Имплантация этапы: Этапы и сроки проведения имплантации зубов.

Этапы и сроки проведения имплантации зубов.

Имплант по праву считается «золотым стандартом» для возвращения потерянного зуба на место. Процедура становится все более популярной. Статей и роликов тысячи. Казалось бы, информации достаточно. Однако, по нашим данным, почти у половины пациентов сформировалось искаженное представление о том, какие существуют этапы процедуры, каковы сроки, на что стоит обратить особое внимание.

Мы готовы предоставить объективную информацию — чтобы, с одной стороны, пациенты не ожидали невозможного, а с другой —  не отказывались от красивой улыбки из-за кажущихся сложностей.

Как устанавливают импланты зубов: этапы большого пути

Скорее всего, вы уже были не на одном сайте и читали об этапах имплантации. Вы знаете о необходимости обследования, профессиональной чистки, лечения пораженных кариесом зубов. А еще сама операция, ожидание, пока конструкция приживется, и только потом — коронки и долгожданная безупречная улыбка.

Либо, если условия позволяют, одноэтапная установка импланта зуба, через три дня — временная коронка и немедленная нагрузка.

Каждый пациент — уникален. Различны исходное состояние полости рта, качество костной ткани, скорость регенерации и обменных процессов, уровень иммунитета, сопутствующие заболевания. Отличаются и объемы вмешательства — кому-то необходимо наращивание кости, и процесс имплантации зуба растягивается на полтора года, а кому-то можно все сделать одним этапом за пару визитов, через три месяца все  приживается.

Этапы имплантации: кратко и по делу

Чтобы «разложить все по полочкам», мы подготовили краткую таблицу по различным этапам имплантации: что и когда делают, как долго длится процесс, на какое количество посещений в среднем стоит ориентироваться.

Процедура	Что делают	Сколько длится	Сколько нужно посещений
Диагностический этап 1 день	Выполняют опрос, осмотр, панорамный снимок, ставят диагноз. При необходимости — назначают дополнительное обследование, Составляют план лечения, выбирают производителя и систему.	30-40 минут	1
Подготовительный  этап 2-7 дней	Проводят обследование — компьютерную томографию, анализы, исключают противопоказания, при необходимости — консультируют у смежных специалистов.	В зависимости от состояния	В зависимости от состояния
	Разрабатывают хирургические шаблоны, выполняют моделирование.	2-3 дня	—
	Делают профессиональную чистку.	30-40 минут	1
	Санируют полость рта, при необходимости — лечат заболевания десен и слизистой оболочки.	В зависимости от состояния и объема работ	В зависимости от состояния и объема работ
Хирургический этап: подготовка кости, заживление, имплантация зуба остеоинтеграция, формирование десны, установка абатмента. Сроки — 3-18 месяцев	Выполняют наращивание костной ткани при ее недостатке и близком расположении гайморовой пазухи. В случае закрытого синус-лифтинга и наличии условий имплант ставят сразу. При открытом способе — спустя несколько месяцев.	15-40 минут	1
	Выполняют операцию — отслойку десны, небольшой разрез, формируют ложе для искусственного корня, устанавливают его, накладывают швы. При малоинвазивной методике делают только прокол десны. При одномоментной — располагают имплант в лунке только что удаленного зуба.	10-20 минут на один имплант	1
	Устанавливают формирователь десны для ровного контура.	10-15 минут	1
	Снимают заглушки и устанавливают абатмент.	До 30 минут	1
Ортопедический этап: слепки, изготовление коронок, их фиксация. Сроки — 1-2 недели	Снимают оттиски для изготовления коронок, Создают сами коронки из металлокерамики, керамики или циркония, Фиксируют коронки на абатменты.	10-15 минут 1 неделя 30-40 минут

Основные этапы имплантации зубов | Семейный доктор

На сегодняшний день, при отсутствии одного или нескольких зубов наиболее простым и несложным способом восстановления утраченных зубов является имплантация.

Имплантация состоит из нескольких этапов: 

Первый – это грамотная полноценная диагностика с помощью компьютерной томографии.
Второй – это собственно установка зубного импланта стоматологом-хирургом.
Третий – это изготовление коронки на имплант.

После установки импланта, прежде чем изготавливать постоянную коронку, возможны два варианта: либо это перерыв, прежде чем изготовить коронку на время приживления импланта, либо, если имплант располагается в эстетически значимой зоне лица, изготовление временной коронки сразу.

Первым этапом обязательно является тщательная полноценная диагностика.
Для этого в клинике «Семейный доктор» есть компьютерный томограф, который позволяет увидеть все анатомические образования, нервы, сосуды, гайморовы пазухи, любые образования, которые нам нужны, чтобы правильно установить имплант.

Вторым этапом является собственно хирургическая процедура установки импланта.
Данная процедура абсолютно безболезненна. Она даже менее инвазивна, чем удаление зуба.
Хирург устанавливает имплант в течение часового приёма.
Если требуется одновременно удаление зуба и установка импланта, то это можно сделать также за один приём, а если имплант располагается в эстетически значимой зоне, то коронка может быть изготовлена на имплант в тот же день.

Третьим этапом является изготовление ортопедической коронки, которая должна соответствовать всем требованиям окклюзии, то есть обязательно соответствовать функции жевания, коронки должны полностью быть с буграми, фисурами и т.д., если этого не будет, то это может в долгосрочной перспективе привести к потере импланта или поломке самой коронки.

По сути, чисто технически, импланты обычно гораздо меньше, чем размеры корней зубов.
Корни зубов бывают неправильной формы, и удаление зубов бывает гораздо более сложным, чем установка имплантов. При современных методах анестезии и фармацевтики, установка импланта гораздо проще и менее проблематичная процедура, чем удаление зуба. Поэтому не стоит этой процедуры бояться.

Лосев Сергей Александрович — врач стоматолог-ортопед, ведет прием в корпусе клиники на Усачева.  

Особенности, виды и этапы классической имплантации зубов в нашей клинике

Восстановление зубного ряда может выполняться по классической или экспресс методике. В первом случае имплантация происходит в четыре этапа, во втором – за один визит.
  
Классическое протезирование более надежно, долговечно и позволяет установить стержни даже при недостаточности костной ткани. Экспресс-имплантация происходит непосредственно в день удаления. Она менее травматчина для слизистой, но требует хорошего состояния полости рта.

Как происходит классическая имплантация зубов

Полное восстановление зубного ряда по классической методике занимает от 4 до 7 месяцев. Весь процесс имплантации можно условно разделить на несколько этапов:

1. осмотр, диагностика и подготовка полости рта;
2. установка имплантата;
3. установка формирователя десны;
4. протезирование (абатмент и коронка).

Осмотр, диагностика и подготовка полости рта к имплантация

На этом этапе врач тщательно осматривает ротовую полость, выявляет анатомические особенности челюсти, проводит рентгенографию, КТ, оценивает общее состояние здоровья и качество костной ткани пациента. Кроме того, в процессе первичного обследования стоматолог-хирург:

• изучает соотношение между альвеолярными гребнями и зубами;
• анализирует прикус;
• проверяет зубной ряд на патологическую подвижность;

• отмечает наиболее подходящую под имплантацию область;
• подбирает форму и размер имплантата.

 На основе собранной информации врач дает рекомендации по подготовке и проведению процедуры имплантации, определяет сколько будет длиться процедура зубов и нужно ли время на дополнительное лечение сопутствующих проблем со здоровьем, при которых установка имплантата невозможна.
Перед хирургическим вмешательством обязательно проводится санация — устраняется кариес, лечатся заболевания слизистой и десен. На момент имплантации в ротовой полости не должно быть никаких воспалительных процессов.

Процедура санации включает в себя:

• диагностику таких заболеваний, как: гингивит, пульпит, периодонтит, кариес;
• комплексное лечение полости рта, включая удаление зубов, если терапия невозможна;
• профессиональная гигиена полости рта.

Важно! Установку имплантата нельзя проводить в период обострения хронических заболеваний, при инфекционных недомоганиях, в период беременности и при ослабленном иммунитете. В таком состоянии вероятность отторжения стержня организмом многократно повышается.

Установка имплантата

Это непосредственно хирургическая стадия, на которой подготавливается лунка в костной ткани и устанавливается сам имплантат с заглушками, накладываются швы, которые снимают на 7-14 день. Процедура проводится под местной анестезией и абсолютно безболезненна для пациента. Длительность такой операции около 40-50 минут.

Формирование костного ложа
Создание посадочной лунки для имплантата проводится с помощью специальных фрез. Глубина и диаметр костного ложа формируются исходя из размеров, подобранных на подготовительном этапе штифтов. Перед сверлением специалист обнажает костную ткань, делая надрез слизистой.

Установка имплантата и заглушки
В сформированную лунку вкручивается титановый стержень (имплантат). Заглушка устанавливается поверх него. Она предотвращает проникновение в конструкцию патогенной микрофлоры. Затем на место надреза слизистой накладывается плотный шов, который полностью закрывай имплантат. Сам процесс установки занимает не более 15-20 минут.

Важно. Для приживления имплантата в нижней челюсти нужно в среднем 2-3 месяца, в верхнем зубном ряду процесс может затягиваться до полугода. Как правило, после имплантации зуба десна болит около 5-6 дней – это нормально. Если по пришествию этого времени болевой синдром не проходит, а только усиливается, не нужно терпеть — обратитесь к врачу.

Дополнительные хирургические манипуляции
Перед имплантацией некоторым пациентам требуются дополнительные хирургические манипуляции:

• наращивание, восстановление структуры костной ткани;
• расширение поверхности десны.

Наращивание и восстановление костной ткани необходимо, если она атрофировалась, истончилась, потеряла структуру из-за отсутствия нагрузки. Такая ситуация, как правило, возникает, если зуб у пациента отсутствует давно. Однако проблема может быть и врожденной. В любом случае она требует решения, ведь такое основание не удержит ни один протез. Для того чтобы восстановить плотность и структуру испорченного «цемента», врач проводит костную пластику.
Вторая по распространенности проблема – это отсутствие достаточного места для имплантата вследствие смещения зубов. Природа не терпит пустоты, и, если в ротовой полости не хватает зубов, их место постепенно «оккупируется» близлежащими здоровыми зубами. Сталкиваясь с такой проблемой, проводится ортодонтическое лечение.

Установка формирователя десны

После полного заживления слизистой и интеграции имплантата с костной тканью на протез устанавливается специальный формирователь десны. Он слега возвышается над ее поверхностью и помогает десне принять нужную анатомическую форму. На этом этапе при желании пациента возможно установить первый временный протез.

Этапы процедуры по установке формирователя десны:
• место операции обезболивается;
• десна надрезается, оголяя верхнюю часть имплантата;
• вытаскиваются заглушки;
• на их место вставляются формирователи слизистой.

Пациент отправляется домой. Следующий визит к имплантологу назначается через 7-14 дней после проведения манипуляции. Как правило, этого времени достаточно, чтобы десна полностью зажила и приняла нужную форму.

Установка абатмента и коронки

На последнем этапе формирователи десны заменяются абатментами, поверх которых устанавливаются коронки. На создание индивидуальных протезов уходит в среднем 6-7 дней. Если дело касается фронтальных зубов, то, как правило, до изготовления постоянных протезов пациент носит временные коронки. Такая мера помогает решить волнительный для многих эстетический вопрос.

После имплантации – рекомендации стоматолога
Сразу же после имплантации зубов нельзя есть и курить. Первый перекус возможен не раньше, чем через 2 часа после операции. От табакокурения желательно отказаться хотя бы на сутки. Также, обязательным является придерживаться всех рекомендаций лечащего врача.

Ограничения после хирургической имплантации:

• в первые 2-3 дня есть только мягкую, негорячую и протертую пищу;
• обязательно полоскать рот выписанным врачом раствором;
• не принимать горячую ванну, не париться в бане и сауне в течение 14 дней;
• в первые 2 суток при чистке рта избегать касания области имплантации;
• в последующем можно чистить всю ротовую полость, но осторожно, чтобы не повредить швы;
• не заниматься активным спортом — 2 недели;
Если через 7 дней после операции боли в десне не проходят, и слизистая начинает опухать, обязательно обратитесь к врачу. Обратиться к врачу следует и в ситуации, если у вас поднялась высокая температура или имплантат прорезался через слизистую десны.

Памятка – уход за зубами после окончательного протезирования
Все пациенты, прошедшие классическую имплантацию, после приживления имплантата и установки постоянной коронки должны помнить, что искусственные зубы требуют не меньшего ухода, чем настоящие. Их нельзя перегружать – грызть орехи, косточки и иные твердые предметы. При появлении даже небольшой подвижности имплантатов следует незамедлительно обратиться к врачу. Имплантатам так же, как и «живым» зубам, необходима ежедневная гигиена, чистка и полоскание после еды.
Кроме того, в уходе желательно использовать зубную нить и специальную щетку с ершиками.
Помните, что срок службы прижившихся имплантатов зависит во многом от вас. При правильной эксплуатации протезы выполняют свою функцию и сохраняют прекрасный внешний вид и после 25-30 лет использования.

Как проходит экспресс-имплантация

Экспресс-имплантация проводится сразу же после удаления зуба. Такое протезирование малотравматично, не требует разрезания десны и последующего наложения швов.

Этапы:

1. консультация с врачом, обследование, подготовка ротовой полости;
2. удаление зуба;
3. подготовка лунки к имплантации, сверление костной ткани;
4. установка имплантата в открытую лунку;
5. установка абатмента и временной коронки, если это необходимо;
6. постоянное протезирование.

Первые пять этапов экспресс протезирования проводятся в первый день посещения за один сеанс. Постоянную коронку устанавливают в течение 2-4 месяцев после вживления стержня.

Условия проведения одномоментной имплантации

Проведение экспресс-имплантации возможно только при хорошем состоянии костной ткани и при отсутствии очагов воспаления в полости рта: заболеваний десен, слизистой, кариеса.

Этапы имплантации зубов

Этапы имплантации зубов условно можно разделить на шесть основных этапов. Далее рассмотрим их более подробно.

Первый этап — консультация

На консультации по имплантации стоматолог-имплантолог изучает состояние полости рта и костной ткани пациента по результатом сделанной ортопантомограммы и 3Д компьютерной томографии. Проводится подробный опрос пациента о состоянии здоровья и перенесенных ранее заболеваниях. На основании этого определяется наличие показаний и противопоказаний к имплантации. Далее составляется план лечения и если требуется назначаются дополнительные подготовительные процедуры.

Второй этап — подготовка к имплантации зубов

На этом этапе проводятся мероприятия необходимые для санации полости рта — профессиональная гигиена и терапевтическое лечение зубов. Санированная полость рта гарантия успешной имплантации. Также на этом этапе происходит сдача всех необходимых анализов. При необходимости пациенту наращивается костная ткань с помощью синус-лифтинга.

Третий этап — операция по установке имплантов

После проведения всех подготовительных мероприятий следует непосредственно сама имплантация — установка титанового имплантата в костную ткань челюсти на место отсутствующего корня зуба. Сверху имплантата устанавливается временная заглушка. Операция проводится под местной анестезией. В качестве обезболивающих препаратов используются современные анестетики самого высокого качества, что делает данную процедуру практически безболезненной.

Четвёртый этап — установка формирователя десны

Через 3-5 месяцев после имплантации (в зависимости от челюсти куда установлен имплант) пациент приходит на приём к хирургу имплантологу, на котором происходит установка формирователя десны. В течение недели вокруг формирователя образуется высокоэстетичный край десны, который делает практически неотличимой установленную на имплант коронку от своих зубов.

Пятый этап — установка абатмента

Абатмент является связующим звеном с помощью которого коронка крепится к импланту. На данном этапе ортопед снимет формирователь, устанавливает абатмент и делает слепок для последующего протезирования.

Шестой этап — установка коронок

Заключительный этап имплантации зубов заключается в установке коронок на имплант, после которого процесс восстановления зубов с помощью имплантации считается оконченым.

В дальнейшем после имплантации зубов рекомендуется посещать стоматолога раз в полгода для профилактического осмотра и, если потребуется, проходить комплекс профилактических мероприятий.

Этапы имплантации зубов — всё о процедуре имплантации – Клиника ЕС

Существует немало клинических ситуаций, при которых полное удаление зуба является единственным решением проблемы. Тогда перед пациентом возникает вопрос, чем заменить удаленную коронку, протезом или имплантатом. Многие люди боятся операций, поэтому готовы страдать от дискомфорта при ношении протеза, лишь бы не идти к хирургу. На самом же деле бояться нечего, в этой статье мы подробно расскажем, как проходит имплантация зубов.

Главное, это следовать всем указаниям специалиста, тогда операция обязательно порадует своим надежным результатом.

Процедура имплантации зубов

1. Изначально каждый пациент должен пройти детальное обследование для обнаружения возможных противопоказаний и, при необходимости, подготовительного лечения. На данном этапе имплантации зубов происходи осмотр специалистом, диагностика посредством рентгеновских снимков или компьютерной томографии.

2. Операция по внедрению имплантата (только опорная часть) в костную ткань. Примерно за час врач подготовит ложе для установки искусственного зубного корня, после чего и имплантат вкручивают в ткань и плотно фиксируют.

3. Спустя 2-4 месяца можно выполнить надрез слизистой, чтобы убрать поменять специальную заглушку имплантата на титановый абатмент.

4. После выполнения 3 этапов имплантации можно сделать слепки зубных рядов. Затем готовую коронку специалист фиксирует на десне.

Разновидности наркоза при операции:

• Местная анестезия. Практически полностью убирает дискомфортные ощущения и боль у пациента,  что значительно облегчает и ускоряет работу хирургу.

• Общий наркоз. Применим в обширных случаях, например, когда нужно установить сразу несколько имплантатов.

• Медикаментозная седация. Активно используется, если у пациента очень большой страх перед операцией.

Разновидности имплантации

Изначально процесс установки имплантатов производился исключительно 1 способом – двухэтапным, который впервые применил профессор Бранемарк в своей практике. Сегодня появилось еще несколько вариантов установки, но многие врачи хирурги активно практикуют данный способ, ссылаясь на высокий уровень надежности и долговечности.

После осмотра специалиста можно однозначно говорить, с какой нагрузкой будет проводиться операция  — с немедленной или отложенной нагрузкой.

Клиника ЕС предлагает несколько типов  имплантации зубов:

1. Одноэтапно. Вся процедура охватывает одновременно фиксацию имплантата через небольшой надрез в десне с последующим надеванием коронки. Считается самым быстрым способом стандартного проведения имплантации без операции.

1. Двухэтапно. Изначально выполняется надрез десны, далее происходит откидывание деснового лоскута, после чего можно готовить ложе для установки имплантата. При проведении процедуры врач видит всю рабочую область, что снижает риск возможных осложнений. Часто применяется при восстановлении объема костной ткани.

2. Одномоментная. Актуальный выбор, если работа ведется с областью передних зубов. Помогает сохранить эстетику и красоту зубной полости.

Сроки имплантации

Очень часто нас спрашивают о длительности процедуры имплантации зубов, на что мы отвечаем, что каждый случай индивидуален и требует отдельного рассмотрения. Хирургический этап занимает 30-60 минут, но, чтобы имплантат держался долго, выдерживая значительные нагрузки, ему нужно пройти период приживления, которая длится примерно полтора года после фиксации.

Обратите внимание, что в 99% случае протез отлично приживается и служит десятки лет. 

Что касается коронок, то уже примерно через 3 месяца можно ставить на верхнюю челюсть и через 5 месяцев на нижнюю. Но бывают случаи, что процесс выполняется в более короткие сроки.

Недостатки зубных имплантатов

Если говорить о всевозможных недостатках данной процедуры, то их практически нет. Единственным выделением можно сделать запрет на проведение процедуры для людей с серьезными заболевания сердечно-сосудистой системы и относительно высокая цена.

Но, учитывая качество полученного результата, длительность срока службы и функциональность, можно понять, что цена полностью себя оправдывает.

Имплантация зубов рекомендации и предосторожности

Когда процедура имплантации завершена, и вы красивые и довольные своим внешним видом вернулись домой, некоторое время придется придерживаться определенных советов и рекомендаций.   После того, как анестезия отойдет, у вас могут возникнуть некоторые болевые ощущения, устранить вы их можете любым обезболивающим лекарством. После самой процедуры лучше же будет немного полежать, чтобы к голове не было прилива крови, но делать это лучше на высокой подушке, как и спать в первую ночь. Первое время не стоит себя перегружать физическими нагрузками и посещением спортзала, сауны, избегайте переохлаждений, а вот непродолжительные прогулки на свежем воздухе пойдут на пользу. Первые недели необходимо отказаться от слишком горячей, острой и твердой пищи, алкоголь, сигареты и кофе тоже временно следует исключить из рациона.

Процесс заживления происходит довольно быстро, если придерживаться рекомендаций доктора и соблюдать вышеуказанные ограничения. В течение первых шести месяцев после имплантации зубов вам периодически необходимо будет проходить осмотр у врача, все это решается индивидуально с каждым клиентом в зависимости от того, как происходила имплантация зубов уход за ними и прочие моменты.

Рекомендуется консультация с врачом

Записаться к нам на прием можно непосредственно на сайте «Клиники ЕС» в специальной вкладке. Вы вписываете свое имя, номер телефона, время, когда вы сможете прибыть к нам, а еще выбираете врача, к которому желаете обратиться.

Также вы можете записаться на прием в телефонном режиме. Мы предлагаем бесплатные звонки по всей территории страны по номеру 8-800-550-02-53, 8 (812) 764-37-72 или 8 (812) 764-84-52.

Также свои вопросы вы можете отправить нам по электронной почте: [email protected].

Запись на прием

Экспресс-имплантация зубов: показания, противопоказания и этапы проведения

Существует такой популярный вид услуг, как экспресс-имплантация зубов. Заключается данный метод в установке импланта на место испорченного или полностью отсутствующего зуба в кратчайшие сроки. В случае экспресс имплантации пациенту достаточно и одного визита к  стоматологу для того, чтобы установить имплант на место удаленного зуба. Такой имплант фиксируется сразу благодаря трансгингивальному методу, когда не приходится разрезать десну.

Трансгингивальная или базальная имплантация – наиболее щадящий способ имплантации, поскольку процедура вживление искусственного корня зуба выполняются всего за один-два визита к хирургу-стоматологу.

Экспресс-имплантация имеет еще несколько названий. Наиболее популярны: одноразовая имплантация зубов, базальная или имплантация с немедленной нагрузкой. Такие синонимы служат описательными названиями данного вида имплантации.

Внешний вид искусственного корня после имплантации

Экспресс-имплантация является не только быстрой методикой по восстановлению зубов, но и переносится пациентами намного легче, поскольку не требует серьезной и долгой реабилитации. Традиционная методика по установке импланта заключается в разрезе десны, наращивании костной ткани, тогда как пациенту приходится долгое время ждать заживания мягких тканей, ограничивая себя в пище. В экспресс-имплантации же используется более деликатный способ установки. Поскольку этот способ не подразумевает разреза десны, данная методика получила название безоперационной. Однако, даже при таком щадящем процессе установки импланта не стоит забывать, что практически любая процедура не может пройти без хирургического вмешательства. А значит, пациент в любом случае почувствует небольшой дискомфорт при установке импланта.

Показания для проведения базальной имплантации

Стоматологи выделяют ряд причин, по которым рекомендуется проводить экспресс-имплантацию:

• в случае, когда зуб травмирован, а большая его часть проникает глубоко в десну
• в случае, если пациент желает максимально быстрого восстановить зубной ряд
• при срочном восстановлении жевательной функции
• если нет возможности дальнейшего лечения зубов или их полного удаления
• при отсутствии зубов

Также стоит отметить преимущества такого метода имплантации:

• минимальный риск отторжения имплантата
• применима даже при ярко выраженой атрофии костных тканей
• cразу после операции пациент уже может нормально пережевывать пищу

Противопоказания для проведения экспресс-имплантации

Существует и объективные причины, по которым проводить подобную процедуру запрещается:

• при наличии остеопороза
• при диагностировании онкологических заболеваний
• при заболеваниях эндокринной системы

Также врачи-стоматологи не рекомендуют проводить процедуру экспресс-имплантации зубов, если у пациента есть кариес, дефекты прикуса, какие-либо воспаления слизистых. При наличии данных симптомов имплант может плохо приживаться в ротовой полости и дать осложнения, которые в дальнейшем приведут к более серьезным последствиям. Поэтому перед проведение имплантации необходимо провести полную санацию полости рта.

Санация полости рта означает целый комплекс процедур, направленных на обеспечение здоровья ротовой полости. Сюда входит: лечение кариеса, пломбирование, удаление налета, зубного камня, устранение воспалительных процессов.

Этапы проведения экспресс-имплантации

В большинстве случаев данная процедура датируется сроком выполнения в один день, иногда, чаще в сложных ситуациях, потребуется до пяти дней. Установка импланта проводится в несколько этапов:

1. Первый этап – подготовительный. Сначала врач-стоматолог убеждается в том, что пациент не имеет никаких противопоказаний к данной процедуре.
2. На втором этапе врач-стоматолог проводит полную санацию полости рта.
3. Третий этап заключается в установке импланта наиболее безболезненным путем. Отсутствие операции предполагает собой прокол десны, куда и ставится сам искуственный корень (имплантат).
4. На четвертом этапе производится установка протеза или специальной коронки, фиксирующей всю конструкцию.

Стоматология LUXAR предлагает следующие виды коронок:

• Коронка на импланте из диоксида циркония
• Цельнолитая коронка или зуб
• Коронка Ducera plus(германия) на импланте(промежуточная часть,консоль)
• Металлокерамическая коронка на имплант на индивидуальном аббатменте
• Временная пластмассовая коронка (зуб) по технологии Protemp

Экспресс-имплантация зубов лидирует среди других методик установки имплантов в передовых странах мира, поскольку является максимально безболезненной и быстрой процедурой, которая не требует длительного периода лечения после установки импланта.

Вам может быть интересно:

Как проходит операция по установке зубного имплатата

В этой статье мы расмотрим основные виды современных операций по имплантации – все из этих методик успешно применяются в стоматологических клиниках Азбука Здоровья (Санкт-Петербург).

1. Двухэтапная имплантация цилиндрических имплантатов

Традиционный и самый надежный на сегодняшний день вид операции. Цель операции – поставить имплантат так, чтобы обеспечить его надежное врастание (остеоинтеграцию) в костную ткань, и правильно соориентировать его относительно будущей зубопротезной конструкции. Операция происходит в 2 этапа:

I Этап

Внедрение имплантата. После точной установки имплантата в костную ткань, он полностью закрывается слизистой оболочкой. Имплантат находится внутри кости и не имеет контакта с полостью рта. Приживление имплантата происходит в течение 2-3 месяцев при имплантации зубов на нижней челюсти и в течение 4-6 – на верхней). Этот этап можно проводить как под местной анестезией, так и под общим наркозом.

