КУТЕРГИН Максим	5:00:53	37	ЧАС	РУС
114	ФРИДКИН Станислав	5:02:28	39	ЧАС	РУС
115	НИКИТИНА Ольга	5:02:52	41	Ф	РУС
116	БИЛАЛОВА Регина	5:03:06	32	Ф	РУС
117	СТАРОВЕРОВА Вера	5:03:28	39	Ф	РУС
118	КУЗНЕЦОВ Александр	5:05:06	42	ЧАС	РУС
119	Кочев Никита	5:05:11	36	ЧАС	РУС
120	Громова Елена	5:05:33	49	Ф	РУС
121	ПИРОГОВСКАЯ Елена	5:08:28	55	Ф	РУС
122	СКУДНЕВСКИЙ Владимир	5:10:15	63	ЧАС	РУС
123	ЛОСИК Андрей	5:10:50	44	ЧАС	РУС
124	КОЗЫРЕВА Екатерина	5:12:54	33	Ф	РУС
125	ИВАНОВА Виктория	5:13:00	35	Ф	РУС
126	ЗЕНЧЕНКО Артем	5:13:00	25	ЧАС	РУС
127	ШОРОХОВА Лилия	5:13:25	43	Ф	РУС
128	ЧЕКУЛАЕВА Ирина	5:15:05	36	Ф	РУС
129	ПАЛЬЧИКОВА ВИКТОРИЯ	5:15:20	26	Ф	РУС
130	Колчева София	5:17:11	36	Ф	РУС
131	ТРУТНЕВА Любовь	5:18:23	52	Ф	РУС
132	ШАМСУТДИНОВА Светлана	5:18:54	37	Ф	РУС
133	МОРОЗОВ Алексей	5:19:11	38	ЧАС	РУС
134	КУЛИКОВ Андрей	5:19:37	41	ЧАС	РУС
135	Брюхов Андрей	5:20:00	34	ЧАС	RU
136	КОРОБКОВ Андрей	5:20:20	33	ЧАС	РУС
137	ЧУМАЧЕНКО Екатерина	5:20:50	44	Ф	РУС
138	ПАНТЕЛЕЕВА Анна	5:21:43	40	Ф	РУС
139	ШАГИМАРДАНОВА Марьяна	5:22:54	35	Ф	РУС
140	ЯШИНА Анжелика	5:22:57	51	Ф	РУС
141	МАГОМЕДОВ Махач	5:24:31	40	ЧАС	РУС
142	АРХАНГЕЛЬСКАЯ Наталья	5:24:33	46	Ф	РУС
143	ЛЯЛИКОВА Дарья	5:25:41	30	Ф	РУС
144	ХЛИСТУНОВ Виталий	5:28:04	38	ЧАС	РУС
145	ХЛИСТУНОВА Юлия	5:28:08	36	Ф	РУС
146	КОСЕНКО Александр	5:28:54	44	ЧАС	РУС
147	ТАРАСОВА Елена	5:29:50	40	Ф	РУС
148	САЙПУЛАЕВ Джанхуват	5:30:42	38	ЧАС	РУС
149	НЕМТИНОВА Татьяна	5:32:43	32	Ф	РУС
150	СЛЕСАРЕВ Владимир	5:33:08	39	ЧАС	РУС
151	Воробьева Марина	5:33:51	29	Ф	РУС
152	ВАСИЛЬЕВА Алена	5:34:29	36	Ф	РУС
153	ТРЕВОГИН Денис	5:36:36	42	ЧАС	РУС
154	ДРОЗДОВА Анна	5:37:12	49	Ф	РУС
155	МОЛЧАНОВ Евгений	5:38:04	54	ЧАС	РУС
156	МЕТРЕВЕЛИ Инга	5:38:21	37	Ф	РУС
157	КИМ Карина	5:40:54	35	Ф	РУС
158	АХАТОВ Исмаил	5:40:55	40	ЧАС	РУС
159	КУЛЕШОВ Дмитрий	5:40:57	52	ЧАС	РУС
160	ВЛАДИМИРОВА Елена	5:41:22	39	Ф	РУС
161	ПЕТРОВ Иван	5:42:01	42	ЧАС	РУС
162	ЖИЛЯКОВА Юлия	5:42:04	38	Ф	РУС
163	ЮДИН Сергей	5:43:44	52	ЧАС	РУС
164	ЛЮБАКОВА Александра	5:44:42	35	Ф	РУС
165	ОПРЕЯ Дарья	5:47:25	37	Ф	РУС
166	Шеметов Алексей	5:47:36	43	ЧАС	РУС
167	ДЕНИСЕНКО Владимир	5:47:59	34	ЧАС	РУС
168	КУХАРЧИК ЕВГЕНИЯ	5:48:28	39	Ф	РУС
169	ФЕТИСОВ Александр	5:48:42	34	ЧАС	РУС
170	ГАВРИКОВ Роман	5:49:14	38	ЧАС	РУС
171	ПРИКАЗЧИКОВА Мария	5:49:30	26	Ф	РУС
172	ТРИФОНОВА Оксана	5:49:40	45	Ф	РУС
173	ОСИПЕНКО Александра	5:49:47	27	Ф	РУС
174	ПАВЛОВ Александр	5:49:52	41	ЧАС	РУС
175	СТАНКЕВИЧ Владислав	5:50:09	26	ЧАС	РУС
176	СИЛИНА Валентина	5:51:40	46	Ф	РУС
177	ЛИСИНА Екатерина	5:54:05	42	Ф	РУС
178	ЗОЛОТУХИНА Анна	5:55:27	43	Ф	РУС
179	МУХИНА Ольга	5:56:15	37	Ф	РУС
180	БАХАРЕВА Любовь	5:56:23	39	Ф	РУС
181	ГРИГОРЯН Сергей	5:56:28	34	ЧАС	РУС
182	КОРОТКИНА Евгения	5:57:49	32	Ф	БЛР
183	Жуков Георгий	6:02:53	31	ЧАС	РУС
184	КОМАРОВ Александр	6:06:06	44	ЧАС	РУС
185	Страхов Михаил	6:07:11	50	ЧАС	РУС
186	НОРКИНА Анна	6:07:58	38	Ф	РУС
187	ЧЕБАНОВ Виталий	6:10:00	27	ЧАС	РУС
188	ДОЛГОВА Евгения	6:10:54	34	Ф	РУС
189	ГОНЧАРОВА Светлана	6:10:59	41	Ф	РУС
190	БЕЗУГЛОВ Андрей	6:11:10	45	ЧАС	РУС
191	КУЗНЕЦОВ Сергей	6:12:29	47	ЧАС	РУС
192	Литвинова Елена	6:13:57	47	Ф	РУС
193	БЫКОВ Павел	6:19:39	38	ЧАС	РУС
194	САМОХИН Алексей	6:26:40	45	ЧАС	РУС
195	ЛЮКАНОВ Игорь	6:27:58	61	ЧАС	РУС
196	ФИЛИППОВА Александра	6:28:23	33	Ф	РУС
197	КАМЕНЕВА Жамиля	6:30:01	42	Ф	РУС
198	РЫБИН Евгений	6:30:50	24	ЧАС	РУС
199	СОБОЛЕВА Янина	6:31:15	36	Ф	РУС
200	СОЛНЦЕВА Екатерина	6:32:05	33	Ф	РУС
201	ГИЛЬФАНОВА гузель	6:32:08	39	Ф	РУС
202	ВАСЛЯЕВА света	6:32:12	43	Ф	РУС
203	КОСТЮКОВ олег	6:32:23	33	ЧАС	РУС
204	ИЛЬИНА ЕЛЕНА	6:36:06	36	Ф	РУС
205	БОЙКО Ольга	6:36:11	51	Ф	РУС
206	БУЛОВ Игорь	6:36:31	55	ЧАС	РУС
207	МАЛИКОВ Тимур	6:36:50	32	ЧАС	РУС
208	ГАЛИЕВ Руслан	6:38:29	26	ЧАС	РУС
209	ТРУТНЕВА Анна	6:43:03	22	Ф	РУС
210	КРАВЧЕНКО Игорь	6:47:36	25	ЧАС	РУС
211	ШЕБНЕВ Александр	6:51:41	36	ЧАС	РУС
212	ТРЕВОГИНА АЛИСА	6:51:56	19	Ф	РУС
213	МИХАЙЛОВ Глеб	6:52:37	47	ЧАС	РУС
214	Панасенкова Елена	6:58:58	34	Ф	РУС
215	НЕВЕРОВА Мария	7:00:04	33	Ф	РУС
216	ЮЛДАШЕВ Ибрагим	7:05:51	43	ЧАС	РУС
217	КУЛАГИНА Галина	7:06:01	41	Ф	РУС
218	САЗОНОВА Анастасия	7:10:00	45	Ф	РУС
219	Леонов Кирилл	7:14:00	36	ЧАС	РУС
220	ЛАНИНА Наталья	7:16:53	40	Ф	РУС
221	Вьюшкова ДАРЬЯ	8:01:09	25	Ф	RU
222	СИМОНОВА Юлия	8:03:09	57	Ф	РУС
ДНФ	АЛИГАДЖИЕВ Али		38	ЧАС	РУС
ДНФ	БОГАТОВ Георгий		26	ЧАС	РУС
ДНФ	ФРОЛОВ Александр		25	ЧАС	РУС
ДНФ	ИВАНОВА Татьяна		52	Ф	РУС
ДНФ	КАЛЬНИЧЕНКО Юлия		34	Ф	РУС
ДНФ	КАРПОВА Наталья		30	Ф	РУС
ДНФ	ХАЛКВИСТА Сергей		43	ЧАС	РУС
ДНФ	КОРНЕЕВА Татьяна		51	Ф	РУС
ДНФ	КУДРЯВЦЕВ Сергей		35	ЧАС	РУС
ДНФ	КУЛАГИН Кулагин		34	ЧАС	РУС
ДНФ	Латыпов Ринат		31	ЧАС	РУС
ДНФ	ЛИГУН Светлана		31	Ф	РУС
ДНФ	МАКАШОВА Ирина		24	Ф	РУС
ДНФ	ПОНИМАСОВА Ольга		36	Ф	РУС
ДНФ	ПОЗДНЯКОВА Яна		31	Ф	РУС
ДНФ	ПУТИНЦЕВА Юлия		34	Ф	РУС
ДНФ	РОМАШКОВА Юлия		44	Ф	РУС
ДНФ	ШАЙМУХАМЕТОВА Амина		29	Ф	РУС
ДНФ	ШИКОЛЕНКО Илья		33	ЧАС	РУС
ДНФ	СОЛОПАНОВ Михаил		29	ЧАС	РУС
ДНФ	СЫЧЕВ Сергей		34	ЧАС	РУС
ДНФ	ВОЛГУЦКОВА Лариса		36	Ф	РУС
ДНФ	ВЫХОДЦЕВ Михаил		53	ЧАС	РУС

