Где сделать денситометрию: Денситометрия в Нижнем Новгороде — цены в 12 клиниках

Объявление!

Специалистам

Отделения

Наши услуги

Мы лечим

Своевременное обращение к ревматологу способствует более быстрому снижению активности заболевания, снижает вероятность развития осложнений и увеличивает возможность сохранения трудоспособности.

Вы спрашивали…

Версия для слабовидящих

Стационар

Информация о персональных данных авторов обращений, направленных в электронном виде, хранится и обрабатывается с соблюдением требований Российского законодательства о персональных данных. Подробнее…

Администрация Губернатора Санкт-Петербурга проводит комплексный опрос бизнес сообщества в целях оценки условий ведения бизнеса в Санкт-Петербурге и определения направлений совершенствования работы исполнительных органов власти. Подробнее…

Диагностика

Услуги

В Клинической ревматологической больнице №25 вы можете получить медицинскую помощь на платной основе Подробнее…

цена в Екатеринбурге, где сделать анализ на остеопороз // Мегадента Клиник

«Мегадента Клиник» — одно из немногих медицинских учреждений Екатеринбурга, где проводится денситометрия. Цена на услугу зависит от различных факторов. На стоимость анализа структуры костей влияет, например, область исследования (все тело, позвоночник, т/б суставы и пр.). Возраст пациентов, повторность диагностики также учитывались при формировании цены на услугу в нашей клинике Екатеринбурга.

Денситометрия позвоночника или предплечья назначается врачом. И когда это происходит впервые, возникает множество вопросов:

• Для чего нужна денситометрия? Что это такое?
• Почему необходим такой анализ?
• Насколько продолжительна и безопасна диагностика?
• Как подготовиться к исследованию и применяется ли рентген?
• Где сделать денситометрию?

Подробнее о процедуре, проводимой в нашей клинике Екатеринбурга, читайте ниже.

Денситометрия костей как метод диагностики

Нехватка кальция в организме может сказаться на позвоночнике и вызвать ряд заболеваний. Одним из наиболее серьезных из них является остеопороз. Своевременная диагностика недуга позволяет безотлагательно начать терапию и не доводить его до тяжелых стадий. И очень важно вовремя сделать анализ состояния костей, поскольку цена промедления слишком высока.

Денситометрия — это неинвазивная методика измерения минеральной плотности костей. Цена исследования, как правило, доступна. При этом оно позволяет обнаружить остеопороз на ранних стадиях, что улучшает терапевтические прогнозы.

Особенно важна своевременная денситометрия позвоночника. Ведь он максимально нагружен при движении. И как следствие — нарушение костной структуры позвоночника снижает качество жизни.

В нашем центре анализ на остеопороз (денситометрия) осуществляется на специальном устройстве, измеряющем плотность костной ткани с помощью рентгеновских лучей. Это наиболее оптимальный по цене метод диагностики. Сегодня такой анализ структуры различных участков опорно-двигательного аппарата называют «золотым стандартом» диагностики остеопороза. И сделать его просто!

Специалисты ведущего медучреждения Екатеринбурга советуют пройти обследование на современном оборудовании последнего поколения — Hologic (США). Рентгеновская денситометрия, проводимая на таком аппарате по приемлемой цене, позволяет обнаружить пониженную плотность кости с максимальной точностью.

В «Мегадента Клиник» (г. Екатеринбург) денситометр применяют, чтобы:

• Определить полный стоматологический статус при составлении комплексного плана лечения;
• Вести пародонтологических пациентов, находящихся в группе риска по остеопорозу;
• Назначить ортодонтическое лечение;
• Спланировать хирургическое лечение, в том числе имплантацию.

Таким образом, понятия «остеопороз», «диагностика», «денситометрия», «рентген» широко используются в различных медицинских отраслях. И стоматология не является исключением.

Костная денситометрия: показания и противопоказания

В группе риска по остеопорозу находятся женщины старше 45 лет после менопаузы. К однозначным факторам, содействующим развитию заболевания, относят раннее наступление менопаузы, дефицит массы тела, курение, прием гормональных препаратов (особенно – преднизолона), семейный анамнез переломов. В связи с этим важно вовремя сделать анализ состояния костей скелета (позвоночника, конечностей и пр.).

По мнению медиков, главная проблема — это недостаточная информированность пациентов: даже те, кто относится к группам риска, не осознают всей опасности недуга, не торопятся сделать исследование на остеопороз, денситометрия и обращение к врачу не входят в их планы. А те, кому уже назначено лечение, считают заболевание несерьезным, потому что «вроде ничего не болит», а значит, можно не тратиться на лекарства или повторный рентген. В итоге те, кто пренебрегает своим здоровьем, платит слишком высокую цену. Узнать больше об остеопорозе можно в материале на сайте «Мегадента Клиник» (г. Екатеринбург).

Российская ассоциация по остеопорозу рекомендует обязательно сделать анализ структуры костной ткани женщинам старше 65 лет и мужчинам в возрасте от 70 лет. Тем более, что денситометрия в Екатеринбурге является вполне доступной по цене процедурой.

Абсолютных противопоказаний для проведения этого вида диагностики нет. Но поскольку при исследовании используется рентген, денситометрия не рекомендуется при беременности. Женщине, которая ждет ребенка, следует подождать с подобной диагностикой. Исследование на остеопороз (денситометрия) может быть затруднительным при таких изменениях позвоночника, когда пациенту сложно занять нужное положение во время анализа плотности костей и удерживать его при диагностике.

Как проходит исследование и где его можно сделать?

Рентгеновская денситометрия проводится на специальном аппарате с мягким столом. Пациент ложится на него, после чего доктор запускает программу сканирования рентгеном необходимого участка скелета (позвоночника, тазобедренных суставов и пр.).

Во время исследования рекомендуется лежать спокойно. Костная денситометрия длится от 10 до 30 минут. Продолжительность анализа костной ткани рентгеном зависит от исследуемой зоны (позвоночник, например, сканируется дольше, чем кость предплечья). Во многих населенных пунктах есть клиники, где проводится денситометрия. Екатеринбург не исключение. Сделать анализ состояния костей с помощью рентгена конечностей или позвоночника по приемлемой цене предлагает и наша клиника — «Мегадента Клиник».

Что надо сделать перед диагностикой?

Специальная подготовка для проведения такой диагностики рентгеном не требуется. Пожалуй, самым трудоемким этапом в этом процессе — поиск клиники, где проводится денситометрия в Екатеринбурге по оптимальной цене.

Также нет особых требований к соблюдению диеты или рациона питания перед исследованием рентгеном. Вы даже можете поесть непосредственно перед процедурой в «Мегадента Клиник» (г. Екатеринбург). Обследование рентгеном хоть позвоночника, хоть т/б суставов можно сделать в одежде. Необходимо проследить за тем, чтобы на ней не было металлических пуговиц и замков/молний.

Безопасна ли денситометрия костей и сколько она стоит?

Исследование не влияет на кожу. Анализ структуры опорно-двигательного аппарата можно сделать много раз. Побочные эффекты после рентгена, как правило, не наблюдаются.

Поэтому даже при серьезных патологиях для диагностики применяется денситометрия костей. Цена услуг по исследованию различных участков тела (позвоночника, т/б суставов и т.д.) в «Мегадента Клиник» (г. Екатеринбург) указана в разделе Прайс. Стоит отметить, что анализ на остеопороз (денситометрия) не относится к дорогостоящим исследованиям.

Ищете, где сделать денситометрию в Екатеринбурге?

Обращайтесь в Центр современной стоматологии на Кузнечной, 83.
Здесь проводится денситометрия, цена которой снижена для пенсионеров и детей.
Записаться и уточнить информацию можно по телефону (343) 342-00-00.

Денситометрия

Денситометрия

Кабинет денситометрии нашего медицинского центра оснащен  двухэнергетическим рентгеновским остеоденситометром Discovery W фирмы «Hologic».

      

Чаще всего проводится денситометрия двух областей пояснично-кресцового отдела позвоночника и тазобедренного сустава, где происходит большинство связанных с остеопорозом переломов, при необходимости можно измерить плотность костной ткани бедра, костей предплечья или сделать денситометрию всего тела. Денситометрия также позволяет определить содержание костных минералов как в отдельных частях тела (голова, туловище, рука, нога и т.д.), так и во всем организме.

Само исследование денситометрия заключается  в просвечивании кости невидимыми рентгеновскими лучами с низкой дозой ионизирующей нагрузки посредством двух энергетических потоков, что позволяет максимально точно и быстро провести исследование. Аппараты для проведения денситометрии оснащены специальным программным обеспечением, в которое заложены программы нормативных показателей по полу и возрасту. При проведении исследования денситометрия, полученные данные сопоставляются с ними и рассчитываются отклонения от статистических показателей.

При проведении процедуры на современном цифровом оборудовании доза радиации сведена к минимуму и составляет менее 1/10 дозы стандартной рентгенографии грудной клетки.

Клинические показания для проведения исследования денситометрия:

• Ранняя менопауза
• Естественная менопауза
• Почечная недостаточность
• Хроническое заболевание печени
• Длительный прием кортикостероидов
• Синдром пониженного всасывания
• Длительная неподвижность
• Ревматоидный артрит
• Гиперпаратиреоидизм
• Гиперадренокортицизм
• Гипотиреоидизм
• Наследственный остеопороз
• Диабет
• Переломы после небольших травм

Поделиться:

Читайте также:

• Центрифугирование, центрифуга с охлаждением
• Эхокардиография (УЗИ сердца)
• Эргоспирометрия
• Электрокардиография
• Холтеровское мониторирование ЭКГ
• Триплексное сканирование сосудов нижних конечностей (артерий и вен)
• Тредмил-тест
• Суточное мониторирование артериального давления (СМАД)
• Стресс-эхокардиография
• Магниторезонансная томография органов малого таза
• Триплексное сканирование сосудов головы и шеи
• Прейскурант. Диагностика
• Ультразвуковая диагностика (УЗИ)
• Рентгенография
• Ортопантомография
• Маммография
• Компьютерная томография
• Функциональная диагностика
• МРТ
• Эндоскопия
• Лабораторная диагностика

Врачи отделения:

Узнать о враче Записаться на приемЗадать вопрос

Дмитриев Александр Александрович

Врач-рентгенолог

Узнать о враче Записаться на приемЗадать вопрос

Собко Виктор Юрьевич

Врач-рентгенолог первой квалификационной категории

Показать всех специалистов

Высокотехнологичное оснащение лаборатории «КДЦ с поликлиникой» позволяет проводить полный комплекс точнейших биохимических исследований для наших пациентов: анализировать углеводный, липидный и минеральный обмен, гормоны щитовидной железы и репродуктивной системы, онкомаркеры, D-димеры, тропонины, выявлять аллергические предрасположенности, осуществлять инновационную проверку функции тромбоцитов.