II Этап

Микрооперация по раскрытию имплантата (через 2-6 месяцев). В имплантат вкручивается временная головка (формирователь десны). Эта головка видна во рту на месте будущего зуба. С этим шариком пациент ходит 10 дней, пока вокруг не сформируется десна. На этом этапе можно изготовить временные протезы, чтобы восстановить эстетику. Формирователь десны позволяет сформировать десневой край (шейку зуба) для максимально естественной посадки будущей коронки. Спустя 10 дней формирователь выкручивается и на его место специальным динанометрическим ключем устанавливается абатмент – связующее звено между имплантом и металлокерамической коронкой.

Далее следует заключительный этап – протезирование с опорой на имплантах. Протезирование может быть выполнено как классической металлокерамикой (коронка или мост), так и цельнокерамическими конструкциями на основе диоксида циркония или  золотоплатиновом сплаве, которые являются более дорогостоящими, но в некоторых случаях они оправдывают себя (замещение фронтальных зубов, аллергия на металл и т.п.). Протезирование с опорой на импланты занимает около 2х недель.

2. Одноэтапная имплантация (одномоментная имплантация)

При данной методике имплантации имплантаты помещаются в сформированное костное ложе таким образом, что головка импланта находится в полости рта над десной (вокруг головки накладываются швы). Таким образом сразу формируется десневой край, а к протезированию приступают в ближайшие дни после установки имплантов (при отсутствии противопоказаний) или же через 4–6 месяцев.

3. Имплантация с установкой временной коронки

Сразу после вживления имплантата устанавливается временная коронка – все происходит в одно посещение. После этого, через 2-4 месяца можно будет приступить к постоянному протезированию. Такой способ имплантации оправдан на фронтальных зубах, когда эстетическая составляющая находится в абсолютном приоритете.  В результате любые медицинские манипуляции в полости рта останутся незаметны для окружающих.

4. Имплантация сразу после удаления зуба

Методика позволяет на место только что удаленного зуба сразу поставить имплантат. Преимущества этого способа:

• За один прием хирург и удаляет зуб и ставит имплантат – меньше вмешательств в организм.
• Кость сразу получает необходимую нагрузку, и не атрофируется.
• Остеоинтеграция происходит быстрее, т. к. организм минует этап сращения пустой полости и костная ткань лучше приживляет новый искуственный зуб.
• Сроки лечения сокращаются, и к протезированию можно приступить в среднем через 2 месяца.

5. Отсроченная имплантация после удаления зуба

Операцию по внедрению имплантата проводят через 2-4 месяца после удаления зуба.

Мы рассмотрели основные методики современной имплантации зубов. Определить какой способ подходит именно Вам поможет наш специалист на консультации. В процессе подготовки к операции или во время самой операции может возникнуть необходимость в дополнительных хирургических процедурах, таких как синуслифтинг, остеопластика и т.д., суть которых Вам подробнее разъяснит врач-имплантолог на приеме.

Запись к специалисту в любую из наших клиник по телефонам или через форму записи на сайте.

Имплантация — обзор | ScienceDirect Topics

II Вехи имплантации

Имплантация эмбриона млекопитающего обычно зависит от синхронной работы двух биологических часов. Развитие эмбриона начинается в момент оплодотворения; Производство гормонов яичников находится под контролем матери. Стероидные гормоны, достигающие яйцеводов и матки, связываются с рецепторами, активируя транскрипцию нижележащих наборов генов. В результате эмбрион транспортируется в полость матки и эндометрий становится рецептивным.Степень, в которой эти два часа могут работать независимо, все еще остается спорной. Тем не менее, ооциты могут быть оплодотворены in vitro и развиваться нормально, и, если их заменить в соответствующее время, произойдет беременность. Точно так же при отсутствии функции яичников можно стимулировать искусственные циклы в матке введением экзогенных гормонов, а донорские эмбрионы, перенесенные в соответствующее время, могут имплантироваться. Эта статья посвящена событиям в организме человека со ссылкой на модели грызунов.

Эмбриональные часы легко калибруются: овулировавший ооцит попадает в яйцевод (известный как маточная труба у человека), где он оплодотворяется спермой. Образовавшийся зародыш транспортируется с помощью бьющихся ресничек, расположенных на эпителиальной поверхности труб. При этом он проходит несколько стадий дробления: это циклы деления бластомеров (клеток предимплантационного зародыша). После уплотнения образуется морула, и у человека обычно на этой стадии, через 4 дня после овуляции, эмбрион попадает в полость матки.Дальнейшее развитие следует с образованием бластоцисты; к этой стадии происходит первый этап клеточной дифференцировки с образованием внешней оболочки трофэктодермы (предшественника плацентарных клеток), покрывающей заполненную жидкостью полость, с одной стороны которой находится клубок клеток, внутренняя клеточная масса (предшественник плацентарных клеток). плод).

Овариальные часы интенсивно охарактеризованы. В фолликулярную фазу цикла вырабатывается эстроген, который стимулирует пролиферацию клеток-мишеней эндометрия, замещая ткани, утраченные во время менструации (у человека; менструируют лишь некоторые другие виды). Это соответствует пролиферативной фазе эндометриального цикла. Эстроген также запускает экспрессию рецепторов прогестерона в эндометрии. Уровень лютеинизирующего гормона достигает пика, и примерно через 36 часов происходит овуляция. В лютеиновую (постовуляторную) фазу овариального цикла как прогестерон, так и эстроген вырабатываются стероидогенными клетками, составляющими желтое тело. Прогестерон, достигая максимума в средней лютеиновой фазе, связывается с рецепторами, вызывая изменения в эндометрии, которые подготавливают его к восприятию имплантируемой бластоцисты.Эта часть эндометриального цикла известна как секреторная фаза.

У людей до этого момента эндокринные паттерны циклов зачатия и отсутствия зачатия аналогичны, хотя уровни циркулирующих лютеиновой фазы эстрогена и прогестерона несколько выше при имплантации, чем при неимплантационных циклах. Однако следующие этапы весьма различны. Если беременность не наступила, уровень прогестерона начинает снижаться, и желтое тело спадается, что приводит к менструации, при которой отторгается более трех четвертей эндометрия. В качестве альтернативы, если присутствует эмбрион, трофэктодермальные клетки и их непосредственное потомство (трофобласт) продуцируют полипептидный гормон хорионический гонадотропин, который связывается с рецепторами в желтом теле, спасая его и обеспечивая постоянное повышение уровня прогестерона и выживание эндометрия. . У других видов выживание желтого тела достигается с помощью различных сигнальных путей.

Эндометриальный цикл менее изучен, по крайней мере, в отношении основных требований к имплантации.Эндометрий крыс и мышей допускает имплантацию в течение примерно 24 часов на 4-5 день беременности, период, известный как окно имплантации. Ясно, что это контролируется матерью, потому что неимплантированные бластоцисты, извлеченные путем смыва и переданные восприимчивым матерям, дают нормальную беременность. Точные гормональные потребности для имплантации были определены путем замены эмбрионов у овариэктомированных животных при различных режимах введения экзогенных стероидов. Необходимая последовательность: эстроген (E), затем прогестерон (P), а затем эстроген плюс прогестерон.Примированная E/P матка поддерживает выживание бластоцист в ее полости в течение значительного времени, пока ежедневно вводится прогестерон (это известно как отсроченная имплантация), а однократная доза E во время P-стимуляции является абсолютным требованием для их имплантация. Это соответствует порционному импульсу эстрогена в естественных циклах. Пострецептивная матка враждебна к неимплантированным эмбрионам, которые дегенерируют.

Программы вспомогательной репродукции человека позволили получить много дедуктивных данных о частоте имплантации и оптимальном времени.По-видимому, эндометрий восприимчив приблизительно в течение 4 дней, с 7 по 11 день после пика лютеинизирующего гормона. Это вполне может закончиться, когда спасение желтого тела станет невозможным; то есть он, вероятно, не контролируется маткой. Таким образом, риск потери беременности на ранних сроках увеличивается с поздней имплантацией с 13% на 9-й день после овуляции до 82% на 12-й день и позже. Остается неясным, требуется ли выработка эстрогена в лютеиновой фазе для имплантации человеку. В искусственных циклах у женщин с преждевременной недостаточностью яичников точное воспроизведение естественного стероидного паттерна не требуется; например, фолликулярная фаза может быть продлена, и часто используются постоянные суточные дозы эстрогена и прогестерона.Кроме того, эстрогена, а затем только прогестерона достаточно для поддержания беременности, что позволяет предположить, что отхаркивающий эстроген, необходимый для грызунов, может не быть абсолютным требованием для имплантации человеку. Однако человеческий эмбрион экспрессирует фермент ароматазу и, следовательно, может быть способен производить собственный эстроген, который может действовать локально на материнские клетки в месте имплантации. Однако у женщин после замены эмбриона достигаются довольно низкие показатели беременности (редко более 50% и чаще 25% даже у более молодых женщин).Причины обсуждаются ниже.

Гистологические изменения в эндометрии указывают на реакцию ткани на гормоны яичников, при этом продукция в железах гликогена и гликопротеинов, предназначенных для секреции, проявляется уже через 3 дня после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ). Секреция достигает максимума через 7 дней после пика ЛГ, и на поверхности эпителиальных клеток эндометрия появляются выпуклые апикальные вздутия плазматической мембраны, известные как пиноподы или утеродомы, сохраняющиеся примерно 2 дня в зависимости от экспрессии гомеобоксного гена Hoxa-10.Примерно в это же время строма начинает становиться отечной. Однако эндометрий от 30% женщин с нормальной фертильностью демонстрирует гистологические особенности, отличающиеся от нормального фенотипа средней лютеиновой фазы. При условии высокого качества эмбриона (см. ниже) некоторые изменения в состоянии дифференцировки эндометрия совместимы с имплантацией. Сообщалось о многочисленных молекулярных изменениях, которые коррелируют с рецептивной фазой, но мало доказательств у человека или других видов животных, чтобы пролить свет на молекулярные взаимодействия, которые прикрепляют имплантирующийся эмбрион к эндометрию.Действительно, это одна из важных нерешенных проблем современной биологии.

С 01 по 04 неделю беременности — Consumer Health News

Возможно, ваша беременность еще не подтверждена, но пока вы ждете, чтобы узнать об этом, внутри вашего тела происходит чудо.

Один единственный сперматозоид из миллионов конкурентов соединился с яйцеклеткой. В нормальных условиях оплодотворение происходит в одной из фаллопиевых труб, после чего оплодотворенная яйцеклетка начинает пробиваться в матку.

Примерно на пятый день после зачатия эмбрион наконец достигает матки, где имплантируется в эндометрий или слизистую оболочку матки. Если имплантация произошла, то вы беременны. (Имплантация сама по себе является чем-то вроде чуда: 60 ​​процентов не успешны.)

Хотя вы еще некоторое время не будете получать новости, пол вашего ребенка уже установлен. Половина генетического материала только что оплодотворенной яйцеклетки поступает из спермы отца, половина — из яйцеклетки матери, но пол определяется при зачатии спермой.Яйцеклетка матери всегда несет Х-хромосому, в то время как сперма отца может нести Х или Y. Если сперма несет Х, то ребенок будет женского пола; если он несет Y (чтобы составить комбинацию XY), ребенок будет мужского пола.

Получение пищи

Через четыре-шесть дней после зачатия оплодотворенная яйцеклетка превращается в бластоцисту и проникает в слизистую оболочку матки, прочно прикрепляясь к ней. На этой ранней стадии у эмбриона развивается желточный мешок, который обеспечивает его первые питательные вещества.Но по мере того, как крошечное существо растет, оно обращается к своему хозяину (вам) за пропитанием. Крошечные ворсинки или пальцы ткани снаружи оплодотворенной яйцеклетки размножаются в эти первые недели. Они продолжают соединяться с капиллярами в эндометрии, которые поставляют питательные вещества и удаляют отходы. Со временем эта масса клеток станет плацентой, которая будет питать и защищать вашего ребенка на протяжении всей беременности.

В процессе имплантации крошечный эмбрион активно выделяет гормон беременности, известный как хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), который препятствует менструации и изгнанию эмбриона из матки.В анализе крови ХГЧ появится уже через шесть-восемь дней после овуляции, что указывает на то, что вы беременны. (Одно предостережение: не решайте, беременны ли вы, основываясь на самочувствии. Признаки ранней беременности напоминают предменструальные симптомы и включают набухание и болезненность молочных желез, вздутие живота, тошноту и утомляемость. )

Первые недели

В течение этих первых недель эмбрион продолжает расти по мере того, как клетки размножаются и выполняют определенные функции в процессе, известном как дифференцировка.Эти специализированные клетки в конечном итоге сформируют органы и части тела вашего ребенка. Этот этап развития имеет решающее значение, поэтому, если вы знаете, что беременны (или даже подозреваете, что можете быть беременны), важно избегать употребления алкоголя, уличных наркотиков и табака. (Избегайте этих веществ на протяжении всей беременности, но особенно важны первые 12 недель, в течение которых почти завершается базовое формирование органов и частей тела.) лекарства, не посоветовавшись с врачом, чтобы убедиться, что они безопасны для использования во время беременности.

К четырем неделям эмбрион состоит из трех отдельных слоев. Внутренний слой постепенно разовьется в легкие, печень и пищеварительную систему; средний слой будет состоять из костей, мышц, почек, сердца и половых органов ребенка; а внешний слой в конечном итоге сформирует кожу, волосы, глаза и нервную систему.

Что вы можете чувствовать

К концу второй недели после оплодотворения вы также можете начать испытывать первые признаки утреннего недомогания.Около 70 процентов всех беременных женщин имеют некоторые признаки утренней тошноты, но тяжесть состояния может варьироваться от легкой тошноты до ежедневных приступов сильной рвоты. У некоторых женщин симптомы не ограничиваются утром: многие жалуются на каменистый желудок в конце дня. Эксперты считают, что утренняя тошнота вызвана увеличением количества гормонов в организме беременной женщины.

Вы также можете чувствовать себя более уставшим, чем обычно: многие женщины чувствуют сильную усталость в течение первого триместра беременности.Эксперты связывают эту усталость с дополнительной работой, которую должен выполнять ваш организм сейчас, когда он вынашивает ребенка. Ваш кровоток увеличился, чтобы выполнить работу по кормлению вашего ребенка. В результате увеличения кровотока ваше сердце должно сокращаться сильнее, и объем вашего сердца увеличится на целых 50 процентов.

Если ваш тест показывает, что вы беременны, поздравляем! Это захватывающее и радостное время, но оно также может быть ошеломляющим. Не удивляйтесь, если вы испытываете целый ряд эмоций, включая опасение и замешательство.Это поможет узнать все, что вы можете, о беременности и шагах, которые вам необходимо предпринять, чтобы позаботиться о себе и о своем будущем ребенке.

Ссылки

Марш Десяти центов. Предлежание плаценты. http://www.marchofdimes.com/pnhec/188_1132.asp

Медицинский институт Говарда Хьюза. Биология развития. http://www.hhmi.org/cgi-bin/askascientist/

Больница Святого Имени. Руководство по охране здоровья: Беременность и роды. Первый триместр (0-12 недель).http://www.holyname.org/health_information_resourc…

Университет штата Колорадо. Гормоны щитовидной железы: беременность и развитие плода. http://arbl.cvmbs.colostate.edu/hbooks/pathphys/en…

Руководство Merck. Нормальная беременность, роды и роды. http://www.merck.com/mrkshared/mmanual/section18/c…

Труд: шесть признаков того, что вы скоро будете там. https://consumer.healthday.com/encyclopedia/pregna…

Утренняя тошнота.Немур Детское здоровье. https://kidshealth.org/en/parents/hyperemesis-grav…