Питомник Velvet Dandy’s

ШНАУЦЕР ИНОСТРАННЫЕ ДЕЛА

Талисман Монера

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткая запись:

Русалочка Velvet Dandy в Stahlkrieger

эл.

Ch Mohner’s Nordic Star
u. Веселая поездка Ch Mohner

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткое описание:
Ответ: Шерил Кромптон

SEUCH
Stahlkriegers Некоторая удача

эл. Чемпион Маля Мохито
у. Не совсем черный Ch Stahlkrieger’s

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткое описание:
Спасибо, Шерил Кромптон; питомнику Stahlkrieger, за то, что подарили нам этого абсолютно идеального кобеля! Мы полюбили его с первого момента и с нетерпением ждем возможности полюбить его, показать и развести с нашей Лаурой!

Бархат Денди Катунь

эл.

CH Velvet Dandy’s Neapolitan Dynamite
u. CH Эпоха Курабо Игрушка

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткое описание:
Ответ: Шерил Кромптон, питомник Stahlkreiger!

Многоканальный Nois Epoha Rockfeller

эл. CH Stahlkriegers Magnum Force
u. CH Нойс Эпоха Ясна

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткое описание:
”Rock” bodde hos ett halvår och vi kunde konstatera att han är lika underbar som han ser ut! En complett schnauzerhane med correkt topline och ett riktigt tegelstenshuvud med massa och balanserade rörselser helt enligt standarden.

Ханс Фар суперстъярнан Ch Stahlkrieger Magnum Force из США. Tack Natalia for att vi fick förtroendet att njuta av din älskade hund. Nu ser vi fram emot att njuta av hans valpar!
Эгаре Наталья Чекулаева Хемсида

VELVET DANDY’S HEAVEN HILL

эл. Перико Авеню Серхас
u. Безуэла Де Верорих

Фотон

Результат

Авкоммор

Короткое описание:
Питомник «Дива» Verorich i Spanien.

			Вероника Ланге Тел. 073-920 33 22, 021-38 33 266

Бархатные Денди © 2018			Мария Борг Тел. 070-268 96 24

Множественные роли полицистронного гена Tarsal-less/Mille-Pattes/Polished-Rice во время эмбриогенеза поцелуйного жука Rhodnius prolixus

Введение

В ходе генетического скрининга модельных организмов было обнаружено большое количество важных генов, необходимых для биологических процессов. например, плодовая муха Drosophila melanogaster (например, Nüsslein-Volhard and Wieschaus, 1980). В то время как большинство локусов, важных для процессов развития, были идентифицированы в этих первоначальных скринингах, недавний генетический анализ и анализ экспрессии у D. melanogaster и у жука Tribolium castaneum показали, что гены, ранее классифицированные как предполагаемые некодирующие РНК, кодируют функциональные небольшие открытые рамки считывания. (смОРС) или кОРС (Pueyo et al., 2016a; Chekulaeva, Rajewsky, 2018). smORF, ORF размером менее 100 аминокислот, были описаны как фундаментальные для нескольких процессов развития насекомых (Savard et al., 2006; Galindo et al., 2007; Kondo et al., 2007), хотя методы генного предсказания, в целом, отброшенные smORF в полногеномных предсказаниях (обзор в Saghatelian and Couso, 2015). Сравнительный геномный анализ видов дрозофилид показал неожиданную консервативность smORF-содержащих генов, указывая на важную биологическую роль этого нового класса генов (Ladoukakis et al., 2011).

Позже был проведен экспериментальный анализ консервативных smORF, таких как сарколамбан (scl) , консервативный пептид, участвующий в захвате Ca ²⁺ в сарко-эндоплазматическом ретикулуме (Magny et al., 2013), и гемотин (Magny et al., 2013). Pueyo et al., 2016b), консервативный регулятор фагоцитоза, представил дополнительные доказательства того, что гены, содержащие smORF, могут составлять резервуар важных игроков в геномах многоклеточных животных. В последние годы прямые доказательства крупномасштабной трансляции smORF были получены с помощью рибосомного профилирования полисомных фракций в Drosophila с использованием методики Poly Ribo-Seq (Aspden et al., 2014). Это исследование позволило классифицировать смОРС на две группы: «более длинные» смОРС, содержащие около 80 аминокислот, напоминающие канонические белки, в основном содержащие трансмембранные мотивы, и более короткие («карликовые») смОРС. Эти «карликовые» smORF обычно короче (длиной около 20 аминокислот), менее консервативны и в основном обнаруживаются в 5′-UTR и некодирующих РНК.

В то время как биоинформационные исследования указывают на сотни или тысячи генов, содержащих предполагаемые smORF, было проведено лишь несколько функциональных исследований. У насекомых функция члена-основателя smORF миль-паттес (mlpt) был подробно исследован только у насекомых с голометаболом, таких как D. melanogaster и T. castaneum (Savard et al. , 2006; Galindo et al., 2007; Kondo et al. , 2007), а совсем недавно — у двукрылых (Jiménez-Guri et al., 2018) и чешуекрылых (Cao et al., 2018). У T. castaneum mlpt действует как гэп-ген во время процесса эмбриональной сегментации, регулируя гены Hox и спецификацию грудного и брюшного отделов; нокдаун mlpt приводит к эмбрионам с несколькими ногами, mille-pattes по-французски (Savard et al., 2006). В D. melanogaster, tarsal-less (tal) был идентифицирован у спонтанного мутанта с дефектами в дистальной части ног, tarsus (Galindo et al., 2007). Независимо, в том же году было показано, что пептиды полированного риса (Pri) необходимы для организации F-актина во время морфогенеза трихом; эмбрионы, лишенные pri , имеют внешние дефекты кутикулы, напоминающие шлифованный рис (Kondo et al., 2007). Совсем недавно было показано, что пептиды Mlpt регулируются ecdysone, определяя начало развития эпидермальных трихом, посредством посттрансляционного контроля фактора транскрипции Shavenbaby (Svb) (Chanut-Delalande et al. , 2014). В целом, пептиды Mlpt демонстрируют контекстно-специфические роли и взаимодействия в различных процессах развития.

В то время как у D. melanogaster, mlpt ранняя экспрессия эмбрионального гена является сегментарной, демонстрируя паттерн парных правил, мутанты не демонстрируют сегментации или гомеотических изменений, как сообщалось в Т. кастанеум . Эмбриональные мутантные фенотипы D. melanogaster включают сломанную трахею, потерю черепно-глоточного скелета, аномальные задние дыхальца и отсутствие поясков зубцов, структуры экспрессии позднего эмбриона mlpt (Galindo et al., 2007).

Выяснить, является ли функция сегментации mlpt наследственной, но утраченной в линии, давшей начало D. melanogaster , или это недавно возникшая специализация T. castaneum важно изучить функцию mlpt в других группах насекомых. Поскольку полужесткокрылые, как полуметаболические, составляют сестринскую группу голометаболических насекомых (обзор в Panfilio and Angelini, 2018), функциональная характеристика mlpt в эмерджентной модели полужесткокрылых, целующийся клоп Rhodnius prolixus был бы важен (Nunes-da -Fonseca et al. , 2017) . R. prolixus доступных геномных и транскриптомных ресурсов (Medeiros et al., 2011; Ribeiro et al., 2014; Mesquita et al., 2015; Marchant et al., 2016; Brito et al., 2018), установленная эмбриональная стадия системы (Berni et al., 2014) и недавней доступности 9Методы гибридизации 7952 in situ и РНК-интерференции являются большими преимуществами этой модельной системы (Nunes-da-Fonseca et al., 2017). Недавно функция mlpt была исследована у нескольких насекомых, включая два вида полужесткокрылых, водомерку Gerris buenoi (Hemiptera, Gerridae) и молочая Oncopeltus fasciatus (Hemiptera, Lygaeidae) (Ray et al., 2019). ). Этот анализ предоставил доказательства того, что пептиды Mlpt, ubiquitin-ligase Ubr3 и фактор транскрипции Shavenbaby (Svb), составляют древний онтогенетический модуль, необходимый для раннего формирования паттерна эмбрионов насекомых.