Современное оборудование экспертного класса, произведенное ведущими японскими и французскими исследовательскими компаниями в соответствии с международными стандартами, которое установлено в лабораторном центре «КДЦ», позволяет анализировать кровь пациента по 28 параметрам, в том числе отслеживать популяцию лейкоцитов и исследовать областные клетки. Автоматизированность рабочего процесса и передовая техническая база обеспечивают минимальные сроки обработки анализов: например, в течение часа можно получить результаты биохимии, гематологии, гемостаза и анализа гормонов. В отделении лабораторной диагностики центра осуществляется ежедневный внутренний контроль качества международного уровня. Мы соблюдаем все критерии комфорта и безопасности проведения исследования для пациентов: забор крови осуществляется в стерильном процедурном кабинете с помощью вакуумной системы.

Доктор Екатерина Нестеренко

Высокотехнологичное оснащение лаборатории «КДЦ с поликлиникой» позволяет проводить полный комплекс точнейших биохимических исследований для наших пациентов: анализировать углеводный, липидный и минеральный обмен, гормоны щитовидной железы и репродуктивной системы, онкомаркеры, D-димеры, тропонины, выявлять аллергические предрасположенности, осуществлять инновационную проверку функции тромбоцитов.

Современное оборудование экспертного класса, произведенное ведущими японскими и французскими исследовательскими компаниями в соответствии с международными стандартами, которое установлено в лабораторном центре «КДЦ», позволяет анализировать кровь пациента по 28 параметрам, в том числе отслеживать популяцию лейкоцитов и исследовать областные клетки. Автоматизированность рабочего процесса и передовая техническая база обеспечивают минимальные сроки обработки анализов: например, в течение часа можно получить результаты биохимии, гематологии, гемостаза и анализа гормонов. В отделении лабораторной диагностики центра осуществляется ежедневный внутренний контроль качества международного уровня. Мы соблюдаем все критерии комфорта и безопасности проведения исследования для пациентов: забор крови осуществляется в стерильном процедурном кабинете с помощью вакуумной системы.

Доктор Екатерина Нестеренко

Грамотный подход к пациенту, который существует у нас в центре, и наличие современного оборудования – медицинской эндоскопической техники, аппаратов лучевой диагностики – позволяет проводить не только точное и комплексное всестороннее обследование, но и дальнейшее эффективное лечение пациентов.

В «КДЦ с поликлиникой» проводятся уникальные процедуры, соответствующие стандартам европейской медицинской практики – МР-энтерография, КТ-виртуальная гистеросальпинография, исследования суставов с картированием хряща и прямой артрографией, МРТ сердца, а также КТ-коронарография и КТ-колонография, которые мы стали делать первыми в Петербурге.

Доктор Алла Карпенко

Грамотный подход к пациенту, который существует у нас в центре, и наличие современного оборудования – медицинской эндоскопической техники, аппаратов лучевой диагностики – позволяет проводить не только точное и комплексное всестороннее обследование, но и дальнейшее эффективное лечение пациентов.

В «КДЦ с поликлиникой» проводятся уникальные процедуры, соответствующие стандартам европейской медицинской практики – МР-энтерография, КТ-виртуальная гистеросальпинография, исследования суставов с картированием хряща и прямой артрографией, МРТ сердца, а также КТ-коронарография и КТ-колонография, которые мы стали делать первыми в Петербурге.

Доктор Алла Карпенко

Здравствуйте!

Хочу выразить ОГРОМНУЮ благодарность докторам, работающим на отделении эндоскопии! Было страшно идти на колоноскопию, но эти очень внимательные, аккуратные и деликатные люди провели процедуру абсолютно без боли, создали очень комфортную обстановку с психологической точки зрения. К сожалению, имен и фамилий не помню, но таким врачам просто УРА!
СПАСИБО

Крякова Екатерина / 22.10.10

Здравствуйте!

Хочу выразить ОГРОМНУЮ благодарность докторам, работающим на отделении эндоскопии! Было страшно идти на колоноскопию, но эти очень внимательные, аккуратные и деликатные люди провели процедуру абсолютно без боли, создали очень комфортную обстановку с психологической точки зрения. К сожалению, имен и фамилий не помню, но таким врачам просто УРА!
СПАСИБО

Крякова Екатерина / 22.10.10

Показать все отзывы

Главная

Отделения

Направления

Денситометрия

Назад

Онлайн-заявка

Для записи на исследования и консультации, пожалуйста, внимательно заполните нашу электронную анкету. Поля, помеченные звёздочкой, обязательны для заполнения.

ФИО специалиста/ Направление/ Исследование *:

Желаемая дата:

Время приема

• Любое
• Утро 8:00 — 12:00
• День 12:00 — 17:00
• Вечер 17:00 — 21:00

Комментарий:

---

Фамилия*

Отчество

Телефон*

Время для звонка

E-mail

Это мое первое обращение в ФГБУ «КДЦ с поликлиникой»

Я ознакомлен с Политикой обработки персональных данных ФГБУ «КДЦ с поликлиникой», принимаю ее, а также даю свое согласие на сбор, обработку и хранение моих персональных данных согласно бланку указанного Согласия

Проверочные
символы

Записаться к врачу

Для записи на прием заполните, пожалуйста, форму:

Желаемая дата:

Опишите в двух словах суть обращения:

---

Фамилия*

Имя*

Телефон

Время для звонка

Это мое первое обращение в ФГБУ «КДЦ с поликлиникой»

Я ознакомлен с Политикой обработки персональных данных ФГБУ «КДЦ с поликлиникой», принимаю ее, а также даю свое согласие на сбор, обработку и хранение моих персональных данных согласно бланку указанного Согласия

Проверочные
символы

Обратный звонок

Я ознакомлен с Политикой обработки персональных данных ФГБУ «КДЦ с поликлиникой», принимаю ее, а также даю свое согласие на сбор, обработку и хранение моих персональных данных согласно бланку указанного Согласия

Условия соглашения

В соответствии с требованиями статьи 9 Федерального закона «О персональных данных» от 27. 07.2006 N 152-ФЗ, подтверждаю свое согласие на обработку ФГБУ «Консультативно-диагностический центр с поликлиникой» (далее — Оператор) моих персональных данных, включающих: фамилию, имя, отчество, контактные телефоны, адрес электронной почты, данные о состоянии моего здоровья, заболеваниях, случаях обращения за медицинской помощью — в медико-профилактических целях, в целях установления медицинского диагноза и оказания медицинских услуг при условии, что их обработка осуществляется лицом, профессионально занимающимся медицинской деятельностью и обязанным сохранять врачебную тайну. В процессе оказания Оператором мне медицинской помощи я предоставляю право медицинским работникам передавать мои персональные данные, содержащие сведения, составляющие врачебную тайну, другим должностным лицам Оператора в интересах моего обследования и лечения. Предоставляю Оператору право осуществлять все действия (операции) с моими персональными данными, включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, обновление, изменение, использование, обезличивание, блокирование, уничтожение. Оператор вправе обрабатывать мои персональные данные посредством внесения их в электронную базу данных, включения в списки (реестры) и отчетные формы, предусмотренные документами, регламентирующими порядок ведения и состав данных в учетно-отчетной медицинской документации. Срок хранения моих персональных данных соответствует сроку хранения первичных медицинских документов (медицинской карты) и составляет двадцать пять лет для стационара и пять лет для поликлиники. Передача моих персональных данных иным лицам или иное их разглашение может осуществляться только с моего письменного согласия. Настоящее согласие дано мной и действует бессрочно. Я оставляю за собой право отозвать свое согласие посредством составления соответствующего письменного документа, который может быть направлен мной в адрес Оператора по почте заказным письмом с уведомлением о вручении либо вручен лично под расписку представителю Оператора. В случае получения моего письменного заявления об отзыве настоящего согласия на обработку персональных данных Оператор обязан: по истечении указанного выше срока хранения моих персональных данных уничтожить (стереть) все мои персональные данные из баз данных автоматизированной информационной системы Оператора, включая все копии на машинных носителях информации, без уведомления меня об этом.

Написать письмо

Я ознакомлен с Политикой обработки персональных данных ФГБУ «КДЦ с поликлиникой», принимаю ее, а также даю свое согласие на сбор, обработку и хранение моих персональных данных согласно бланку указанного Согласия