Имплантация | СВЕТИЛЬНИК

1	Navot D, Drews MR, Bergh P, et al: возрастное снижение женской фертильности не связано с уменьшением способности матки поддерживать имплантацию эмбриона. Фертил Стерил 61:97, 1994
2	Murray MJ, Lessey BA: Эмбриональная имплантация и метастазирование опухоли: общие пути инвазии и ангиогенеза.Семин Репрод Эндокринол 17:275, 1999
3	Макларен А., Мичи Д.: Исследования по передаче оплодотворенных яиц мышей маточным матерям. Дж. Эксперт Биол. 33:394, 1974
4	Hodgen GD: перенос суррогатных эмбрионов в сочетании с эстроген-прогестероновой терапией у обезьян: имплантация, беременность и роды без яичников. ДЖАМА 250:2167, 1983
5	Psychoyos A: Восприимчивость матки к мочеиспусканию.Энн NY Acad Sci 476:36, 1986
6	Das S, Wang X, Paria B, et al: Гепарин-связывающий ген EGF-подобного фактора роста индуцируется в матке мышей бластоцистой височно только в месте ее соприкосновения: возможный лиганд для взаимодействия с бластоцистой EGF- рецептор в имплантации. Развитие 120:1071, 1994
7	Чакраборти И., Дас С., Ван Дж. и др.: Развитие экспрессии генов циклооксигеназы-1 и циклооксигеназы-2 в периимплантационной матке мышей и их дифференциальная регуляция бластоцистами и стероидами яичников. Дж Мол Эндокринол 16:107, 1996
8	Карсон Д.Д., Багчи И., Дей С.К. и др.: Имплантация эмбрионов. Дев Биол 223:217, 2000
9	Парр М, Парр Э: Реакция имплантации. В Wynn RM, Jollie WP (ред.): Матка. стр. 233, 277 Нью-Йорк, Пленум, 1989
10	Enders A, Schlafke S: Цитологические аспекты взаимодействия трофобласта с маткой при ранней имплантации.Ам Дж Анат 125:1, 1969
11	Хоффман Л., Олсон Г., Карсон Д. и др.: Прогестерон и имплантированные бластоцисты регулируют экспрессию Muc1 в эпителии матки кроликов. Эндокринология 139:266, 1998
12	Эндерс А., Шлафке С.: Проникновение эпителия матки во время имплантации кролику. Ам Дж Анат 132:219, 1971
13	Климан Х. , Нестлер Дж., Сермаси Э. и др.: Характеристика очистки и дифференцировка in vitro цитотрофобластов из доношенных плацент человека.Эндокринология 118:1567, 1986
14	Coutifaris C, Babalola G, Feinberg R и др.: Очищенные цитотропобласты человека: суррогаты бластоцисты в in vitro моделях имплантации? В Mashiach S (ed): Достижения в области вспомогательных репродуктивных технологий. стр. 687, 695 Нью-Йорк, Plenum Press, 1990
15	Bentin-Ley U, Horn T, Sjögren A, et al: Ультраструктура взаимодействий бластоцисты и эндометрия человека in vitro .J Reprod Fertil 120:337, 2000
16	Hertig AT, Rock J, Adams ED: Описание 34 яйцеклеток человека в течение первых 17 дней развития. Ам Дж Анат 98:435, 1956
17	Ёсинага К. Концепция рецепторов в исследованиях имплантации. В Йошинага К., Мори Т. (ред.): Развитие преимплантационных эмбрионов и их окружение. стр. 379, 387 Нью-Йорк, Alan Liss, Inc., 1989
18	Wilcox AJ, Baird DD, Wenberg CR: Время имплантации зачатия и потеря беременности. N Engl J Med 340:1796, 1999
19	Bergh PA, Navot D: Влияние эмбрионального развития и зрелости эндометрия на сроки имплантации. Фертил Стерил 58:537, 1992
20	Бастер Дж., Бустилло М., Роди И. и др.: Биологическое и морфологическое развитие донорских яйцеклеток человека, извлеченных с помощью нехирургического лаважа матки.Am J Obstet Gynecol 153:211, 1985
21	О’Рахилли Р., Мюллер Ф.: Стадии развития человеческих эмбрионов, Публикация 637. Вашингтон, округ Колумбия, Вашингтонский институт Карнеги, 1987 г.
22	Croxatto HB, Ortiz ME, Diaz S, et al: Исследования продолжительности транспорта яиц по яйцеводу человека. II. Расположение яйцеклетки через различные промежутки времени после пика лютеинизирующего гормона Am J Obstet Gynecol 132:629, 1978
23	Mitchell MH, Mitchell MS, Swanson RJ и др.: Усиление развития мышиных эмбрионов in vitro с помощью рекомбинантного ингибирующего фактора лейкемии.J Soc Gynecol Invest 1:215, 1994
24	Cullinan EB, Abbondanzo SJ, Anderson PS, et al: Ингибирующий лейкемию фактор (LIF) и экспрессия рецептора LIF в эндометрии человека предполагают потенциальную аутокринную паракринную функцию в регуляции имплантации эмбриона. Proc Natl Acad Sci USA 93:3115, 1996
25	Martin KL, Barlow DH, Sargent IL: Гепарин-связывающий эпидермальный фактор роста значительно улучшает развитие и вылупление бластоцист человека в бессывороточной среде. Гул Репрод 13:1645, 1998
26	Фишел С.Б., Эдвардс Р.Г., Эванс С.Дж.: Хорионический гонадотропин человека, секретируемый gy преимплантационных эмбрионов, культивируемых in vitro. Наука 223:816, 1984
27	Hay DL, Lopata A: Секреция хорионического гонадотропина in vitro. J Clin Endocrinol Metab 67:1322, 1988
28	Коэн Дж., Аликани М., Троубридж Дж. и др.: Улучшение имплантации путем селективного вспомогательного хетчинга с использованием сверления зон человеческих эмбрионов с плохим прогнозом.Гул Репрод 7:685, 1992
29	Коэн Дж., Райт Г., Малтер Х. и др.: Нарушение процесса вылупления после экстракорпорального оплодотворения у человека и улучшение имплантации за счет вспомогательного вылупления с использованием микроманипуляций. Гул Репродукция 5:7, 1990
30	Штейн А. , Руфас О., Амит С. и др.: Вспомогательный хэтчинг путем частичного рассечения зоны преэмбрионов человека у пациентов с рецидивирующей неудачей имплантации после экстракорпорального оплодотворения.Фертил Стерил 63:838, 1995
31	Навот Д., Берг П.А., Уильямс М. и др.: Изучение ранних репродуктивных процессов с помощью модели донорства яйцеклеток in vivo. J Clin Endocrinol Metab 72:408, 1991
32	Гонен Ю., Каспер Р.Ф., Якобсон В. и др.: Толщина и рост эндометрия во время стимуляции яичников: возможный предиктор имплантации при экстракорпоральном оплодотворении.Фертил Стерил 52:446, 1989
33	Абдалла Х.И., Брукс А.А., Джонсон М.Р. и др.: Толщина эндометрия: предиктор имплантации у реципиентов яйцеклетки? Гул Репрод 9:363, 1994
34	Noyes RW, Hertig AT, Rock J: Датировка биопсии эндометрия. Фертил Стерил 1:3, 1950
35	Martel D, Frydman R, Glissant M, et al: Сканирующая электронная микроскопия постовуляторного эндометрия человека в спонтанных циклах и циклах, стимулированных гормональной терапией.Дж Эндокринол 114:319, 1987
36	Martel D, Monier MN, Roche D, Psychoyos A: Гормональная зависимость образования пиноподов на поверхности просвета матки. Гул Репрод 6:597, 1991
37	Никас Г., Дракас П., Лутрадис Д. и др.: Пиноподы матки как маркеры «окна нидации» у велосипедисток, получающих экзогенный эстрадиол и прогестерон. Гул Репрод 10:1208, 1995
38	Savouret JF, Chauchereau A, Misrahi M, et al: Рецептор прогестерона.Биологические эффекты прогестинов и антипрогестинов Hum Reprod 9S:7, 1994
39	Cowell TP: Имплантация и развитие яйцеклеток мышей, перенесенных в матку мышей без прогестагена. J Reprod Fertil 19:239, 1969
40	Фанчин Р., Ригини С., Оливеннес Ф. и др. Сокращения матки во время переноса эмбриона влияют на частоту наступления беременности после экстракорпорального оплодотворения.Гул Репрод 13:1968, 1998
41	Лесни П., Киллик С.Р., Тетлоу Р.Л. и др.: Перенос эмбрионов — можем ли мы чему-нибудь научиться, наблюдая за сокращениями соединительной зоны? Гул Репрод 13:1540, 1998
42	Aplin JD, Charlton AD, Ayad S: Иммуногистохимическое исследование внеклеточного матрикса эндометрия во время менструального цикла и в первом триместре беременности.Соотношение тканей клеток 253:231, 1988
43	Билалис Д.А., Кленцерис Л.Д., Флеминг С.: Иммуногистохимическая локализация белков внеклеточного матрикса в лютеиновой фазе эндометрия фертильных и бесплодных пациенток. Гул Репрод 11:2713, 1996
44	Hewitt K, Beer AE, Grinnell F: Исчезновение анионных участков с поверхности эпителия эндометрия крыс во время имплантации бластоцисты.Биол Репрод 21:691, 1979
45	Мерфи К.Р., Роджерс А.В.: Влияние гормонов яичников на клеточные мембраны в матке крыс. III. Поверхностные углеводы на верхушке просветного эпителия Cell Biophys 3:305, 1981
46	Surveyor GA, Gendler SJ, Pemberton L, et al: Дифференциальная экспрессия Muc-1 на апикальной клеточной поверхности эпителиальных клеток матки мыши.FASEB J 7:1151a, 1993
47	Aplin JD, Hey NA: MUC1, имплантация эндометрия и эмбрионов. Биохим Сок Транс 23:826, 1995
48	Woessner JF: Металлопротеиназы матрикса и их ингибиторы в ремоделировании соединительной ткани. FASEB J 5:2145, 1991
49	Emonard H, Grimaud JA: Матриксные металлопротеиназы.Обзор Cell Mol Biol 36:131, 1990
50	Табибзаде С.: Сигналы и молекулярные пути, участвующие в менструации человека, уникальном процессе разрушения и ремоделирования тканей. Мол Хум Репродукция 2:77, 1996
51	Salamonsen LA, Woolley DE: Матриксные металлопротеиназы при нормальной менструации. Hum Reprod 11 (Suppl 2): ​​124, 1996
52	Nagase H: Механизмы активации матриксных металлопротеиназ.Биол Хим Хоппе-Сейлер 378:151, 1997
53	Coussens LM, Werb Z: Матриксные металлопротеиназы и развитие рака. Хим. Биол. 3:895, 1996
54	Господарович Д. , Гринбург Г., Бёрдвелл К.Р.: Определение клеточной формы внеклеточным матриксом и его корреляция с контролем клеточного роста. Рак Рез 38:4155, 1978
55	Верб З., Трембл П., Дамски С.Х.: Регуляция деградации внеклеточного матрикса за счет взаимодействия между клетками и внеклеточным матриксом.Cell Diff Dev 32:299, 1990
56	Brooks PC, Stromblad S, Sanders LC и др.: Локализация матриксной металлопротеиназы MMP-2 на поверхности инвазивных клеток путем взаимодействия с интегрином αvβ3. Сотовый 85:683, 1996
57	Huppertz B, Kertschanska S, Demir AY и др.: Иммуногистохимия матриксных металлопротеиназ (MMP), их субстратов и их ингибиторов (TIMP) во время инвазии трофобласта в плаценту человека.Соотношение клеточных тканей 291:133, 1998
58	Librach CL, Werb Z, Fitzgerald ML, et al: Коллагеназа IV типа 92 кДа опосредует инвазию цитотрофобластов человека. J Cell Biol 113:437, 1991
59	Marzusch K, Ruck P, Dietl JA и др.: Иммуногистохимическая локализация тканевого ингибитора металлопротеиназ-2 (ТИМП-2) в децидуальной оболочке плаценты человека в первом триместре.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 68:105, 1996
60	Табибзаде С., Бабакня А.: Сигналы и молекулярные пути, участвующие в спаечной и тканевой инвазии. Гул Репрод 10:1579, 1995
61	Фудзимото Дж., Хори М., Ичиго С. и др.: Сравнительное исследование экспрессии ингибитора активатора плазминогена 1 и его мРНК при раке эндометрия и нормальном эндометрии.Тумор Биол 18:13, 1997
62	Khamsi F, Armstrong DT, Zhang XQ: Экспрессия активатора плазминогена урокиназного типа в предимплантационных эмбрионах человека. Мол Хум Репрод 2:273, 1996
63	Queenan JT, Kao LC, Arboleda CE и др. : Регуляция продукции активатора плазминогена урокиназного типа культивируемыми цитотрофобластами человека. J Biol Chem 262:10903, 1987
64	Zini JM, Murray SC, Graham CH, et al: Характеристика экспрессии рецептора урокиназы трофобластами плаценты человека.Кровь 79:2917, 1992
65	Axelrod HR: Измененные функции трофобласта у эмбрионов мыши с дефектом имплантации. Дев Биол 108:185, 1985
66	Лоскутофф Д.Дж., Содей М., Мимуро Дж.: Активатор плазминогена I типа. Прог Гемостаз Тромб 9:87, 1989
67	Glueck CJ: Активность ингибитора активатора плазминогена: независимый фактор риска высокой частоты выкидышей во время беременности у женщин с синдромом поликистозных яичников.Метаб Клин Опыт 48:1589, 1999
68	Gris JC: Исследование частоты тромбофилических нарушений у пар с поздней потерей плода и отсутствием предшествующего тромбоза (NOHA5). Тромб Хемост 81:891, 1999
69	Sutherland AE, Calarco PG, Damshky CH: Регуляция развития экспрессии интегрина во время имплантации эмбриону мыши.Развитие 119:1175, 1993
70	Damsky CH, Fitzgerald ML, Fisher SJ: Паттерны распределения компонентов внеклеточного матрикса и рецепторов адгезии сложно модулируются во время дифференцировки цитотрофобласта в первом триместре по инвазивному пути, in vivo . Джей Клин Инвест 89:210, 1992
71	Лесси Б.А., Дамьянович Л., Кутифарис С. и др.: Молекулы адгезии интегрина в эндометрии человека.Корреляция с нормальным и ненормальным менструальным циклом J Clin Invest 90:188, 1992
72	Лесси Б.А., Кастельбаум А.Дж., Бак К.А. и др.: Дальнейшая характеристика эндометриального интегрина во время менструального цикла и во время беременности. Фертил Стерил 62:497, 1994
73	Табибзаде С.: Паттерны экспрессии молекул интегрина в эндометрии человека на протяжении менструального цикла.Гул Репрод 7:876, 1992
74	Лесси Б.А., Кастельбаум А.Дж., Савин С.Дж. и др.: Интегрины как маркеры восприимчивости матки у женщин с первичным необъяснимым бесплодием. Фертил Стерил 63:535, 1995
75	Лесси Б.А., Кастельбаум А.Дж., Савин С.Дж. и др.: Аберрантная экспрессия интегрина в эндометрии женщин с эндометриозом. Дж. Клин Энокриол Метаб 79:643, 1994
76	Meyer WR, Castelbaum AJ, Harris JE и др.: Гидросальпингез отрицательно влияет на маркеры восприимчивости матки.Гул Репрод 12:1393, 1997
77	Lessey BA, Ilesanmi AO, Sun J и др. : Люминальный и железистый эпителий эндометрия экспрессируют интегрины по-разному на протяжении менструального цикла: последствия для имплантации, контрацепции и бесплодия. Am J Reprod Immunol 35:195, 1996
78	Armant DR, Kaplan HA, Mover H и др.: Влияние гексапептидов на прикрепление и рост бластоцист мыши, культивируемых in vitro: Доказательства участия трипептида распознавания клеток Arg-Gly-Asp.Proc Natl Acad Sci USA 83:6751, 1986
79	Yelian FD, Yang Y, Hirata JD и др. Молекулярные взаимодействия между фибронектином и интегринами во время роста бластоцисты мыши. Мол Репрод Дев 41:435, 1995
80	Apparao KBC, Lovely LP, Gui Y и др.: Повышенная экспрессия рецепторов андрогенов в эндометрии у женщин с синдромом поликистозных яичников. Биол Репрод 66:297, 2002
81	Илесанми А. О., Хокинс Д.А., Лесси Б.А.: Иммуногистохимические маркеры восприимчивости матки в эндометрии человека.Микроскопия Res Tech 25:208, 1993
82	Tulppala M, Julkunen M, Tiitinen A, et al: Привычный аборт сопровождается низким уровнем плацентарного белка 14 в лютеиновой фазе фертильного цикла. Фертил Стерил 63:792, 1995
83	Фукуда М.Н., Сато Т., Накаяма Дж. и др.: Трофинин и тастин, новый комплекс молекул клеточной адгезии с потенциальным участием в имплантации эмбриона.Гены Дев 9:1199, 1995
84	Mac Calman CD, Furth EE, Omigbodun A и др.: Регулируемая экспрессия кадгерина-11 в эпителиальных клетках человека: роль кадгерина-11 во взаимодействиях трофобласт-эндометрий? Дев Дин 206:201, 1996
85	Albers A, Thie M, Hohn HP и др.: Дифференциальная экспрессия и локализация интегринов и CD44 в мембранных доменах эпителиальных клеток матки человека во время менструального цикла. Акта Анат 153:12, 1995
86	Stewart CL, Kaspar P, Brunet LJ и др.: Имплантация бластоцисты зависит от материнской экспрессии фактора, ингибирующего лейкмию. Природа 359:76, 1992
87	Bhatt H, Brunet LJ, Stewart CL: Экспрессия ингибирующего фактора лейкемии в матке совпадает с началом имплантации бластоцисты. Proc Natl Acad Sci USA 88:11408, 1991
88	Das SK, Wang XN, Paria BC, et al: Гепарин-связывающий ген EGF-подобного фактора роста индуцируется в матке мыши темпорально бластоцистой исключительно в месте прикрепления: возможный лиганд для взаимодействия с бластоцистным EGF-рецептором в имплантации.Развитие 120:1071, 1994
89	Giudice LC: Факторы роста и белки эндометрия. Семин Репрод Эндокринол 13:93, 1995
90	Apparao KBC, Murray MJ, Fritz MA, et al: Остеопонтин и его рецептор интегрин avb3 коэкспрессируются в эндометрии человека во время менструального цикла, но регулируются по-разному. J Clin Endocrinol Metab 86:4991, 2001
91	Ruoslahti E, Pierschbacher MD: Новые перспективы клеточной адгезии: RDG и интегрины.Наука 238:491, 1987
92	Джонсон Г.А., Спенсер Т.Е., Бургхардт Р.К. и др.: Модуляция прогестероном экспрессии гена остеопонтина в овечьей матке. Биол Репрод 62:1315, 2000
93	Lindenberg S, Hyttel P, Sjogren A и др.: Сравнительное исследование прикрепления бластоцист человека, крупного рогатого скота и мыши к монослою эпителия матки. Гул Репрод 4:446, 1989
94	Линденберг С.: Ультраструктура при имплантации человека: Просвечивающая и сканирующая электронная микроскопия.Bailieres Clin Obstet Gynaecol 5:1, 1991
95	Линденберг С., Хиттель П. , Ленц С. и др.: Ультраструктура ранней имплантации человека in vitro. Гул Репрод 1:533, 1986
96	Р. Алон и С. Фейгельсон, Semin. Иммунол. 14, 93 (2002)
97	Генбацев О. и др., Наука, 299(5605), 405 (2003)
98	Т.Лай и др., Feril Steril, 85(3), 761 (2006)
99	Werb Z: ECM и протеолиз клеточной поверхности: регулирование клеточной экологии. Сотовый 91:493, 1997
100	Werb Z, Tremble PM, Behrendtsen O и др.: Передача сигнала через рецептор фибронектина индуцирует экспрессию генов коллагеназы и стромелизина. J Cell Biol 109:877, 1989
101	Enders AC: Имплантация (эмбриология).Энциклопедия Hum Biol 4: 423, 1991
102	Brenner RM, West NB: Гормональная регуляция репродуктивного тракта у самок млекопитающих. Энн Рев Физиол 37:273, 1975
103	Baulieu EE: Контрагезия и другие клинические применения RU-486 и антипрогестерона на рецепторе. Наука 245:1351, 1989
104	Мацудзаки С., Уэхара С., Мураками Т. и др.: Количественный анализ уровней рецепторов эстрогена альфа и бета-мессенджера рибонуклеиновой кислоты в нормальном эндометрии и эндометриоидных кистах яичников с использованием полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени.Фертил Стерил 74:753, 2000
105	Mote PA, Balleine RL, McGowan EM и др.: Колокализация рецепторов прогестерона A и B с помощью двойной иммунофлуоресцентной гистохимии в эндометрии человека во время менструального цикла. J Clin Endocrinol Metab 84:2963, 1999
106	Бамбергер А.М., Милде-Лангош К. , Лонинг Т. и др. Глюкокортикоидный рецептор специфически экспрессируется в стромальном отделе эндометрия человека.J Clin Endocrinol Metab 86: 5071, 2001
107	Katzenellenbogen BS: Динамика действия рецепторов стероидных гормонов. Анну Рев Физиол 42:17, 1980
108	Sanborn BM, Kuo KS, Held B: концентрации эстрогена и прогестагена в эндометрии и шейке матки человека в течение менструального цикла и в тканях женщин, принимающих оральные контрацептивы. J Steroid Biochem 9:951, 1978
109	Лесси Б.А., Киллам А.П., Мецгер Д.А. и др.: Иммуногистохимический анализ рецепторов эстрогена и прогестерона в матке человека на протяжении менструального цикла.J Clin Endocrinol Metab 67:334, 1988
110	de Ziegler D, Cornel C, Bergeron C, et al: Контролируемая подготовка эндометрия экзогенным эстрадиолом и прогестероном у женщин с функционирующими яичниками. Фертил Стерил 56:851, 1991
111	Lessey BA, Apparao KBC, Young SL, et al: Экспрессия эндометриального эстрогенового рецептора-α повышена у женщин с дефектами внутриутробной рецептивности: объединяющая концепция неудачи имплантации [аннотация]? J Soc Gynecol Invest 9S:493, 2002
112	Garcia E, Bouchard P, De Brux J и др.: Использование иммунохимии рецепторов прогестерона и эстрогена для эндометриального датирования.J Clin Endocrinol Metab 67:80, 1988
113	Savouret JF, Chauchereau A, Misrahi M, et al: Рецептор прогестерона. Биологические эффекты прогестинов и антипрогестинов Hum Reprod 9S:7, 1994
114	Сомкути С.Г., Юань Л.В., Фриц М.А. и др.: Эпидермальный фактор роста и половые стероиды динамически регулируют маркер восприимчивости эндометрия в клетках Исикавы. J Clin Endocrinol Metab 82:2192, 1997
115	Кунья Г.Р., Бигсби Р.М., Кук П.С. и др.: Стромально-эпителиальные взаимодействия во взрослых органах: Обзор. Сотовая разница 17:137, 1985
116	Kurita T, Young P, Brody JR и др.: Стромальные прогестероновые рецепторы опосредуют ингибирующее действие прогестерона на эстроген-индуцированный синтез дезоксирибонуклеиновой кислоты в эпителиальных клетках матки.Эндокринология 139:4708, 1998
117	Кук П.С., Бьюкенен Д.Л., Янг П. и др. Стромальные эстрогеновые рецепторы опосредуют митогенное действие эстрадиола на эпителий матки. Proc Natl Acad Sci USA 94:6535, 1997
118	Lessey BA, Gui Y, Apparao KBC и др.: Гепарин-связывающий EGF-подобный фактор роста (HB-EGF) в эндометрии человека: апотенциальная паракринная роль во время имплантации. Мол Репрод Дев (в печати).
119	Фриц М.А., Лесси Б.А.: Дефектная лютеиновая функция. В Fraser IS, Jansen R, Lobo RA, Whitehead M (eds): Estrogens and Progestogens in Clinical Practice. стр. 437, Лондон, Черчилль Ливингстон, 1998
120	Kao LC, Giudice LC: Факторы роста и имплантация. В Lessey BA (ed): Клиники бесплодия и репродуктивной медицины Северной Америки: имплантация.п. 281, Филадельфия, WB Saunders Co., 2001
121	Clark SC, Kamen R: Гемопоэтические колониестимулирующие факторы человека. Наука 236:1229, 1987
122	Pollard JW, Hunt JS, Wkitor-Jedrzejczak W и др. Дефект беременности у мышей с остеопетрозом (op/op) демонстрирует потребность в CSF-1 для женской фертильности. Дев Биол 148:273, 1991
123	Каума С. В., Аукерман С.Л., Эйерман Д. и др.: Колонстимулирующий фактор-1 и экспрессия c-fms в тканях эндометрия и плаценте человека во время менструального цикла и на ранних сроках беременности.J Clin Endocrinol Metab 73:746, 1991
124	Haimovici F, Anderson DJ: Влияние факторов роста и взаимодействий фактора роста с внеклеточным матриксом на рост трофобласта мыши in vitro . Биол Репрод 49:124, 1993
125	Hilton DJ, Gough NM: Ингибирующий фактор лейкемии: биологическая перспектива. J Cell Biochem 46:21, 1991
126	Bhatt H, Brunet LJ, Stewart CL: Экспрессия ингибирующего фактора лейкемии в матке совпадает с началом имплантации бластоцисты.Proc Natl Acad Sci USA 88:11408, 1991
127	Cullinan EB, Abbondanzo SJ, Anderson PS, et al: Ингибирующий лейкемию фактор (LIF) и экспрессия рецептора LIF в эндометрии человека предполагают потенциальную аутокринную паракринную функцию в регуляции имплантации эмбриона. Proc Natl Acad Sci USA 93:3115, 1996
128	Nachtigall MJ, Kliman HJ, Feinberg RF, et al: Влияние ингибирующего лейкемию фактора (LIF) на дифференцировку трофобласта: потенциальная роль в имплантации человека.J Clin Endocrinol Metab 81:801, 1996
129	Dinaello CA: Биология интерлейкина-1. Хим Иммунол 51:1, 1992
130	Meisser A, Chardonnens D, Campana A и др.: Влияние фактора некроза опухоли-альфа, интерлейкина-1-альфа, макрофагального колониестимулирующего фактора и трансформирующего фактора роста бета на металлопротеиназы трофобластического матрикса. Мол Хум Репрод 5:252, 1999
131	Шет К.В., Рока Г.Л., Аль-Седайри С.Т. и др.: Прогнозирование успешной имплантации эмбриона путем измерения интерлейкина-1 альфа и иммунодепрессивного фактора (факторов) в предимплантационной культуральной жидкости эмбриона. Фертил Стерил 55:952, 1991
132	Frank GR, Brar AK, Jikihara H и др.: Интерлейкин-1β и эндометрий: ингибитор дифференцировки стромальных клеток и возможный ауторегулятор децидуализации у человека. Биол Репрод 52:184, 1995
133	Саймон С., Фрэнсис А., Пикетт Г. и др.: Система интерлейкина-1 в материнско-трофобластной единице при имплантации человека: иммуногистохимические доказательства аутокринной/паракринной функции.J Clin Endocrinol Metab 78:847, 1994
134	Де лос Сантос М.Дж., Меркадер А., Фрэнсис А. и др.: Роль эндометриальных факторов в регуляции секреции компонентов иммунореактивной эмбриональной системы интерлейкина-1 человека во время эмбрионального развития. Биол Репрод 54:563, 1996
135	Simon C, Frances A, Lee BY и др. : Иммуногистохимическая локализация, идентификация и регуляция антагониста рецептора интерлейкина-1 в эндометрии человека.Гул Репрод 10:2472, 1995
136	Simon C, Frances A, Piquette GN и др. Мыши с эмбриональной имплантацией блокируются антагонистом рецептора интерлейкина-1. Эндокринология 134:521, 1994
137	Abbondanzo SJ, Cullinan EB, McIntyre K, et al: Репродукция у мышей, лишенных функционального рецептора IL-1 типа 1. Эндокринология 137:3598, 1996
138	Фишер Д.А., Лакшманан Дж.: Метаболизм и эффекты эпидермального фактора роста и родственных факторов роста у млекопитающих.Endocr Rev 11:418, 1990
139	Beerli RR, Hunes NE: Пептиды, связанные с эпидермальным фактором роста, активируют различные подмножества рецепторов ErbB и различаются по своей биологической активности. J Biol Chem 271:6071, 1996
140	Paria BC, Dey SK: Предимплантационное развитие эмбриона in vitro: Взаимодействие между эмбрионами и роль факторов роста.Proc Natl Acad Sci USA 874756:1990
141	Machida T, Taga M, Minaguchi H: Влияние эпидермального фактора роста и трансформирующего фактора роста альфа на рост трофобласта мыши in vitro . Eur J Endocrinol 133:741, 1995
142	Paria BC, Das SK, Andrews GK и др.: Экспрессия гена эпидермального фактора роста регулируется в бластоцистах мышей во время отсроченной имплантации.Proc Natl Acad Sci USA 90:55, 1993
143	Джонсон, округ Колумбия, Чаттерджи С.: Имплантация эмбриона в матку крысы, вызванная эпидермальным фактором роста. J Reprod Fertil 99:557, 1993
144	Das SK, Lim H, Wang J и др. : Несоответствующая экспрессия трансформирующего фактора роста человека (TGF)-α в матке трансгенных мышей вызывает подавление рецепторов TGF-β и задерживает реакцию прикрепления бластоцисты.Дж Мол Эндокринол 18:243, 1997
145	Hofmann GE, Scott RTJ, Bergh PA и др.: Иммуногистохимическая локализация эпидермального фактора роста в эндометрии, децидуальной оболочке и плаценте человека. J Clin Endocrinol Metab 73:882, 1991
146	Chegini N, Rossi MJ, Masterson BJ: фактор роста тромбоцитов (PDGF), эпидермальный фактор роста (EGF), а также бета-рецепторы EGF и PDGF в ткани эндометрия человека, локализация и действие in vitro .Эндокринология 130:2373, 1992
147	Fazlebas AT, Hild-Petito S, Verhage HG: Секреторные белки и факторы роста матки бабуина (Papio anubis): потенциальные роли во время беременности. Cell Biol Int 18:1145, 1994
148	Yoo HJ, Barlow DH, Bardon HJ: Временная и пространственная регуляция экспрессии гепарин-связывающего эпидермального фактора роста, подобного фактору роста, в эндометрии человека: возможная роль в имплантации бластоцисты.Дев Жене 21:102, 1997
149	Wang XN, Das SK, Damm D, et al: Дифференциальная регуляция гепарин-связывающего эпидермального фактора роста, подобного фактору роста, в матке взрослых мышей после овариэктомии с помощью прогестерона и эстрогена. Эндокринология 135:1264, 1994
150	Nonoshita LD, Wathen NC, Dsupin BA, et al. Инсулиноподобные факторы роста (IGF), IGF-связывающие белки (IGFBP) и протеолизированный IGFBP-3 в эмбриональных полостях на ранних сроках беременности человека: их потенциальное значение для материнского организма. Эмбриональные и фетальные взаимодействия. J Clin Endocrinol Metab 79:1249, 1994
151	Zhou J, Dsupin BA, Giudice LC и др.: Экспрессия генов системы инсулиноподобного фактора роста в эндометрии человека во время менструального цикла. J Clin Endocrinol Metab 79:1723, 1994
152	Guidice LC, Lamson G, Rosenfeld RG и др.: Инсулиноподобный фактор роста-II (IGF-II) и IGF-связывающие белки в эндометрии человека.Энн NY Acad Sci 626: 295, 1991
153	Bell SC, Patel SR, Jackson JA и др.: Главный секреторный белок децидуализированного эндометрия человека во время беременности представляет собой белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста. Дж Эндокринол 118:317, 1988
154	Ирвин Дж. К., де лас Фуэнтес Л., Дсупин Б. А. и др. Инсулиноподобный фактор роста, регулирующий функцию эндометриальных стромальных клеток человека: координированное воздействие на инсулиноподобный фактор роста, связывающий белок-1, пролиферацию клеток и секрецию пролактина. Регул Пепт 48:165, 1993
155	Jones JI, Gockerman A, Busby WH, et al. Белок 1, связывающий инсулиноподобный фактор роста, стимулирует миграцию клеток и связывается с интегрином альфа 5/бета 1 посредством своей последовательности ARG-GLY-ASP. Proc Natl Acad Sci USA 90:10553, 1993
156	Osteen KG, Bruner KL, Eisenburg E, et al: Индуцированный прогестероном трансформирующий фактор роста-β (TGF-β) подавляет эндометриальные металлопротеиназы, но сам по себе TGF-β не может блокировать эндометриоподобные поражения у голых мышей.О-071:S35. Представлено на ежегодном собрании Американского общества фертильности, 1995 г.
157	Kallapur S, Ormsby I, Doetschaman T: Зависимость от напряжения функции TGFβ1 во время эмбриогенеза. Мол Репрод Дев 52:341, 1999
158	Smith EA, Seldin MF, Martinez L: Альфа-ген рецептора тромбоцитарного фактора роста мыши делетирован в W19H и патч-мутации на хромосоме 5. Proc Natl Acad Sci USA 88:4811, 1991
159	Nuttall RK, Kennedy TG: Эпидермальный фактор роста и основной фактор роста фибробластов увеличивают выработку матриксных металлопротеиназ во время децидуляции in vitro стромальных клеток эндометрия крысы. Эндокринология 141:629, 2000
160	Rappolee DA, Patel Y, Jacobson K: Экспрессия рецепторов факторов роста фибробластов в периимплантационных эмбрионах мышей.Мол Репрод Дев 51:252, 1998
161	Feinberg RF, Kliman HJ, Lockwood CJ: Является ли онкофетальный фибронектин трофобластным клеем для имплантации человеку? Ам Дж. Патол 138: 537, 1991
162	Giannelli G, Faulk-Marziller J, Schiraldi O и др.: Индукция миграции клеток путем расщепления матриксной металлопротеиназой-2 ламинина-5. Наука 277:225, 1997
163	Судзуки М. , Рааб Г., Мозес М.А. и др.: Матриксная металлопротеиназа-3 высвобождает активный гепарин-связывающий ЭФР-подобный фактор роста путем расщепления в определенном околомембранном участке.J Biol Chem 272:31730, 1997
164	Martin KL, Barlow DH, Sargent IL: Гепарин-связывающий эпидермальный фактор роста значительно улучшает развитие и вылупление бластоцист человека в бессывороточной среде. Гул Репрод 13:1645, 1998
165	Андерсон Т.Л., Зиг С.М., Ходжен Г.Д.: Состав мембран эпителия эндометрия: молекулярные маркеры восприимчивости матки к имплантации.Гул Репрод 3:513, 1988
166	Гарднер Д.К., Велла П., Лейн М. и др.: Культивирование и перенос бластоцист человека увеличивает частоту имплантации и снижает потребность в многократном переносе эмбрионов. Фертил Стерил 69:84, 1998
167	Папа В. Ф.: Асинхрония матки: причина потери эмбриона. Биол Репрод 39:999, 1988
168	Stephenson MD: Частота факторов, связанных с привычным абортом, у 197 пар.Фертил Стерил 66:24, 1996
169	Soules MR, Wiebe RH, Aksel S и др.: Диагностика и терапия дефицита лютеиновой фазы. Фертил Стерил 28:1033, 1977
170	Li TC, Lenton EA, Dockery P и др.: Сравнение некоторых клинических и эндокринологических особенностей между циклами с нормальной и дефектной лютеиновой фазой у женщин с необъяснимым бесплодием.Гул Репрод 5:805, 1990
171	Seif MW, Aplin JD, Buckley CH: Дефект лютеиновой фазы: возможность иммуногистохимической диагностики. Фертил Стерил 51:273, 1989
172	Накадзима С. Т., Гибсон М.: Патофизиология дефицита лютеиновой фазы в репродукции человека. Клин Обстет Гинекол 34:167, 1991
173	Джоши С.Г.: Регулируемые прогестином белки человеческого эндометрия.Семин Репрод Эндокринол 1:221, 1983
174	McNeely MJ, Soules MR: Диагноз дефицита лютеиновой фазы: критический обзор. Фертил Стерил 50:1, 1988
175	Balasch J, Vanrell JA: Дефицит лютеиновой фазы: неадекватный ответ эндометрия на нормальную гормональную стимуляцию. Инт Дж Фертил 31:368, 1986
176	М.Мюррей и др., Fertil Steril, 81(5), 1333 (2004)
177	C. Coutifaris, et al., Fertil Steril, 82(5), 1264 (2004)
178	Андерсен А. Н., Юэ З., Менг Ф.Дж. и др.: Низкая частота имплантации после оплодотворения in vitro у пациентов с гидросальпингом, диагностированным с помощью УЗИ. Гул Репрод 9:1935, 1994
179	Кассабджи М., Симс Дж.А., Батлер Л. и др.: Снижение исхода беременности у пациентов с односторонним или двусторонним гидросальпинксом после оплодотворения in vitro .Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 56:129, 1994
180	Карамардян Л.М., Граймс Д.А.: Дефицит лютеиновой фазы: влияние лечения на частоту наступления беременности. Am J Obstet Gynecol 167:1391, 1992
181	Daly DC: Эндометрий и дефект лютеиновой фазы. Семин Репрод Эндокринол 1:237, 1983
182	Huang KE: Первичное лечение недостаточности лютеиновой фазы: прогестерон против цитрата кломифена. Am J Obstet Gynecol 155:824, 1986
183	Мюррей Д.Л., Райх Л., Адаши Э.Ю. Пероральные цитрат кломифена и вагинальные суппозитории прогестерона при лечении дисфункции лютеиновой фазы: сравнительное исследование. Фертил Стерил 51:35, 1989
184	Segal S, Casper RF: Прием прогестерона увеличивает толщину эндометрия в лютеиновой фазе и уровень эстрадиола при экстракорпоральном оплодотворении.Гул Репрод 7:1210, 1992
185	Scialli AR: Влияние прогестерона и его производных на развитие. Reprod Toxicol 2:3, 1988
186	Dodson KS, McNaughton MC, Coutts JRT: Бесплодие у женщин с явными овуляторными циклами II. Влияние лечения кломифеном на профили гонадотропинов и половых стероидных гормонов в периферической плазме Br J Obstet Gynaecol 82:625, 1975
187	Кук С. Л., Шредер Дж.А., Юссман М.А. и др.: Индукция дефекта лютеиновой фазы цитратом кломифена.Am J Obstet Gynecol 149: 613, 1984
188	Даунс К.А., Гибсон М.: Терапия цитратом климфена при дефекте лютеиновой фазы. Фертил Стерил 39:34, 1983
189	Quagliarello J, Weiss G: Цитрат кломифена в лечении бесплодия, связанного с укороченной лютеиновой фазой. Фертил Стерил 31:373, 1979
190	Родин Д.А., Фишер А.М., Клейтон Р.Н.: Нарушения цикла у бесплодных женщин с регулярными менструальными циклами: эффекты лечения цитратом кломифена.Фертил Стерил 62:42, 1994
191	Джонс Г.С., Аксель С.С., Венц А.С.: Значения прогестерона в сыворотке при дефектах лютеиновой фазы. Акушерство Гинекол 44:706, 1974

Роль эндометрия и эмбриона в имплантации человека | Обновление репродукции человека

Аннотация

Несмотря на многочисленные достижения в области вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), уровень имплантации остается низким. Процесс имплантации требует взаимного взаимодействия между бластоцистой и эндометрием, кульминацией которого является небольшое окно возможностей, в течение которого может произойти имплантация. Это взаимодействие включает в себя эмбрион с присущей ему молекулярной программой роста и дифференцировки клеток, а также временную дифференцировку клеток эндометрия для достижения восприимчивости матки. Сама имплантация регулируется множеством эндокринных, паракринных и аутокринных модуляторов эмбрионального и материнского происхождения.Считается, что отторжение имплантации происходит в результате нарушения потенциала развития эмбриона и/или нарушения рецептивности матки и диалога между эмбрионом и маткой. Следовательно, требуется лучшее понимание имплантации и относительной важности задействованных факторов. Новые методы мониторинга изменений в эндометрии и/или эмбрионе на уровне регуляции генов и экспрессии белков могут привести к выявлению лучших маркеров для имплантации. Более того, использование прогностических наборов маркеров может оказаться более надежным, чем использование одного маркера. Дальнейшее совершенствование протоколов ВРТ, например, оптимизация режимов стимуляции яичников, сроков введения хорионического гонадотропина человека или сроков переноса эмбрионов, должны способствовать дальнейшему увеличению частоты имплантации.