Здесь мы сообщаем об интересных консервативных и новых функциональных аспектах прототипа гена smORF mlpt R. prolixus . Во-первых, анализ последовательности идентифицировал новый специфичный для Hemiptera пептид в полицистронной мРНК mlpt , ген, консервативный во всей кладе Pancrustacean. Во-вторых, анализ молекулярного докинга показывает, что небольшой пептид, содержащий консенсусный мотив LDPTG(L/Q/T)Y, взаимодействует с N-концом фактора транскрипции Svb, как в D. melanogaster . В-третьих, экспрессия и функциональный анализ показывают, что ортолог mlpt действует во время эмбриональной сегментации, регулируя переход между торакальной и брюшной идентичностью, сходно с его ролью, ранее описанной у T. castaneum . В-четвертых, также наблюдалась законсервированная роль в формировании паттерна предплюсны. В целом, сегментация и формирование тарзального паттерна законсервированы, а предковые роли mlpt и наши данные свидетельствуют о том, что генерация новых пептидов из smORFs может представлять собой недооцененный механизм эволюции новых генов.

Results

Недавнее описание нескольких биологически важных генов, кодирующих smORF у многоклеточных животных, открыло новые возможности для исследований в области молекулярной биологии и функциональной геномики (Saghatelian and Couso, 2015; Pueyo et al. , 2016a; Zanet et al., 2016). Функция mlpt была в значительной степени исследована у насекомых с холометаболом, в то время как о его функции у насекомых с гемиметаболизмом сообщалось только недавно (Ray et al., 2019). В текущей рукописи мы описываем биоинформатический и функциональный анализ mlpt функция у целующегося жука R. prolixus .

mlpt Распределение полицистронных генов и пептидов среди членистоногих

Предыдущие поиски BLAST генов, кодирующих mlpt пептидов в отношении различных геномов и транскриптомов членистоногих, предоставили доказательства того, что этот ген, содержащий smORF, встречается только у насекомых и ракообразных (Galindo et al., 207, 27). ). Увеличение последовательностей генома в последние годы (Tribolium Genome Sequencing Consortium et al., 2008; Schwager et al., 2017; Panfilio et al., 2019).) позволили нам провести полный поиск в доступных геномах членистоногих. Используя нестрогий подход BLAST (подробности см. В методах), мы идентифицировали ортолога mlpt в доступных геномах насекомых (дополнительная таблица 1). Эти ортологи кодируют от двух до нескольких копий пептида из 11–32 аминокислот, содержащего консенсусный мотив LDPTG(L/Q/T)Y (рис. 1А – красные прямоугольники, рис. 1В). Ранее было показано, что эти пептиды опосредуют переключение транскрипционного фактора svb с репрессора на активатор (Kondo et al., 2010) посредством убиквитин-конъюгирующего комплекса, UbcD6-Ubr3, и рекрутирования протеасомы (Zanet et al. , 2015). Примечательно, что полужесткокрылые 9Ортологи 7952 mlpt не только содержат две smORF, кодирующие консенсусный мотив LDPTG(L/Q/T)Y (рис. 1A — красные прямоугольники), но также содержат большую smORF, специфичную для Hemiptera, состоящую примерно из 80 аминокислот (рис. 1A — зеленые прямоугольники). и рисунок 1С). Мы назвали этот новый пептид smHemiptera из-за его ограниченного филогенетического распространения. Интересно, что в транскриптоме R. prolixus пищеварительного тракта был идентифицирован полицистронный транскрипт, содержащий все вышеперечисленные смОРС (Ribeiro et al. , 2014 и наши собственные наблюдения). Этот пептид, по-видимому, меньше и менее консервативен у видов полужесткокрылых с базальным ветвлением, имеющих около 60 аминокислот в геноме гороховой тли 9.7952 Acyrthosiphon pisum и Pseudococcus longispinus и более 80 аминокислот в триатомах, таких как Rhodnius prolixus и Triatoma pallidipennis . smHemiptera содержит консервативный участок из 14 аминокислот (GHR(S/N)WMTHLPLSRP) почти у всех производных видов полужесткокрылых с доступными транскриптомами (рис. 1А,С). Единственным исключением является геном клопа молочая O. fasciatus (Panfilio et al., 2019), в котором отсутствует mlpt 9.Последовательность гена 7953 в текущей сборке. Из — mlpt стенограмма, недавно опубликованная Ray et al. (2019) не содержит smHemiptera. Таким образом, либо O. fasciatus mlpt гена smHemiptera утеряны, либо опубликованная транскрипция неполна. Мы склоняемся к последнему варианту, поскольку smHemiptera также присутствует в mlpt генах всех проанализированных видов, включая недавно опубликованную последовательность mlpt водомерок, Gerris buenoi (Hemiptera, Gerridae) (Ray et al. , 2019).). Наконец, еще один пептид из 14 аминокислот был идентифицирован в 3′-области двух видов триатоминов (рис. 1А — розовые прямоугольники и рис. 1D).

Рисунок 1 . млпт эволюционный анализ и предполагаемая регуляция. (A) Филогенетическое представление распределения mlpt среди видов членистоногих и приблизительное время видообразования узлов на основе онлайн-сервера TimeTree (Kumar et al., 2017). mlpt организация полицистронной мРНК. Черные линии включают всю полицистронную мРНК, содержащую smORF, кодирующие пептиды, показанные в красных, зеленых и розовых прямоугольниках. (B) Выравнивание ранее описанного небольшого пептида (красные прямоугольники в A ), содержащего домен LDPTG (Savard et al., 2006; Galindo et al., 2007; Kondo et al., 2007), консервативного в нескольких видов членистоногих и у которых количество паралогов в одном полицистронном гене варьируется среди видов членистоногих. (C) Выравнивание специфичного для полужесткокрылых пептида примерно из 80 аминокислот (зеленые прямоугольники в A ). (D) Выравнивание триатомин-консервативных пептидов, кодируемых smORF (розовые прямоугольники). ^# указывает на то, что трансляция в этой последовательности не прерывается.

Shavenbaby-

mlpts Прогнозы аффинности связывания, режимов взаимодействия и горячих точек
Предыдущая работа в D. melanogaster идентифицировала 31 N-концевой остаток транскрипционного фактора (TF) Shavenbaby (Svb) как Mlpt-зависимую деградацию сигнал, или дегрон (Zanet et al., 2015). Чтобы исследовать способы взаимодействия между пептидами, кодируемыми полицистронной мРНК mlpt и Svb TF из D. melanogaster (Dmel-Svb) и R. prolixus (Rprol-Svb), трехмерные структуры были предсказаны с помощью подхода ab initio , и были проведены анализы стыковки белок-пептид. Во-первых, был проведен исчерпывающий анализ профиля вторичной структуры и неупорядоченных областей аминокислотных последовательностей Dmel-Svb и Rprol-Svb. Наши результаты показывают, что как Dmel-Svb, так и Rprol-Svb демонстрируют в основном неупорядоченные и спиральные области (дополнительные рисунки 1, 2), как предполагалось ранее (Zanet et al., 2015). Неупорядоченные и спиральные области появляются в больших доменах обоих белков, перемежаясь небольшими альфа-спиралями и короткими бета-листами (рис. 2A-R; дополнительные рисунки 2A, B). Согласно DISOPRED3, около С-конца в обоих Svbs вероятность беспорядка уменьшилась, что указывает на то, что двойной домен Zinc-finger, расположенный в этой области, более упорядочен. Меньшие пептиды, содержащие мотивы LDPTG(L/Q/T)Y, Dmel-pptd1 (дополнительная фигура 2C), Rprol-Mlpt1 (дополнительная фигура 2E) и Rprol-Mlpt2 (дополнительная фигура 2F) принимали неупорядоченные конформации. Напротив, Dmel-Mlpt4 (дополнительная фигура 2D), пептид с 32 аминокислотами и неизвестной функцией (Galindo et al., 2007; Kondo et al., 2007), представлял собой упорядоченную структуру с двумя альфа-спиралями, интеркалированными двумя небольшими неупорядоченные области. Кроме того, программа DISOPRED3 также предсказала сайты связывания белка на N-конце Dmel-Svb в диапазоне от Leu19до Asn23 и в Rprol-Svb от Ser24 до Leu42 (дополнительные рисунки 1A, B). Интересно, что наши выводы о взаимодействиях Dmel-Svb-Mlpt подтверждают предыдущие выводы Zanet et al. (2015), которые показали, что область между первыми 11 (N11) и 31 (N31) аминокислотами необходима для Mlpt-опосредованного процессинга. Поэтому мы дополнительно провели анализы стыковки с Svb и Mlpts, принимая во внимание предсказание данных и ранее опубликованные биологические данные (Zanet et al., 2015).
Рисунок 2 . Прогнозирование взаимодействия Shavenbaby-Mlpts. Анализы стыковки Svbs-Mlpts были основаны на результатах (Zanet et al., 2015) и на анализе предсказания сайтов связывания белков на N-концах Svbs с помощью DISOPRED. Электростатический потенциал представлен на молекулярной поверхности Dmel-Svb (A,D,E,G,H) , Dmel-Mlpt1 (E,F) , Dmel-Mlpt4 (H,I) , Rprol -Svb (D,J,M,N,P,Q) , Rprol-Mlpt1 (N,O) , Rprol-Mlpt2 (Q,R) , с отрицательными значениями (-10 кэВ) красным, нейтральным белым и положительными значениями (+10 кэВ) синим. Ленты Dmel-Svb (B) и Rprol-Svb (K) (рисунок внизу) были окрашены от синего к красному, чтобы указать на переход от N- к C-концу соответственно. N-конец (C, L) был увеличен, и предполагаемая область сайта связывания белка Leu19-Asn23 была изображена красным для Dmel-Svb (C) , а область Ser24-Leu42 для Rprol-Svb (L ) . Дмель-Млпт1 (D) , Dmel-Mlpt4 (G) , Rprol-Mlpt1 (M) и Rprol-Mlpt2 (P) представлены в виде ленты, окрашенной от синего к красному по мере продвижения полипептидной цепи от N — к C-концу, каждый в соответствующем районе стыковки на поверхности Shavenbaby. Остатки боковых цепей Mpts показаны в виде палочек.