Проверочные
символы

Денситометрия костей — цены от 600 руб. в Нижнем Новгороде, 26 адресов

МЦ Ника Спринг на Культуры ул. Культуры, д. 2		записаться ул. Культуры, д. 2	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг на Ошарской ул. Ошарская, д. 38А		записаться ул. Ошарская, д. 38А	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг на Семашко ул. Семашко, д. 12		записаться ул. Семашко, д. 12	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг на Максима Горького ул. Максима Горького, д. 226		записаться ул. Максима Горького, д. 226	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг в переулке Могилевича пер. Могилевича, д. 7		записаться пер. Могилевича, д. 7	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
Центр медицинской профилактики ГАЗ на проспекте Ленина 88А пр-т Ленина, д. 88А		пр-т Ленина, д. 88А	отзывы
Остеоденситометрия 600 р.
Центр медицинской профилактики ГАЗ на проспекте Ленина 99 пр-т Ленина, д. 99		пр-т Ленина, д. 99	отзывы
Остеоденситометрия 600 р.
МЦ Садко на Бекетова ул. Бекетова, д. 13		ул. Бекетова, д. 13	1 отзыв
Рентгеноденситометрия 1200 р.
МЦ Садко на Родионова ул. Родионова, д. 199		ул. Родионова, д. 199	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
МЦ Садко на проспекте Ленина пр-т Ленина, д. 67/1		пр-т Ленина, д. 67/1	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
МЦ Садко на Сормовском шоссе Сормовское шоссе, д. 20		Сормовское шоссе, д. 20	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
МЦ Садко на Белинского ул. Белинского, д. 71/1		ул. Белинского, д. 71/1	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
Здоровёнок на Воровского ул. Воровского, д. 22		ул. Воровского, д. 22	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
Здоровёнок на Белинского ул. Белинского, д. 71/1		ул. Белинского, д. 71/1	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
Здоровёнок на Сормовском шоссе Сормовское шоссе, д. 20		Сормовское шоссе, д. 20	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
Здоровёнок на Родионова ул. Родионова, д. 199		ул. Родионова, д. 199	отзывы
Рентгеноденситометрия 1200 р.
МЦ Ника Спринг на Южном шоссе Южное шоссе, д. 28/2		Южное шоссе, д. 28/2	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг на Мечтателей ул. Мечтателей, д. 2		ул. Мечтателей, д. 2	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг в Сарове г. Саров, ул. Зернова, д. 32		г. Саров, ул. Зернова, д. 32	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
Клиника Семейного Врача на Березовской ул. Березовская, 85А		ул. Березовская, 85А	отзывы
Денситометрия (поясничного отдела позвоночника) 1150 р.
МЦ Ника Спринг в Дзержинске на Гайдара г. Дзержинск, ул. Гайдара, д. 40		г. Дзержинск, ул. Гайдара, д. 40	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг в Дзержинске на Галкина г. Дзержинск, ул. Галкина, д. 11А		г. Дзержинск, ул. Галкина, д. 11А	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
МЦ Ника Спринг в Арзамасе г. Арзамас, пр-т Ленина, д. 135		г. Арзамас, пр-т Ленина, д. 135	отзывы
Остеоденситометрия на Ошарской, 38а 1800 р.
Институт травматологии ПИМУ на Верхне-Волжской набережной Верхне-Волжская наб. , д. 18		Верхне-Волжская наб., д. 18	2 отзыва
Рентгеноденситометрия поясничного отдела позвоночника 1000 р. Рентгеноденситометрия проксимального отдела бедренной кости 1000 р. показать еще 1 цену
Клинический диагностический центр на Решетниковской ул. Решетниковская, д. 2		ул. Решетниковская, д. 2	отзывы
Рентгеноденситометрия 2000 р.
ГКБ №3 на Верхне-Волжской набережной Верхне-Волжская наб., д. 21		Верхне-Волжская наб., д. 21	отзывы
Рентгеноденситометрия проксимального отдела бедренной кости 1070 р. Рентгеноденситометрия 1560 р.

Денситометрия

Подробнее о помощи на дому

Денситометрия — современная диагностическая процедура, позволяющая определить показатель минеральной плотности костей. Это самый передовой метод ранней диагностики остеопороза. Исследование структуры костной ткани обязательно показано после 50 лет, когда кости под воздействием различных факторов могут стать хрупкими и слишком чувствительными к нагрузкам, что увеличивает риск переломов и развития патологических заболеваний опорно-двигательного аппарата.

Суть процедуры, противопоказания и период реабилитации

Денситометрия относится к категории неинвазивных процедур. Она позволяет измерить уровень кальция в костной ткани, который является ее основополагающим структурным элементом. Чаще всего такая диагностика проводится в зоне позвоночника и шейки бедренной кости. Это связано с тем, что повреждения именно этих участков чреваты продолжительной терапией с ограничением двигательной функции пациента.

Абсолютных противопоказаний к денситометрии нет. Среди относительных стоит отметить беременность и патологические изменения в пояснично-крестцовом отделе позвоночника, из-за которых пациент не сможет занять необходимое положение на диагностическом столе или оставаться неподвижным на протяжении получаса, что необходимо для получения точных снимков. Решение о проведении диагностики в таких случаях врач принимает индивидуально, после оценки состояния больного.

Реабилитация после процедуры не нужна. Пациент может сразу же отправляться домой или в палату, если он находится на стационарном лечении.

Как проходит диагностика

Денситометрия абсолютно безболезненна. Перед проведением процедуры пациенту нужно знать несколько простых правил:

• За сутки до диагностики прекращают прием препаратов, содержащих кальций.
• При подозрении на развитие беременности следует обязательно сообщить о ней.
• Доктора необходимо уведомить, если недавно вы проходили обследование с использованием контрастного вещества, содержащего барий.
• Для получения максимально четкого изображения обследуемой зоны на протяжении диагностики нужно лежать абсолютно неподвижно.

В зависимости от обследуемой области тела пациент должен занять необходимое положение. Его укладывают на специальный стол. Далее над нужной зоной двигается датчик с высокой чувствительностью к рентгеновскому излучению, собирающий информацию о плотности костей.

В целом процедура занимает от 10 до 30 минут. Во время обследования пациент может остаться в своей одежде, если на ней нет элементов из металла (пуговицы, замки и другая фурнитура).

Что показывает диагностика

Проведение денситометрии позволяет получить два показателя: Т-балл и Z-балл. Первый получается при сравнении уровня плотности костей пациента с эталонными параметрами. В норме этот показатель равен единице или более. Если цифра менее –1, то это будет основанием для постановки диагноза «остеопороз». При –2,5 существенно увеличивается риск переломов костей.

Z-балл получают путем сравнения показателя плотности костей пациента со средним показателем по его возрастной группе. Если отклонения слишком большие, причем в любую из сторон, то для точной постановки диагноза потребуется еще рентгенография, биохимия или забор материала на биопсию костной ткани.

Где пройти диагностику

Стоимость денситометрии напрямую зависит от обследуемой зоны и используемого метода диагностики. Процедура проводится при помощи современного рентгеновского денситометра. Использование такого оборудования позволяет сократить лучевую нагрузку на организм. Она будет в 20 раз ниже, чем при прохождении стандартной флюорографии.

Результаты денситометрии пациенту выдают уже через 15 минут после завершения диагностики.

Получить консультацию опытного врача и записаться на денситометрию вы сможете, обратившись в клинику К+31. Мы предлагаем своим пациентам высокий уровень сервиса и передовое диагностическое оборудование для быстрого получения максимально точных результатов обследования. Прием по предварительной записи — вам не придется тратить время в очереди!

Я согласен на обработку моих персональных данных

Я ознакомлен с правилами внутреннего распорядка

Пользовательское соглашение сервисов АО «К+31»

Записаться

Бигвава
Нино Валерьевна

Врач-рентгенолог

Записаться

Большакова
Ирина Александровна

Врач-рентгенолог

Записаться

Скорняков
Юрий Владимирович

Врач-рентгенолог

Записаться

Снетков
Виктор Юрьевич

Врач-рентгенолог

Кандидат медицинских наук

Записаться

Подтетенев
Дмитрий Сергеевич

Руководитель диагностического центра, врач-рентгенолог

Записаться

Павликова
Елена Юрьевна

Врач-рентгенолог

Кандидат медицинских наук

Записаться

Синицын
Валентин Евгеньевич

Главный консультант по лучевой диагностике, врач-рентгенолог

Доктор медицинских наук, профессор

Записаться

Дружинина
Ксения Викторовна

Врач-рентгенолог

Записаться

Чичканова
Татьяна Владимировна

Врач онколог-маммолог, рентгенолог

Записаться

Вишневская
Анна Вадимовна

Врач-рентгенолог

Записаться

Душкова
Дарья Владимировна

Врач-рентгенолог

Записаться

Кондратьев
Евгений Валерьевич

Ведущий специалист по КТ, МРТ

К. м.н., ведущий научный сотрудник

Записаться

Шульц
Евгений Игоревич

Ведущий нейрорадиолог по МРТ и КТ диагностике

Записаться

Бронов
Олег Юрьевич

Врач-рентгенолог

Кандидат медицинских наук

Записаться

Васильева
Юлия Николаевна

Врач-рентгенолог, ведущий специалист по лучевой диагностике

Кандидат медицинских наук

Записаться

Гурчиани
Александр Ражденович

Врач-рентгенолог

Записаться

Мазо
Михаил Львович

Врач-маммолог, рентгенолог, врач ультразвуковой диагностики

Кандидат медицинских наук

Наблюдаюсь у Татьяны Владимировны Чичкановой несколько лет, и хочу написать самые добрые слова. Большое спасибо за профессионализм, чуткость и внимание. За то, что можете успокоить и помочь, войти в положение, и в непростой ситуации найти-собрать всех нужных специалистов и продлить на несколько часов свой рабочий день. Огромное Вам спасибо, была на приеме вчера — да, все было профессионально, спокойно, уверенно, на отлично)))
 

Наталья

Чтобы стать специалистом- необходимо окончить университет, чтобы стать хорошим специалистом- необходимо продолжать расширять теоретические знания и практиковать, чтобы стать профессионалом- необходимо грамотно совмещать знания, опыт и быть чутким, внимательным человеком. Татьяна Владимировна- настоящий профессионал своего дела. Очень рада, что попала именно к этому врачу. Внимательный и индивидуальный подход к вопросу здоровья- именно это происходит на приемах у Татьяны Владимировны. Спасибо!
 

Маргарита

Если необходима профессиональная консультация, помощь- нужно идти к Татьяне Владимировне. Человеку, который сталкивается с проблемами со здоровьем, критически важен подход и отношение врача. Татьяна В. профессионал с большой буквы. Я очень рада, что нашла «своего» врача онколога/маммолога. Спасибо Вам!!!!!
 

Маргарита

Анна Вадимовна заметила на рентгене трещину в кости, из-за которой и были все мои проблемы. До этого врачи не могли понять причину. Я очень благодарна доктору за квалифицированную работу и мастерство в чтении снимков.
 

Ольга

У Д.В. Душковой делала кт и мрт, в обоих случаях доктор была очень вежлива, приветлива и описала результаты довольно подробно.

Хочу выразить признательность персоналу делающему МРТ , увы у пациента оказалась серьезнейшая клаустрофобия и процедура не состоялась, но терпение и профессионализм с которым девушки отнеслись к своему делу- неоценимы! Будем возвращаться в клинику снова.
 

Angelika Simonova

Нельзя подобрать слов за спасение жизни человека, за правильный диагноз , за то , что сделали счастливыми близких ! Спасибо , что вы есть, Александр Ражденович !!!

Юлия

Лучший

Ирина

Хочу выразить благодарность Мазо Михаилу Львовичу (Врач-маммолог, рентгенолог, врач ультразвуковой диагностики ) за качественное лечение,высокий профессионализм и доброе отношение. Разработанные и применяемые им новейшие технологии позволяют людям улучшить качество жизни и вселяют надежду на дальнейшую счастливую жизнь .Когда зашла в кабинет, страх куда-то исчез, т.к. врач настолько умеет успокоить пациента , что становится совершенно не страшно. Процедура проходила под анестезией, все прошло отлично. Михаил Львович профессионал своего дела.
 

Дайгибат

Превосходная, заботливая поддержка менеджера Юлии Кулак. И до и после и во время обращения. Спасибо большое! На всех этапах У меня очень положительное впечатление от взаимодействия с персоналом. А в докторе Мазо М.Ю. я априори не сомневалась.)
 