Введение

Техники, используемые во вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ), значительно продвинулись с момента рождения первого экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) в 1978 году. Теперь доступны инструменты, которые позволяют выбирать высококачественные эмбрионы или оценивать состояние эндометрия.Кроме того, протоколы ВРТ продолжают развиваться с целью достижения более высоких показателей беременности, меньшего количества многоплодных родов и здоровых детей от генетически пораженных предков. Однако, несмотря на эти достижения, частота наступления беременности остается относительно низкой и за последнее десятилетие значительно не увеличилась (Nygren and Andersen, 2001; Andersen et al. , 2005). Это говорит о том, что частота имплантации в стимулированных циклах остается субоптимальной. Другие факторы, которые еще предстоит определить, должны сыграть свою роль.

Исторически о рецептивности эндометрия и качестве эмбриона судили с помощью морфологических оценок, и поиск предикторов имплантации был сосредоточен главным образом на анализе отдельных маркеров. В настоящее время наблюдается движение к более сложным технологиям с высокой пропускной способностью, таким как ДНК-чипы и протеомные массивы, способные быстро отслеживать небольшие изменения в уровнях тысяч различных генов или белков соответственно. Это не только позволяет отобрать гораздо больше потенциальных молекулярных кандидатов, но и идентифицировать характерные молекулярные профили (например,г. кластеры экспрессии генов или «отпечатки пальцев» цитокинов), а не отдельные биомаркеры. Эта стратегия может быть особенно актуальна в области имплантации, потому что задействовано множество факторов, многие из которых имеют несколько функций, и потенциально существует большое количество избыточности.

Целью этого обзора является описание современного понимания имплантации у человека, а также описание и критика инструментов, доступных в настоящее время для изучения преимплантационного эмбриона человека, восприимчивости эндометрия и диалога между эмбрионом и маткой.Кроме того, в этом обзоре будут определены ключевые области исследований и методологии имплантации, на которых необходимо сосредоточить усилия в будущем.

Имплантация

На основании исследований на макаках-резусах считается, что имплантация человека включает ряд различных стадий (Enders et al. , 1986). Перед имплантацией бластоциста демонстрирует признаки полярности, принимая определенную ориентацию по мере приближения к эндометрию. Как только бластоциста ориентирована правильно (сопоставление), блестящая оболочка отслаивается.Затем бластоциста вступает в контакт с эпителиальным слоем и прилипает к поверхности эндометрия (адгезия). Наконец, бластоциста проникает через эпителиальный слой и вторгается в строму (инвазия).

Успешная имплантация требует своевременного прибытия жизнеспособной бластоцисты в рецептивный эндометрий. Эндометрий ремоделируется на протяжении всего менструального цикла и демонстрирует лишь короткий период восприимчивости, известный как «имплантационное окно». У человека во время естественного цикла эмбрион попадает в полость матки примерно через 4 дня после овуляции (Croxatto et al., 1978). Эндометрий становится восприимчивым к имплантации бластоцисты через 6-8 дней после овуляции и остается восприимчивым в течение примерно 4 дней (20-24 дни цикла) (Bergh and Navot, 1992). Важность среды эндометрия подчеркивается наблюдением, что высококачественные эмбрионы, пересаженные женщинам, участвующим в качестве реципиентов эмбрионов в процедуре суррогатного материнства, имеют более высокую вероятность имплантации, чем если бы они были перенесены обратно женщинам-донорам (Check et al. , 1992; Стаффорд-Белл и Коупленд, 2001).Плохое качество эмбриона также было определено как основная причина неудачи имплантации (Urman et al. , 2005).

Очевидно, что для повышения частоты имплантации в стимулированных циклах важно найти способы точно определить окно имплантации, обеспечить выбор лучшего эмбриона и синхронизировать перенос эмбриона со временем оптимальной рецептивности эндометрия. Важно, чтобы были идентифицированы способы оценки и повышения рецептивности эндометрия и качества эмбрионов без нарушения самого деликатного процесса имплантации.

Имплантация у человека контролируется сложным взаимодействием между эмбрионом и эндометрием, которое начинается на ранних стадиях созревания ооцита (Emiliani et al. , 2005). Этот диалог обеспечивает синхронное развитие ооцита и созревание эндометрия с последующей ориентацией эмбриона, аппозицией, адгезией и инвазией эндометрия бластоцистой (Enders et al. , 1986). Понимая активность и функцию гормонов и факторов, участвующих в этом диалоге, можно использовать их в качестве предикторов рецептивности эндометрия или качества эмбриона, чтобы максимизировать частоту имплантации в циклах гормонально-стимулированной ВРТ.

Эпидемиология

В большинстве спонтанных зачатий у людей не удается завершить имплантацию и добиться продолжающейся беременности. Данные программ донорства спермы показали, что максимальная вероятность успешной имплантации в оптимальных условиях составляет примерно 40% за цикл, и этот показатель снижается с возрастом (Ferrara et al. , 2002; Achard et al. , 2005). . Доля человеческих зачатий, которые не могут быть имплантированы, остается неопределенной, поскольку данные ограничены.Больше известно о судьбе эмбриона после имплантации. Используя маркеры ранней беременности, такие как хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), было продемонстрировано, что одна треть постимплантационных потерь беременности на ранних сроках приходится на доклинические стадии беременности у фертильных женщин (Wilcox et al. , 1999). Ситуация еще хуже для реципиентов в программах донорства яйцеклеток или для пациенток, перенесших ЭКО, у которых показатели потери беременности на ранних сроках достигают 37 и 48% соответственно (Simon et al. , 1999а).

Сообщалось о высокой частоте хромосомных аномалий у эмбрионов человека (Munne, 2001), и значительная часть невынашивания беременности вызвана числовыми или структурными хромосомными аномалиями (Hasseld et al. , 1980). Частота эмбриональных генетических аномалий увеличивается с возрастом матери (Hasseld et al. , 1980) и выше среди бесплодных пар, чем в общей популяции (Munne, 2001). Таким образом, считается, что генетические аномалии являются основным фактором, способствующим неудаче имплантации при ВРТ.Пациентки, подвергающиеся процедурам ВРТ, часто возлагают нереально высокие надежды на беременность (Peddie et al. , 2005), и это может быть связано с отсутствием осведомленности о низкой частоте имплантации, наблюдаемой в естественных циклах.

Морфология и клеточный состав эндометрия

Эндометрий представляет собой многослойный динамичный орган, покрывающий миометрий и состоящий из функционального слоя и базального слоя. Каждый месяц клетки функционального слоя отделяются от базального слоя во время менструации.Базальный слой прикрепляется к миометрию и остается интактным во время менструации, служа основой для регенерации эндометрия. Эндометрий состоит из нескольких различных типов клеток, включая люминальные и железистые эпителиальные клетки, строму со стромальными фибробластическими клетками, иммунокомпетентные клетки и кровеносные сосуды. Количество, активность, структура и функция этих клеток меняются на протяжении менструального цикла и снова меняются во время беременности.

В начале 1950-х Нойес и его коллеги (Нойес и др., 1950; Noyes and Haman, 1953) исследовали гистологические особенности биоптатов эндометрия, взятых в течение 8000 спонтанных циклов у 300 женщин. Связав гистологические изменения с естественными изменениями базальной температуры тела, они смогли связать различные гистологические паттерны с определенными временными точками во время менструального цикла. Критерии датирования эндометрия, полученные в результате этой работы, с тех пор остаются золотым стандартом для оценки реактивности эндометрия и выявления аномалий эндометрия.

Известно, что биопсия эндометрия нарушает нормальную анатомическую слоистость. Биоптаты могут содержать различные части слоев эндометрия, фрагменты нижнего сегмента матки и различное количество желез или стромы. Тем не менее, по сравнению с другими методами биопсии, анализ образцов с использованием метода Нойеса обычно позволяет оценить клеточную архитектуру. Другие ключевые преимущества метода Нойеса заключаются в том, что он позволяет проводить дифференциальный компонентный анализ и оценивать как морфологию, так и функцию клеток (таблица 1) (Bourgain et al., 1994).

Таблица 1:

Преимущества и недостатки морфологических и иммуногистохимических оценок рецептивности эндометрия

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	Субъективная интерпретация (высокая внутриобсервера)
широко используется и принято	Анализ снимок
Архитектура Сохранена	Образец смещения
предоставляет информацию о морфологии и функции	Плохая межцикловая ассоциация
Анализ дифференциальных компонентов	Не учитывается взаимодействие эмбрионов

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	Субъективная интерпретация (высокая внутриобсервера)
широко используется и принято	Анализ снимок
Архитектура Сохранена	Образец смещения
предоставляет информацию о морфологии и функции	Интер-циклический ассоциация бедных
анализ дифференциальных компонентов	игнорирует взаимодействие эмбриона

Таблица 1:

Прочность и ограничения морфологической и иммуногистохимии оценки рецептивности эндометрия

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	Субъективная интерпретация (высокая внутриобсервера)
широко используется и принято	Анализ снимок
Архитектура Сохранена	Образец смещения
предоставляет информацию о морфологии и функции	Плохая межцикловая ассоциация
Анализ дифференциальных компонентов	Не учитывается взаимодействие эмбрионов

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	Субъективная интерпретация (высокая внутриобсервера)
широко используется и принято	Анализ снимок
Архитектура Сохранена	Образец смещения
предоставляет информацию о морфологии и функции	Плохая межцикловая ассоциация
Дифференциальный компонентный анализ	Игнорирование взаимодействия эмбрионов

Помимо этих преимуществ, в подходе Нойеса был выявлен ряд недостатков.Биопсия может дать только моментальный снимок реальной ситуации в эндометрии, и систематическая ошибка выборки неизбежна, поскольку она неприменима для взятия большого количества образцов. Гистологическая интерпретация по своей природе субъективна, вариабельность как внутри, так и между наблюдателями высока, и было показано, что вариабельность внутри наблюдателей является самой высокой среди бесплодных женщин во время окна имплантации (коэффициент внутриклассовой корреляции = 0,65) (Murray et al. , 2004; Myers et и др. , 2004).Изменчивость также возникает из-за различий между женщинами и различий между циклами у одной и той же женщины (Murray et al. , 2004). Кроме того, стимуляция яичников в искусственных циклах может привести к различиям во времени созревания эндометрия по сравнению с естественными циклами (Papanikolaou et al. , 2005).

Вопрос о сроках, основанный на датировании эндометрия, имеет решающее значение (рис. 1). В течение 2-х суток после овуляции морфологические особенности эндометрия существенно не изменяются.Поэтому в датировку эндометрия для биопсий, взятых в этот период, вносится ошибка в 2 дня. Аналогичная ситуация очевидна для биопсий, взятых в середине лютеиновой фазы, когда отсутствуют положительные морфологические критерии в течение 4–5 дней (отек стромы — единственный признак, который существенно меняется в этот период). Ясно, что необходимы более строгие критерии для повышения точности определения времени при датировании эндометрия.

Рисунок 1:

График, иллюстрирующий метод Noyes для датирования эндометрия, который подчеркивает неопределенность во времени, возникающую в постовуляторный период, в середине лютеиновой фазы и при измерении выброса ЛГ.Распределение во времени многих наблюдаемых изменений слишком размыто, чтобы можно было точно датировать эндометрий, например, 2 дня постовуляторного периода и 4–5 дней средней лютеиновой фазы

Рисунок 1:

График, иллюстрирующий Метод Noyes для датирования эндометрия, который подчеркивает неопределенность во времени, возникающую в постовуляторный период, в середине лютеиновой фазы и путем измерения всплеска ЛГ. Распределение во времени многих наблюдаемых изменений слишком размыто, чтобы можно было точно датировать эндометрий, например, 2 дня постовуляторного периода и 4–5 дней средней лютеиновой фазы

Использование всплеска лютеинизирующего гормона (ЛГ) для прогнозирования овуляция является одним из подходов, которые были исследованы, хотя по-прежнему остается некоторая неопределенность в отношении времени, поскольку всплеск ЛГ происходит в течение 30 часов (Acosta et al. , 2000). Электронная микроскопия позволяет исследовать ультраструктуры эндометрия, присутствующие во время имплантационного окна, такие как пиноподы и ядрышковые каналы, которые могут оказаться полезными маркерами рецептивности эндометрия (Bentin-Ley et al. , 1999; Isaac et al. , 2001). . Методы, связывающие морфологию и функцию (например, иммуногистохимия, молекулярные маркеры), могут помочь повысить точность датирования эндометрия. К сожалению, иммуногистохимия страдает от тех же проблем, что и морфологическая оценка.Кроме того, наиболее многообещающие молекулярные кандидаты в качестве маркеров имплантационного окна до сих пор не сработали в качестве предикторов состояния эндометрия (Acosta et al. , 2000). Однако другие маркеры могут быть более эффективными (например, муцин (MUC-1), интегрины) (Lessey et al. , 1996; DeLoia et al. , 1998). В будущем микродиссекция с лазерным захватом может быть объединена с анализом экспрессии генов, что станет еще одним полезным инструментом, который можно будет использовать для установления связи между морфологией и функцией эндометрия (Yanaihara et al. , 2004).

Еще одно важное соображение при использовании датирования эндометрия заключается в том, что оно не учитывает статус эмбриона. Обеспечение восприимчивости эндометрия мало что дает, если внедряется некачественный эмбрион. Поэтому для обеспечения оптимальных условий для имплантации датирование эндометрия не следует использовать изолированно, а следует сочетать с другими методами, позволяющими получить информацию о качестве эмбриона.

Эндокринологические аспекты

Прогестерон и эстроген являются доминирующими гормональными модуляторами развития эндометрия.Эстроген яичников и прогестерон обуславливают подготовку матки к имплантации, а знание точного временного действия этих гормонов в течение менструального цикла позволило разработать контрацепцию на основе гормонов. Как эпителиальные, так и стромальные компартменты экспрессируют рецепторы прогестерона и эстрогена, и ответ зависит от уровней этих рецепторов, а также от концентрации самих гормонов. Взаимодействие прогестерона и эстрогена с рецепторами эстрогена (ER) во время развития эндометрия показано на рис.2 . В последние годы было достигнуто лучшее понимание типов задействованных рецепторов (ERα, ERβ, PRA, PRB) и динамики экспрессии рецепторов (рис. 3) (Cooke et al. , 1997; Mote ). и др. , 1999). Очевидно, что соответствующий циклический паттерн экспрессии рецепторов имеет решающее значение для достижения рецептивности эндометрия и успешной имплантации (Lessey, 2003; Ma et al. , 2003).

Рисунок 2:

Роли прогестерона и эстрогена (E ₂ ; E ₃ , эстроол) и эстрогенные рецепторы (ER) во время развития эндометрия

Рисунок 2:

Роли прогестерона и эстроген (E ₂ ; E ₃ , эстриол) и эстрогеновые рецепторы (ER) во время развития эндометрия

Рисунок 3:

Изменения экспрессии рецепторов прогестерона (PRA, PRB) в клетках железистого эпителия и стромальных клетках в разные фазы менструального цикла. Адаптировано с разрешения Mote et al. (1999)

Рисунок 3:

Изменения экспрессии рецепторов прогестерона (PRA, PRB) в клетках железистого эпителия и стромальных клетках в разные фазы менструального цикла. Адаптировано с разрешения Mote et al. (1999)

Хотя прогестерон и эстроген являются ключевыми модуляторами созревания эндометрия, их роль в этом процессе сложна и изощренна (Punyadeera et al., 2003). Гормональная активность зависит не только от уровней прогестерона, эстрогена и их рецепторов, но также от скорости метаболизма прогестерона и эстрогена (например, активация ферментов, которые превращают эстрадиол (E ₂ ) в эстрон или сульфат эстрона или удаляют сульфат из E ₂ и эстрона) (Punyadeera et al. , 2003). На активность прогестерона и эстрогена также влияют эффекты коактиваторов и репрессоров (Punyadeera et al., 2003). Более того, оба гормона регулируют экспрессию многочисленных эндометриальных белков (паракринная передача сигналов) (Cooke et al. , 1997).

Помимо прогестерона и эстрогена, известно, что ряд других эндокринологических факторов опосредуют функцию эндометрия (Kodaman and Taylor, 2004). Считается, что у грызунов простагландины (PG) способствуют повышению проницаемости сосудов во время имплантации (Kennedy, 1979), а ферменты, участвующие в продукции PG (COX-1 и COX-2), демонстрировали циклические изменения в экспрессии (Chakraborty et al., 1996; Дас и др. , 1999). Считается, что ХГЧ оказывает прямое воздействие на эндометрий, а также опосредует перекрестные связи между эмбрионом и эндометрием через рецепторы хорионического гонадотропина, присутствующие на эпителиальных клетках (Srisuparp et al. , 2003). Влияние андрогенов на женский репродуктивный цикл часто упускается из виду. Однако рецепторы андрогенов присутствуют на стромальных и эпителиальных клетках эндометрия, и как андростендион, так и тестостерон вызывают изменения в функции эндометрия, которые могут быть важны во время имплантации (Kodaman and Taylor, 2004).

Эндометриальные модуляторы имплантации

Эндометриальные факторы являются важными медиаторами всех фаз процесса имплантации (рис. 4). Как только эмбрион достигает матки, первыми клетками, с которыми он сталкивается, являются эпителиальные клетки эндометрия. Эти клетки выделяют в просвет матки ряд факторов, которые могут влиять на прикрепление эмбриона, а также на дальнейшее развитие ранней плаценты и эмбриона. Тем не менее, точная роль отдельных факторов, а также вовлеченных молекулярных взаимодействий в основном не выяснена для человека, и текущее понимание этих процессов проистекает в основном из исследований на грызунах (рассмотрено в Dimitriadis et al., 2005; Трангуч и др. , 2005; Ван и Дей, 2005 г.).

Рисунок 4:

Рисунок 4:

У людей одним из факторов, вызывающих особый интерес, является фактор ингибирования лейкемии (LIF), представляющий собой цитокин интерлейкина (IL)-6, экспрессируемый в эпителиальных клетках эндометрия в соответствующее время, в течение которого рецепторы присутствуют на преимплантационных эмбрионах. Исследования на мышах показывают, что LIF играет роль в имплантации и может также способствовать эмбриональному развитию.Наблюдательные исследования на людях предполагают возможную роль LIF в организме человека (Robb et al. , 2002; Dimitriadis et al. , 2005). Действительно, бесплодие у некоторых женщин было связано с нарушением регуляции LIF, а также IL-11, который таким же образом вырабатывается эндометриальными железами во время рецептивной фазы (Dimitriadis et al. , 2006). Тем не менее, важность LIF в имплантации все еще обсуждается, поскольку многообещающие результаты на животных моделях не удалось применить к людям (Kimber, 2005).

Эмбриональные факторы и влияние ВРТ

С усилением тенденции к переносу одного эмбриона при ВРТ (Vilska et al. , 1999; Hamberger et al. , 2005) выбор жизнеспособных эмбрионов становится все более и более важным. Морфологическая оценка в настоящее время является стандартным инструментом для отбора эмбрионов в ВРТ (Таблица 2) (Борини и др. , 2004). За прошедшие годы, с улучшением понимания эмбрионального развития и прогрессом в методах культивирования in vitro , стадия развития, на которой эмбрион может быть перенесен, стала более продвинутой, и соответственно эволюционировали критерии отбора эмбрионов.Однако не существует единого метода отбора эмбрионов, при этом некоторые группы отбирают эмбрионы на стадии бластоцисты, а другие все еще выбирают отбор на стадии 2PN или стадии дробления (De Neubourg et al. , 2002). Кроме того, признано, что морфологическая оценка качества эмбрионов все еще очень субъективна, и поэтому в настоящее время изучается ряд альтернативных подходов, таких как оценка среды культивирования эмбрионов для определения поглощения питательных веществ или секреции метаболитов (Sakkas and Gardner, 2005). ).

Таблица 2:

Преимущества и недостатки морфологических оценок жизнеспособности эмбрионов

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	субъективный подход
широко используемый и принятый	Не существует консенсуса на сроках отбора (2PN против сцены расщепления против Blastocyst)
неинвазивных	критериев отбора пока не может гарантировать перенос эмбриона с потенциалом развития

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	субъективный подход
широко используемый и принятый	Не существует консенсуса на сроках отбора (2PN против сцены расщепления против Blastocyst)
неинвазивных	критериев отбора еще не может гарантировать перенос эмбриона с потенциалом развития

. Ограничения . Установленная техника субъективный подход широко используемый и принятый Не существует консенсуса на сроках отбора (2PN против сцены расщепления против Blastocyst) неинвазивных критериев отбора пока не может гарантировать перенос эмбриона с потенциалом развития

Преимущества .	Ограничения .
Установленная техника	субъективный подход
широко используемый и принятый	Не существует консенсуса на сроках отбора (2PN против сцены расщепления против Blastocyst)
неинвазивных	критериев отбора еще не может гарантировать перенос эмбриона с потенциалом развития

Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) изначально была разработана как тест перед зачатием для пар с генетическими нарушениями, у которых был риск рождения ребенка с этим заболеванием (Thornhill et al. ., 2005). Однако в последнее время этот метод широко используется в контексте оптимизации результатов ЭКО у бесплодных пациентов, не являющихся носителями наследственного заболевания (Sermon et al. , 2007). Хромосомный анализ гамет и эмбрионов человека показал, что хромосомные аберрации встречаются с высокой частотой у ранних преимплантационных эмбрионов. Преимплантационный генетический скрининг (ПГС) позволяет тестировать гаметы и эмбрионы на числовые хромосомные аберрации, обычно встречающиеся при невынашивании беременности на ранних сроках, с целью замещения только эуплоидных эмбрионов и повышения частоты наступления беременности после ЭКО в группах женщин с низкими показателями успешности ЭКО (Munné). , 2003; Верлинский и др., 2004; Каглар и др. , 2005; Кернс и др. , 2005). Генетический анализ можно проводить на полярных тельцах, извлеченных из ооцита до оплодотворения (первое полярное тельце) и/или после оплодотворения (второе полярное тельце) (Verlinsky et al. , 2001). На более поздних стадиях генетическое тестирование можно проводить на одном или двух бластомерах эмбриона на стадии дробления (3-й день) или на трофэктодермальной ткани бластоцисты (5-й день) (Staessen et al. , 2004; McArthur et al., 2005). Хотя появляются данные клинических исследований, посвященных изучению применения ПГС в эмбрионах и бластоцистах на стадии дробления (Staessen et al. , 2004; McArthur et al. , 2005; Platteau et al. , 2005a, b; Twisk 9005). et al., , 2006), еще предстоит установить, уравновешиваются ли преимущества генетической селекции пагубным эффектом процедуры биопсии и удаления эмбриональных клеток соответственно. Кроме того, мозаицизм (наличие как анеуплоидных, так и эуплоидных клеток у эмбриона) обычно встречается у эмбрионов на стадии дробления, хотя клиническая значимость этого явления остается неясной (Bielanska et al., 2005; Баарт и др. , 2006).

Еще один ключевой вопрос в протоколах ВРТ, который все еще обсуждается, — это сроки переноса эмбрионов. В то время как в неотобранной популяции пациентов клиническая польза переноса на 5-й день (перенос бластоцисты) в отношении частоты живорождения и частоты многоплодной беременности не была показана (Blake et al. , 2005), у пациентов с хорошим прогноз (молодые пациенты, минимальное количество эмбрионов хорошего качества на 3-й день) перенос бластоцисты дает значительно более высокую частоту живорождения (Papanikolaou et al. , 2006а, б; Комитет по практике Американского общества репродуктивной медицины и Комитет по практике Общества вспомогательных репродуктивных технологий, 2006 г.). Перенос бластоцисты дает возможность выбрать морфологически наилучший эмбрион, в то время как было также показано, что бластоцисты хорошего качества имеют меньшую частоту анеуплоидии (рис. 5) (Staessen et al. , 2004).