Анализы стыковки были сосредоточены на предсказанных сайтах связывания белка на N-конце Svb. Наши результаты показывают, что по крайней мере половина остатков мотивов LDPTG(L/Q/T)Y из пептидов Mlpts участвует в комплексообразовании (дополнительная таблица 2). Были предсказаны возможные взаимодействия на сложных интерфейсах (дополнительная фигура 3), вклад свободной энергии связывания на остаток (дополнительная таблица 2), а также их теоретическое сродство к взаимодействию (дополнительная таблица 2). Аффинность связывания, измеренная программой HawkDock с использованием метода MM/GBSA, показала, что Dmel-Svb_Dmel-Mlpt4 имеет самую высокую аффинность, за ней следует Rprol-Svb_Rprol-Mlpt1, после Rprol-Svb_Rprol-Mlpt2 и Dmel-Svb_Dmel-Mlpt1 (дополнительный Таблица 3). Константа диссоциации (Kd) была измерена программой PRODIGY и предполагает низкое сродство между ними (дополнительная таблица 3). Количество связей и контактов было измерено с помощью PDBsum (дополнительная фигура 3; дополнительная таблица 3), и результаты показывают, что модель взаимодействия Rprol-Svb_Rprol-Mlpt1 имеет наибольшее количество несвязанных контактов, за которой следует Rprol-Svb_Rprol-Mlpt2. . Rprol-Svb_Rprol-Mlpt1 и Dmel-Svb_Dmel-Mlpt4 установили наибольшее количество водородных связей, но Dmel-Svb_Dmel-Mlpt4 имеет наибольшее количество солевых мостиков. Дальнейший анализ по 9Сайт-направленный мутагенез 7952 in silico подтвердил вклад каждой аминокислоты в связывание пептида с ТФ (дополнительная фигура 4). Важно отметить, что предсказания изменений аффинности связывания при мутациях указывают на то, что в глобальном масштабе не менее 30% остатков на поверхности раздела являются критическими для стабилизации белковых комплексов. Анализ изменений аффинности связывания при мутациях подтверждает предыдущие биологические данные Zanet et al. (2015), поскольку одиночные мутации лейцинов (L24, L25 и L19) и глутаминовой кислоты (E20) в N-концевой области Dmel-Svb влияют на взаимодействие этой области с Dmel-Mlpt1 (дополнительная фигура 4). Эти аминокислоты лежат в области, которая, как ранее было экспериментально показано, необходима для процессинга Dmel-Svb, опосредованного Dmel-Mlpt1 (Zanet et al., 2015). Подводя итог, предлагаемая модель смогла восстановить ранее данные о биологическом взаимодействии Dmel-Svb_Dmel-Mlpt (Zanet et al., 2015) и предложить предполагаемые области взаимодействия между Rprol-Svb и Rprol-Mlpts.

Rp-mlpt Паттерн пространственной экспрессии и относительная экспрессия Во время Rhodnius prolixus Эмбриогенез

mlpt Эмбриональная экспрессия была первоначально описана у жука T. castaneum и характеризовалась очень динамичным формированием паттерна ., 2006). У D. melanogaster экспрессия mlpt коррелирует с укладкой ткани, действуя как связь между формированием паттерна и морфогенезом (Galindo et al., 2007). Раннее выражение D. melanogaster mlpt начинается с семи полосок бластодермы и скопления клеток в передней части эмбриона, хотя у мутантов mlpt сегментация не затрагивается (Galindo et al., 2007). Позже, после сегментации, mlpt присутствуют в трахее, задних дыхальцах, глотке, задней кишке и предполагаемых зубчатых поясках. Мутанты D. melanogaster mlpt обнаруживают редуцированные кутикулярные структуры, а эктопическая экспрессия mlpt в голове индуцирует дополнительные компоненты скелета (Galindo et al. , 2007). У полужесткокрылых O. fasciatus и G. buenoi mlpt экспрессируется в переднем домене на ранних стадиях, во время удлинения зародышевой полосы через недавно добавленные сегменты кпереди от зоны роста, а более поздняя экспрессия наблюдается в презумптивных нейронах в центральной нервной системе, а также в зачатках конечностей и ротовых частях (Ray et al., 2019).

Для исследования экспрессии mlpt в R. prolixus в процессе эмбриогенеза была проведена гибридизация in situ нескольких эмбриональных стадий. Исходные данные 9Экспрессия 7952 Rp-mlpt с использованием колориметрического субстрата и окрашивания DAPI представлена на дополнительной фигуре 5, а для простоты на рисунке 3 представлены наложенные изображения псевдофлуоресцентной экспрессии и окрашивания DAPI. наблюдается на стадии 1B, между 6 и 12 часами после откладки яиц (AEL), в переднем домене (рис. 3A), который соответствует предполагаемым долям головы, с последующим появлением заднего домена экспрессии незадолго до задней инвагинации на стадии 2A (рис. 3B, 12–18 ч AEL). Полужесткокрылые, такие как R. prolixus , подвергаются эмбриональному инверсионному движению, называемому анатрепсисом (Panfilio, 2008). На стадии 3A (24–30 ч AEL), во время этого инверсионного движения (рис. 3C, C’) и в начале удлинения зародышевой полосы на стадии 3B (рис. 3D, D’ 30–36 ч AEL) Rp- mlpt экспрессируется на новообразованных грудных и брюшных сегментах, но не в самой задней области, зоне добавления сегмента (SAZ) или зоне роста (Auman et al., 2017; Paese et al., 2018). На стадии 4, при удлинении полосы драгоценного камня, 9Экспрессия 7952 Rp-mlpt остается перед SAZ и в переднем домене экспрессии головы (Рисунки 3E-J, 36-48 ч AEL). На стадии 5 (48–60 ч AEL), незадолго до окончания сегментации и когда сегментарные зачатки вот-вот должны появиться, Rp-mlpt экспрессируется только в самой задней области (рис. 3K, 48–60 ч AEL). Между стадиями 5 и 6 (60–72 ч) сегментация брюшка завершается, и экспрессия Rp-mlpt наблюдается на кончиках ног и в головных долях (рис. 3L). Между стадией 7 (72–84 ч AEL) и стадией 8 (84–96 ч AEL), который характеризуется ростом проксимально-дистальной оси ноги и утолщением брюшных сегментов, можно визуализировать экспрессию в латеральной, будущей дорсальной эмбриональной области (рис. 3M). На стадии 9 (96–108 ч AEL), в начале ретракции зародышевого диска, Rp-mlpt наблюдается только на антенне, органе, претерпевающем значительное увеличение в размерах на стадиях 9 и 10 (рис. 3N; Berni et al. ., 2014). В целом экспрессия mlpt очень динамична, предполагая несколько ролей в течение R. prolixus эмбриональное развитие.

Рисунок 3 . Экспрессия mlpt во время эмбриогенеза R. prolixus . Передняя часть яйца слева на всех панелях. При процессах анатрепсиса и кататрепсиса ориентация эмбрионов смещается вдоль передне-задней и DV-осей (подробнее см. Nunes-da-Fonseca et al., 2017 и Berni et al., 2014). Выражение mlpt отображается искусственным красным цветом, а DAPI — синим. Вентральный вид яйца (A,B,C ′ ,D ′ ,G,H,I) . Яйца, выделенные из желтка (L,M,N) (A) Стадия 1B, ~10 ч после откладки яиц (AEL) mlpt экспрессия выявляется в виде широкого средне-переднего домена, перекрывающегося с будущей головкой . (B) Через несколько часов (стадия 2А – 12–18 ч AEL) помимо переднего домена наблюдается еще и задний домен. (C,C ‘ ,D,D ‘ ) На стадии 3A (24–30 ч AEL) во время анатрепсиса задний домен экспрессии находится на поверхности (эктодерме), но не распространяется к задний отдел зародышевого диска. (E–J) На стадии 3B (30–36 ч AEL) экспрессия остается впереди задней области и в небольшом билатеральном домене в голове и начинает исчезать по мере завершения элонгации. (K) Стадия 4 (36–48 ч) в начале головной и грудной сегментации наблюдается экспрессия на заднем конце. (L) Стадия 5 (48–60 ч AEL) во время роста ног окрашивание особенно наблюдается на кончиках ног и в мочках головы. (M) На стадии 7 (72–84 ч AEL) сегментация брюшной полости очевидна, и наблюдается экспрессия в кластерах латеральных сегментарных клеток, потенциально соответствующих периферическим нейронам, как предполагалось ранее для T. castaneum (Savard et al., 2006). (N) Стадия 9 (96–108 ч AEL) во время экспрессии ретракции зародышевых полос ограничена антеннами. Система стадирования эмбрионов R. prolixus была описана Berni et al. (2014).