Амина

Используя сайт, Вы даете согласие на использование файлов cookie, а также согласие на обработку персональных данных.

Используем cookie , работаем с данными.

Принимаю

Тест плотности костной ткани — Клиника Майо

Обзор

Тест плотности костной ткани определяет, есть ли у вас остеопороз — заболевание, характеризующееся более хрупкими костями и большей вероятностью их поломки.

В тесте используются рентгеновские лучи для измерения того, сколько граммов кальция и других костных минералов содержится в сегменте кости. Кости, которые чаще всего проверяются, находятся в позвоночнике, бедре и иногда в предплечье.

Продукты и услуги

• Книга: Книга семейного здоровья Mayo Clinic, 5-е издание
• Книга: Mayo Clinic по остеопорозу
• Информационный бюллетень: Mayo Clinic Health Letter — Digital Edition

Зачем это делается

Плотность костей

Плотность костей

При потере костной массы внешняя оболочка кости становится тоньше, а внутренняя становится более пористым. Нормальная кость крепкая и гибкая. Остеопоротическая кость слабее и подвержена переломам.

Врачи используют тестирование плотности кости для:

• выявления снижения плотности кости до того, как вы сломаете кость
• Определите риск переломов костей (переломов)
• Подтвердить диагноз остеопороза
• Мониторинг лечения остеопороза

Чем выше содержание минералов в ваших костях, тем плотнее ваши кости. И чем плотнее ваши кости, тем они обычно прочнее и тем меньше вероятность того, что они сломаются.

Тесты плотности костей отличаются от сканирования костей. Сканирование костей требует предварительной инъекции и обычно используется для обнаружения переломов, рака, инфекций и других аномалий в костях.

Хотя остеопороз чаще встречается у пожилых женщин, у мужчин также может развиться это заболевание. Независимо от вашего пола или возраста, ваш врач может порекомендовать пройти тест плотности костей, если вы:

• Потеряли рост. У людей, потерявших не менее 1,5 дюймов (3,8 см) в росте, могут быть компрессионные переломы позвоночника, одной из основных причин которых является остеопороз.
• Перелом кости. Хрупкие переломы возникают, когда кость становится настолько хрупкой, что ломается гораздо легче, чем ожидалось. Небольшие переломы иногда могут быть вызваны сильным кашлем или чиханием.
• Принимал определенные наркотики. Длительное использование стероидных препаратов, таких как преднизолон, препятствует процессу восстановления костей, что может привести к остеопорозу.
• Было снижение уровня гормонов. В дополнение к естественному падению гормонов, которое происходит после менопаузы, уровень эстрогена у женщин также может снижаться во время некоторых видов лечения рака. Некоторые методы лечения рака предстательной железы снижают уровень тестостерона у мужчин. Снижение уровня половых гормонов ослабляет кости.

Дополнительная информация

• Anorexia Neversa
• Гиперпаратиреоз
• Гипопаратиреоз
• Кифоз
• . . Устройства для измерения плотности костей позвоночника и бедра более точны, но стоят дороже, чем устройства для измерения плотности периферических костей предплечья, пальца или пятки.
• Предыдущие проблемы с позвоночником. Результаты теста могут быть неточными у людей со структурными аномалиями позвоночника, такими как тяжелый артрит, предшествующие операции на позвоночнике или сколиоз.
• Радиационное облучение. При проверке плотности костной ткани используются рентгеновские лучи, но уровень радиационного облучения обычно очень мал. Тем не менее, беременным женщинам следует избегать этих тестов.
• Отсутствие информации о причине. Тест плотности костной ткани может подтвердить, что у вас низкая плотность костной ткани, но не может сказать, почему. Чтобы ответить на этот вопрос, вам нужно более полное медицинское обследование.
• Ограниченное страховое покрытие. Не все планы медицинского страхования оплачивают тесты на плотность костей, поэтому заранее узнайте у своей страховой компании, покрывается ли этот тест.

Как подготовиться

Тесты на плотность костей просты, быстры и безболезненны. Практически не требует подготовки.

Обязательно сообщите своему врачу заранее, если вы недавно проходили обследование с барием или вам вводили контрастное вещество для КТ или ядерной медицины. Контрастные материалы могут помешать вашему тесту плотности кости.

Продукты питания и лекарства

Избегайте приема добавок с кальцием по крайней мере за 24 часа до теста плотности костей.

Одежда и личные вещи

Носите свободную удобную одежду и избегайте ношения одежды с молниями, ремнями или пуговицами. Оставьте украшения дома и выньте из карманов все металлические предметы, такие как ключи, зажимы для денег или мелочь. В некоторых учреждениях вас могут попросить переодеться в смотровую одежду.

Чего ожидать

Места для проверки плотности костей

Места для проверки плотности костей

Измерения плотности костей обычно проводятся на костях в позвоночнике (позвонках), бедре, предплечье, запястье, пальцах и пятке.

Тесты плотности костей обычно проводят на костях, которые с наибольшей вероятностью могут сломаться из-за остеопороза, включая:

• Кости нижнего отдела позвоночника (поясничные позвонки)
• Узкая шейка бедренной кости (бедренной кости) рядом с тазобедренным суставом
• Кости в предплечье

Если вам сделают тест на плотность кости в больнице, он, вероятно, будет сделан на устройстве, где вы лежите на мягкой платформе, а механическая рука проходит над вашим телом. Количество радиации, которому вы подвергаетесь, очень низкое, намного меньше, чем количество, испускаемое во время рентгена грудной клетки. Тест обычно занимает от 10 до 30 минут.

Небольшой портативный прибор может измерять плотность кости в костях на дальних концах скелета, например, в пальце, запястье или пятке. Инструменты, используемые для этих тестов, называются периферийными устройствами и часто используются на ярмарках здоровья.

Поскольку плотность костной ткани может варьироваться от одного участка тела к другому, измерение, проведенное на пятке, обычно не является таким точным предиктором риска перелома, как измерение, проведенное на позвоночнике или бедре. Следовательно, если ваш тест на периферийном устройстве положительный, ваш врач может порекомендовать повторное сканирование позвоночника или бедра для подтверждения вашего диагноза.

Результаты

Результаты теста плотности костей представлены двумя числами: T-показатель и Z-показатель.

Т-балл

Ваш Т-показатель — это плотность вашей кости по сравнению с тем, что обычно ожидается у здорового молодого человека вашего пола. Ваш Т-показатель — это количество единиц, называемых стандартными отклонениями, на которые плотность вашей кости выше или ниже среднего.

Z-показатель

Ваш Z-показатель — это число стандартных отклонений выше или ниже того, что обычно ожидается для человека вашего возраста, пола, веса, этнического или расового происхождения. Если ваш Z-показатель значительно выше или ниже среднего, вам могут потребоваться дополнительные тесты для определения причины проблемы.

Персонал клиники Мэйо

Похожие

Новости клиники Мэйо

Продукты и услуги

Количественное определение белковых полос с помощью денситометрии Протокол основан на превосходных инструкциях по использованию ImageJ для количественной оценки полос, написанных Люком Миллером, ноябрь 2010 г. http://www.lukemiller.org/ImageJ_gel_analysis.pdf. Для выполнения этого анализа вам понадобится программное обеспечение ImageJ, которое можно загрузить с веб-сайта NIH 9.0005

Протокол

Подготовка файла изображения группы:

• Откройте изображение с помощью imageJ
• Сохраните файлы в формате TIFF, используя имя, отличное от исходного 8 бит)
• Если у вас черный фон и белые полосы, инвертируйте изображение (Edit > Invert). В противном случае оставить как есть.
• Поверните изображение так, чтобы полосы выровнялись по горизонтали (Изображение > Трансформировать > Повернуть)
  • Выберите нужный угол (он будет вращаться по часовой стрелке)
  • Выберите не менее 6 линий сетки, чтобы определить, горизонтальны ли полосы
  • Использование «Билинейной» интерполяции
  • Установите флажок «Заливка фоновым цветом»
  • Отметьте «Предварительный просмотр»
  • Нажмите OK
• Снова сохраните файл
• Если имеется более одного набора полос, которые вы хотите проанализировать, сделайте столько копий файла, сколько полос вы хотите проанализировать. .
• Для каждого файла полос выполните следующие действия:
• Увеличьте изображение с помощью инструмента «Увеличительное стекло», чтобы вы в основном видели только полосы, которые хотите измерить.
• Обрежьте изображение, выделив полосы, которые вы хотите измерить, с помощью инструмента «Прямоугольник». Попробуйте нарисовать прямоугольник как можно меньше вокруг горизонтальной линии полос. Затем обрежьте (Изображение > Обрезать). Теперь у вас должен быть очень маленький файл с прямоугольником, который включает только каналы, которые вы хотите измерить
• Сохраните файл и повторите с другими копиями файла, если у вас есть более одного набора каналов на одном и том же исходном изображении.
• Повторите этот процесс, используя файл изображения управления загрузкой, если это другой файл.
• Откройте файл Powerpoint и перетащите все ваши файлы изображений в PowerPoint
• Выровняйте их, оставляя пробелы между ними.
  • Примечание. Вы также можете пометить все, вставить изображения лестницы и другие вещи, если вы оставите пустое пространство вокруг изображений.
  • Ни в коем случае не изменяйте размеры и не настраивайте изображения. Дорожки должны совпадать.
• Сохраните файл в формате TIFF с помощью команды Powerpoint «Сохранить как». Powerpoint сохраняет папку с именем файла, а затем сохраняет каждый слайд как slide1. tiff и т. д.

Измерение плотности полос.