Рисунок 5:

Связь между хромосомными аномалиями и стадией развития на ( A ) 3-й день или ( B ) 5-й день эмбрионального развития.Рисунок воспроизведен с разрешения Staessen et al. (2004)

Рисунок 5:

Связь между хромосомными аномалиями и стадией развития на ( A ) день 3 или ( B ) день 5 эмбрионального развития. Рисунок воспроизведен с разрешения Staessen et al. (2004)

Неспособность бластоцисты выйти из блестящей зоны была определена как потенциальная причина неудачи имплантации во время вспомогательных циклов, особенно у пожилых женщин (Seif et al. , 2006). Потенциальным решением этой проблемы является искусственное разрушение блестящей оболочки или вспомогательный хетчинг. Систематический обзор исследований, посвященных влиянию этого метода на зачатие, показал, что вспомогательный хетчинг значительно повышает частоту наступления беременности, но не оказывает влияния на показатели живорождения или самопроизвольных абортов, а показатели многоплодной беременности значительно увеличиваются (Seif et al. , 2006). К сожалению, было недостаточно данных для этого анализа, чтобы исследовать влияние вспомогательного хетчинга на ряд других важных исходов, таких как монозиготное двойникование, повреждение эмбриона, врожденные и хромосомные аномалии и развитие бластоцисты in vitro .

При оптимизации процедур ВРТ для максимально близкого воспроизведения природы важно помнить, что контролируемая стимуляция яичников сама по себе прерывает естественные физиологические процессы и может изменить ключевые параметры, такие как скорость эмбрионального развития, а также степень и сроки рецептивности эндометрия. . Искусственная стимуляция влияет на уровни прогестерона и эстрогена, соотношение между этими двумя гормонами и экспрессию их рецепторов в эндометрии (Beckers et al., 2000; Папаниколау и др. , 2005). Имеются данные о том, что супрафизиологические уровни стероидов нарушают лютеиновую фазу, и это верно даже тогда, когда стимуляция начинается в поздней фолликулярной фазе (Bourgain et al. , 1994; Ubaldi et al. , 1996; Macklon and Fauser, 2000a; Kolibianakis и др. , 2003). Следовательно, если лютеиновая фаза не дополняется, может произойти преждевременный лютеолиз, и беременность может не наступить (Beckers et al., 2000, 2003). В циклах ВРТ цель состоит в том, чтобы произвести несколько зрелых фолликулов, что приводит к повышенным уровням прогестерона и эстрогена по сравнению с естественными циклами, и это может вызвать изменения в эндометрии (Bourgain and Devroey, 2003), которые можно обнаружить с помощью стандартных гистологических методов. (Garcia et al. , 1984) и сканирующей электронной микроскопии (Kolb et al. , 1997).

Для преодоления некоторых эффектов, потенциально связанных с гормональной стимуляцией, были исследованы различные модифицированные протоколы стимуляции.Например, были изучены более мягкие режимы стимуляции, при которых гонадотропины вводились в меньшей дозе или позже в цикле, или при которых использовались антагонисты гонадотропин-рилизинг-гормона для подавления гипофиза (Macklon and Fauser, 2000b; Hohmann et al. ). , 2001, 2003). Раннее введение ХГЧ для окончательного созревания ооцитов (как только присутствуют три фолликула ≥17 мм) представляется полезным с точки зрения частоты наступления беременности, особенно при проведении переноса эмбрионов на 3-й день (Kolibianakis et al., 2005).

Модели животных и человека

Системы in vitro

Сам процесс имплантации никогда не наблюдался непосредственно in vivo у людей (Lee and DeMayo, 2004). Однако исследования на животных, прежде всего на грызунах, овцах и приматах, дали представление о гормональных и морфологических изменениях, которые могут произойти у женщин до и во время имплантации (Lee and DeMayo, 2004). Действительно, считается, что три стадии развития эндометрия, наблюдаемые у животных (нейтральность эндометрия, восприимчивость и рефрактерность), встречаются и у людей (Rogers, 1995).Признано, что разные виды демонстрируют широкий спектр механизмов, с помощью которых происходит имплантация (Ringler and Strauss, 1990), и, следовательно, разные животные могут больше подходить в качестве моделей для конкретных этапов процесса имплантации человека. Например, свиньи и овцы являются потенциальными кандидатами для изучения ранних стадий имплантации, поскольку они имеют расширенные фазы аппозиции и прикрепления (Lee and DeMayo, 2004). Наоборот, макаки и люди имеют сходные механизмы инвазии трофобласта и, следовательно, макаки являются подходящей моделью для изучения более поздних фаз имплантации (Lee and DeMayo, 2004).

Хотя информация о физиологии имплантации была получена из ряда различных животных моделей, текущее понимание этого процесса на молекулярном уровне в основном является результатом исследований на мышах (Lee and DeMayo, 2004). Однако механизмы имплантации у мышей и человека весьма различны. Во время имплантации у мышей люминальный эпителий образует инвагинацию, которая окружает трофобласт (эксцентрический механизм) и впоследствии удаляется в результате апоптоза, тогда как у людей трофобласт инвазирует строму, проникая в люминальный эпителий (интерстициальный механизм) (Wimsatt, 1975).

Исследования LIF показывают, как многообещающие результаты, полученные на мышах, привели к разочаровывающим результатам у людей. Целевые исследования мутагенеза на мышах четко установили важную роль LIF в имплантации мышей, что побудило к интенсивным исследованиям его роли у людей. Однако экспрессия LIF широко варьирует у людей, и хотя предполагаемые мутации LIF были идентифицированы (Giess et al. , 1999; Kralickova et al. , 2006), их функциональное значение неясно.Кроме того, низкие уровни LIF были связаны с более успешными программами ЭКО/переноса эмбрионов в некоторых исследованиях (Ledee-Bataille et al. , 2002), тогда как в других не было обнаружено никакой связи (Olivennes et al. , 2003). В совокупности эти данные ставят под сомнение существенную роль LIF в имплантации человека и являются поводом для размышлений о переносимости исследований на животных в биологию человека.

Этот вопрос переводимости имеет важное значение для будущих исследований, поскольку модели грызунов лучше всего подходят для проверки функциональной роли генов и белков.Следовательно, исследования на животных должны быть подтверждены с использованием альтернативных моделей in vivo , включая приматов, и систем in vitro , которые могут точно воспроизвести критические стадии процесса имплантации, до начала широкомасштабных клинических испытаний или разработки методов. для оценки рецептивности эндометрия или улучшения показателей имплантации. Чтобы удовлетворить эту потребность, было разработано несколько моделей in vitro с использованием систем культивирования клеток человека для изучения различных аспектов взаимодействия эмбриона и эндометрия.

Bentin-Ley и др. (1994) сконструировали сложную трехмерную систему культуры клеток эндометрия, содержащую стромальные клетки, встроенные в коллагеновую матрицу и отделенные от эпителиального монослоя материалом базальной мембраны («Матригель»: Becton and Dickinson Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США). Используя эту модель, они продемонстрировали, что человеческие бластоцисты предпочтительно прикрепляются к участкам, представляющим пиноподы, на поверхности эндометрия (Bentin-Ley et al. , 1999). Другая группа культивировала полную биопсию эндометрия верхнего функционального слоя эндометрия на коллагеновом геле (Landgren et al., 1996). Хотя они смогли наблюдать человеческую бластоцистную адгезию стромального слоя в этом «миниоргане», были признаки дегенерации ткани через 48 часов.

Саймон и др. разработали модели in vitro специально для изучения фаз аппозиции и адгезии при имплантации (Simon et al. , 1999b; Mercader et al. , 2003). В модели аппозиции эмбрионы, полученные после суперовуляции яичников и инсеминации (ЭКО или интрацитоплазматическая инъекция спермы), культивировали совместно с эпителиальными клетками эндометрия лютеиновой фазы.Результатом этой модели стала клиническая программа, в которой эмбрионы можно было совместно культивировать с эпителиальными клетками до стадии бластоцисты и переносить обратно к матери (Mercader et al. , 2003). Для модели адгезии была приготовлена ​​3D-культура, включающая эпителиальные и стромальные клетки, полученные из биоптатов эндометрия. Бластоцисты, культивированные на этих эпителиальных клетках эндометрия, прикрепленных к поверхности эпителия, могут быть иммунологически локализованы с помощью окрашивания анти-β-ХГЧ (Galan et al., 2000; Месегер и др. , 2001). Эти модели предоставили информацию о эмбриональной регуляции эпителиальных молекул эндометрия, таких как антиадгезионные молекулы (Meseguer et al. , 2001), белки цитоскелета (Martin et al. , 2000), хемокины (Dominguez et al. , 2003) и систему лептина (Cervero et al. , 2004) во время фаз присоединения и прилипания при имплантации человека.

Модель in vitro также была разработана для изучения процесса инвазии бластоцисты (Carver et al., 2003). Карвер и др. (2003) смогли наблюдать структурные и гормональные изменения, происходящие во время инвазии бластоцисты, с помощью покадровой фотографии, иммуноокрашивания и измерения уровней ХГЧ для вылупившихся бластоцист человека, совместно культивируемых с монослоями стромальных клеток эндометрия человека.

Молекулярные подходы

Достижения в области биотехнологии привели к разработке новых методов, позволяющих исследовать изменения в эндометрии и эмбрионе на молекулярном уровне. ДНК-микрочипы позволяют анализировать одновременную экспрессию тысяч генов в одном образце. Были разработаны биоинформационные инструменты, которые могут количественно определять и связывать такие молекулярные изменения (таблица 3). Эти геномные и протеомные методы использовались для изучения изменений, происходящих на протяжении всего цикла, изучения влияния искусственной стимуляции и определения закономерностей экспрессии генов в различных типах клеток.

Таблица 3:

Преимущества и недостатки измерения изменений в экспрессии белка или генов для оценки рецептивности эндометрия и/или жизнеспособности эмбриона

Преимущества .	Ограничения .
Объективный подход	Недоступен для многих групп (дорогой и высокий уровень технических навыков, необходимых для анализа и интерпретации результатов)
Предоставляет информацию о родственных группах молекул (кластерах)	Новая технология, методология необходимо стандартизировать
Большое количество информации, полученное за небольшой промежуток времени	Плохая воспроизводимость между экспериментами в разных группах
Может быть более репрезентативным для биологических фаз, чем морфологические методы	Правильная подготовка проб имеет важное значение и должны быть последовательными

Преимущества .	Ограничения .
Объективный подход	Недоступен для многих групп (дорогой и высокий уровень технических навыков, необходимых для анализа и интерпретации результатов)
Предоставляет информацию о родственных группах молекул (кластерах)	Новая технология, методология необходимо стандартизировать
Большое количество информации, полученное за небольшой промежуток времени	Плохая воспроизводимость между экспериментами в разных группах
Может быть более репрезентативным для биологических фаз, чем морфологические методы	Правильная подготовка проб важна и должны быть последовательными

Таблица 3:

Преимущества и недостатки измерения изменений в экспрессии белков или генов для оценки рецептивности эндометрия и/или жизнеспособности эмбрионов

Преимущества .	Ограничения .
Объективный подход	Недоступен для многих групп (дорогой и высокий уровень технических навыков, необходимых для анализа и интерпретации результатов)
Предоставляет информацию о родственных группах молекул (кластерах)	Новая технология, методология необходимо стандартизировать
Большое количество информации, полученное за небольшой промежуток времени	Плохая воспроизводимость между экспериментами в разных группах
Может быть более репрезентативным для биологических фаз, чем морфологические методы	Правильная подготовка проб имеет важное значение и должны быть последовательными

Преимущества .	Ограничения .
Объективный подход	Недоступен для многих групп (дорогой и высокий уровень технических навыков, необходимых для анализа и интерпретации результатов)
Предоставляет информацию о родственных группах молекул (кластерах)	Новая технология, методология необходимо стандартизировать
Большое количество информации, полученное за небольшой промежуток времени	Плохая воспроизводимость между экспериментами в разных группах
Может быть более репрезентативным для биологических фаз, чем морфологические методы	Правильная подготовка проб имеет важное значение и должны быть постоянными

Было показано, что экспрессия многих генов эндометрия изменяется в течение менструального цикла (Ponnampalam et al. , 2004; Талби и др. , 2006). Однако некоторые из этих паттернов экспрессии, по-видимому, не связаны с гистопатологическими изменениями, происходящими в эндометрии (Ponnampalam et al. , 2004). Возможно, экспрессия генов может быть лучшим маркером биологических фаз и может быть более надежным предиктором рецептивности эндометрия, чем морфология.

На сегодняшний день в пяти исследованиях изучались изменения в экспрессии генов эндометрия во время рецептивной фазы, и во всех сообщалось о наличии генов, которые сильно активируются или подавляются, когда эндометрий восприимчив (Carson et al., 2002; Као и др. , 2002; Бортвик и др. , 2003; Рисевийк и др. , 2003; Миркин и др. , 2005). Одним поразительным наблюдением является то, что только один ген (остеопонтин) по-разному экспрессировался (активировался) во всех пяти из этих исследований (Carson et al. , 2002; Kao et al. , 2002; Borthwick et al. , 2003; Riesewijk и др. , 2003; Mirkin и др. , 2005).Расходящиеся результаты разных исследований объясняются различиями в дизайне исследований и программном обеспечении/статистике, использованных при анализе данных (Riesewijk et al. , 2003). Это открытие подчеркивает необходимость стандартизации методологии, если необходимо сделать значимые выводы из геномных и протеомных исследований.

Исследования на микрочипах, сравнивающие естественные и стимулированные циклы, показывают, что контролируемая стимуляция яичников оказывает глубокое влияние на экспрессию генов эндометрия во время окна имплантации (7 дней после всплеска ЛГ по сравнению с 2 днями; рис.6) (Horcajadas et al. , 2005; Simon et al. , 2005). Более 200 генов по-разному экспрессировались в циклах стимуляции (Horcajadas et al. , 2005), а характер экспрессии зависел от типа используемого протокола подавления (агонист или антагонист) (Simon et al. , 2005). . В исследованиях также изучались изменения экспрессии генов в клетках эндометрия человека in vitro во время децидуализации (Popovici et al., 2000; Брар и др. , 2001; Тирни и др. , 2003), в ответ на введение прогестерона (Okada et al. , 2003) или в биоптатах эндометрия, взятых в разные фазы менструального цикла (Ponnampalam et al. , 2004; Punyadeera et al. ,6). ; Talbi и др. , 2006).

Рисунок 6:

Анализ основных компонентов (PCA) экспрессии генов эндометрия, показывающий кластеризацию образцов из ( A ) 2 и 7 дней после всплеска ЛГ или ( B ) естественных и стимулированных циклов.Адаптировано с разрешения Riesewijk et al. (2003) и Horcajadas et al. (2005)

Рисунок 6:

Анализ основных компонентов (PCA) экспрессии генов эндометрия, показывающий кластеризацию образцов из ( A ) 2 по сравнению с 7 днями после всплеска ЛГ или ( B ) естественного по сравнению со стимулированным циклы. Адаптировано с разрешения Riesewijk et al. (2003) и Horcajadas et al. (2005)

Микродиссекция с лазерным захватом в сочетании с анализом экспрессии генов позволяет точно сравнивать паттерны экспрессии генов между различными типами клеток одной и той же ткани.На сегодняшний день в одном исследовании этот метод использовался для изучения различий в нормальных тканях человеческого эндометрия и в секреторной фазе (Yanaihara et al. , 2004). Было обнаружено, что в общей сложности 28 генов по-разному экспрессируются в эпителиальных и стромальных клетках, и ряд этих генов обладает известными иммунологическими функциями (Yanaihara et al. , 2004).

Наряду с технологиями массивов, используемыми для изучения экспрессии генов, также разрабатываются методы для изучения протеомных изменений, происходящих во время имплантации.Аспирация эндометриального секрета является одним из таких подходов и позволяет измерять изменения белка в просвете матки во время циклов лечения (van der Gaast et al. , 2003). Ключевым преимуществом этого подхода является то, что сама техника не оказывает неблагоприятного воздействия на имплантацию (van der Gaast et al. , 2003). Однако важно отметить, что аспирация секрета может содержать клеточные загрязнения, такие как лейкоциты, стромальные клетки или эпителиальные клетки, которые необходимо удалить перед анализом или принять во внимание при интерпретации результатов.

Помимо изучения молекулярных изменений, происходящих в эндометрии, одинаково важно проводить молекулярные исследования ооцитов и эмбрионов, но, к сожалению, их было немного (Neilson et al. , 2000; Stanton et al. , 2002; Dobson и др. , 2004; Katz-Jaffe и др. , 2006). В двух из этих исследований изучалась дифференциальная экспрессия генов или белков у эмбрионов человека (Dobson et al. , 2004; Katz-Jaffe et al., 2006). Добсон и др. (2004) охарактеризовали глобальные изменения в экспрессии генов в течение первых 3 дней эмбрионального развития и обнаружили, что эмбриональные программы транскрипции уже устанавливаются в течение 3 дней после оплодотворения. Katz-Jaffe и др. (2006) изучали изменения в протеоме отдельных бластоцист человека и наблюдали характерные профили экспрессии, связанные с изменениями морфологии или дегенерацией эмбрионов. Такие исследования могли бы выявить молекулярные сигнатуры, которые соответствуют высококачественным гаметам и эмбрионам, и, что более важно, идентифицировать секретируемые молекулы-кандидаты, которые можно было бы неинвазивно оценить на предмет связи с успехом имплантации.Однако при оценке ооцитов и эмбрионов можно получить гораздо меньшее количество материала по сравнению с образцами эндометрия. Чем меньше клеток удаляется из эмбриона (или бластоцисты), тем меньше вероятность разрушения. Поэтому требуются высокоточные методы амплификации и детектирования.

Исследователи из Serono International SA (Женева, Швейцария) приступили к разработке инструментов и стратегии, позволяющих осуществлять отбор эмбрионов на молекулярной основе (рис.  7 ). Используя этот подход, амплификация РНК из одного бластомера обеспечивает достаточное количество амплифицированной РНК для анализа микрочипов. Экспрессия более 8300 генов была обнаружена у эмбрионов человека на 3-й день, и для подтверждения экспрессии этих генов проводится иммуноферментный анализ (ELISA). Параллельно обнаружение белков, продуцируемых эмбрионами в культуре, с использованием массивов антител или ELISA обеспечивало достаточную чувствительность для идентификации секретируемых белков из одного эмбриона с возможностью оценки качества эмбрионов на 3-й день культивирования. Наконец, дактилоскопия ДНК эмбрионов из биопсии одиночного бластомера, а затем амниоцитов и клеток пуповины плода позволит сопоставить геномные и протеомные профили с успешно развивающимся эмбрионом.Как анализ микросателлитной ДНК (короткий тандемный повтор), так и анализ однонуклеотидного полиморфизма (SNP) продемонстрировали ранний потенциал для использования с одной клеткой.

Рисунок 7:

Разрабатывается молекулярный подход для улучшения фенотипической селекции человеческих эмбрионов для переноса с использованием геномных и протеомных инструментов. Также представлены некоторые исходные данные из подходов «прямо к протеомике» и «геномно к протеомике». РНК, рибонуклеиновая кислота; STR, полиморфизм коротких тандемных повторов

Рисунок 7:

Разрабатывается молекулярный подход для улучшения фенотипического отбора человеческих эмбрионов для переноса с использованием геномных и протеомных инструментов.Также представлены некоторые исходные данные из подходов «прямо к протеомике» и «геномно к протеомике». РНК, рибонуклеиновая кислота; STR, полиморфизм коротких тандемных повторов

Выходя за рамки геномики и протеомики, метаболические профили, а также профили эмбриональных сигнальных молекул могут использоваться в качестве предикторов потенциала развития («метаболомика»). Однако на сегодняшний день большая часть данных о метаболизме эмбрионов получена в результате исследований на грызунах и нуждается в оценке на людях.

Путь вперед

Исследования

на животных и экспериментов in vitro улучшили понимание гормональных и морфологических изменений, происходящих во время имплантации в естественных циклах. Кроме того, были идентифицированы многочисленные паракринные факторы, которые опосредуют процессы имплантации, и следующим шагом было бы связать эту информацию с эндокринологией и морфологией. Также ясно, что стимулированные циклы ведут себя иначе, чем естественные циклы, поэтому установление этих различий с точки зрения как эндометрия, так и эмбриона является еще одной важной областью будущих исследований.

Современные морфологические маркеры рецептивности эндометрия являются плохими предикторами беременности.Следовательно, существует потребность в неразрушающих in vivo методах изучения рецептивности эндометрия и самого процесса имплантации, особенно у тех женщин, у которых наступила беременность. Аспирация эндометриальной секреции может быть одним из подходов к решению этой проблемы, при условии, что аспирация не влияет на частоту имплантации (van der Gaast et al. , 2003).

В прошлом для улучшения отбора эмбрионов основное внимание уделялось морфологическим критериям и обнаружению хромосомных аномалий. Однако, хотя хромосомные аномалии могут быть причиной значительной части неудач имплантации, они не являются причиной всех из них. Таким образом, были бы полезны исследования, в которых изучались бы причины неудач имплантации, особенно у пожилых женщин с высоким уровнем хромосомных аномалий. В идеале следует использовать перенос одного эмбриона, хотя политика переноса одного эмбриона может быть неэтичной для этой конкретной группы пациентов.

Новые молекулярные методы становятся доступными для измерения как эмбриональных, так и эндометриальных изменений до и во время имплантации.Однако эти подходы все еще находятся в зачаточном состоянии, и хотя они обещают многообещающие результаты, важно, чтобы стандартизированные методы работы были разработаны на ранней стадии. В конечном счете, цель состоит в том, чтобы использовать эти инструменты для увеличения числа имплантаций в искусственных циклах и, следовательно, для повышения показателей живорождения.

Приложение

Группа семинаров по современной репродуктивной медицине Evian

Вероника Алам (Serono International SA, Женева, Швейцария), Пол Бишоф (Женевский университет, Женева, Швейцария), Клэр Бурген (Университетская больница, нидерландскоязычный Брюссельский свободный университет, Брюссель, Бельгия), Пол Деврой (Центр репродуктивной медицины , голландскоязычный Брюссельский свободный университет), Клаус Дидрих (Университетская клиника земли Шлезвиг-Гольштейн, Любек, Германия), Ализа Эшколь (Serono International SA), Барт Фаузер (Университетский медицинский центр, Утрехт, Нидерланды), Георг Гризингер (Университетская клиника земли Шлезвиг-Гольштейн), Кристоф Кек (Serono International SA), Ник Маклон (Университетский медицинский центр, Утрехт, Нидерланды), Стив Палмер (Институт репродуктивной биологии Сероно, Рокленд, Массачусетс, США), Эвангелос Папаниколау (AZ-VUB, Центр репродуктивной медицины, Брюссель, Бельгия), Лоис Саламонсен (Институт медицинских исследований принца Генри, Мельбурн, Австралия), Гамаль Серур (Египетский центр ЭКО-ЭТ, Каир, Египет), Карлос Симон (Университет Валенсии) y, Валенсия, Испания), Кэтрин Стаессен (университетская больница, нидерландскоязычный Брюссельский свободный университет) и Джером Ф. Strauss III (Медицинский факультет Университета Содружества Вирджинии, Ричмонд, Вирджиния, США).

Семинар Evian по современной репродуктивной медицине был проведен в феврале 2006 г. Семинар и подготовка данной рукописи спонсировались Serono International SA, Женева, Швейцария.

Каталожные номера

,  ,  ,  ,  ,  .

Оптимизация искусственного осеменения донорской спермой: четырехлетний опыт

,

Gynecol Obstet Fertil

,

2005

, том.

33

 (стр. 

877

—

883

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Датирование эндометрия и определение окна имплантации у здоровых фертильных женщин

,

Fertil Steril

,

2000

, том.

73

 (стр. 

788

—

798

),  ,  ,  ,  .

Вспомогательные репродуктивные технологии в Европе, 2001 г. Результаты, полученные из европейских регистров ESHRE

,

Hum Reprod

,

2005

, vol.

20

 (стр.

1158

—

1176

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Преимплантационный генетический скрининг выявил высокую частоту анеуплоидии и мозаицизма у эмбрионов молодых женщин, перенесших ЭКО.

21

 (стр. 

223

—

233

),  ,  ,  .

Характеристики фолликулярной и лютеиновой фаз после раннего прекращения приема агонистов гонадотропин-высвобождающего гормона во время стимуляции яичников для экстракорпорального оплодотворения

15

 (стр. 

43

—

49

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Характеристики лютеиновой фазы без добавок после введения рекомбинантного человеческого хорионического гонадотропина, рекомбинантного лютеинизирующего гормона или агониста гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ) для индукции окончательного созревания ооцитов у пациенток с экстракорпоральным оплодотворением после стимуляции яичников рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном и антагонистом ГнРГ одновременно

,

J Clin Endocrinol Metab

,

2003

, vol.

88

 (стр. 

4186

—

4192

),  ,  ,  ,  ,  .

Выделение и культивирование клеток эндометрия человека в системе трехмерного культивирования

,

J Reprod Fertil

,

1994

, vol.

101

 (стр. 

327

—

332

),  ,  ,  ,  ,  .

Наличие пиноподов матки на границе эмбрион-эндометрий во время имплантации человеку in vitro

,

Hum Reprod

,

1999

, том

14

 (стр. 

515

—

520

),  .

Влияние эмбрионального развития и зрелости эндометрия на сроки имплантации

58

 (стр. 

537

—

542

),  ,  ,  ,  .

Диплоидно-анеуплоидный мозаицизм у эмбрионов человека, культивируемых до стадии бластоцисты

84

 (стр. 

336

—

342

),  ,  ,  .

Сравнение стадии дробления и переноса эмбрионов на стадии бластоцисты при искусственном оплодотворении

Достижения в области искусственных репродуктивных технологий для оптимизации качества эмбрионов

,

Ann NY Acad Sci

,

2004

, vol.

1034

 (стр. 

252

—

261

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Определение профиля транскриптов эндометрия человека

,

Mol Hum Reprod

,

2003

, vol.

9

 (стр. 

19

—

33

),  .

Эндометрий в стимулированных циклах для ЭКО

,

Hum Reprod Update

,

2003

, том.

9

 (стр. 

515

—

522

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Созревание эндометрия человека заметно улучшается после приема лютеиновой добавки аналога гонадотропин-рилизинг-гормона/циклов, стимулированных человеческим менопаузальным гонадотропином

9

 (стр. 

32

—

40

),  ,  ,  .

Индукция генов и категориальное репрограммирование во время децидуализации фибробластов эндометрия человека in vitro

7

 (стр. 

135

—

148

),  ,  ,  ,  .

Преимплантационная генетическая диагностика для скрининга анеуплоидии при повторных неудачных имплантациях

10

 (стр. 