Чтобы выяснить, изменяются ли уровни экспрессии mlpt в ходе эмбрионального развития, мы исследовали его экспрессию с помощью ПЦР в реальном времени (RT-qPCR). Небольшие изменения экспрессии Rp-mlpt наблюдались между неоплодотворенными (0–6 ч NF) и ранними оплодотворенными яйцами (0–6 ч AEL), в то время как 10-кратное увеличение экспрессии было обнаружено при анализе 36– 48-часовые яйца AEL (дополнительная фигура 6A). В целом эти данные RT-qPCR показывают, что 9Экспрессия 7952 Rp-mlpt выше на стадиях зиготической сегментации, чем у материнских депонированных мРНК.

Rp-mlpt Интерференция родительской РНК эффективна и приводит к серии нокдаун-фенотипов

Поскольку ген Rp-mlpt демонстрирует сложный паттерн экспрессии во время эмбриогенеза, мы попытались проанализировать его функцию с помощью интерференции родительской РНК (pRNAi) в R. prolixus , как описано ранее (Berni et al., 2014). В этом методе самкам вводят двухцепочечную (дцРНК), синтезированную против интересующего гена, и оценивают фенотипические эффекты у потомства. 9Яйца 7952 Rp-mlpt дцРНК показали снижение до 60–70% экспрессии Rp-mlpt по сравнению с его экспрессией в контрольной группе дцРНК, что подтверждает нокдаун (дополнительная фигура 6B). Увеличение инъекционной концентрации дцРНК Rp-mlpt до шести микрограммов на микролитр (6 мкг/мкл) не приводило к дальнейшему увеличению эффективности нокдауна (данные не показаны).

После сбора и фиксации яиц было выполнено ядерное окрашивание DAPI, и было обнаружено множество эмбриональных мутантных фенотипов. Первый фенотипический класс Rp-mlpt Эмбрионы RNAi включают эмбрионы с количеством сегментов дикого типа, но со слиянием грудных или гнатальных сегментов. Эмбрионы с такой морфологией были видны на стадиях 5 и 7 (рис. 4B, B’, C, C’). Второй фенотипический класс состоял из эмбрионов с четырьмя парами ног в РНКи Rp-mlpt вместо трех пар, наблюдаемых в контроле (рис. 4E,E’). Наконец, третий фенотипический класс эмбрионов Rp-mlpt RNAi показал неправильную удлиненность зародышевой полосы и отсутствие задней области на стадии 3 (рис. 4A, A’), что более очевидно на стадии 9., когда наблюдалось отсутствие сегментации брюшка и сросшиеся ноги (рис. 4D, D′).

Рисунок 4 . mlpt дефектов сегментации с нокдауном. Окрашивание DAPI контрольных и mlpt эмбрионов RNAi. Передняя область яйца слева на всех панелях. (А,А ′ ) Этап 3А. Удлинение зародышевой полосы кажется нерегулярным у эмбрионов RNAi по сравнению с контролями. (B,B ′ ) Стадия 5. Неправильная сегментация грудной и гнатальной областей у эмбрионов РНКи. (C,C ′ ) Стадия 7. Слияние сегментов грудной клетки и неправильная сегментация брюшной полости в сегментации эмбрионов РНКи по сравнению с контролем. по сравнению с контролем Эмбрион РНКи показывает четыре пары ног по сравнению с тремя парами ног в контроле. 9Система стадирования эмбрионов 7952 R. prolixus была описана Berni et al. (2014).

Эти фенотипические классы также можно наблюдать при вскрытии эмбрионов на очень поздних стадиях, когда окрашивание ядер DAPI невозможно из-за образования кутикулы (рис. 5A–D). Красную пигментацию грудной клетки можно использовать для сравнения эмбрионов дикого типа и РНКи. В первом фенотипическом классе Rp-mlpt РНКи (20 из 45 эмбрионов — 45%) могут быть идентифицированы эмбрионы с двумя парами грудных сегментов, что указывает на неправильную сегментацию грудного отдела (рис. 5B-B9).7962 ‴ ). Во втором классе (15 из 45 эмбрионов-33%) присутствуют четыре грудных сегмента (рис. 5C-C ^‴), а в третьем классе (10 из 45 эмбрионов-22%), самый сильный нокдаун-фенотип , у поздних эмбрионов наблюдается нарушение удлинения зародышевых полос и большая часть брюшной сегментации утрачена, в то время как дорсальное закрытие показывает явные дефекты (Рисунки 5D-D ^‴). Мы заметили, что введение более высоких концентраций дцРНК Rp-mlpt увеличивало частоту третьего фенотипического класса и наблюдение дефектов головки, которые не были идентифицированы ни в одном из ранее описанных классов (см. ниже).

Рисунок 5 . Фенотипические классы mlpt РНКи поздних эмбрионов. млпт нокдаунных эмбрионов были классифицированы по трем фенотипическим классам по сравнению с контролем (А-А ^‴ ). (B–B ^‴ ) Класс 1 — Эмбрионы, имеющие только два грудных сегмента и удвоение дистальных отделов ног (звездочка) (B–D) . Абдоминальная сегментация кажется нормальной, за исключением некоторых асимметричных сегментарных делений на левой и правой сторонах (звездочка) (20 из 45 эмбрионов). (C–C ^‴ ) Класс 2 — Эмбрионы с четырьмя грудными сегментами и неправильной сегментацией брюшка (15 из 45 эмбрионов). (D–D ^‴ ) Класс 3 — более короткие эмбрионы, имеющие только грудные сегменты и меньше брюшных сегментов, чем контрольные (10 из 45 эмбрионов).

Интересно, что введение дцРНК Rp-mlpt в более низких концентрациях (до 1 мкг/мкл) самкам R. prolixus приводит к небольшому проценту нимф, способных покидать яичную скорлупу (10–15% ). Некоторые из этих 9Нимфы 7952 Rp-mlpt dsRNA обнаруживают одностороннее сегментарное слияние первого и второго грудных сегментов, приводящее к аномальной морфологии дистальных отделов ног (рис. 6А, В). Дистальные области ног R. prolixus дикого типа состоят из стереотипного рисунка большеберцовой кости, предплюсны и пары когтей (рис. 6А). dsRNA Rp-mlpt нимфы демонстрируют неправильное затемнение кутикулы и различные типы отклонений ног от паттерна дикого типа, включая отсутствие надлежащего различия между лапкой и когтями (Рисунки 6B′, B″). В целом, наши результаты показывают, что Rp-mlpt важен для различения грудных и брюшных сегментов, для процесса удлинения зародышевых полос и формирования рисунка дистальных ножек.

Рисунок 6 . Слияние сегментов и дефекты ног после mlpt RNAi. (A,B) Контроль (A) и mlpt RNAi нимфа (B,B ′ ,B ″ ). (B’) mlpt Нимфа RNAi демонстрирует одностороннее слияние ног L1 и L2. (B ′ ,B ″ ) Более сильное увеличение дистальных областей сросшихся ног показывает морфологию, которая отличается от картины дикого типа. После mlpt RNAi наблюдаются некоторые фенотипические изменения по сравнению с паттерном дикого типа, такие как отсутствие дистальных областей, таких как предплюсна (Ts) и когти, как выделено в (B ″ ) . ТБ, большеберцовая кость; Ц, предплюсна; С, когти. Шкала бар 500 мкМ.