• Откройте созданный выше файл TIFF в ImageJ.
• Преобразование изображения в 8-битное (Изображение > Тип > 8-битное). Вы должны сделать это снова, потому что файл PowerPoint сохраняет его как файл RGB tiff.
• Увеличьте изображение с помощью инструмента «Увеличительное стекло», чтобы вы в основном видели только полосы, которые хотите измерить
• С помощью инструмента «Прямоугольник» создайте вертикальный прямоугольник на первой дорожке. Включите немного белого пространства выше и ниже полосы (или полос). Если на дорожке несколько полос, убедитесь, что между полосами есть пустое пространство. Укажите, что это первая дорожка геля, выбрав: Анализ > Гели > Выбрать первую дорожку (или команду — 1)
• С помощью мыши щелкните внутри прямоугольника и перетащите (второе поле будет перетаскиваться) на вторую дорожку. Укажите, что это другая дорожка, выбрав: Анализ > Гели > Выбрать следующие дорожки (или команду -2)
• Повторяйте, пока все дорожки не будут выделены прямоугольником. (Примечание: вам не нужно следить за высотой блоков, так как ImageJ автоматически выровняет блоки.)
• После того, как вы перетащили последний прямоугольник на последнюю дорожку, укажите, что вы закончили, выбрав: Анализировать > Гели > Сюжетные линии (или команда -3). ImageJ откроет новое окно, в котором окна располагаются горизонтально, по одному окну на каждую из ваших дорожек. Внутри каждого окна будет гора, если только на дорожке не было более одной полосы, и в этом случае будет эквивалентное количество гор. Гора представляет плотность полосы. Если нижняя часть горы не доходит до нижней части окна, значит, вы неправильно подготовили свои изображения, и не было белого пространства выше или ниже бэнда. В этом случае вам необходимо переделать изображения, следуя приведенным выше инструкциям.
• Рассчитайте площадь внутри гор с помощью волшебной палочки. Нажмите на волшебную палочку на панели инструментов ImageJ, затем щелкните один раз внутри каждой горы. При первом щелчке внутри горы ImageJ откроет новое окно и отобразит область внутри горы. Когда вы нажимаете на последующие горы, Image J добавит в окно еще одно измерение.
• После щелчка по всем горам скопируйте данные в таблицу Excel.
• Вы можете сохранить изображение графика, если хотите, и скопировать его в PowerPoint, где есть рисунок блота.
• Повторите процесс с каждым изображением.
• Теперь у вас должна быть таблица Excel, содержащая «Площадь» каждой полосы на всех ваших изображениях.

Расчет относительной плотности

• Для каждой полосы подряд рассчитайте «процент» от общей площади каждой полосы. Другими словами, сложите все плотности ряда полос, а затем подсчитайте, какой процент от общей плотности приходится на каждую полосу. Ниже приведен пример вестерн-блоттинга с шестью дорожками, показывающий рассчитанный процент.

• Затем рассчитайте относительную плотность каждой полосы, используя контрольное условие. Разделите процент полосы состояния на процент полосы контроля. В таблице ниже показана относительная плотность на основе столбца процентов. Обратите внимание, что по определению относительная плотность условия контроля всегда должна быть равна 100.

• Затем повторите процесс для контрольных полос загрузки. Ниже приведен пример, который соответствует приведенной выше таблице. Это НЕ является хорошим репрезентативным вестерн-блоттингом, потому что, как вы можете видеть по числам ниже, полосы контроля загрузки немного различаются по плотности. Но именно поэтому мы используем контроль загрузки.

• На последнем шаге рассчитайте скорректированную относительную плотность для интересующих вас полос. Для этого разделите относительную плотность состояния 1 с помощью экспериментального антитела на относительную плотность состояния 1 с использованием контрольного антитела. В приведенном выше случае это будет 46, разделенное на 54.

• Готово! Вы можете использовать гистограмму для визуального отображения скорректированной относительной плотности. Обратите внимание, что контрольное условие, опять же по определению, всегда должно быть равно 100. В приведенном выше примере измеряемый белок был сильно снижен в условии 4, но относительно не изменился в других условиях. Также помните, что к этим числам не привязаны единицы измерения, все они относительны и не могут использоваться для указания фактического количества белка.

Сканирование плотности костей: медицинский тест MedlinePlus

Что такое сканирование плотности костей?

Сканирование плотности костей, также известное как DEXA-сканирование, представляет собой тип низкодозового рентгеновского исследования, при котором измеряется кальций и другие минералы в костях. Измерение помогает показать прочность и толщину (известную как плотность или масса кости) ваших костей.

Кости большинства людей с возрастом становятся тоньше. Когда кости становятся тоньше, чем обычно, это называется остеопенией. Остеопения подвергает вас риску более серьезного заболевания, называемого остеопорозом. Остеопороз — прогрессирующее заболевание, при котором кости становятся очень тонкими и ломкими. Остеопороз обычно поражает пожилых людей и чаще всего встречается у женщин старше 65 лет. Люди с остеопорозом подвержены более высокому риску переломов (сломанных костей), особенно в области бедер, позвоночника и запястий.

Другие названия: тест минеральной плотности кости, тест BMD, сканирование DEXA, DXA; Двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия

Для чего он используется?

Сканирование плотности костной ткани используется для:

• Диагностики остеопении (низкая костная масса)
• Диагностика остеопороза
• Предсказать риск будущих переломов
• Узнайте, работает ли лечение остеопороза

Зачем мне нужно сканирование плотности костей?

Большинство женщин в возрасте 65 лет и старше должны пройти сканирование плотности костей. Женщины в этой возрастной группе подвержены высокому риску потери плотности костной ткани, что может привести к переломам. У вас также может быть риск низкой плотности костной ткани, если вы:

• Имеют очень низкую массу тела
• Имели один или несколько переломов после 50 лет
• Потеряли полдюйма или более в росте в течение одного года
• Мужчина старше 70 лет
• Наличие остеопороза в семейном анамнезе

Другие факторы риска включают:

• Отсутствие физической активности
• Курение сигарет
• Пьянство
• Недостаток кальция и витамина D в рационе

Что происходит во время сканирования плотности костей?

Существуют различные способы измерения плотности костей. Наиболее распространенный и точный способ использует процедуру, называемую двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрией, также известную как сканирование DEXA. Сканирование обычно проводится в кабинете рентгенолога.

Во время сканирования DEXA:

• Вы ляжете на спину на мягкий стол. Вы, вероятно, сможете оставить свою одежду.
• Возможно, вам придется лечь с прямыми ногами, или вас могут попросить положить ноги на мягкую платформу.
• Сканирующий аппарат пройдёт через нижнюю часть позвоночника и бедро. В то же время под вами пройдет еще одна сканирующая машина, называемая генератором фотонов. Изображения с двух машин будут объединены и отправлены на компьютер. Медицинский работник будет просматривать изображения на экране компьютера.
• Пока машины сканируют, вам нужно оставаться неподвижным. Вас могут попросить задержать дыхание.

Для измерения плотности кости в предплечье, пальце, кисти или стопе врач может использовать портативный сканер, известный как периферийное сканирование DEXA (p-DEXA).

Нужно ли мне что-то делать для подготовки к тесту?

Вам может быть рекомендовано прекратить прием добавок кальция за 24–48 часов до исследования. Кроме того, вам следует избегать ношения металлических украшений или одежды с металлическими деталями, такими как пуговицы или пряжки.

Есть ли риски для теста?

При сканировании плотности костей используются очень низкие дозы радиации. Это безопасно для большинства людей. Но это не рекомендуется для беременных женщин. Даже низкие дозы радиации могут нанести вред нерожденному ребенку. Обязательно сообщите своему врачу, если вы беременны или думаете, что можете быть беременны.

Что означают результаты?

Результаты плотности костей часто представляются в виде Т-балла. Т-показатель — это измерение, которое сравнивает ваше измерение плотности костей с плотностью костей здорового 30-летнего человека. Низкий показатель T означает, что у вас, вероятно, есть потеря костной массы.

Ваши результаты могут иметь одно из следующих значений:

• Показатель T -1,0 или выше. Это считается нормальной плотностью костей.
• Показатель Т от -1,0 до -2,5. Это означает, что у вас низкая плотность костной ткани (остеопения) и вы можете подвергаться риску развития остеопороза.
• Т-показатель -2,5 или меньше. Это означает, что у вас, вероятно, остеопороз.

Если ваши результаты показывают, что у вас низкая плотность костной ткани, ваш поставщик медицинских услуг порекомендует шаги для предотвращения дальнейшей потери костной массы. Сюда могут входить:

• Больше физических упражнений, таких как ходьба, танцы и использование силовых тренажеров.
• Добавление в рацион кальция и витамина D
• Прием рецептурных лекарств для увеличения плотности костей

Если у вас есть вопросы о ваших результатах и/или лечении потери костной массы, поговорите со своим лечащим врачом.

Узнайте больше о лабораторных тестах, контрольных диапазонах и понимании результатов.

Есть ли что-нибудь еще, что мне нужно знать о сканировании плотности костей?

DEXA-сканирование является наиболее распространенным способом измерения плотности кости. Но ваш поставщик медицинских услуг может назначить дополнительные анализы, чтобы подтвердить диагноз или выяснить, работает ли лечение потери костной массы. К ним относятся анализ крови на кальций, анализ на витамин D и/или анализы на определенные гормоны.