381

—

388

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Изменения в экспрессии генов во время перехода от ранней к средней лютеиновой (рецептивной фазе) в эндометрии человека, обнаруженные скринингом микрочипов высокой плотности

8

 (стр.  

871

—

879

),  ,  ,  ,  ,  .

Модель стромальной инвазии in vitro при имплантации бластоцисты человека

,

Hum Reprod

,

2003

, том

18

 (стр. 

283

—

290

),  ,  ,  ,  .

Система лептина во время рецептивности человеческого эндометрия и предимплантационного развития

89

 (стр. 

2442

—

2451

),  ,  ,  .

Развитие экспрессии генов циклооксигеназы-1 и циклооксигеназы-2 в периимплантационной матке мышей и их дифференциальная регуляция бластоцистой и стероидами яичников

16

 (стр. 

107

—

122

),  ,  ,  ,  .

Сравнение частоты наступления беременности после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов между донорами и реципиентами в рамках программы донорских ооцитов

9

 (стр. 

248

—

250

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Стромальные эстрогеновые рецепторы опосредуют митогенное действие эстрадиола на эпителий матки

,

Proc Natl Acad Sci USA

, vol.

94

 (стр. 

6535

—

6540

),  ,  ,  ,  ,  .

Исследования продолжительности транспортировки яиц по яйцеводу человека. II. Расположение яйцеклетки с различными интервалами после пика лютеинизирующего гормона

132

 (стр. 

629

—

634

),  ,  ,  .

Пространственно-временная экспрессия циклооксигеназы 1 и циклооксигеназы 2 при отсроченной имплантации и периимплантационном периоде у западного пятнистого скунса

60

 (стр. 

893

—

899

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Влияние выбора пациентом переноса одного эмбриона с эмбрионом высшего качества по сравнению с переносом двух эмбрионов в первом цикле ЭКО/ИКСИ

17

 (стр. 

2621

—

2625

),  ,  ,  ,  ,  .

Региональная специализация ассоциированного с клеточной мембраной полиморфного муцина (MUC1) в эпителии матки человека

13

 (стр. 

2902

—

2909

),  ,  ,  .

Цитокины, хемокины и факторы роста эндометрия, связанные с имплантацией

,

Hum Reprod Update

,

2005

, том

11

 (стр.  

613

—

630

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Нарушение регуляции интерлейкина-11, рецептора IL-11-альфа и фактора, ингибирующего лейкемию, в эндометрии бесплодных женщин с эндометриозом во время окна имплантации

69

 (стр. 

53

—

64

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Уникальный транскриптом 3-го дня преимплантационного развития человека

,

Hum Mol Genet

,

2004

, vol.

13

 (стр. 

1461

—

1470

),  ,  ,  ,  ,  .

Гормональная и эмбриональная регуляция хемокиновых рецепторов CXCR1, CXCR4, CCR5 и CCR2B в эндометрии человека и бластоцисте человека

9

 (стр. 

189

—

198

),  ,  ,  .

Эмбрионально-материнские интерактивные факторы, регулирующие процесс имплантации: значение для вспомогательной репродуктивной системы

10

 (стр. 

527

—

540

),  ,  .

Дифференциация зародышевого диска, амниона и желточного мешка у макак-резусов

177

 (стр. 

161

—

185

),  ,  .

Внутриматочная инсеминация замороженной донорской спермой. Исход беременности в зависимости от возраста и режима стимуляции яичников

,

Hum Reprod

,

2002

, vol.

17

 (стр. 

2320

—

2324

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Бластоциста человека регулирует апоптоз эпителия эндометрия при эмбриональной адгезии

63

 (стр. 

430

—

439

),  ,  ,  .

Расширенное созревание эндометрия после индукции овуляции человеческим менопаузальным гонадотропином/хорионическим гонадотропином человека для экстракорпорального оплодотворения

41

 (стр. 

31

—

35

),  ,  ,  .

Мутации гена фактора ингибирования лейкемии у женщин с бесплодием

5

 (стр.

581

—

586

),  ,  .

Предотвращение многоплодной беременности путем переноса одного эмбриона

57

 (стр. 

15

—

19

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Цитогенетическое исследование 1000 самопроизвольных абортов

,

Ann Hum Genet

,

1980

, vol.

44

 (стр. 

151

—

178

),  ,  ,  ,  .

Низкие дозы экзогенного ФСГ, начатые в раннюю, среднюю или позднюю фолликулярную фазу, могут вызвать развитие множественных доминантных фолликулов

16

 (стр. 

846

—

854

),  ,  .

Рандомизированное сравнение двух протоколов стимуляции яичников с сопутствующей терапией антагонистами гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ) для экстракорпорального оплодотворения, начиная с введения рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона на 2-й или 5-й день цикла, со стандартным длительным протоколом агонистов ГнРГ

,

J Clin Endocrinol Metab

,

2003

, том.

88

 (стр. 

166

—

173

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Влияние контролируемой гиперстимуляции яичников при ЭКО на профили экспрессии генов в эндометрии

11

 (стр. 

195

—

205

),  ,  .

Внутриядерный эндоплазматический ретикулум, индуцированный Nopp140, имитирует систему ядрышковых каналов эндометрия человека

114

 (стр.  

4253

—

4264

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Глобальное профилирование генов в эндометрии человека в период имплантации

,

Эндокринология

,

2002

, том.

143

 (стр.

2119

—

2138

),  ,  .

Протеомный анализ отдельных человеческих эмбрионов для выявления новых биомаркеров развития и жизнеспособности

85

 (стр. 

101

—

107

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Преимплантационная генетическая диагностика и скрининг

,

Semin Reprod Med

,

2005

, vol.

23

 (стр. 

336

—

347

).

Простагландины и повышенная проницаемость сосудов эндометрия в результате применения искусственного стимула к матке крысы, сенсибилизированной к реакции децидуальных клеток

20

 (стр. 

560

—

566

).

Ингибирующий лейкемию фактор в имплантации и биологии матки

,

Репродукция

,

2005

, vol.

130

 (стр. 

131

—

145

),  .

Гормональная регуляция имплантации

,

Obstet Gynecol Clin North Am

,

2004

, vol.

31

 (стр. 

745

—

766

),  ,  .

Ультраструктурные характеристики эндометрия лютеиновой фазы у пациенток, подвергающихся контролируемой гиперстимуляции яичников

67

 (стр. 

625

—

630

),  ,  ,  ,  ,  .

Аномальное развитие эндометрия происходит во время лютеиновой фазы донорских циклов без добавок, получающих лечение рекомбинантными антагонистами фолликулостимулирующего гормона и гонадотропин-высвобождающего гормона

80

 (стр. 

464

—

466

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Продление фолликулярной фазы за счет отсрочки введения ХГЧ приводит к более высокой частоте продвижения эндометрия в день извлечения ооцитов в циклах с антагонистами ГнРГ

20

 (стр. 

2453

—

2456

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Мутации гена фактора ингибирования лейкемии в популяции бесплодных женщин не ограничиваются нерожавшими женщинами

127

 (стр. 

231

—

235

),  ,  ,  ,  .

Новый метод исследования процесса имплантации бластоцисты человека in vitro

,

Fertil Steril

,

1996

, том.

65

 (стр. 

1067

—

1070

),  ,  ,  ,  ,  .

Концентрация фактора, ингибирующего лейкемию (LIF), в жидкости для промывания матки в высокой степени предсказывает имплантацию эмбриона.

17

 (стр. 

213

—

218

),  .

Модели имплантации животных

,

Репродукция

,

2004

, том.

128

 (стр. 

679

—

695

).

Два пути действия прогестерона в эндометрии человека: значение для имплантации и контрацепции

68

 (стр. 

809

—

815

),  ,  ,  ,  ,  .

Люминальный и железистый эпителий эндометрия по-разному экспрессируют интегрины в течение менструального цикла: значение для имплантации, контрацепции и бесплодия

35

 (стр. 

195

—

204

),  ,  ,  ,  .

Эстроген является критической детерминантой, определяющей продолжительность окна восприимчивости матки к имплантации

100

 (стр. 

2963

—

2968

),  .

Влияние гиперстимуляции яичников на лютеиновую фазу

,

J Reprod Fertil

,

2000a

, vol.

55

 

Приложение

(стр.

101

—

108

),  .

Регуляция развития фолликулов и новые подходы к стимуляции яичников для ЭКО

6

 (стр. 

307

—

312

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Повышенная адгезивность культивируемых клеток, происходящих из эндометрия, связана с отсутствием экспрессии моезина

63

 (стр. 

1370

—

1376

),  ,  ,  ,  .

Беременность и живорождение после биопсии трофэктодермы и преимплантационного генетического тестирования бластоцист человека

84

 (стр. 

1628

—

1636

),  ,  ,  ,  ,  .

Клинический опыт и перинатальные результаты переноса бластоцисты после совместного культивирования эмбрионов человека с эпителиальными клетками эндометрия человека: 5-летнее последующее исследование

80

 (стр. 

1162

—

1168

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Муцин эндометрия человека MUC1 активируется прогестероном и подавляется in vitro бластоцистой человека

,

Biol Reprod

,

2001

, vol.

64

 (стр.

590

—

601

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

В поисках генов-кандидатов, критически экспрессирующихся в эндометрии человека в период имплантации

,

Hum Reprod

,

2005

, vol.

20

 (стр. 

2104

—

2117

),  ,  ,  .

Совместная локализация рецепторов прогестерона A и B с помощью двойной иммунофлуоресцентной гистохимии в эндометрии человека во время менструального цикла

84

 (стр. 

2963

—

2971

).

Преимплантационная генетическая диагностика структурных аномалий

183

 

Дополнение 1

(стр.

S55

—

S58

).

Предимплантационная генетическая диагностика и имплантация человека — обзор

,

Плацента

,

2003

, том.

24

 

Приложение B

(стр.

S70

—

S76

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Критический анализ точности, воспроизводимости и клинической полезности гистологического датирования эндометрия у женщин фертильного возраста

81

 (стр.  

1333

—

1343

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Межнаблюдательная и внутринаблюдательная вариабельность гистологического датирования эндометрия у фертильных и бесплодных женщин

,

Fertil Steril

,

2004

, том.

82

 (стр. 

1278

—

1282

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Молекулярный фенотип ооцита человека по данным ПЦР-SAGE

,

Genomics

,

2000

, vol.

63

 (стр. 

13

—

24

),  .

Точность датирования эндометрия; корреляция датирования эндометрия с базальной температурой и менструациями

,

Fertil Steril

,

1953

, vol.

4

 (стр. 

504

—

517

),  ,  .

Датировка биопсии эндометрия

,

Fertil Steril

,

1950

, том.

1

 (стр.

3

—

25

),  .

Вспомогательные репродуктивные технологии в Европе, 1997 г. Результаты получены из европейских регистров ESHRE. Европейская программа мониторинга ЭКО (EIM) для Европейского общества репродукции человека и эмбриологии (ESHRE)

,

Hum Reprod

,

2001

, vol.

16

 (стр. 

384

—

391

),  ,  ,  ,  .

Микроматричный анализ генов, контролируемых прогестероном, в стромальных клетках эндометрия человека in vitro

17

 (стр. 

271

—

280

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Оценка уровней фактора, ингибирующего лейкемию, с помощью промывания матки во время забора яйцеклетки не оказывает неблагоприятного влияния на частоту наступления беременности при экстракорпоральном оплодотворении

79

 (стр. 

900

—

904

),  ,  ,  ,  .

Экспрессия стероидных рецепторов в эндометрии поздней фолликулярной фазы в циклах ЭКО с антагонистами ГнРГ уже изменена, что указывает на инициацию ранней трансформации лютеиновой фазы при отсутствии секреторных изменений

20

 (стр. 

1541

—

1547

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Ранняя потеря беременности значительно выше после переноса одного эмбриона на 3-й день, чем после переноса одиночной бластоцисты на 5-й день в циклах ЭКО, стимулированных антагонистами ГнРГ

2

 (стр.  

60

—

65

),  ,  ,  ,  ,  .

Оплодотворение in vitro с одной стадией бластоцисты по сравнению с эмбрионами с одной стадией дробления

354

 (стр. 

1139

—

1146

),  ,  .

Качественное исследование принятия решений женщинами в конце лечения ЭКО

,

Hum Reprod

,

2005

, том.

20

 (стр. 

1944

—

1951

),  ,  ,  ,  ,  .

Преимплантационная генетическая диагностика для скрининга анеуплоидии у пациенток с необъяснимыми привычными выкидышами

83

 (стр. 

393

—

397

),  ,  ,  ,  ,  .

Преимплантационная генетическая диагностика для скрининга анеуплоидии у женщин старше 37 лет

84

 (стр. 

319

—

324

),  ,  ,  ,  .

Молекулярная классификация стадий эндометриального цикла человека с помощью профилирования транскрипции

,

Mol Hum Reprod

,

2004

, том.

10

 (стр. 

879

—

893

),  ,  .

Открытие новых индуцируемых генов в децидуализированных in vitro стромальных клетках эндометрия человека с использованием технологии микрочипов

141

 (стр.  

3510

—

3513

),  ,  .

Реакции на эстроген и прогестин в эндометрии человека

84

 (стр. 

393

—

410

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Модулируемая эстрогеном экспрессия генов в эндометрии человека

,

Cell Mol Life Sci

,

2005

, vol.

62

 (стр. 

239

—

250

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Профилирование экспрессии генов рецептивности эндометрия человека в дни LH + 2 по сравнению с LH + 7 с помощью технологии микрочипов

9

 (стр. 

253

—

264

),  .

Последние достижения в понимании процесса имплантации

2

 (стр. 

703

—

708

),  ,  ,  .

Ингибирующий лейкемию фактор и интерлейкин-11: цитокины, играющие ключевую роль в имплантации

57

 (стр. 

129

—

141

).

Текущие исследования по имплантации человека: краткий обзор

,

Reprod Fertil Dev

,

1995

, том.

7

 (стр. 

1395

—

1399

),  .

Неинвазивные методы оценки качества эмбрионов

,

Curr Opin Obstet Gynecol

,

2005

, vol.

17

 (стр. 

283

—

288

),  ,  ,  ,  ,  .

Вспомогательный хетчинг при вспомогательном зачатии (ЭКО и ИКСИ)

, 

Cochrane Database Syst Rev

, 

2006

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , et al.

ESHRE PGD Consortium data collection VI: циклы с января по декабрь 2003 г. с последующим наблюдением за беременностью до октября 2004 г.

,

Hum Reprod

, vol.

22

 (стр. 

323

—

336

),  ,  ,  ,  ,  .

Ранние потери беременности при экстракорпоральном оплодотворении и донорстве ооцитов

,

Fertil Steril

,

1999a

, vol.

72

 (стр. 

1061

—

1065

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Совместное культивирование эмбрионов человека с аутологичными эпителиальными клетками эндометрия человека у пациентов с неудачной имплантацией

84

 (стр. 

2638

—

2646

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , и др.

Сходное развитие эндометрия у доноров ооцитов, получавших высокие или стандартные дозы антагониста ГнРГ, по сравнению с лечением агонистом ГнРГ или в естественных циклах

20

 (стр.  

3318

—

3327

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Пути передачи сигнала, активируемые хорионическим гонадотропином в эпителиальных клетках эндометрия приматов

68

 (стр. 

457

—

464

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  .

Сравнение переноса бластоцисты с преимплантационной генетической диагностикой или без нее для скрининга анеуплоидии у пар старшего возраста матери: проспективное рандомизированное контролируемое исследование

19

 (стр. 

2849

—

2858

),  .

Суррогатное материнство в Австралии: количество имплантаций влияет на качество эмбрионов и восприимчивость матки

13

 (стр. 

99

—

104

),  ,  ,  ,  ,  .

Профилирование экспрессии генов в ооцитах ВГ человека: анализ профиля, полученного с помощью серийного анализа экспрессии генов (SAGE)

,

J Reprod Immunol

,

2002

, vol.

53

 (стр. 

193

—

201

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , и др.

Молекулярное фенотипирование эндометрия человека позволяет различать фазы менструального цикла и лежащие в их основе биологические процессы у нормоовуляторных женщин.

147

(стр.

1097

—

1121

)

Комитет по практике Американского общества репродуктивной медицины и Комитет по практике Общества вспомогательных репродуктивных технологий

Посев бластоцисты и перенос в клинической вспомогательной репродукции

7 4 Fertil Steril

,

2006

, том.

86

 

Приложение 5

(стр.

S89

—

S92

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , и др.

Консорциум ESHRE PGD «Руководство по передовой практике клинической преимплантационной генетической диагностики (ПГД) и преимплантационного генетического скрининга (ПГС)

20

 (стр. 

35

—

48

),  ,  ,  .

Активация пути протеинкиназы А в стромальных клетках эндометрия человека выявляет последовательную категориальную регуляцию генов

16

 (стр. 

47

—

66

),  ,  ,  ,  .

Молекулярная сложность в установлении рецептивности матки и имплантации

62

 (стр.

1964

—

1973

),  ,  ,  ,  ,  .

Предимплантационный генетический скрининг на аномальное число хромосом (анеуплоидии) при экстракорпоральном оплодотворении или интрацитоплазматической инъекции спермы

Преждевременная лютеинизация в циклах экстракорпорального оплодотворения с использованием агониста гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ-а) и рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и ГнРГ-а и ФСГ в моче

66

 (стр.  

275

—

280

),  ,  .

Рецидивирующая неудача имплантации при вспомогательной репродукции: как консультировать и лечить. A. Общие соображения и варианты лечения, которые могут принести пользу паре

,

Reprod Biomed Online

,

2005

, vol.

11

 (стр. 

371

—

381

),  ,  ,  ,  .

Аспирация эндометриального секрета перед переносом эмбрионов не снижает частоту имплантации

7

 (стр. 

105

—

109

),  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , и др.

Хромосомные аномалии в первом и втором полярных тельцах

,

Mol Cell Endocrinol

,

2001

, vol.

183

 

Приложение 1

(стр.

S47

—

S49

),  ,  ,  ,  ,  ,  .

Более чем десятилетний опыт преимплантационной генетической диагностики: многоцентровый отчет

,

Fertil Steril

,

2004

, том.

82

 (стр.

292

—

294

),  ,  ,  .

Избирательный перенос одного эмбриона обеспечивает приемлемую частоту наступления беременности и устраняет риск многоплодных родов

14

 (стр.  

2392

—

2395

),  .

Липидная сигнализация при имплантации эмбриона

77

 (стр. 

84

—

102

),  ,  .

Время имплантации зачатия и прерывание беременности

,

New Engl J Med

,

1999

, vol.

340

 (стр. 

1796

—

1799

).

Некоторые сравнительные аспекты имплантации

,

Biol Reprod

,

1975

, vol.

12

 (стр. 

1

—

40

),  ,  ,  ,  ,  .

Сравнение экспрессии генов в секреторном эндометрии человека с помощью лазерной микродиссекции

2

стр.

66

© Автор, 2007 г. Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии.Все права защищены. Чтобы получить разрешение, отправьте электронное письмо по адресу: [email protected]

.

Динамика дифференцировки трофобласта у эмбрионов человека на стадии периимплантации

Значение

Механизмы, ведущие к наступлению беременности и формированию функциональной плаценты на раннем этапе развития человека, плохо изучены из-за этических и технических ограничений, ограничивающих исследования, однако это период, когда многие беременности заканчиваются неудачей и, скорее всего, инициируются патологии плаценты. Мы культивировали донорские человеческие эмбрионы на 8, 10 и 12 дни после оплодотворения и для каждой стадии проводили секвенирование одноклеточной РНК на клетках трофобласта, которые составляют раннюю плаценту и окружают собственно эмбрион по мере его имплантации. В течение 5 дней культивирования из популяции стволовых клеток-предшественников возникло 2 линии клеток. Один был синцитиальным и продуцировал плацентарные гормоны. Второй стал подвижным и экспрессировал гены, связанные с врожденной иммунной системой и инвазией.

Abstract

Секвенирование одноклеточной РНК клеток культивируемых бластоцист человека позволило нам определить транскриптомный ландшафт плацентарного трофобласта (ТБ), который окружает эпибласт и связанные с ним эмбриональные ткани в период с загадочного дня 8 (D8) до D12 пери- период имплантации до формирования ворсинчатой ​​плаценты.Мы проанализировали транскриптомы 3 ранних типов плацентарных клеток, цитоТБ (СТБ), синцитиоТБ (СТБ) и мигрирующий ТВ (МТБ), отобранных вручную из культивируемых эмбрионов, диссоциированных трипсином, и смогли проследить сублинии, возникшие из пролиферирующих ЦТБ на периферии концепция. Уникальная форма CTB с некоторыми чертами STB была обнаружена на 8-й день, в то время как зрелый STB был в зените на 10-й день. Форма MTB со смешанным фенотипом MTB/CTB возникла около D10. К 12 дню генерация STB пришла в упадок, CTB вступили в новую фазу пролиферации, и зрелые клетки MTB начали перемещаться из основного тела концептуса.Примечательно, что транскриптом MTB в день 12 показал обогащение транскриптов, связанных с передачей сигналов IFN, миграцией, инвазией и активацией HLA-C, HLA-E и HLA-G. STB, который отличается от STB более поздних ворсинчатых STB, имел фенотип, соответствующий интенсивному экспорту белка и продукции плацентарных гормонов, а также миграции и инвазии. Исследования показывают, что ТБ, связанный с человеческими эмбрионами, находится в быстром развитии во время периимплантационного периода, когда он должен проникнуть, дать сильный сигнал матери, чтобы гарантировать продолжение беременности, и установить первый контакт с материнской иммунной системой.

Имплантация человеческого эмбриона в стенку матки плохо изучена и не имеет близких параллелей у модельных организмов, таких как мыши. Подсчитано, что от 40 до 60% человеческих зачатий терпят неудачу, причем большинство потерь происходит непосредственно перед или во время имплантации (1, 2), процесс, который начинается вскоре после прикрепления бластоцисты к стенке матки примерно на 6-й день. (D6) после зачатия. То немногое, что известно о раннем развитии человеческого эмбриона и возникновении самой ранней формы плаценты (3, 4), получено из гистологических исследований, проведенных более 50 лет назад (5⇓–7), из архивных материалов (8) и параллелей с нечеловеческие приматы (8⇓–10).Общепринятая точка зрения состоит в том, что вскоре после прикрепления полярной трофэктодермы бластоцисты D6-D7 к стенке матки в месте имплантации формируется зона инвазивного синцитиотрофобласта (STB), где он локально вытесняет эпителиальные клетки матки, тем самым обеспечивая проникновение зародыша. подлежащая строма. STB вскоре окружает зачаток и, продвигаясь в децидуализированный эндометрий, образует полости, которые заполняются кровью и маточными выделениями, которые, вероятно, обеспечивают зачатие (11⇓⇓–14). Трофобласты этого крошечного концептуса также должны выделять достаточное количество хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), чтобы спасти желтое тело; в противном случае беременность прерывается. К 12 дню столбцы цитотрофобласта (ЦТБ) начинают проникать в СТБ с образованием первичных ворсинок, которые со временем разветвляются, приобретают ядра кровеносных сосудов и соединительной ткани и формируют формирующуюся ворсинчатую плаценту, в то время как судьба исходного слоя СТБ остается неясной. . Все эти события происходят до того времени, когда у небеременной женщины обычно начинается новый менструальный цикл.

Вышеупомянутые гистологические исследования лишь дали представление о событиях, происходящих на второй неделе беременности, и не смогли дать представление о динамическом процессе имплантации и о том, что может пойти не так. Некоторые модели для понимания появления плацентарного трофобласта оказались многообещающими. Напр., человеческие плюрипотентные стволовые клетки, подвергшиеся воздействию BMP4, могут быть эффективно направлены к тому, что, как было предположено, является трофобластом, аналогичным тому, который встречается на периферии имплантирующегося концептуса (15, 16). Стволовые клетки трофобласта, полученные либо из преимплантационных бластоцист, либо из ворсин первого триместра (17), а также из органоидов трофобласта (18, 19), также можно индуцировать для дифференцировки вдоль сублинии трофобласта. Недавно была описана система, позволяющая культивировать человеческие эмбрионы in vitro до 14 дней (20, 21). Здесь мы использовали такую ​​систему для сравнения клонов трофобластов от эмбрионов в увеличивающиеся дни в культуре, в первую очередь с помощью секвенирования одноклеточной РНК (RNA-seq), чтобы получить представление о событиях, вызывающих раннее появление плаценты.Следует отметить, что ранее было 3 статьи, в которых изучалась природа трофобласта в культивируемых эмбрионах человека с использованием подхода одноклеточной РНК-секвенции (22⇓–24), но эти исследования были ограничены предимплантационным периодом.

Результаты

Расширенная культура эмбрионов и коллекция одиночных клеток.

Витрифицированные и нагретые донорские бластоцисты D5 человека культивировали до эмбриональных D8, D10 и D12 в соответствии с опубликованным протоколом (20, 21) (рис. 1 A и B и SI Приложение , таблица S1).К 8 дню большинство эмбрионов прикреплялись ко дну чашки и имели периферически расположенную, по-видимому, синцитиальную область, положительную по бета-субъединице CG (CGB) (рис. 1 C ), определяющему маркеру STB, и инициировали секрецию ХГЧ в среду (рис. 1 D ). Синцитиальные области расширялись со временем и окрашивались более интенсивно для CGB на D10 и D12, чем на D8 (рис. 1 C и SI Приложение , рис. S1 A ). Суточный выброс ХГЧ увеличился в 41 раз на 10-й день по сравнению с 8-м днем ​​(рис.1 Д ). Экспрессия маркера эпибласта, POU5F1, была ограничена центральной областью, которая представляет собой формирование зародышевого диска ( SI, Приложение , рис. S1 A и B ). Обычно используемые маркеры трофобласта, KRT7 и GATA3, также были подтверждены в этих внешних областях с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания ( SI, Приложение , рис. S1 B ). В некоторых культурах D10 можно было наблюдать несколько клеток, мигрирующих от зародыша. К 12 дню этих мигрирующих клеток стало больше.Покадровое видео, которое наблюдало за развитием между D8 и D12, соответствовало этим моделям слияния и миграции клеток во время расширенного культивирования (видео S1).

Рис. 1.

Выделение одиночных клеток из расширенных культивируемых эмбрионов человека. ( A ) Рабочий процесс культивирования эмбрионов человека и выделения цитотрофобласта (CTB), синцитиотрофобласта (STB) и мигрирующего трофобласта (MTB) для секвенирования одноклеточной РНК. ( B ) Морфология бластоцисты человека D5 после удаления zona pellucida и эмбрионов на эмбриональных D8, D10 и D12.Розовые круги обводят MTB, который можно увидеть на D12, но редко раньше. (Шкала, 200 мкм.) ( C ) Иммунофлуоресценция бета-человеческого CG (CGB) на эмбриональных днях D8, D10 и D12 ( n = 3). (Масштабная линейка, 200 мкм.) ( D ) Уровни ХГЧ в среде для культивирования клеток в эмбриональный период с D8 по D12 (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) ( n = 13). ( E ) Морфология CTB, STB и MTB после расщепления одноклеточными ферментами. (Масштабная линейка, 200 мкм.)