Rp-mlpt Инъекция дцРНК приводит к слиянию сегментов и нарушению формирования головки у самых сильных фенотипов
Снижение экспрессии Rp-mlpt повлияло на формирование сегмента с четкими фенотипическими эффектами в грудной клетке и брюшной полости, перед задней инвагинацией и на более поздних стадиях сегментации (рис. 4, 5). Поскольку уменьшение или увеличение числа грудных сегментов наблюдалось на поздних эмбриональных стадиях после Rp-mlpt RNAi, мы оценили экспрессию ортолога гена полярности сегмента hedgehog (hh) в контроле и Rp-mlpt эмбриона РНК-интерференции. Как и у других насекомых, задняя область каждого сегмента экспрессирует Rp-hh во время эмбриональной сегментации, а грудной и брюшной сегменты могут быть идентифицированы по их разной ширине (рис. 7А). Фенотипическая серия Rp-mlpt RNAi эмбрионов показывает, что расстояние между сегментарными полосками уменьшено и что различие между грудными и брюшными сегментами менее четкое. Примечательно, что у явно более сильных фенотипов нокдауна также наблюдалось отсутствие самых передних сегментов головы (рис. 7А, звездочка). чч окрашивания этих самых сильных фенотипов mlpt на стадии 9 подтверждают, что голова поражается на более поздних стадиях (рис. 7А’). Фенотипические дефекты в голове наблюдались только при инъекциях более высоких концентраций dsRNA (от 4 до 6 мкг на микролитр) и при низкой частоте (~10% эмбрионов). Этот сильнейший фенотип нельзя отнести ни к одному из трех ранее описанных классов. В целом анализ экспрессии Rp-hh показывает, что Rp-mlpt необходим для правильного различения грудных и брюшных сегментов и для формирования головы.
Рисунок 7 . Слияние сегментов и экспрессия гена Hox у эмбрионов с нокдауном mlpt и других генов развития. (A) Гибридизация in situ для hedgehog ( hh ) и контрастное окрашивание ядер с DAPI контроля (ctrl) слева и прогрессирующие более сильные фенотипы mlpt dsRNA слева направо. Желтые стрелки указывают на явные сегментарные слияния в грудном отделе. В самом сильном фенотипе (самый правый) поражена головка (звездочка), а удлинение зародышевой полосы не происходит. (A ‘ ) На стадии 9 один контрольный (ctrl) один сильно пострадал mlpt эмбриона дцРНК, демонстрируя сегментацию и дефекты головки. (B) Окрашивание антител ANTP в контроле и эмбрионах Rp-mlpt RNAi. Антитело ANTP маркирует первую и вторую ноги (L1 и L2) и три грудных сегмента у контрольных эмбрионов. Средний ряд — эмбриона Rp-mlpt показывают два сросшихся сегмента (L1 и L2) и третью ногу (L3), которая не экспрессирует ANTP. Крайний правый эмбрион показывает четыре ноги с вероятной дупликацией L3, так как две самые задние ноги не экспрессируют ANTP. (C) экспрессия pb в контрольных эмбрионах и эмбрионах РНКи. У контрольных эмбрионов на стадии 6 pb экспрессируется в третьем гнатальном сегменте, соответствующем предполагаемой губе. После mlpt RNAi pb либо не затронуты (правая сторона), либо имеют неправильную форму (левая сторона). Дупликации или отсутствие окрашивания не наблюдались после мл РНКи. Эмбрионы Kr RNAi демонстрируют паттерны дупликации, эмбрионы gt RNAi демонстрируют меньшую группу экспрессирующих клеток и отсутствие передних гнатальных сегментов. svb RNAi демонстрирует четкие отклонения сегментации от паттерна дикого типа, но не показывает изменений в окрашивании pb . (D) Экспрессия Ubx в контрольных эмбрионах и эмбрионах РНКи. Экспрессия Ubx сильнее на первом сегменте брюшка и в концентрических кольцах третьей ноги. После mlpt RNAi Ubx все еще сильно экспрессируется в первом сегменте брюшка, а не в концентрических кольцах третьей ноги. Кр эмбриона РНК-интерференции демонстрируют диффузное окрашивание в брюшной области. В сильном фенотипе эмбрионов gt RNAi отсутствует брюшная экспрессия Ubx , в то время как этот маркер экспрессируется в двух последовательных парах ног, указывая на дупликацию третьей ноги (L3). Эмбрионы Hb RNAi демонстрируют экспрессию Ubx в передних (гнатальных) сегментах. В ногах не наблюдалось окрашивания Ubx . У сильного эмбриона svb RNAi отсутствует задняя брюшная часть, но наблюдается экспрессия убкс .
Сравнение нокдаун-фенотипов
mlpt и других генов развития

Предыдущий функциональный анализ mlpt у T. castaneum и D. melanogaster показал, что этот ген необходим для раннего формирования паттерна у жуков, но не у плодовых мушек. У жуков mlpt действует как гэп-ген, тогда как у плодовых мушек его роль ограничивается более поздними (постсегментарными) эмбриональными стадиями (Savard et al. , 2006; Galindo et al., 2007; Kondo et al., 2007). , 2010 г. Рэй и др., 2019 г.). Недавний анализ функции mlpt у двух других видов полужесткокрылых и у осы показал потребность в ранних процессах формирования паттерна, предполагая, что это наследственная функция гена (Ray et al., 2019). Из нашего фенотипического анализа остается открытым вопрос о том, приводит ли нокдаун Rp-mlpt к аналогичным морфологическим изменениям, что и нокдаун классических генов gap, факторов транскрипции Круппеля (Kr), гигантского ( gt ) и горбатого. ( Hb) . Мы выполнили родительскую РНК-интерференцию против ортологов этих трех гэп-генов и проанализировали экспрессию Hox-генов. Krüppel (Kr) и гигантский ( gt ) РНКи фенотипы были опубликованы в другом месте (Lavore et al., 2012, 2014). Экспрессия гена Hox proboscipedia ( pb ) в третьем гнатальном сегменте сравнима у контрольных эмбрионов и эмбрионов mlpt RNAi, хотя задняя область при нокдауне была явно затронута (фиг. 7C). Напротив, 9Экспрессия 7952 pb дублируется после Rp-kr RNAi, значительно снижается после Rp-gt RNAi и незначительно влияет на Rp-Hb RNAi (фиг. 7C).

Экспрессию гена Hox Ultrabithorax ( Ubx) также оценивали в контроле и в нокдаунах mlpt и других гэп-генов. У контрольных эмбрионов R. prolixus Ubx сильно экспрессируется в первом сегменте брюшка и в концентрических кольцах вокруг третьей ноги (L3) (рис. 7С). Как уже было сказано, эффект mlpt РНКи могут генерировать по крайней мере три класса эмбриональных фенотипов. Анализ эмбриона с четырьмя парами ног (фенотип класса 2) показал, что только самая задняя нога экспрессирует Ubx , указывая на то, что эта нога соответствует L3 и что должна иметь место дупликация L1 или L2. Интересно, что экспрессия Ubx в L3 происходит не в виде концентрического кольца, как в контроле, а скорее на одной стороне ног, что позволяет предположить, что формирование паттерна ног также было затронуто (рис. 7С). Кроме того, небольшое расширение Ubx в направлении задних сегментов наблюдали у mlpt эмбрионов RNAi (рис. 7C). Экспрессию Ubx также анализировали при нокдауне других гэп-генов, таких как Kr, gt и hunchback ( Hb) pRNAi. Эмбрионы Kr RNAi показывают только две пары ног и отсутствие окрашивания Ubx в ногах, что позволяет предположить, что третья нога (L3) отсутствует. Кроме того, большая экспансия экспрессии Ubx в сторону задней области у 9Наблюдали 7952 эмбриона Kr RNAi. Эмбрионы Rp-gt RNAi лишены гнатального и брюшного сегментов и обнаруживают дупликацию L3. Эмбрионы Rp-Hb RNAi обнаруживают большую экспансию задних судеб в сторону передней области, что также указывает на главную роль этого гена gap в R. prolixus (Fig. 7D). В целом эти результаты свидетельствуют о том, что роль сегментации Rp-mlpt у R. prolixus довольно ограничена и в основном сосредоточена на переходе между грудным и брюшным отделами и что классические гены разрыва, такие как kr, gt, hb , проявляют более широкую роль в сегментарном каскаде полужесткокрылых R. prolixus (рис. 7). Дальнейшее подтверждение гипотезы о том, что функция mlpt в основном необходима для различения грудного и брюшного отделов, обеспечивается иммуногистохимическим анализом с использованием моноклонального антитела против гомеобоксного транскрипционного фактора ANTP. ANTP разграничивает грудные сегменты (T1-T3) и ноги один и два (L1 и L2) в контроле (рис. 7B). Как и в контроле, ANTP экспрессируется только в L1 и L2 в mlpt эмбрионов дцРНК с четырьмя ногами (L1-L4), что позволяет предположить, что L4 у этих эмбрионов может быть дупликацией L3 (Ray et al., 2019).

Наконец, был проведен морфологический анализ нокдауна партнера по взаимодействию mlpt , фактора транскрипции svb (Kondo et al., 2010; Ray et al., 2019). Как недавно продемонстрировали Ray et al. (2019) у двух видов полужесткокрылых, mlpt и svb , фенотипы RNAi выглядят удивительно сходными. Как наблюдается для mlpt RNAi, svb RNAi не показали каких-либо изменений в характере экспрессии pb или Ubx , хотя удлинение зародышевой полосы и различие между грудной и брюшной сегментацией были явно затронуты (рис. 7C).

Обсуждение

Анализ последовательности нуклеотидов и пептидов дает представление об эволюции функции гена

mlpt Couso, 2015; Zanet et al., 2015; Pueyo et al., 2016a). mlpt — наиболее широко изученный полицистронный ген, кодирующий smORF у насекомых. Предыдущие исследования и наш собственный анализ последовательности, представленный здесь, показали, что mlpt не присутствует в геномах хелицеровых и многоножек, будучи ограниченным Pancrustacea.

Предыдущие анализы выявили специфические роли коротких пептидов mlpt , содержащих мотивы LDPTG(L/Q/T)Y, у насекомых D. melanogaster , в то время как функция второго слабоконсервативного предсказанного пептида (ORF-B в Galindo et al., 2007), остается открытым, поскольку не переведен на 9Клеточная культура 7952 D. melanogaster функционально не требуется в экспериментах по спасению (Galindo et al., 2007; Kondo et al., 2007). Механически небольшие пептиды из mlpt , содержащие мотивы LDPTG(L/Q/T)Y, необходимы для селективного опосредованного протеасомами N-концевого процессинга и активации транскрипционного фактора svb (Kondo et al. , 2010; Zanet et al., 2010; Zanet et al. др., 2015). Идентифицированный здесь новый специфичный для полужесткокрылых пептид (smHemiptera) примерно на 35% длиннее у R. prolixus 979.53, чем у наиболее базально ветвящихся проанализированных видов, Pseudococcus longispinus (рис. 1А, С). Недавно было высказано предположение, что smORF могут эволюционировать в основные ORF посредством паттерна «удлинения» (Couso and Patraquim, 2017). Хотя smHemiptera не является основной ORF, распределение размеров пептида smHemiptera в филогении полужесткокрылых подтверждает эту гипотезу. Будущие исследования должны рассмотреть функцию smHemiptera. Маловероятно, что предсказанный пептид smORF с участком из 14 аминокислот со 100% идентичностью в течение 240 миллионов лет будет нефункциональным. Следует учитывать, что применяемая в нашем исследовании методика pRNAi приводит к нокдауну зрелого транскрипта и, предположительно, всех предсказанных пептидов, кодируемых полукрылыми млпт ген. Технология редактирования Cas9/CRISPR была установлена у других немодельных видов членистоногих (Gilles et al. , 2015), и ее внедрение в R. prolixus может помочь раскрыть специфическую функцию каждого небольшого пептида, присутствующего в Rp-mlpt . транскрипция на разных стадиях развития. Недавние исследования показали, что mlpt необходимы для активации Svb во взрослых тканях, особенно в почечных и кишечных стволовых клетках D. melanogaster (Al Hayek et al., 2019).). Поскольку mlpt также экспрессируется в желудочно-кишечном тракте R. prolixus (Ribeiro et al., 2014 и наши собственные наблюдения), также будет интересно рассмотреть функциональную роль этого гена, содержащего smORF, в др. контекстах развития.