Ссылки

1. Kaiser Permanente [Интернет]. Kaiser Foundation Health Plan Inc; c2021. Плотность костей: как это делается; [цитировано 24 августа 2021 г.]; [около 6 экранов]. Доступно по адресу: https://healthy.kaiserpermanente.org/health-wellness/health-encyclopedia/he.bone-density.hw3738#hw3761
2. Kaiser Permanente [Интернет]. Kaiser Foundation Health Plan Inc; c2021. Плотность костей: результаты; [цитировано 24 августа 2021 г.]; [около 9 экранов]. Доступно по адресу: https://healthy.kaiserpermanente.org/health-wellness/health-encyclopedia/he.bone-density.hw3738#hw3770
.
3. Kaiser Permanente [Интернет]. Kaiser Foundation Health Plan Inc; c2021. Плотность костей: риски; [цитировано 24 августа 2021 г. ]; [около 8 экранов]. Доступно по адресу: https://healthy.kaiserpermanente.org/health-wellness/health-encyclopedia/he.bone-density.hw3738#hw3768
4. Kaiser Permanente [Интернет]. Kaiser Foundation Health Plan Inc; c2021. Плотность костей: обзор теста; [цитировано 24 августа 2021 г.]; [около 3 экранов]. Доступно по адресу: https://healthy.kaiserpermanente.org/health-wellness/health-encyclopedia/he.bone-density.hw3738#hw3741
.
5. Kaiser Permanente [Интернет]. Kaiser Foundation Health Plan Inc; c2021. Плотность костей: зачем это делается; [цитировано 24 августа 2021 г.]; [около 4 экранов]. Доступно по адресу: https://healthy.kaiserpermanente.org/health-wellness/health-encyclopedia/he.bone-density.hw3738#hw3752
6. Лабораторные тесты онлайн [Интернет]. Вашингтон, округ Колумбия: Американская ассоциация клинической химии; c2001–2020 гг. Остеопороз; [обновлено 30 октября 2019 г .; процитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 2 экранов]. Доступно по адресу: https://labtestsonline. org/conditions/osteoporosis
.
7. Здоровье штата Мэн [Интернет]. Портленд (Мэн): Здоровье штата Мэн; c2020. Тест плотности кости/сканирование DEXA; [цитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 3 экранов]. Доступно по адресу: https://mainehealth.org/services/x-ray-radiology/bone-density-test
.
8. Клиника Майо [Интернет]. Фонд Мэйо по медицинскому образованию и исследованиям; с1998–2020. Тест плотности костной ткани: Обзор; 7 сентября 2017 г. [цитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 3 экранов]. Доступно по адресу: https://www.mayoclinic.org/tests-procedures/bone-density-test/about/pac-20385273
.
9. Руководство Merck, версия для потребителей [Интернет]. Кенилворт (Нью-Джерси): Merck & Co. Inc.; 2020. Тесты на заболевания опорно-двигательного аппарата; [обновлено в марте 2020 г.; процитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 2 экранов]. Доступно по адресу: https://www.merckmanuals.com/home/bone,-joint,-and-muscle-disorders/diagnosis-of-musculoskeletal-disorders/tests-for-musculoskeletal-disorders
10. My Health Finder [Интернет]. Вашингтон, округ Колумбия: Министерство здравоохранения и социальных служб США; Пройдите тест на плотность костей; [обновлено 13 апреля 2020 г .; процитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 3 экранов]. Доступно по адресу: https://health.gov/myhealthfinder/topics/doctor-visits/screening-tests/get-bone-density-test
.
11. Национальный фонд остеопороза [Интернет]. Арлингтон (Вирджиния): NOF; c2020. Экзамен/тестирование плотности костей; [цитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 3 экранов]. Доступно по адресу: https://www.nof.org/patients/diagnosis-information/bone-density-examtesting
12. Национальный ресурсный центр по остеопорозу и связанным с ним заболеваниям костей [Интернет]. Bethesda (MD): Министерство здравоохранения и социальных служб США; Измерение костной массы: что означают цифры; [цитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 2 экранов]. Доступно по адресу: https://www.bones.nih.gov/health-info/bone/bone-health/bone-mass-measure
.
13. UF Health: Университет здоровья Флориды [Интернет]. Гейнсвилл (Флорида): Университет здоровья Флориды; c2020. Тест минеральной плотности костей: Обзор; [обновлено 13 апреля 2020 г .; процитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 2 экранов]. Доступно по адресу: https://ufhealth.org/bone-mineral-density-test
14. Медицинский центр Университета Рочестера [Интернет]. Рочестер (Нью-Йорк): Медицинский центр Рочестерского университета; c2020. Энциклопедия здоровья: Тест на плотность костей; [цитировано 13 апреля 2020 г.]; [около 2 экранов]. Доступно по адресу: https://www.urmc.rochester.edu/encyclopedia/content.aspx?ContentTypeID=92&ContentID=P07664
.

Распространенные ошибки количественного анализа в денситометрии Вестерн-блот и предлагаемые корректирующие меры0005

Данные денситометрии, полученные для вестерн-блоттинга, обычно используются для сравнения содержания белка в образцах. В последнее десятилетие стало очевидным, что предположения, лежащие в основе этих сравнений, часто нарушаются в исследованиях, сообщающих данные вестерн-блоттинга в литературе. Эти нарушения могут привести к ошибочной интерпретации данных и могут способствовать плохой воспроизводимости исследований. Мы оценили достоверность данных вестерн-блоттинга, полученных при изучении белков ткани миометрия человека. Мы провели серию разведений белковых лизатов, чтобы изучить линейность данных денситометрии. Проанализированные белки включали α SMA, HSP27, ERK1/2 и GAPDH. Хотя идеальные данные денситометрии прямо пропорциональны количеству белка, наши данные подтверждают, что данные денситометрии часто отклоняются от этого идеала, и в этом случае они могут соответствовать непропорциональным линейным или гиперболическим математическим моделям и могут достигать насыщения. Данные нелинейной денситометрии наблюдались при обнаружении вестерн-блотов с использованием инфракрасной флуоресценции или хемилюминесценции и при различных условиях SDS-PAGE. Мы подтверждаем, что фантомные артефакты, связанные с переизбытком интересующих белков в вестерн-блоттингах, могут исказить результаты. Мы также подтверждаем, что, когда данные, подлежащие нормализации, не прямо пропорциональны содержанию белка, будет ошибкой использовать метод нормализации, заключающийся в разделении данных денситометрии по интересующему белку на данные денситометрии по нагрузочному контрольному белку (белкам), поскольку это может привести к тому, что нормализованные данные будут непригодны для сравнения. Используя добавленные белки таким образом, который позволил нам контролировать общее количество белка на дорожке, изменяя только количество добавленных белков, мы подтверждаем, что нелинейность и насыщение данных денситометрии, а также ошибки, вызванные процессами нормализации, могут возникать в рутинных анализах, которые сравнить равные количества лизата. Эти результаты применимы ко всем исследованиям вестерн-блоттинга, и мы выделяем проверки контроля качества, которые необходимо выполнять, чтобы сделать данные вестерн-блоттинга более количественными.

1. Введение

Вестерн-блоттинг обычно используется для обнаружения белков и их посттрансляционных модификаций (ПТМ) в биологических образцах. Разработка и широкое распространение современных устройств обработки изображений, которые захватывают цифровые изображения вестерн-блотов, визуализированные с помощью детекции хемилюминесценции или флуоресценции, привели к предположению о количественном вестерн-блоттинге в литературе. Каждому пикселю в этих цифровых изображениях присваивается значение интенсивности, которое связано с количеством фотонов, обнаруженных соответствующим пикселем в датчике, пока он не достигнет насыщения [1]. Для количественного анализа используются изображения без насыщения детектором, а содержание белка/PTM чаще всего измеряется с использованием алгоритма оптической плотности (OD), который вычисляет OD. значения интенсивности полосы с поправкой на фон и площади полосы интересующего белка/PTM. Все специализированное программное обеспечение для вестерн-блоттинга от основных поставщиков позволяет измерять ОП. с незначительными вариациями в реализации от поставщика к поставщику.

Идеальный Н.Д. данные пропорциональны содержанию белка/PTM и поэтому лучше всего моделируются с помощью линейной регрессии через начало координат (далее именуемой прямо пропорциональной или пропорциональной линейной моделью, уравнение y = mx) [2–5]. Принято считать, что эта модель соответствует внешнему диаметру. данные [5], и лишь изредка экспериментальные данные, подтверждающие это предположение, включаются в опубликованные исследования. Однако недавние исследования показали, что O.D. данные могут нарушать это предположение, и в этих случаях их лучше моделировать с помощью непропорциональных линейных функций (уравнение y = mx + b) или нелинейных гиперболических функций [2, 4–6]. Определение подходящей модели для O.D. данные имеют решающее значение, поскольку анализ данных с использованием неподходящей модели приводит к неправильной оценке величины любых различий в содержании белка/PTM между образцами [2, 4, 5, 7]. В крайних случаях данные вестерн-блоттинга могут стать насыщенными (независимо от насыщения системы обнаружения), после чего дальнейшее увеличение количества белка не может быть обнаружено и/или измерено [2-21]. Нецелесообразно количественно анализировать данные насыщенного вестерн-блоттинга, поскольку различия в количестве белка/PTM между образцами могут быть упущены, что приведет к ложноотрицательным результатам [3, 4, 8, 12, 13].

В большинстве количественных вестерн-блоттингов уровни целевого белка (белков)/ПТМ (белков) нормализуются к уровням нагрузочного контрольного белка (белков), содержание которых не меняется между сравнениями [7, 9–12, 17, 18, 20, 22]. Этот метод нормализации используется для коррекции различий в содержании белка, которые не имеют отношения к рассматриваемому биологическому вопросу [7, 9–12, 17, 18, 20, 22]. Нормализация обычно выполняется путем деления O.D. значение целевого белка/ПТМ по О.Д. значение загрузки контрольного белка (белков), которые были обнаружены в одном и том же образце [6, 10, 12, 13] и в идеале были проведены на одной и той же дорожке геля и обнаружены на одной и той же вестерн-мембране [23]. Это соотношение (целевой/контрольный(ые) нагрузки)) используется для сравнений, и считается, что любое различие между образцами соответствует различию в содержании целевого белка/PTM. Однако широко не признано, что эта стратегия нормализации действительна только тогда, когда О. Д. данные соответствуют прямопропорциональным моделям [4–6, 24]. Учитывая, что в лучшем случае О.Д. данные соответствуют только прямо пропорциональным моделям в ограниченных диапазонах разбавлений лизата [2-21, 25], возможно, что многие исследования вестерн-блоттинга с использованием этого подхода к нормализации были скомпрометированы неверными предположениями.

Вестерн-блоты являются одними из наиболее распространенных экспериментальных инструментов, используемых для изучения белков в репродуктивной биологии, включая исследования функции гладкой мускулатуры миометрия. В этой области стандартной практикой является нормализация наружного диаметра. данные белков-мишеней для загрузки контрольных белков, таких как альфа-актин гладких мышц ( α SMA) [26–28], β -актин [29], глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH) [30 ] и α -тубулина [31]. Также обычно данные, специфичные для PTM, нормализуются к общему уровню целевого белка [28, 32, 33]. Мы провели случайный поиск среди более чем 100 индексированных в PubMed статей, опубликованных в период с 2005 по 2017 год, в которых исследовалась функция миометрия с использованием количественного вестерн-блоттинга, и обнаружили, что только одна [30] представила данные проверки вестерн-блоттинга либо в основном тексте, либо в дополнительных материалах.

Целью нашего исследования было проверить, могут ли количественные эксперименты по вестерн-блоттингу с использованием непроверенных предположений о пропорциональности для нормализации вводить в заблуждение и влиять на изучение белков ткани миометрия человека. Подобные ошибки могут возникать во всех исследованиях вестерн-блоттинга независимо от типа образца [2–21, 25]. В то время как неопределенная специфичность антитела угрожает валидности любого вестерн-блоттинга [2, 3, 20, 34-37], вестерн-блоттинг, выполненный с использованием антитела, которое не распознает правильную мишень, может быть исправлен только путем замены его антителом, которое распознает. Поэтому мы сосредоточимся на возможных ошибках, которые могут возникнуть на этапах количественного определения вестерн-блоттинга.

В рамках этих исследований мы всесторонне сравнили обнаружение вестерн-блоттинга с помощью хемилюминесценции и инфракрасной флуоресценции и предоставили пример количественного анализа вестерн-блоттинга с использованием надлежащего рабочего процесса.

Мы надеемся, что углубление знаний об ограничениях вестерн-блоттинга позволит ученым лучше использовать эту технологию для получения значимых данных и, следовательно, приведет к регулярному включению данных проверки в будущие публикации.