Наконец, после обработки трипсином эмбрионов D8, D10 и D12, были отобраны 3 различных класса плацентарных клеток, которые были отобраны индивидуально, в зависимости от их размера и местоположения, для секвенирования РНК.Предполагается, что самые маленькие круглые клетки (рис. 1 E ) представляют собой одноядерные CTB и, возможно, клетки аналогичного размера из других линий. Многоядерные STB ( SI Приложение , рис. S1 A ) были легко идентифицированы как структуры неправильной формы, значительно большие, чем мелкие клетки (рис. 1 E ). Мигрирующие клетки трофобласта (MTB), которые, по-видимому, удаляются от основного тела эмбриона, собирали до того, как эмбрионы были полностью диссоциированы трипсином (рис.1 B и E ). Хотя мы смогли собрать популяции CTB и STB на D8, D10 и D12, клетки MTB были исключительно от D12 из-за их дефицита в более ранние сроки (рис. 1 A и B ). РНК была извлечена из 139 образцов, полученных из 11 эмбрионов ( SI, Приложение , Таблица S2), и после секвенирования было получено ~1,4 миллиарда прочтений (~10 миллионов прочтений на отдельную клетку). Чтобы гарантировать, что мы анализировали только транскриптомы клеток трофобласта, а не других типов клеток, клеточные линии были сначала предсказаны на основе сообщений об экспрессии маркеров линий, полученных из бластоцист человека (24), с помощью алгоритма корреляции Спирмена.Первоначально 7 одноклеточных образцов считались нетрофобластными по этим критериям. Однако при использовании дополнительных известных маркерных генов линии ( POU5F1 , GATA6 , KRT7 , GATA3 , SOX2 , NANOG и CD064) эти клетки были использованы для проверки 200006 и CD064. считались трофобластами из-за высокой экспрессии KRT7, и GATA3. Остальные 2 были подтверждены как эпибласты (высокая экспрессия POU5F1 , SOX2 и NANOG и низкая экспрессия KRT7 и GATA3 ) и были исключены из расширенного анализа ( SI , Приложение ) ). Анализ основных компонентов (PCA) и кластерный анализ определили 9 клеток как выбросы, в то время как 3 клетки имели низкое количество прочтений (обнаружено <8000 генов). Они также были отброшены. При окончательном анализе оставшихся 125 клеток (78 CTB, 31 STB и 16 MTB) было 14 105 генов с максимальным значением FPKM ≥ 1 и 15 420 генов с максимальным значением FPKM ≥ 0,3 как минимум в 4 клетках ( SI Приложение ). , рис. S2 A ). Эти гены остались в анализе, а все остальные были исключены. В целом, CTB экспрессировал наибольшее количество экспрессируемых генов на клетку, но не было существенной разницы в количестве внутри любой группы между D8, D10 и D12 ( Приложение SI , рис.С2 Б ).

Экспрессия специфичного для типа клеток маркера и анализ путей.

PCA был выполнен, чтобы показать профили транскрипции всех 3 клеточных популяций в разные моменты времени сбора (рис. 2 A ). Транскриптомные профили сгруппированы лучше по типу клеток (CTB, STB и MTB), чем по дням, то есть по стадии развития ( SI Приложение , рис. S3 A и B ). Неконтролируемый кластерный анализ (K-средних) также показал, что 17 малых ячеек (CTB) имели частичную сигнатуру MTB и были классифицированы как Pre-MTB, в то время как 15 малых ячеек имели частичную сигнатуру STB и были обозначены как Pre-STB (рис.2 В ). Мы делаем вывод, что эти промежуточные клетки находились в процессе дифференциации от CTB либо к подлиниям MTB, либо к STB. Клетки, которые считались принадлежащими к этим 2 промежуточным классам, удаляли из остальной части группы CTB, чтобы идентифицировать уникальную сигнатуру транскриптома для CTB. Мы также идентифицировали гены, которые были обогащены в каждом типе клеток. В частности, гены 2932, 592 и 569 были идентифицированы как обогащенные маркерные гены для CTB, STB и MTB соответственно (рис.2 C и D и набор данных S1). Основываясь на таких генных панелях, каждый основной тип клеток можно было четко разделить с помощью иерархического кластерного анализа (рис. 2 E ), который показал сильную корреляцию с соответствующими генами, специфичными для определенного типа клеток (рис. 2 F ), и продемонстрировал надежность. каждой панели для идентификации каждой соответствующей клеточной линии.

Рис. 2.

Идентификация специфических маркеров типа клеток для CTB, STB и MTB. ( A ) PCA клеток трофобласта, показывающий дискретные кластеры в зависимости от типа клеток.( B ) Анализ PCA выявляет подмножества CTB с частичными сигнатурами STB и MTB, классифицируемые как Pre-STB и Pre-MTB соответственно. ( C ) Среднее значение FPKM для экспрессии маркерных генов CTB, STB и MTB в каждом типе клеток. ( D ) Экспрессия, основанная на наименьшей вероятности ложного обнаружения 10 лучших маркерных генов для CTB, STB и MTB в каждом типе клеток. ( E ) Иерархический кластерный анализ маркерных генов клеточного типа в клетках трофобласта. Эти 3 панели маркерных генов четко разделили каждый основной тип клеток TE.Три панели маркерных генов специально для CTB, STB и MTB представлены по оси y , а типы клеток с различными стадиями развития представлены по оси х . Цветовой спектр, варьирующийся от желтого до черного, указывает на нормализованные уровни экспрессии генов от высоких до низких. ( F ) Карта корреляции Спирмена, показывающая сильную корреляцию между каждым типом клеток и их маркерными генами. Цветовой спектр от красного до синего указывает на корреляцию от высокого к низкому.

Затем была проведена генная онтология (GO) и анализ путей для определения путей, наиболее тесно связанных с каждым типом клеток. Основные термины GO для CTB были связаны с клеточной пролиферацией, транскрипцией и энергетическим метаболизмом ( SI, Приложение , рис. S4), что согласуется с предполагаемой ролью CTB в снабжении клетками других линий трофобласта и, в конечном итоге, плаценты как все. Для STB главными терминами были фолдинг белка, транспорт и процессинг гормонов ( SI, Приложение , рис.S4), которые снова согласуются с известными функциями синцитиального трофобласта, будь то в ворсинчатой ​​плаценте или в примитивной плаценте, обнаруживаемой на очень ранних сроках беременности (16). Пути, участвующие в экспорте и поглощении белка, стероидогенезе и миграции, также активировались. Последний термин может отражать предполагаемую инвазивную, а также эндокринную природу раннего ТБ во время имплантационной фазы беременности (25). Как и ожидалось, MTB-обогащенные пути подчеркивают роль в миграции клеток и инвазии во внеклеточный матрикс.Более удивительным было наличие терминов и путей, связанных с передачей сигналов IFN I и II типа, врожденными иммунными реакциями и процессингом антигена (, Приложение SI , рис. S4).

Динамика дифференцировки трофобластов.

В то время как транскриптомные профили STB оставались относительно стабильными между D8 и D12, профили CTB претерпели значительные изменения, возможно, отражающие пластичность развития CTB по мере подготовки клеток к дифференцировке (рис.3 A и B ). Сравнение транскриптомов CTB между D8 и D10, например, отражало переключение с пролиферативного фенотипа на D8 на фенотип с большим акцентом на синцитиализации, процессинге белков и стероидогенезе на D10, предполагая, что дифференциация в сторону STB стала акцентом. . Кроме того, несколько связанных с MTB путей GO, включая ангиогенез, реакцию на гипоксию и реакцию на цитокины и гормоны, также стали активными на D10 (рис.3 D и SI Приложение , рис. S5). Эти данные свидетельствуют о том, что существует 2 различных пути дифференцировки CTB на D10: один к STB, а другой к MTB. Этот вывод подтверждается тем фактом, что большинство мелких клеток, собранных в день 10, были либо Pre-STB (12 из 23), либо Pre-MTB (6 из 23), и только 5 (21,7%) обладали фенотипом bona. истинный недифференцированный CTB (рис. 3 C ). К 12 дню появились признаки более выраженного сдвига в сторону фенотипа Pre-MTB, о чем свидетельствует активация путей, связанных с передачей сигналов IFN, гипоксией, миграцией клеток и ремоделированием сосудов, в то время как гены, связанные с образованием синцития, стали менее активными. доминирует, чем у D10 CTB (рис.3 D и SI Приложение , рис. S5). Кроме того, больше Pre-MTB (10 из 30 мелких клеток) и меньше Pre-STB (2 из 30 мелких клеток) присутствовало в популяции CTB, собранной на D12 (рис. 3 C ). Также наблюдалось частичное восстановление числа недифференцированных CTB на 12 день, а также появление возможного нового фенотипа в виде 2 клеток со смешанной сигнатурой STB/MTB (рис. 3 C ).

Рис. 3.

Динамика дифференцировки ЦТБ.( A ) PCA клеток трофобласта, сгруппированных по типу клеток и стадиям развития. Данные свидетельствуют о том, что клетки CTB значительно более динамичны, чем STB, на разных стадиях развития. ( B ) Количество дифференциально экспрессируемых генов в CTB на разных стадиях развития. ( C ) Количество клеток каждого типа, собранных на разных стадиях развития. ( D ) Диаграмма, иллюстрирующая переключение клеточных функций CTB на разных стадиях развития, выявленное терминами GO и анализом путей.( E ) Диаграмма, иллюстрирующая переключение клеточных функций CTB по мере того, как они подвергаются дифференцировке в STB ( Верхний ) и MTB ( Нижний ), как показано с помощью терминов GO и анализа путей.

Затем мы сравнили транскриптомы Pre-STB и Pre-MTB с недифференцированными CTB и дифференцированными STB и MTB независимо от дня их сбора. В то время как у Pre-STB были активированы гены, связанные с образованием синцития (рис. 3 E и SI Приложение , рис.S6 A ), они также сохраняли высокую митотическую активность, о чем свидетельствуют их уровни экспрессии маркеров клеточной пролиферации генов PCNA и MCM (26, 27) ( SI Приложение , рис. S7). Напротив, дифференцированные STB демонстрировали признаки отклонения от клеточного цикла и обладали генными сетями, связанными с транспортом белков и выработкой гормонов, которые в значительной степени отсутствовали у Pre-STB (рис. 3 E и SI, Приложение , рис. S6 ). А ).Мы пришли к выводу, что Pre-STB представляют собой популяцию делящихся CTB, готовых к слиянию с образованием синцития, но еще не активировавших механизм, необходимый для производства гормонов и слияния клеток (рис. 3 E и SI, Приложение , рис. , S6 А ). Pre-MTB существовал в состоянии, аналогичном Pre-STB, т. е. стремился к дифференцировке, но не имел полноценного фенотипа MTB. Например, они, по-видимому, продолжали размножаться, хотя пути, связанные с процессингом РНК, начали снижаться (рис.3 E и SI Приложение , рис. S6 B ). Термины GO, связанные с передачей сигналов IFN и процессингом антигена, которые были широко представлены в зрелых MTB, по-видимому, не были приобретены Pre-MTB.

Генные сети, связанные с ответами IFN.

Более тщательный анализ данных RNA-seq показал, что несколько генов ответа на IFN экспрессировались уже в D8 в клетках трофобласта и увеличивались в экспрессии по мере развития (Fig. 4 A ). Анализ пути GO показал, что D12 CTB ( SI Приложение , рис.S5) и MTB ( SI Приложение , рис. S4) имели несколько терминов, связанных с сигнальными путями IFN I и II типа. Чтобы подтвердить эти результаты, мы иммуноокрашивали эмбрионы на субъединицу 1 рецептора IFN типа I (IFNAR1), субъединицу 2 рецептора IFN типа II (IFNGR2) и ISG20 (рис. 4 B ). Мы обнаружили экспрессию INFAR1 и ISG20 уже в D8, при этом IFNAR1 и ISG20 в основном располагались на периферии колоний, где происходит дифференцировка (рис. 4 B ). Все маркеры, связанные с IFN, стали положительными к D12.Увеличение экспрессии IFNAR2 и ISG15 также было подтверждено вестерн-блоттингом (фиг. 4 C ).

Рис. 4. Пути ответа

IFN на ранних сроках беременности. ( A ) Значения FPKM генов, связанных с IFN: рецепторы IFN I и II типов (IFNAR1, IFNAR2, IFNGR1 и IFNGR2), IFN I типа (IFNA1 и IFNB1) и IFN-стимулируемые гены (ISG15 и ISG20). ). ( B ) Иммунофлуоресцентная локализация белков, участвующих в потенциальных реакциях IFN у эмбрионов человека между D8 и D12 ( n = 3).(Шкала, 100 мкм.) ( C ) Вестерн-блот анализ IFNAR2 и ISG15 ( n = 3) и ( D ) фосфорилирование STAT1 ( n = 3), mTOR ( n = 3), AKT ( n = 3) и MAPK1/3 ( n = 3) у эмбрионов человека между D8 и D12. Экспрессию белков нормализовали по ACTB (актин бета). Соотношение содержания фосфорилированного (p) и общего белка использовали для определения уровня фосфорилирования белков-мишеней. Все данные представлены как среднее ± SEM.

Ответ IFN, запускаемый IFN типа I и типа II, опосредуется путем JAK-STAT (28). Хотя общее количество STAT1 увеличивалось с течением времени, мы не обнаружили доказательств присутствия его фосфорилированной формы, что указывает на то, что путь JAK-STAT, вероятно, не был активирован (Fig. 4 D ). Кроме того, сигнальная активность mTOR, механизм, который, как считается, опосредует IFN-индуцированную трансляцию мРНК (28), оставалась неизменной с течением времени, что также свидетельствует о неактивности классического JAK-STAT-опосредованного сигнального пути IFN (рис.4 Д ). Хотя были обнаружены повышенные концентрации фосфорилированных AKT и ERK1/2, эти факторы играют более общую роль в метаболизме, а не усиливают реакции IFN I и II типов. Мы также не обнаружили никаких признаков бактериального заражения или эндотоксина в среде, которые могли бы вызвать ответ IFN типа II, а также не было обнаружено IFNG или IFNA/B в среде с помощью иммуноанализа. Наконец, значения FPKM для подтипов IFNA и IFNB были чрезвычайно низкими (рис.4 A ), в то время как транскриптов IFNG не обнаруживались. Эти данные предполагают, что повышающая регуляция рецепторов IFN и нижестоящих генов ответа IFN не запускалась экзогенными факторами, а была компонентами конститутивного процесса развития, связанного с нормальным развитием.

Около 8% генома человека (29) состоит из эндогенных ретровирусов человека (HERV), способных продуцировать вирусоподобные частицы, способные индуцировать ответ IFN. Плацента экспрессирует несколько HERV, которые вовлечены в дифференцировку и синцитиализацию трофобласта (30, 31).Восемь HERV были экспрессированы в культивируемых эмбрионах человека (фиг. 5 A ). Из них 5 ( ERV3-1 , ERVFRD-1 , ERVV-1 , ERVV-2 и ERVW-1 ) были более обильно экспрессированы в дифференцированных клетках трофобласта (Pre-STB, Pre -MTB, STB и MTB), чем в CTB. ERVV-1 , ERV-2 и ERVW-1 имели самые высокие уровни транскриптов с максимальной экспрессией в день 10, когда присутствие ERVW-1 можно было подтвердить с помощью иммунофлуоресценции (рис.5 В ). Напротив, экспрессия ERVh58-1 и ERVMER34-1 была выше в недифференцированных CTB, чем в более дифференцированных клеточных популяциях. Известно, что ERVh58-1 ингибирует, а не способствует слиянию клеток, чего он достигает, конкурируя с ERVW-1 за связывание с его рецептором клеточной поверхности (32). ERVMER34-1 почти не изучен, но его присутствие в CTB, а не в STB предполагает, что он тоже может быть ингибитором слияния клеток.

Рис. 5.

Эндогенные ретровирусы человека в периимплантационных эмбрионах.( A ) Значения FPKM (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) для нескольких HERV у эмбрионов человека между D8 и D12. ( B ) Иммунофлуоресценция ERVW-1 в эмбрионах человека D10 ( n = 3). (Масштабная линейка, 100 мкм.)

Обсуждение

Здесь мы использовали расширенную систему культивирования эмбрионов человека, объединили ее с секвенированием одноклеточной РНК и успешно зафиксировали динамику транскриптома в клетках трофобласта, встречающихся в примитивной плаценте между D8 и D12 после оплодотворения, время, которое in vivo соответствует первым 5 дням после того, как эмбрион начинает имплантироваться в стенку матки.Важно отметить, что в этот период знакомая ворсинчатая плацента с ее характерным тонким наружным синцитиализированным эпителием, покрывающим митотическую популяцию стволовых клеток СТВ, еще не сформировалась. Вместо этого собственно эмбрион окружен массой трофобласта с STB и, как показано здесь, популяцией мигрирующих клеток (здесь называемых MTB) наружу. Наши данные согласуются с гипотезой о том, что STB и MTB пополняются снизу популяцией-предшественником CTB.Однако следует иметь в виду несколько фактов об этой ранней плацентарной структуре. Во-первых, в отличие от ворсинчатого STB (33), он обладает инвазивными/мигрирующими свойствами, которые, вероятно, ответственны за его способность внедряться в эндометрий и помещать зародыш в полую нишу, где он может получать питательную поддержку в непосредственной близости от окружающей материнской децидуальной оболочки. клеток, капилляров и желез. Во-вторых, зачатие должно продуцировать достаточное количество ХГЧ и, возможно, других поддерживающих факторов, чтобы предотвратить снижение уровня прогестерона в результате регрессии желтого тела, которое может произойти при бесплодном цикле.В-третьих, эта ранняя плацента, хотя и функциональна, недолговечна. Столбцы CTB начинают проникать в слой STB, начиная примерно с D12, и в конечном итоге дают начало ворсинчатой ​​плаценте, в то время как судьба первоначального STB остается неясной. Ошибочно полагать, как это делали другие, что STB, связанный с плацентой от D8 до 12, эквивалентен ворсинчатому STB, что явно не так, хотя он может иметь аналогичную функцию в снабжении собственно эмбриона питательными веществами. Кроме того, мигрирующие клетки (называемые здесь МТБ), вероятно, не следует называть вневорсинчатым ТБ, поскольку на этой стадии нет ворсинчатых структур, из которых мог бы возникнуть МБТ.С точки зрения экспрессии маркерного гена профили транскриптома MTB, включая экспрессию HLA-G, по-видимому, действительно напоминают профили EVT первого триместра, возникающие из кончиков якорных ворсинок, но относятся ли последние к той же линии, что и MTB? непонятно.

На D8, когда имплантация in vivo должна была только начаться, большинство клеток TB в эмбрионах были небольшими и, по-видимому, митотически активными и имели преимущественно фенотип CTB, хотя некоторые клетки STB и 1 или 2 клетки Pre-STB и Pre-MTB также присутствовали в популяции CTB (рис.3 C ) и, вероятно, были ответственны за небольшое количество ХГЧ, вырабатываемого в это время (рис. 1 D ). Трофэктодерма, простой эпителий, может обеспечить предшественников для разрастания трофобласта из клеток на полярном конце бластоцисты (24), но четко функционально отличается от трофобласта, связанного с имплантацией. Кроме того, наши транскриптомные данные показывают, что небольшая клеточная популяция, хотя и выглядит морфологически гомогенной, содержит подмножество митотически активных промежуточных клеток цитотрофобласта, уже транскрипционно готовящихся либо к слиянию с образованием синцития, что особенно заметно на D10, либо к дифференцировке в сторону MTB (рис.2 B и 3 C ). Эта бифуркация клонов, по-видимому, началась около 8-го дня, но была наиболее заметна в 10-й день, когда приверженность STB была максимальной и продукция ХГЧ резко возрастала (рис. 1 D и 3 C ). К 12 дню дифференцировка STB снижалась, но продукция MTB росла (Fig. 3 C ). На 12-й день также было указание на увеличение доли недифференцированных, митотически активных CTB (рис. 3 C ), возможно, отражающее начало формирования ворсинок и отмирание ранней плаценты.Вместе эти данные свидетельствуют о том, что ранняя плацента отличается от трофэктодермы и, хотя и недолговечна, способна отдавать приоритет высокоспециализированным клеточным функциям в очень специфические моменты времени на протяжении всего периода имплантации.

Транскриптомные данные также преподнесли несколько сюрпризов. Одним из них была идентификация нескольких генов и путей GO, связанных с передачей сигналов IFN и частичной активацией противовирусных ответов в MTB. Хотя продукция IFN I и II типов трофобластом была продемонстрирована у некоторых копытных (34) и особенно важна для жвачных животных, у которых IFN-tau (IFNT) играет критическую роль в распознавании беременности матерью (35, 36), никакой гомологичной роли IFN здесь не было очевидно для человека, у которого не транскрибировались гены IFN ни типа I, ни типа II (рис.4 А ). Скорее, MTB, казалось, был готов реагировать на IFN, имея уже на месте как рецепторы, так и некоторые эффекторы компонентов. Предположительно, IFN, высвобождаемый клетками, находящимися в эндометрии, может вызывать IFN-ответ в трофобласте и обеспечивать некоторое преимущество в выживании эмбриона в дополнение к тому, что он служит первой линией защиты от вирусных и бактериальных инфекций. Например, у пациенток с экстракорпоральным оплодотворением (ЭКО) с рецидивирующей неудачей имплантации концентрация внутриутробного IFNG значительно ниже, чем у контрольной группы (37).Конечно, чрезмерная стимуляция IFN может десенсибилизировать пути IFN, механизм, который способствует невосприимчивости IFN I типа при ВИЧ-инфекции (38). У человеческих эмбрионов высокий уровень воздействия IFN в результате внутриутробной инфекции или воспаления может привести к десенсибилизации путей IFN и блокированию дифференцировки трофобласта, что приводит к гибели эмбриона, тем самым снижая материнские затраты, связанные с продолжением прерывания беременности. Таким образом, пути ответа IFN могут действовать как предохранительный переключатель, определяющий успех имплантации in vivo.

Как и предполагалось, экспрессия транскриптов классических молекул MHC класса I, HLA-A и HLA-B (39), а также молекул MHC класса II (40), проиллюстрированных здесь HLA-DOB и HLA-DRB1 ( SI Приложение , рис. S9 C ) плохо экспрессировались в каждом классе клеток трофобласта в каждый момент времени развития. Напротив, гены HLA-C и неклассические гены HLA-E и HLA-G были надежно экспрессированы D12 ( SI Приложение , рис.S9 A и B ), особенно в МТБ. Было высказано предположение, что эти человеческие версии молекул главного комплекса гистосовместимости (MHC) ответственны за создание иммуномодулирующей среды in vivo, которая способствует вневорсинчатой ​​инвазии трофобласта (41). Такие особенности системы MHC, как и сигнальный путь IFN, обсуждавшийся ранее, могут быть критическими для раннего выживания зачатия до формирования ворсинчатой ​​плаценты в опасное время беременности, когда эмбриональные потери высоки.Более глубокое исследование этих транскриптомных данных, вероятно, прольет свет на дополнительные сведения о механизмах, которые облегчают имплантацию человека.

Следует признать, что эмбрионы, использованные в наших экспериментах, культивировались в среде без материнских децидуальных клеток и на субстрате, а именно на фибронектине, который был бы единственным компонентом смешанной матрицы, встречающейся в эндометрии во время имплантации. . Например, как состав субстрата, так и жесткость могут влиять на транскриптомы стволовых клеток (42, 43).Таким образом, траектория развития, наблюдаемая здесь in vitro, может несколько отличаться от траектории, происходящей in vivo при нормальной беременности. Однако, как показано на рис. 5, основные пути метаболизма оставались активными на 12-й день, и наблюдалось явное увеличение митотически активных CTB и повышение MTB. Тем не менее было бы слишком оптимистично полагать, что эмбрионы не теряют к этому моменту жизнеспособности. По мере совершенствования технологии расширенного культивирования эмбрионов вполне вероятно, что появится система, в большей степени отражающая взаимодействия эндометрия и зачатия, происходящие in vivo.Таким образом, даже несмотря на то, что данные, представленные в настоящей статье, могут быть лишь неполным указанием на то, что происходит in vivo, мы подозреваем, что они все же дают представление о функционировании ранней плаценты, структуры, необходимой для поддержания беременности до того момента, когда она забеременеет. выходит ворсинчатая плацента. Наши результаты согласуются с выводом о том, что начальные события имплантации и эндокринная поддержка выработки прогестерона яичниками у матери являются функцией STB, окружающих зачаток, в то время как подвижные MTB ответственны за инициирование дополнительной колонизации эндометрия матки до разрастание плацентарных ворсинок.

Материалы и методы

Заявление об этике.

Это исследование было одобрено Western Institutional Review Board (исследование № 1179872) и соответствовало международным рекомендациям по расширенному культивированию эмбрионов. Эмбрионы были пожертвованы для исследований с информированного согласия пациентов. После того, как пациент завершил лечение и больше не нуждается в своих замороженных эмбрионах по медицинским показаниям и больше не хочет их оставлять, у них есть несколько вариантов: отказаться от своих эмбрионов и, таким образом, уничтожить их, пожертвовать свои эмбрионы другой паре для усыновления эмбрионов или пожертвовать их исследовательская работа.Этот выбор удостоверяется подписанным и нотариально заверенным документом о распоряжении. Этот процесс завершается не исследовательским персоналом. После того, как пациент выбрал и завершил «пожертвование для исследования» и его решение было подтверждено, эти эмбрионы становятся доступными для исследования.

Размораживание эмбрионов человека и удаление Zona Pellucida.

Эмбрионы человека (дополнительную информацию см. в приложении к SI ) были добровольно пожертвованы пациентами Центра репродуктивной медицины штата Колорадо. Витрифицированные бластоцисты человека D5 и D6 оттаивали в предварительно подогретом растворе в течение 1 мин и переносили в модифицированный раствор для разведения Kitazato (Kitazato) на 3 мин перед промывочным раствором (WS) на 5 мин (44).Отдельные бластоцисты помещали в отдельные капли культуры среды IVC1 (Cell Guidance Systems, M11 25), покрытые минеральным маслом, и оставляли на 2 часа при 37 °C при 20% O ₂ и 7,5% CO ₂ для корректировки высокогорье, где проводились эти исследования. Через 2 часа эмбрионы были перемещены в буферную среду с 3-( N -морфолино)пропансульфоновой кислотой (Mops) перед удалением блестящей оболочки путем 3 последовательных промывок в растворе Acidic Tyrode (Millipore Sigma, T1788) с последующими 3 последовательными промываниями в швабры

Расширенная культура эмбрионов.