Насколько нам известно, это первое исследование, в котором представлена теоретическая модель взаимодействия комплексов Svb-Mlpt для D. melanogaster (Dmel) и R. prolixus (Rprol). Наши прогнозы смогли зафиксировать ранее опубликованные данные для D. melanogaster (Zanet et al., 2015), даже при отсутствии экспериментально подтвержденных трехмерных структур из D. melanogaster Svb. Вторичная структура и укладка как для Svb, так и для Mlpts, а также сайты связывания белка на N-конце Svbs были смоделированы и согласуются с (Zanet et al., 2015). Оба Svbs (Dmel и Rprol) демонстрируют около 80–90% консервативных неупорядоченных областей, но было предсказано, что двойной домен цинкового пальца возле C-конца будет более упорядоченным (дополнительная фигура 1C). Результаты анализов стыковки и изменения аффинности связывания при мутации ключевых остатков на границе взаимодействия предлагают интересную возможность предложить теоретическую модель взаимодействия для Svb-Mlpt обоих видов (дополнительные рисунки 3, 4). Лейцины (L24, L25 и L19) и глутаминовая кислота (Е20) в N-концевой области Dmel-Svb влияет на его взаимодействие с Dmel-Mlpt1, аминокислотами, ранее идентифицированными в области взаимодействия между Dmel-Svb и Dmel_Mlpt1 (Zanet et al., 2015). Кроме того, наши результаты предполагают, что оба организма используют по крайней мере половину остатков мотива LDPTG(L/Q/T)Y для закрепления на N-концевой области Shavenbaby. Все эти данные in silico могут быть полезны для будущих подходов ЯМР для проверки этих структурных предсказаний и для проверки эффектов мутаций в пептидах smORF с использованием Cas9./Технология CRISPR.

Сохранение экспрессии

mlpt среди насекомых
Анализ гибридизации in situ гена Rp-mlpt во время эмбрионального развития показывает сложную модель пространственной экспрессии, аналогичную ранее описанным моделям экспрессии у жуков, плодовых мушек и других голометаболических насекомых (Savard et al., 2006; Galindo et al., 2007; Cao et al., 2018; Jimenez-Guri et al., 2018; Zhu et al., 2018; Ray et al., 2019). Большинство различий в экспрессии наблюдается на ранних стадиях развития. В D. melanogaster , экспрессия происходит в семи бластодермальных полосках, по парному правилу, в то время как у большинства других видов насекомых, включая базально ветвящихся двукрылых мошек Clogmia albipunctata , экспрессия проявляется в виде домена разрыва (Jiménez-Guri et др. , 2018). Так, как наблюдалось для T. castaneum (Savard et al., 2006) и совсем недавно у полужесткокрылых O. fasciatus и G. buenoi (Ray et al., 2019), Rp-mlpt является сначала экспрессируется в переднем домене, перекрывающемся с головой, и вскоре после экспрессии в заднем домене, перекрывающемся с проспективными грудными сегментами (рис. 3). Позже, во время удлинения зародышевой полосы и закрытия спины, динамическая экспрессия Rp-mlpt наблюдается в нескольких тканях, включая кончики ног, голову и антенну (рис. 3). В то время как выражение в голове и в ногах было зарегистрировано у других видов (Ray et al., 2019), выражение в антеннах на более поздних стадиях, насколько нам известно, было сообщено только здесь и недавно у другого вида полужесткокрылых. O. fasciatus (Ray et al., 2019).
Сравнение экспрессии Rp-mlpt с помощью ОТ-ПЦР между оплодотворенными и неоплодотворенными яйцами в течение первых часов развития (0–6 ч AEL) и 36–48 AEL показывает в 10 раз более высокую экспрессию на более поздних стадиях по сравнению с свежеотложенные или неоплодотворенные яйца (0–6 ч AEL) (дополнительный рисунок 6). Хотя время развития процесса материнско-зиготического перехода в R. prolixus неизвестен, эти результаты предполагают, что большие изменения в уровнях транскрипции mlpt происходят зиготически, на более поздних стадиях (36–48 ч AEL). Возможно, что транслированные пептиды Mlpt могут посттранскрипционно переключать Svb с репрессора на активатор через 36–48 ч AEL, как сообщалось ранее для D. melanogaster (Kondo et al., 2010; Zanet et al., 2015). ).
mlpt Функционирует не как классический гэп-ген в R. prolixus , но скорее участвует в торакальной и брюшной сегментарной идентичности
Три фенотипических класса наблюдались у mlpt нокдаунных эмбрионов, главным образом влияющих на формирование сегментов (рис. 4, 5). Сравнение морфологических дефектов mlpt эмбрионов с нокдауном с дефектами нокдаунов гена пробела фактора транскрипции, таких как Kr, Hb и Gt (рис. 7), показало четкие различия (рис. 7). Эмбрионы с нокдауном mlpt обнаруживают локализованные фенотипические изменения в основном на переходе между грудным и брюшным сегментами, в то время как нокдаун вышеупомянутых факторов транскрипции показывает более значительные эффекты и изменения в экспрессии молекулярных маркеров (Рис. 7). Наши результаты можно согласовать с несколькими недавно опубликованными исследованиями о mlpt в других отрядах насекомых (рис. 8A,B). У T. castaneum mlpt нокдаун приводит к обширным гомеозисным трансформациям, и эмбрионы обнаруживают до шести пар ног (Savard et al., 2006). Недавние данные по двум другим полужесткокрылым показали, что нокдаун трех генов mlpt, Ubr3 и svb демонстрирует сходные фенотипические эффекты, которые мы описываем здесь для R. prolixus , такие как усечение сзади со слиянием/потерей грудных сегментов, укороченные ноги и придатки головы (Ray et al., 2019). В то время как у R. prolixus наблюдались mlpt RNAi эмбрионов с четырьмя парами ног, O. fasciatus и G. buenoi нокдаун эмбрионов демонстрируют слияние грудных сегментов, и об увеличении количества грудных сегментов не сообщалось. Поскольку формирование эктопического сегмента после mlpt RNAi происходит с низкой частотой у R. prolixus , возможно, что оно также происходит с низкой частотой при нокдауне O. fasciatus и G. buenoi mlpt . Интересно, что у этих трех видов mlpt в основном требуется, когда происходит удлинение зародышевого диска и сегментация брюшка, и будущие исследования с использованием визуализации эмбрионов в реальном времени, как недавно описано для других видов насекомых (Benton, 2018), могут помочь понять роль mlpt во время удлинения зародышевого диска. и спецификация грудного и брюшного сегментов.
Рисунок 8 . Сравнение функций mlpt у R. prolixus и других видов насекомых. (А,А ′ ) В R. prolixus mlpt требуется для правильной спецификации грудных и брюшных сегментов, формирования рисунка дистальных структур ног и формирования головы у сильно пораженных эмбрионов. (B) Множественные роли mlpt в эволюции насекомых, основанные на выводах Galindo et al. (2007), Пуэйо и Кузо (2011), Чанут-Делаланд и др. (2014), Zanet et al. (2015), Цао и др. (2018), Хименес-Гури и др. (2018), Zhu et al. (2018) и Рэй и соавт. (2019) и текущую рукопись.
Наконец, после Rp-mlpt RNAi наблюдалось несколько дистальных удвоений сегментов ног и пороков развития ног (рис. 6). В то время как некоторые дефекты ног могут быть связаны со слиянием грудного сегмента, по крайней мере, некоторые примеры дистальных удвоений, вероятно, вызваны локальными эффектами Rp-mlpt в ногах. Мы не обнаружили множественных колец экспрессии Rp-mlpt в R. prolixus ; однако такие кольца наблюдались в Periplaneta , а также у других видов полужесткокрылых (Chesebro, 2013). Таким образом, наши данные согласуются с моделью, согласно которой mlpt необходимы на ранних стадиях развития R. prolixus для различия между грудной и брюшной сегментацией, во время удлинения зародышевой полосы и для формирования головы (рис. 8А). Наши данные важны для определения множественных ролей mlpt в эмбриогенезе R. prolixus , особенно во время раннего формирования паттерна. После недавнего анализа двух других видов полужесткокрылых O. fasciatus и G. buenoi продемонстрировали аналогичную роль mlpt и его партнеров по взаимодействию в процессах раннего развития (Ray et al., 2019), можно сделать вывод, что у общего предка Paraneoptera, mlpt уже отображали несколько ролей (рис. 8B). Большая часть этих ролей mlpt была описана у Diptera и Coleoptera, и она остается открытой, если все они сохраняются у гемиметаболических насекомых, а также ее наследственная функция у насекомых (Fig. 8B). Наконец, наши данные способствуют изучению mlpt эволюции, обеспечивая интересное открытие нового консервативного пептида полужесткокрылых, функция которого должна быть изучена будущими функциональными исследованиями.
Материалы и методы
Биоинформатические анализы
Пептидные последовательности Mlpt из D. melanogaster и T. castaneum использовали для поиска BLAST (Altschul et al. , 1997) в сравнении с доступными параметрами геномов членистоногих, чтобы максимизировать релаксированные геномы и транскриптомы. шансы получить гены, кодирующие smORF. Виды, используемые для идентификации smORF, изображены в дополнительной таблице 1. Rp-mlpt/tal/pri было идентифицировано в геноме и транскриптомах R. prolixus (Medeiros et al., 2011; Ribeiro et al., 2014; Mesquita et al., 2015; Marchant et al., 2016). Результаты BLAST и архитектуры доменов были аннотированы вручную.
Структурное моделирование и анализы стыковки Shavenbaby-mlpts
Трехмерные модели Dmel-Svb (1351 а.о.; Uniprot: P51521-1) и Rprol-Svb (834 а.о.; VectorBase: GECK01059228) были предсказаны с помощью ab initio моделирования ab initio программа I-Tasser (Янг и др., 2015). Трехмерные структуры Mlpts (Dmel-pptd1 и 4) были предсказаны с помощью CABS-dock (Kurcinski et al., 2015) и I-Tasser соответственно; Rprol-pptd1 и 2, оба через CABS-док. Глобальное и локальное стереохимическое качество всех предсказанных моделей было выполнено с помощью MolProbity (Chen et al. , 2010), Verify 3D (Eisenberg et al., 19).97), ProSA (Wiederstein and Sippl, 2007), VoroMQA (Olechnovic and Venclovas, 2017), ProQ3D (Uziela et al., 2017), Qprob (Cao and Cheng, 2016), DeepQA (Cao et al., 2016), и SVMQA (Манавалан и Ли, 2017 г.). Наиболее подходящие структурные модели были уточнены с помощью ModRefiner (Xu and Zhang, 2011), 3Drefine (Bhattacharya et al., 2016), GalaxyRefine (Heo et al., 2013) и FG-MD (Zhang et al., 2011). Анализы стыковки белков и пептидов были направлены на N-концевую область Shavenbaby (первые 31 а.о.), что было вдохновлено выводами Zanet et al. (2015). Прогнозы вторичных структур, неупорядоченных областей и сайтов связывания пептидов на Shavenbabys были дополнительно проанализированы с помощью PSIPRED (Джонс, 19 лет).99), Porter (Mirabello and Pollastri, 2013), SPOT-Disorder (Hanson et al., 2017) и DISOPRED3 (Jones and Cozzetto, 2015) соответственно. Докинги выполнены HADDOCK (van Zundert et al., 2016). Лучшие комплексы взаимодействия были отобраны после исчерпывающего анализа с помощью программ DockScore (Malhotra et al. , 2015), PPCheck (Sukhwal, Sowdhamini, 2015) и CCharPPI (Moal et al., 2015). После выбора лучшего комплекса дальнейшие уточнения проводились с помощью GalaxyRefineComplex (Heo et al., 2016). Уточнения были выполнены с использованием « 9Функция 7952 «Минимизация энергии боковых цепей » на веб-сервере PDB_Hydro (Azuara et al., 2006). Прогноз свободной энергии связывания (ΔG) с использованием метода MM/GBSA был выполнен HawkDock (Weng et al., 2019), прогноз константы диссоциации ( K _d) был выполнен PRODIGY (Xue et al., 2016). ), а анализ аминокислот в горячих точках, расположенных на границе взаимодействия, был выполнен с помощью HotRegion (Cukuroglu et al., 2012) и ANCHOR (Meireles et al., 2010) соответственно. Расчеты изменения энергии связывания белок-белкового комплекса при мутациях в остатках на границе взаимодействия выполнены с помощью BindProfX (Xiong et al., 2017). Электростатические расчеты проводились с помощью PDB2PQR и APBS (Долинский и др., 2004; Унни и др. , 2011). Межатомные контакты и типы взаимодействий, поддерживаемые на интерфейсах Svbs-MLTP, были проанализированы с помощью PDBsum (Laskowski et al., 2018). Изображения комплексов Svbs-MLTPs были получены с помощью UCSF Chimera 1.13.1 (Pettersen et al., 2004).
Выращивание, фиксация и рассечение насекомых
Выращивание насекомых проводили, как описано Souza-Ferreira et al. (2014). Примерно через 1 неделю после кормления кровью ежедневно собирали яйца и фиксировали их на разных стадиях развития. Для фиксации до 100 яиц кратковременно промывали дистиллированной водой для удаления дебриса, а затем переносили в микропробирку объемом 1,5 мл, содержащую 1 мл дистиллированной воды. Данную микропробирку выдерживали 90 с в кипящей воде, после чего воду заменяли 1 мл 12% параформальдегида (PBS) и фиксировали 1 ч (6–8°С). Затем эмбрионы инкубировали с 1 мл параформальдегида 4%, содержащего 0,1% Tween 20, при перемешивании (200 об/мин) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем яйца повторно промывали PBST (PBS 1X, Tween 20 0,1%). Для длительного хранения эмбрионы постепенно переносили в 100%-ный этанол и затем хранили при температуре -20°С. Для рассечения использовали два щипца (Dumont № 5). Яйцо удерживается с помощью одного из них, а другой используется для оказания давления на ободок хориона для удаления крышки. Хорионический ободок удерживается, а оболочка вскрывается поперечно, что приводит к освобождению эмбриона. На более поздних стадиях, когда сегментация завершена, по крайней мере на стадии 6, желток легко удаляется либо с помощью тонкого пинцета, либо стеклянной иглы, не повреждая зародыш.
In situ Гибридизация, окрашивание ядер и антител
Эмбрионы, хранившиеся в 100% этаноле при -20°C, постепенно переносили в PBST при комнатной температуре. Гибридизацию in situ и синтез зонда проводили, как описано в (Sachs et al., 2015), включая обработку протеиназой К. Окрашивание DAPI (4′,6-диамидин-2′-фенилиндола дигидрохлорид, SIGMA) проводили, как в Berni et al. (2014). Окрашивание антителами проводили по протоколу, описанному Santos et al. (2013). Все изображения были получены с помощью стереоскопа Leica M205, обработаны и проанализированы с помощью программного обеспечения Leica Application Suite Advanced Fluorescence Version 0.4 (LAS AF v4 — Leica Microsystems). Изображения были собраны и 9Гибридизационное окрашивание 7952 in situ (NBT/BCIP) преобразовывали в ложную флуоресценцию, как описано Benton et al. (2016).
РНК-интерференция и ПЦР в реальном времени