2. Материалы и методы

2.1. Экстракция и подготовка белков

Эти исследования были одобрены Комитетом по этике исследований на людях Хантера и Новой Англии в соответствии с рекомендациями Университета Ньюкасла и больницы Джона Хантера, Ньюкасл, Австралия (06.02.12/3.13). Биоптаты ткани миометрия были взяты во время кесарева сечения у доношенных и рожениц в срок, которые дали информированное письменное согласие. Эти образцы были быстро заморожены в жидком азоте (LN ₂ ) и хранят при температуре -80°C. При обработке образцы всегда хранились на сухом льду между этапами до тех пор, пока они не были погружены в буфер для лизиса белка. Ткани измельчали ​​в металлической ступке с пестиком. Образцы помещали в ступку в небольшой бассейн LN ₂ и раздавливали, ударяя пестиком молотком сразу после испарения LN ₂ . После измельчения образцы погружали в LN ₂ , а затем переносили в отдельные пробирки CK28-R на 1,5 мл Precellys (кат. № KT039).61-1-007.2, Бертин Технологии). Ступку и пестик очищали 70% этанолом и предварительно охлаждали LN ₂ для каждого образца. Когда все образцы измельчали, их помещали на лед и лизировали в 1 мл буфера для экстракции 2D (8 М мочевины, 2 М тиомочевины, 4% CHAPS) или 1 мл буфера для экстракции SDS (2% SDS, 50 мМ Трис, pH 6,8). , 5  мМ ЭДТА). В обоих буферах для лизиса использовали таблетки с мини-коктейлем ингибитора протеазы cOplete (кат. № 4693124001, Roche) и таблетки ингибитора фосфатазы PhosSTOP (кат. № 47001, Roche). После добавления лизирующего буфера образцы немедленно гомогенизировали в гомогенизаторе Precellys 24 (Bertin Technologies) при 5000 об/мин с использованием 2 интервалов гомогенизации по 30 с с 20-секундным перерывом между каждой гомогенизацией. Затем образцы хранили на льду в течение 2 минут, чтобы предотвратить нагревание образца, и этап гомогенизации Precellys повторяли еще дважды. Затем образцы центрифугировали в течение 10 мин при 16000°С.0467 г при 4°C для осаждения нерастворимого клеточного дебриса. Супернатант экстрагировали, переносили в свежие пробирки и хранили при -80°С. Количество белка в каждом образце оценивали с помощью анализов количественного определения белка, проводимых в соответствии с инструкциями производителя. 2D-экстракты количественно определяли с использованием набора 2-D Quant Kit (кат. № 80-6483-56, GE Life Sciences). Образцы SDS количественно определяли с использованием набора для анализа белка BCA (кат. № 23227, Thermo Fisher Scientific). Измерения проводились в плоскодонной 96-луночный планшет при длине волны 480 нм для набора 2-D Quant и длине волны 562 нм для набора для анализа белка BCA с использованием планшет-ридера SPECTROstar Nano (BMG LABTECH). Объединенные образцы были созданы путем смешивания равных количеств белка ( μ г общего белка) отдельных образцов, которые были экстрагированы в одном и том же лизирующем буфере. Концентрацию белка в объединенных образцах повторно оценивали с использованием соответствующего набора для количественного определения, указанного выше для буфера 2D или SDS. Каждый отдельный образец, а также объединенные образцы делили на аликвоты и хранили при -80°С.

2.2. Добавление рекомбинантных белков в гомогенаты миометрия

В экспериментах по добавлению белков использовали объединенные гомогенаты человеческого миометрия, полученные из 3 нетрудоспособных тканей, которые были экстрагированы в буфере для лизиса 2D. Экстракция этих образцов, объединение и количественная оценка белка были выполнены идентично 2D-экстракциям, описанным выше. Этот объединенный образец был разбавлен до концентрации 2 мг/мл в 1 мл буфера для лизиса 2D. 900  μ л (1800  μ г) этого образца было использовано для восстановления 100  мкл г очищенного рекомбинантного ENPP1 (кат. № Ab167943, Abcam), а затем 100  мкл г Fam3a (кат. № Ab167946, Abcam), а затем доводят до конечного объема 1  мл. Последующий количественный анализ общего белка (выполнение 2-D Quant Kit в соответствии с инструкциями производителя) подтвердил, что содержание белка по-прежнему составляет примерно 2 мг/мл. Этот метод добавления белка создал образец, в котором каждый добавленный белок составлял примерно 10% от общего количества белка в лизате. Затем этот образец последовательно разбавляли в соотношении 1:1 объединенным лизатом без добавления 2 мг/мл для создания восьми 2-кратных серийных разведений, которые содержали уменьшающиеся количества добавленных белков при сходных концентрациях общего белка. Эти образцы затем делили на аликвоты и хранили при -80°C, и для каждой мембраны использовали отдельную аликвоту. Разделение белков и вестерн-блоттинг выполняли с использованием того же оборудования, что и образцы SDS, описанные ниже. Сигналы вестерн-блоттинга для рекомбинантных ENPP1 и Fam3a одновременно визуализировались на одних и тех же мембранах вестерн-блоттинга с использованием антитела против 6x-His-метки (подробности см. В дополнительной таблице S1), которые распознавали 6x-His-метку, присутствующую на обоих белках.

2.3. Электрофорез в SDS-полиакриламидном геле и перенос мембраны

Аликвоты объединенных гомогенатов ткани миометрия размораживали на льду, нагревали до комнатной температуры, а затем перемешивали на вортексе для получения полной суспензии белков. Образцы проверяли визуально, чтобы убедиться в отсутствии осадка. Если наблюдался осадок, образцы оставляли на 1 мин при комнатной температуре, а затем повторно вортексировали. Это повторялось до тех пор, пока образцы не становились прозрачными. Затем образцы по возможности хранили на льду, стараясь избежать образования осадка. Каждое разведение лизата готовили как исходный образец объемом не менее 10  мкл л, и для каждой мембраны, в которой был обнаружен один и тот же белок (белки), использовали независимо приготовленный исходный образец. Образцы, загруженные в гели, доводили до одинакового конечного объема с использованием необходимых количеств исходного образца, буфера для образцов на основе додецилсульфата лития (LDS), восстановителя и буфера для лизиса. Каждый образец нагревали при 70°C в течение 10 минут, затем центрифугировали в течение 15 секунд на микроцентрифуге Heraeus Pico, настроенной на 16000 г , и загружали в соответствующие гели. Была ли каждая серия разведений серийной или независимой, указано в подписях к рисункам. Предварительно окрашенный стандарт белка Novex Sharp (кат. № LC5800, Thermo Fisher Scientific), MagicMark XP (кат. № LC5602, Thermo Fisher Scientific) и предварительно окрашенный стандарт белка SeeBlue Plus2 (кат. № LC59).25, Thermo Fisher Scientific) использовали для определения молекулярной массы.

2.4. Разделение и перенос белка на мембраны 2D-образцов, не содержащих рекомбинантных белков

Все 2D-образцы, не содержащие рекомбинантные белки, анализировали на 12-луночных гелях NuPAGE Bis-Tris толщиной 1 мм толщиной 1 мм (кат. № NP0322, Thermo Fisher Scientific). Каждый загруженный образец состоял из лизата, разведенного в буфере для лизиса 2D, и соответствующего количества буфера для образцов NuPAGE LDS (кат. № NP0008, Thermo Fisher Scientific) и восстановителя проб NuPAGE (кат. № NP0009)., Термо Фишер Сайентифик). Разделение белков выполняли сразу после загрузки геля при 200 В, 120 мА и 25 Вт в течение 55 мин в рабочем буфере NuPAGE MOPS SDS (кат. № NP0001-02, Thermo Fisher Scientific). Затем белки переносили на армированную нитроцеллюлозу Optitran BA-S 85 (кат. № 10439196, GE Life Sciences) или поливинилидендифторидную (PVDF) мембрану Immobilon-PSQ (кат. № ISEQ00010, EMD Millipore) в буфере для переноса 1× NuPAGE ( № по каталогу NP0006-1, Thermo Fisher Scientific), содержащий 10% метанола. Мембраны PVDF предварительно смачивали 100% метанолом в течение 1 мин перед переносом. Белки переносили при 25 В, 120 мА и 17 Вт в течение 1 часа и 10 минут. SDS-PAGE и этапы переноса выполнялись в мини-гелевом резервуаре XCell SureLock (Thermo Fisher Scientific) на двойном блоке питания Power Zoom или блоке питания Power Ease 500 (Thermo Fisher Scientific).

2.5. Разделение и перенос белка на мембраны для образцов SDS и 2D-образцов, содержащих рекомбинантные белки