Процедуру расширенного культивирования эмбрионов проводили, как описано ранее (20, 21). Вкратце, бластоцисты сразу после удаления зоны промывали в чашке для культивирования органов диаметром 60 мм с центральной лункой (Corning, 353037), содержащей подогретую среду IVC1, перед переносом в чашку с 8-луночной камерой (Ibidi, 80841). Каждую камеру покрывали стерильным фибронектином (Millipore Sigma, F0895), разведенным в PBS в разведении 3:100. Планшеты покрывали в течение ночи, а затем удаляли оставшийся растворимый фибронектин перед добавлением 300 мкл уравновешенной среды IVC1.Не менее чем через 1 ч зародыши без зон помещали в среду и культивировали еще 48 ч. На 2-й день расширенного культивирования эмбрионов оценивали прикрепление эмбрионов для всех эмбрионов. Для прикрепившихся эмбрионов половину среды IVC1 удаляли и заменяли свежей средой IVC2 (Cell Guidance Systems, M12-25). После 2-го дня для всех прикрепленных эмбрионов ежедневно производили 50% замену среды на среду IVC2.

Изоляция отдельных клеток.

Отдельные клетки были выделены из эмбрионов в эмбриональные дни D8, D10 и D12; инкубировали с реагентом TrypLE Express в течение 10 мин; и распадаются на отдельные клетки.Для эмбрионов D12 мигрирующие ТБ (MTB), расположенные за пределами основной колонии, собирали до того, как основная колония была диссоциирована. После осторожного пипетирования были собраны округлые одноядерные цитоТБ (CTB) и многоядерные синцитиоТБ (STB). Каждую клетку переносили в пробирку для ПЦР объемом 0,2 мл (Eppendorf), содержащую буфер для лизиса клеток, и хранили при температуре -80 °C до получения библиотеки.

Подготовка библиотеки одноклеточной РНК-Seq.

Библиотеки RNA-seq были созданы из отдельных клеток с использованием набора Smart-seq2 v4 с небольшими изменениями в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, отдельные клетки лизировали, мРНК захватывали и амплифицировали с помощью набора Smart-seq2 v4 (Clontech). После очистки шариков AMPure XP качество амплифицированных РНК проверяли с использованием набора Agilent High Sensitivity D5000 (Agilent Technologies). Высококачественные амплифицированные РНК подвергали подготовке библиотеки (набор для подготовки библиотеки ДНК Nextera XT; Illumina) и мультиплексировали с помощью Nextera XT Indexes (Illumina). Концентрацию библиотек для секвенирования определяли с использованием набора для анализа HS двухцепочечной ДНК Qubit (Life Technologies) и наборов для количественного определения библиотеки KAPA (KAPA Biosystems).Размер библиотек секвенирования определяли с помощью высокочувствительного анализа D5000 в системе Tapestation 4200 (Agilent). Затем объединенные индексированные библиотеки секвенировали на платформе Illumina HiSeq X с считыванием парных концов длиной 100 п.н.

Фильтрация и обработка данных одноклеточной РНК-Seq.

Мультиплексированные чтения секвенирования, прошедшие фильтры, были обрезаны TrimGalore-0.4.3 для удаления низкокачественных чтений и адаптеров. Качество прочтений после фильтрации оценивали с помощью fastQC с последующим выравниванием с геномом человека (hg38) с помощью STAR (2.5.3а) с параметрами по умолчанию. Было сгенерировано около 10 миллионов прочтений на отдельную ячейку. Индивидуальные картированные чтения были скорректированы для получения значений FPKM (фрагментов на тысячу оснований экзонной модели на миллион картированных фрагментов) с генами RefSeq в качестве эталона. Необработанные файлы FASTQ и нормализованные профили экспрессии генов (FPKM) доступны в Gene Expression Omnibus (GEO) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) под регистрационным номером GSE 130289. Дифференциальный анализ экспрессии генов был выполнен алгоритмом Partek Flow GSA с параметрами по умолчанию.Гены считались дифференциально экспрессированными, если они обеспечивали частоту ложных открытий <0,05 и кратность изменения >2. DAVID (https://david.ncifcrf.gov) и IPA (анализ путей изобретательности) использовались для выявления онтологии генов (GO) и путей соответственно. Клетки с более чем 8000 обнаруженных генов, каждый со значениями FPKM> 0,3, использовались для последующего анализа для спецификации линии. Спецификацию происхождения проводили с помощью корреляции Спирмена. PCA и кластерный анализ были выполнены с использованием R.Идентификацию клеточного типа и генов, специфичных для стадии, проводили, как описано ранее (45). Вкратце, для идентификации типа клеток и генов, специфичных для стадии, для каждого типа клеток (стадии) конструировали единичный вектор с последующим расчетом корреляции Пирсона между вектором и отдельными генами. Этот единичный вектор был разработан для представления паттернов экспрессии генов, специфичных для типа (стадии) клеток. В частности, записи вектора, соответствующие образцам типа клеток (или на стадии), были установлены на 1, а все остальные — на 0.Гены со значением P (после поправки Бонферрони для множественного тестирования) менее 0,05 были помечены как специфичные к типу клеток (стадии).

Иммунофлуоресценция и получение изображений.

Эмбрионы промывали 3 раза в подогретом, отфильтрованном PBS и фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA) в течение 20 мин. Затем их промывали 0,1% Tween20 (Millipore Sigma, P1379) в PBS (PBS-T) 3 раза и пермеабилизировали 0,5% Triton X-100 (Millipore Sigma, X100) в PBS в течение 30 мин. Эмбрионы снова промывали в PBS-T и подвергали воздействию 10% об./об. FBS и 3% вес./об. BSA в PBS-T в течение ночи при 4°C.Первичные антитела ( SI Приложение , таблица S4) добавляли в разведении 1:200 в блокирующем буфере (10% FBS/3% BSA/PBS-T) и инкубировали при 4°C в течение ночи. Затем образцы промывали в PBS-T 3 раза и инкубировали со вторичными антителами в течение ночи при 4°C. После инкубации эмбрионы снова промывали в PBS-T, а затем заключали в антифейдерный реагент ProLong Gold с заливочной средой DAPI (ThermoFisher Scientific, P36931). Эмбрионы визуализировали на инвертированном вращающемся дисковом микроскопе 3I Marianas. Изображения Z-стека были захвачены с использованием 40x/1.Иммерсионный объектив с числовой апертурой 52. Лазеры 405, 488 и 561 использовались для захвата DAPI, Alexa Fluor 488 и Alexa Fluor 594 соответственно. Интенсивность лазера и время экспозиции регулировались вручную для каждого образца, чтобы избежать перенасыщения или фотообесцвечивания образцов. После захвата изображений изображения были немедленно подвергнуты деконволюции с помощью программного обеспечения Slidebook (3i), установленного на настройку «Ближайшие соседи». Изображения визуализировались и обрабатывались с помощью программного обеспечения для анализа изображений для микроскопии Imaris (Bitplane) для создания проекций максимальной интенсивности.

Другие методы, включая Вестерн-блоттинг, анализы ELISA и ECLIA, а также статистический анализ, обобщены в Приложение SI . Антитела, используемые для иммунофлуоресценции и Вестерн-блоттинга, перечислены в SI, Приложение , Таблицы S4 и S5.

Благодарности

Мы благодарим Карен Маруниак и Клиническую лабораторию Колорадского центра репродуктивной медицины (CCRM) за обработку образцов ХГЧ, а также Сью МакКормик и лабораторию ЭКО CCRM за сбор эмбрионов.Мы благодарим доктора Раду Молдована и доктора Доминика Стича из Центра усовершенствованной световой микроскопии Университета Колорадо за их помощь в получении конфокальных изображений и их обработке. Мы также благодарим д-ра Томаса Хансена, д-ра Геррита Боума из Университета штата Колорадо, д-ра Дэнни Шуста, д-ра Лауры Шульц и д-ра Цзе Чжоу из Университета Миссури за их критический вклад. Этот проект финансировался за счет внутренних исследовательских фондов, предоставленных CCRM. Услуги микроскопии и визуализации, предоставляемые основным центром Advanced Light Microscopy Core Facility в Медицинской школе Anschutz Университета Колорадо для CCRM, оплачивались по неакадемическим тарифам (пользователям, не финансируемым NIH).

Сноски

• Вклад авторов: Z.J. и Ю.Ю. проектное исследование; R.C.W., H.M., D.M.L, S.K.R., R.A.K., Z.J. и Y.Y. проведенное исследование; W.B.S. вложенные ресурсы; W.B.S. и Р.Л.К. внесло вклад в администрирование проекта; R.C.W., H.M., J.S., S.K.R., Z.J. и Y.Y. проанализированные данные; и R.C.W., H.M., D.M.L., R.M.R., R.L.K., Z.J. и Y.Y. написал бумагу.

• Рецензенты: GJB, Кембриджский университет; SJF, Калифорнийский университет, Сан-Франциско; и Х.В., Китайская академия наук.

• Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

• Депонирование данных: Данные депонированы в базе данных Gene Expression Omnibus (GEO), https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ (инвентарный номер GSE 130289).

• Эта статья содержит вспомогательную информацию в Интернете по адресу www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.12116/-/DCSupplemental.

Когда происходит имплантация? Признаки имплантации во время беременности

Имплантация — одно из самых драматических биологических событий за всю вашу беременность — первым из них является оплодотворение.Хотя вы можете даже не заметить, что происходит имплантация, хотя некоторые женщины испытывают менструальные спазмы и небольшие кровянистые выделения. В любом случае, имплантация незаметно отмечает создание эмбриона еще до того, как вы точно узнаете, что ждете ребенка.

Что такое имплантация во время беременности?

Имплантация — это процесс, который происходит после того, как эмбрион, т. е. оплодотворенная яйцеклетка, перемещается по фаллопиевой трубе и внедряется глубоко в слизистую оболочку матки, где он остается до родов.

Хотя многие считают оплодотворение началом беременности, успешная имплантация является еще одним серьезным препятствием. После того, как эмбрион имплантирован, он начинает выделять гормоны, которые подготавливают ваше тело к рождению ребенка, прекращают менструацию, формируют плаценту и, возможно, вызывают у вас судороги и усталость.

Когда происходит имплантация?

Имплантация происходит примерно через восемь-девять дней после оплодотворения, хотя это может произойти уже через шесть дней и даже через 12 дней после овуляции.

Каковы признаки и симптомы имплантации?

 Признаки и симптомы имплантации — это способ вашего организма приветствовать вас при беременности. В то время как многие женщины ничего не чувствуют во время процесса, другие сообщают о некоторых симптомах, которые могут включать:

Легкое кровотечение

Разница между симптомами имплантации и вашим периодом может сбивать с толку, особенно потому, что в обоих случаях кровь выделяется из слизистая оболочка матки. Хотя у большинства женщин имплантационное кровотечение не возникает, у некоторых оно возникает, примерно у 15–25 процентов из них наблюдается светлая пятнистая кровь.Эта кровь обычно сначала розовая, а затем становится коричневой, и, в отличие от менструации, она не течет и не содержит сгустков. Это должно прекратиться в течение дня или двух.

Абдоминальные спазмы

У многих женщин симптомы имплантации отсутствуют, но последующие гормональные сдвиги могут вызвать спазмы. Имплантационные спазмы должны длиться не более дня или около того, и вы, вероятно, заметите их примерно во время начала менструации.

Хотя спазмы в животе никогда не доставляют удовольствия, небольшие спазмы при имплантации на ранних сроках беременности очень распространены и не должны доставлять такого дискомфорта, как те, которые могут возникнуть до и во время менструации.Вместо этого вы можете почувствовать покалывание или покалывание в животе, а также легкое давление. Обратитесь к врачу, если вы чувствуете сильную боль.

Другие возможные признаки

Имплантация не совсем болезненна, но очень ранняя беременность — какой бы радостной она ни была — может вызвать у вас тошноту. Хотя сама по себе имплантация не виновата в перечисленных ниже симптомах, каскад гормональных изменений, помогающих вашему телу начать новую жизнь, может вызвать у вас временное чувство слабости и головокружения.

Помимо спазмов и легкого кровотечения, некоторые женщины сообщают:

• Набухшие груди
• Упадок сил
• Головные боли

Ранние признаки беременности

Что такое имплантация?

Во второй половине менструального цикла у женщины начинает повышаться температура, которая повышается примерно на 1 градус во время оплодотворения и остается повышенной на протяжении всей беременности.Если ваша температура снова падает, это может означать, что у вас приближаются месячные, имплантация не произошла, и вы не беременны.

Когда следует делать тест на беременность?

Имплантация — важное событие, которое легко пропустить. Поскольку это может вызвать легкие кровянистые выделения, некоторые женщины ошибочно принимают их за свой менструальный цикл. Если у вас нет менструации, и вы задаетесь вопросом, действительно ли вы беременны, пройдите домашний тест на беременность или обратитесь к врачу для подтверждения.

Хотя вы, вероятно, по понятным причинам будете стремиться пройти тест как можно скорее, лучше всего подождать примерно до 19 дней после оплодотворения.Производство хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) начинается, когда эмбрион имплантируется в матку, и к 19 дню после оплодотворения уровень ХГЧ вырастает настолько, что его можно обнаружить в моче.

8 Ранние признаки и симптомы имплантации

Имплантация является одним из ранних событий беременности. Судороги и кровотечение — это некоторые признаки, которые вы можете испытывать как часть этого нормального физиологического процесса во время беременности. Прочитайте этот пост MomJunction, чтобы узнать больше об имплантации, ее симптомах и о том, как ее определить.

Что такое имплантация?

Имплантация (эмбриона человека) представляет собой прикрепление оплодотворенной яйцеклетки (бластоцисты) к слизистой оболочке матки. Это совершенно естественный процесс и ранняя стадия беременности, которая происходит через неделю после овуляции (1).

Приблизительно от 15 до 25% женщин испытывают имплантационное кровотечение (2), но обычно его ошибочно принимают за менструацию, поскольку оно происходит в одно и то же время цикла.

Когда происходит имплантация?

В большинстве случаев имплантация происходит примерно через девять дней после овуляции, но иногда это может произойти уже через семь или даже через 12 дней.Так, если овуляция происходит на 14-й день после менструации (в среднем 28-дневный цикл), имплантация может произойти на 23-й день.

Во время овуляции яичники выпускают яйцеклетки. Когда сперма попадает в маточную трубу, она оплодотворяет яйцеклетку в течение 12–24 часов после овуляции. Оплодотворенная яйцеклетка, известная как зигота, затем перемещается по фаллопиевой трубе. За это время зигота несколько раз размножается, образуя бластоцисту, которая попадает в полость матки через пять-шесть дней после оплодотворения.

Затем он имплантируется в матку через день или два. Поэтому весь процесс от оплодотворения до имплантации занимает от шести до десяти дней. Это означает, что имплантация происходит между 20 и 24 днями вашего обычного менструального цикла (3).

[ Читать: Калькулятор имплантации ]

Возможные признаки и симптомы беременности Имплантация

Каждая беременность отличается, как и симптомы имплантации. Они также могут отличаться от первой беременности к последующим.Некоторые женщины не замечают никаких симптомов, связанных с имплантацией. Ниже перечислены возможные признаки имплантации.

 1. Имплантационное кровотечение или кровянистые выделения

Это один из основных симптомов имплантации, возникающий, когда эмбрион внедряется в стенку матки (4). Имплантационное кровотечение может быть розоватым, скудным и не таким красным и обильным, как менструальное кровотечение. Он не консистентен и не образует сгустков. Кровотечения могут быть периодическими и продолжаться от нескольких часов до двух дней.

2. Имплантационные спазмы

Вторым распространенным симптомом после кровянистых выделений являются имплантационные спазмы, похожие на менструальные спазмы (5). Однако эти судороги мягче и менее болезненны и могут длиться пару дней. Вы можете испытывать их в спине и нижней части живота. Иногда они связаны с непрерывными сокращениями стенки матки. Если спазмы сильные и продолжительные, что делает их невыносимыми, рекомендуется обратиться к врачу.

3. Изменения груди

Вскоре после имплантации ваше тело начинает меняться.Молочные железы претерпевают такие изменения, как нежность, болезненность и отек. Это связано с изменением уровня женских гормонов после зачатия (6). В некоторых случаях эти изменения видны во время овуляции, а также через неделю после овуляции.

[ Читать: Первые месяцы беременности симптомы и уход ]

4. Базальная температура тела

Базальная температура тела (BBT) высокая во время имплантации и может быть способом определения беременности. Вам не обязательно отслеживать температуру тела, если вы не пытаетесь забеременеть.В идеале вы должны составить график своей дневной температуры и посмотреть, не повышается ли она. БТТ повышается во время овуляции из-за увеличения гормона прогестерона и остается повышенным, когда происходит имплантация (7).

5. Частое мочеиспускание

В течение недели после имплантации у вас могут появиться частые позывы к мочеиспусканию. Увеличение притока крови к области таза может оказать давление на мочевой пузырь и усилить позывы к мочеиспусканию (8).

6. Пристрастие/отвращение к еде

Гормоны, вырабатываемые в результате имплантации, имеют тенденцию изменять симпатии и антипатии женщины к еде.Вы можете хотеть есть продукты, которые раньше не пробовали, или не любить продукты, которые когда-то любили (8).

7. Приливы

Это менее распространенные признаки имплантации и могут длиться около 15 минут во время имплантации. Во время имплантации уровень гормонов быстро колеблется, вызывая приливы. Хотя это противоречивый признак, вы можете рассматривать его в сочетании с другими симптомами.

8. Цервикальная слизь

Повышение уровня прогестерона после имплантации может вызвать отек шейки матки и увеличить приток крови к ней.Кроме того, железы увеличиваются, а гормоны стимулируют железы производить больше цервикальной слизи. Таким образом, слизь содержит немного крови, поэтому цервикальная слизь после имплантации имеет розоватый или коричневатый цвет.

Хотя вышеуказанные признаки могут определить вашу беременность, вы не можете быть уверены, пока не сделаете тест. При этом помните, что не каждая женщина может увидеть эти признаки.

[ Читать: Вагинальное кровотечение во время беременности ]

Каковы этапы имплантации?

Имплантация эмбриона происходит на шестой или седьмой день после овуляции.Этот процесс состоит из трех стадий:

• На первой стадии эмбрион прикрепляется к стенке матки (слизистая оболочка — эндометрий). Эта начальная фаза процесса имплантации называется приживлением. На этом этапе эмбриону около пяти-шести дней.

• На втором этапе оплодотворенная яйцеклетка проникает в стенку матки и закрепляется в матке. Этот процесс представляет собой прилипание бластоцисты к эндометрию.

• На третьей стадии эмбрион окончательно внедряется глубоко в стенку матки.В этот момент яйцеклетка находится в полости эндометрия, и по мере роста эндометрия полость лучше заворачивается (9).

[ Читать: Ранние симптомы беременности до задержки менструации ]

Как убедиться, что имплантация прошла успешно?

Единственный способ подтвердить свою беременность — пройти тест на беременность (бета-ХГЧ в сыворотке/моча) (10). Если вы заметили кровянистые выделения, т. е. имплантационное кровотечение, подождите около трех дней и сделайте домашний тест на беременность.Чем позже вы пройдете тест, тем больше шансов получить точный результат, так как уровень ХГЧ возрастет.

Еще одним способом подтверждения имплантации является УЗИ, чтобы узнать, прикреплен ли эмбрион к стенке матки.

Есть симптомы, но результат теста отрицательный?

У вас могут быть признаки успешной имплантации, но результаты теста могут оказаться отрицательными. Это может быть из-за недостаточного количества гормона ХГЧ. В некоторых случаях может пройти до десяти дней после имплантации, чтобы в организме было достаточно ХГЧ для положительного результата теста на беременность.Поэтому будьте оптимистами и запаситесь терпением.

Можете ли вы улучшить свои шансы на имплантацию?

День овуляции и четыре дня до нее — самые плодородные дни менструального цикла. Вы можете отслеживать дни овуляции с помощью некоторых признаков и симптомов или калькулятора овуляции. Незащищенный половой акт в эти дни может повысить ваши шансы на имплантацию.

Кроме того, вы можете следовать приведенным ниже советам, чтобы вести здоровый образ жизни.

1. Сбалансированное питание

• Продукты, богатые клетчаткой, могут способствовать здоровому уровню эстрогена, метаболизму и пищеварению.Вы можете есть темную листовую зелень, такую ​​как листовая капуста, листовая капуста или зелень свеклы, молотые семена льна, замоченные семена и орехи, а также цельные зерна. Принимайте около 28 граммов клетчатки каждый день (11).

• Суперпродукты могут поддерживать здоровый уровень гормонов. Вы можете включить в свой рацион кокосовое масло, масло печени трески, ягоды годжи (Arctium lappa) и маку (Lepidium meyenii).

• Поддерживайте здоровый рост слизистой оболочки матки, принимая безопасные для беременных травы и продукты, питающие кровь. Травы, такие как гибискус, крапива, листья красной малины и настои или экстракты желтого щавеля, вероятно, помогут.К продуктам, питающим кровь, относятся лосось, мясо травяного откорма, семена подсолнечника и тыквы, спирулина и лебеда.

• Включите продукты, которые могут повысить температуру тела. Когда уровень прогестерона повышается, температура тела также повышается. Поэтому теплая матка — идеальная среда для поддержки новой жизни. Попробуйте есть тушеные блюда и супы с согревающими травами, такими как корица, имбирь и кайенский перец.

2. Достаточно отдыхайте

В ожидании новостей о беременности вы часто можете наблюдать, как сжимаете челюсть, живот или высоко поднимаете плечо, что является признаком стресса.Старайтесь избегать мыслей и действий, которые вызывают стресс. Иметь здоровую атмосферу дома и на работе.

• Ложитесь спать пораньше и вздремните днем.

• Если вы увлекаетесь бегом или тяжелыми упражнениями, переключитесь на быструю ходьбу или йогу для фертильности.

• Поместите свою матку в гнездо, что означает создание безопасной среды для приглашения ребенка.

• Сходите на массаж, погуляйте с близкими, запланируйте спокойный отдых.

3.Верьте в себя

Вы можете не забеременеть, если сомневаетесь в своих способностях родить ребенка. Измените свой образ мыслей и поверьте в себя. Негативные мысли могут изменить гормональный баланс, что повлияет на ваши шансы на здоровую овуляцию, имплантацию и беременность.

Позитивные аффирмации, консультации и медитация могут помочь вам думать о своем теле и внутреннем мире позитивно. Однако это не произойдет в одночасье. Так что будьте нежны, пока вы переходите к позитивному подходу.

Что такое аномальная имплантация?

Аномальная имплантация – это когда имплантация не происходит в слизистой оболочке матки или когда плацента не формируется правильно. В некоторых случаях имплантация может быть нормальной, но сформировавшийся эмбрион может быть аномальным (12).

Почему происходит аномальная имплантация?

В редких случаях у некоторых женщин может возникнуть аномальная имплантация, которая приводит к прерыванию беременности. К ним относятся:

1. Внематочная беременность

Когда оплодотворенная яйцеклетка имплантируется вне матки, это называется внематочной беременностью.Обычно имплантация происходит в фаллопиевой трубе, когда эмбриону не удается опуститься в матку. При этом он может иногда прикрепляться к яичнику или брюшной полости. Этот тип беременности может привести к сильному внутреннему кровотечению и разрыву маточных труб (13). Поэтому он требует немедленного внимания специалистов. Всегда существует риск повторной внематочной беременности в будущем.

2. Пузырный занос

Возникает, когда быстро делящаяся бластоциста прикрепляется к стенке матки, но не развивается в полноценный эмбрион.Вместо эмбриона бластоциста превращается в опухоль. Вы можете испытывать все признаки беременности и даже получить положительный результат теста на беременность из-за выработки ХГЧ опухолевыми клетками. Вы можете определить наличие пузырного заноса только с помощью ультразвука (14).

3. Проблемы с плацентой

Аномалии, связанные с плацентой, зависят от места имплантации. Если функция плаценты нарушена, беременность может не сохраниться.Проблемы с плацентой могут привести к прерыванию беременности, а ранняя потеря называется выкидышем (15). Если аномалии плаценты возникают на более поздних сроках беременности, они могут привести к преждевременным родам, вызывая осложнения для матери и ребенка.

Далее мы ответим на несколько часто задаваемых вопросов о симптомах имплантации.

Часто задаваемые вопросы

1. Как долго длится имплантационное кровотечение?

Имплантационное кровотечение может длиться от нескольких часов до двух дней.В редких случаях это может продолжаться более двух дней. Длина, вероятно, зависит от количества крови, выделяемой в процессе имплантации эмбриона.

2. Как долго длится спазм при имплантации?

Имплантационные спазмы могут длиться пять минут. В некоторых случаях судороги могут длиться менее пяти минут или до двух дней.

3. На что похожи спазмы при имплантации?

Они ощущаются как легкая колющая или тянущая боль в нижней части живота и начинаются примерно за неделю до начала менструации.У некоторых женщин это может быть только один раз, в то время как у других спазмы случаются время от времени.

Имплантация является первым этапом беременности. Это может быть настолько тонко, что вы можете даже не осознавать, что это произошло внутри вашего тела. Но когда у вас сильное желание забеременеть, вы склонны связывать каждое незначительное изменение в своем теле с беременностью. Главное не волноваться за результат и не разочаровываться, если результат отрицательный. Следующая менструация не за горами!

У вас есть вопросы или опыт, которым вы хотите поделиться? Напишите их в разделе комментариев ниже.

Ссылки:

Статьи MomJunction написаны на основе анализа исследовательских работ авторов-экспертов и учреждений. Наши ссылки состоят из ресурсов, установленных властями в соответствующих областях. Вы можете узнать больше о подлинности информации, которую мы представляем в нашей редакционной политике. Следующие две вкладки меняют содержание ниже. Суман Лал — акушер-гинеколог. Она окончила Медицинский колледж Патны и закончила аспирантуру AIIMS в Нью-Дели с золотой медалью университета по гинекологии.Имея опыт работы более 22 лет, в настоящее время она работает в известных медицинских учреждениях Гургаона и Южного Дели. У нее собственная гинекологическая клиника и клиника бесплодия в Гургаоне. Доктор Лал… ещеРебекка — автор статей о беременности и редактор, страстно увлеченный созданием основанного на исследованиях и интересного контента в таких областях, как фертильность, беременность, роды и послеродовой период. Она пишет о здоровье и благополучии с 2010 года. Она получила ученую степень в области биотехнологии и генетики в Академии Лойолы Университета Османии и получила сертификат «Питание и образ жизни во время беременности» от Людвига.