РНК-интерференция (РНКи) выполнялась аналогично Berni et al. (2014), используя неродственную дцРНК в качестве контроля (неомицин дцРНК-дцнео). Для Rp-mlpt два неперекрывающихся ПЦР-фрагмента, содержащих сайты инициации промотора Т7 на обоих концах, использовали в качестве матриц для синтеза дцРНК с использованием набора Ambion T7 Megascript (кат. № AM1334). Количество и целостность образцов дцРНК измеряли с помощью спектрофотометрии и электрофореза в агарозном геле соответственно. Для каждого молчащего гена вводили от 6 до 12 мкг дцРНК. Количественную оценку эффективности РНКи и сравнение экспрессии генов после молчания измеряли с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР), как это было выполнено Berni et al. (2014), используя ген фактора элонгации-1 (Ef1) в качестве эндогенного эталонного гена. Банк генов или инвентарные номера базы векторов генов, проанализированных 9Гибридизация 7952 in situ или ОТ-ПЦР представлены в дополнительной таблице 4. Для анализа ОТ-ПЦР РНК экстрагировали в биологических тройных повторах из яиц в соответствующие часы после откладки яиц (AEL). Для анализа использовали оплодотворенные яйца (0–6 и 36–48 ч AEL) и неоплодотворенные яйца, полученные от самок-девственниц (0–6 ч AEL).

Заявление о доступности данных

Наборы данных, созданные для этого исследования, можно найти в NCBI.

Вклад авторов

VT-S, DG-A, FM, LR, MB, HA, CL, NF, JS-M, EP и RN: генерация и интерпретация экспериментальных данных. HA, CL и RN: привлечение финансирования. ВТ-С и РН: черновик рукописи.

Финансирование

RN было поддержано CNPq (307952/2017-7 и 431354/2016-2) и FAPERJ (E-26/210-150/2016 и E-26/203.298/2016). VT-S и DG-A были магистрантами PPG-PRODBIO-Macaé (стипендии CAPES), MB и доктором философии. студент PPG-PCM-ICB-UFRJ, а LR был постдоком со стипендией CAPES Национального института молекулярной энтомологии / CNPq (INCT-EM).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Роланда Зимма за полезные предложения в рукописи.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fevo.2019.00379/full#supplementary-material

Ссылки

Al Hayek, S ., Alsawadi, A., Kambris, Z., Boquete, J.-P., Bohère, J., Ronsin, B. , et al. (2019). Изоформы белка Shavenbaby управляют самообновлением по сравнению с дифференцировкой стволовых клеток кишечника дрозофилы. биоРксив . doi: 10.1101/627554

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Altschul, S. F., Madden, T. L., Schäffer, A. A., Zhang, J., Zhang, Z., Miller, W., et al. (1997). Gapped BLAST и PSI-BLAST: новое поколение программ поиска белковых баз данных. Рез. нуклеиновых кислот. 25, 3389–3402. doi: 10.1093/nar/25.17.3389