Все образцы SDS анализировали на 10-луночных гелях Bolt Bis-Tris Plus толщиной 1 мм с содержанием 4–12 % (кат. № NW04120, Thermo Fisher Scientific ). Каждый образец, загруженный в каждый гель, состоял из лизата, разведенного в буфере для лизиса SDS, и соответствующего количества буфера для образцов Bolt LDS (кат. № B0007, Thermo Fisher Scientific) и восстановителя Bolt (кат. № B0009, Thermo Fisher Scientific). 2D-образцы, содержащие рекомбинантные белки, показанные на рисунке 4, анализировали на гелях того же типа и переносили на мембраны того же типа в идентичных условиях. После загрузки гелей белки разделяли при 165 В и 125 мА в течение 45 мин в буфере 1× Bolt MOPS SDS Running Buffer (кат. № B000102, Thermo Fisher Scientific), а затем белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны Odyssey (кат. № 926-31092, LI-COR Bioscience) при 10 В и 160 мА в течение 1 ч с использованием 1 × буфера для переноса болтов (кат. № BT00061, Thermo Fisher Scientific), содержащего 10 % метанола. Все переносы SDS-PAGE и вестерн-блоттинга этих образцов белков выполняли в резервуарах с мини-гелем Bolt (Thermo Fisher Scientific) с использованием блоков питания PowerEase мощностью 90 Вт (Thermo Fisher Scientific). Для проведения вестерн-блоттинга, показанного на рисунке 5, два образца, содержащие рекомбинантные белки ENPP1 и Fam3a, разводили 1 к 10 с помощью буфера для мечения, поставляемого в наборе Amersham QuickStain (кат. № RPN4000, GE Life Sciences) до концентрации белка 0,2  мк 90 468 г/ 90 467 мк 90 468 л. Стандартную кривую строили путем приготовления серии 2-кратных серийных разведений лизата из другого образца, содержащего эти добавленные рекомбинантные белки, с использованием меченого буфера набора Amersham QuickStain в качестве разбавителя (белок концентрации этих стандартов варьировались от 0,0125 до 0,4  мк г/ мк л). 10  µ л каждого образца (2  µ г общего белка для образцов, рассматриваемых как неизвестные, и от 0,125 до 4  µ г общего белка для стандартов) объединяли с 6,25  мкл л буфера для мечения Amersham QuickStain, 6,25  мкл л буфера Bolt 4 × LDS и 1  мкл л неразбавленного красителя Cy5 из набора Amersham QuickStain. Реакцию мечения проводили в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего ее останавливали добавлением 2,5  мкл л 10-кратного восстановителя болта. Затем все образцы нагревали в течение 10 минут при 70°C, а затем подвергали импульсному вращению в течение 15 секунд на микроцентрифуге Heraeus Pico, установленной на 10 000 л.0467 г и загружали в 12-луночный гель 4-12% Bis-Tris SDS-PAGE толщиной 1 мм (кат. № NW04122, Thermo Fisher Scientific). После загрузки геля его сразу же запускали при 165 В и 125 мА в течение 50 минут в 1 × Bolt MOPS SDS Running Buffer. После SDS-PAGE гель промывали 3 раза по 30 секунд в буфере для переноса болтов, содержащем 10% метанола, а затем, после смачивания буфером для переноса, его флуоресцентно отображали с использованием установки GE Life Sciences AI600 для обнаружения Cy5 ( приблизительно 10 минут захвата изображения). Затем белки переносили на армированную Protran нитроцеллюлозную мембрану (кат. № 10600016, GE Life Sciences) на 1 час при 10 В, 165 мА в буфере для переноса 1 × Bolt, содержащем 10% метанола. После этапа переноса мембрану промывали водой MilliQ, и меченные Cy5 белки, присутствующие на мембране, подвергали флуоресцентному изображению с использованием GE AI600 (примерно 5 минут захвата изображения). Мембрану промывали в трис-буферном солевом растворе с 0,1% Tween-20 (TBST) и блокировали в 5% сухого обезжиренного молока в TBST на 1 час при комнатной температуре. Затем мембрану инкубировали с первичным антителом (антитело против 6x-His-метки, описанное в дополнительной таблице S1), разведенным 1/1000 в 5% сухом обезжиренном молоке в TBST, в течение приблизительно 18 часов при 4°C. Затем мембрану промывали 3 раза по 5 минут в TBST и инкубировали со вторичным антителом против IgG мыши, конъюгированным с пероксидом хрена (HRP) (описано в дополнительной таблице S1), разведенным 1/3000 в 5% сухого обезжиренного молока в TBST в течение 1 час при комнатной температуре. Перед обнаружением мембрану промывали 3 раза по 5 минут в TBST и горизонтально разрезали пополам, а верхнюю половину, содержащую рекомбинантный ENPP1, проявляли погружением в субстрат Luminata Classico Western HRP (кат. № WBLUCO100, EMD Millipore) на 1 минуту при комнатная температура. Нижнюю половину, содержащую Fam3a, проявляли путем погружения в субстрат Luminata Forte Western HRP (кат. № WBLUF0100, EMD Millipore) на 5 минут при комнатной температуре. После проявления излишки субстрата сливались, и изображения сразу же записывались на AI600.

2.6. Окрашивание общего белка и вестерн-блоттинг

За исключением вестерн-блоттинга, показанного на рис. 5, для которого использован метод, описанный выше, все другие мембраны сушили между фильтровальной бумагой в течение ночи сразу после этапа переноса. Перед выполнением окрашивания Ponceau S мембраны PVDF погружали в 100% метанол на 1 мин, а затем в воду MilliQ на 1 мин, а нитроцеллюлозные мембраны погружали в воду MilliQ на 1 мин. Затем мембраны окрашивали в течение 5 минут в 100 мл раствора Ponceau S (0,1% масс./об. Ponceau S (кат. № P3504-50G, Sigma-Aldrich) в 5% уксусной кислоте). Блоты промывали 3 раза по 1 мин в 100 мл воды MilliQ и визуализировали с использованием систем визуализации GE Life Sciences LAS-3000 или AI600 Western. Изображения, снятые на LAS-3000, были получены с использованием светового освещения с выдержкой 1/60 с. Изображения на AI600 были сняты с использованием автоматической экспозиции при колориметрических настройках. Затем мембраны обесцвечивали 6 промывками по 5 мин в TBST или фосфатно-солевом буфере (PBS) для хемилюминесцентного и инфракрасного обнаружения соответственно. Любые пятна, не окрашенные Ponceau S, регидратировали и подвергали таким же обесцвечивающим промывкам, как и окрашенные пятна. Блокировку мембран для вестерн-блоттинга проводили сразу после обесцвечивания Ponceau S. Эксперименты по вестерн-блоттингу проводились при комнатной температуре с использованием 1-часовой инкубации для блокировки мембраны, 2-часовой инкубации для первичных антител и 1-часовой инкубации для вторичных антител. Таблица S1 в дополнительных материалах содержит конкретные сведения об используемых антителах, условиях блокирования и инкубации первичных антител для обнаружения хемилюминесценции, а также об используемых разведениях антител. Все мембраны, обнаруженные с помощью инфракрасной флуоресценции, блокировали блокирующим буфером Odyssey (OBB) (кат. № 9).27-40000, LI-COR Bioscience), и все первичные антитела, используемые на этих мембранах, разводили в OBB, содержащем 0,1% Tween-20, до той же концентрации, что и на мембранах, обнаруженных с помощью хемилюминесценции. В обоих методах между инкубацией первичных и вторичных антител, а также после инкубации вторичных антител перед визуализацией проводили промывки 3 × 5 мин. В промывках использовали раствор TBST для обнаружения хемилюминесценции и PBS с 0,1% Tween-20 (PBST) для обнаружения в инфракрасном диапазоне. При использовании инфракрасного детектирования мы выполняли все этапы, начиная с инкубации вторичных антител в темноте. Мембраны, обнаруженные с помощью хемилюминесценции, проявляли погружением в субстрат Luminata Classico Western HRP на 1 мин. Излишки субстрата сливали, и изображения сразу же записывали на LAS-3000 или AI600. Мембраны для инфракрасного обнаружения сканировали на системе визуализации LI-COR Bioscience Odyssey CLx. В Odyssey CLx сканировали как влажные, так и сухие мембраны. Репрезентативные изображения данных вестерн-блоттинга и окрашивания Ponceau S, не показанные на основных рисунках результатов, представлены в дополнительных материалах (дополнительные рисунки S2, S3, S4, S5, S6 и S8).

2.7. Программное обеспечение для захвата изображений и форматы изображений

Изображения, снятые с помощью системы LAS-3000, были получены с помощью программного обеспечения Fujifilm Image Read LAS-3000 версии 2.0 и сохранены в виде файлов raw.inf/.img. Изображения AI600 были получены в GE Imager версии 1.2.0 и сохранены в виде файлов TIFF. Вестерны, отсканированные с помощью Odyssey CLx, были обработаны с помощью программного обеспечения LI-COR Image Studio версии 2.1.10, и изображения были сохранены как рабочая область. Все денситометрические анализы проводились на изображениях, сохраненных в указанных выше форматах. Изображения колориметрических пятен Ponceau S, а также вестерн-блоты, обнаруженные с помощью хемилюминесценции, которые были проанализированы как часть наборов данных, представленных на рисунках 1–4, были проанализированы с использованием программного обеспечения для анализа изображений MultiGauge версии 3. 0. Примерные данные вестерн-блоттинга и данные мечения общего белка Cy5, представленные на фиг. 5, были проанализированы с использованием программного обеспечения Image Quant TL версии 8.1. Все анализы денситометрии, проведенные на мембранах, отсканированных на Odyssey CLx, были выполнены с использованием Image Studio Light версии 5.

2.8. Метод денситометрии

Во всех пакетах программного обеспечения область интереса (ROI), окружающая каждую полосу, определялась вручную. Чтобы убедиться, что вся полоса была захвачена, значения в справочной таблице были скорректированы для увеличения контраста. Это не изменяет базовые значения для количественного определения. Все полосы с правильной молекулярной массой ± приблизительно 5 кДа анализировали как сигнал для этого целевого белка. В этой области были включены любые перекрывающиеся видимые полосы как на изображении вестерн-блоттинга, так и на электрофореграмме, чтобы гарантировать, что уровень вычитания фонового сигнала соответствует уровню фонового шума в мембране и не подвергается искусственному влиянию обнаруженного сигнала. Поскольку сравнения проводятся с одним и тем же образцом лизата, любые неспецифические перекрывающиеся полосы, которые могут присутствовать в этой области, считаются имеющими постоянную относительную численность и вряд ли будут мешать интерпретации данных. Любые другие полосы, видимые при различных молекулярных массах, исключали из анализа. Когда полосы на соседних дорожках соприкасались из-за высокой белковой нагрузки, границы ROI располагались в точке минимальной толщины между полосами. Данные денситометрии для изображений окрашивания общего белка Ponceau S были получены для всех белков, видимых на каждой полной дорожке. Все процессы нормализации данных выполнялись путем деления O.D. значение целевого белка по О.Д. значение выбранного элемента управления нагрузкой.

2.9. Анализы с использованием программного обеспечения MultiGauge

Изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения MultiGauge с автоматическим определением горизонтальной или полигональной базовой линии с настройками отношения по горизонтали 10% и отношения по вертикали 70%. Ширина полосы задавалась вручную. Границы полосы были выбраны так, чтобы быть областью на каждой стороне кривой (верхняя/нижняя часть полосы), в которой линия, обозначающая интенсивность, либо касалась, либо проходила параллельно с линией, обозначающей базовую линию.

2.10. Анализы с использованием программного обеспечения Image Quant TL

Алгоритм катящегося шара с радиусом 50 пикселей использовался для вычитания фона. Пределы каждой полосы белка были выбраны как область на каждой стороне кривой (верхняя/нижняя часть полосы), в которой линия, обозначающая интенсивность полосы, касается линии, обозначающей исходный уровень.

2.11. Анализы с использованием программного обеспечения Image Studio

Денситометрия, выполненная в Image Studio, использовала медианную локальную коррекцию фона с шириной границы 1 единица. Местоположение области для коррекции фона определялось вокруг соседних пикселей области интереса с использованием только верхней/нижней, только правой/левой или всей области области интереса. Этот выбор был изменен, чтобы предотвратить подсчет (в качестве фона) сигнала от перекрытия между соседними дорожками, а также любые нецелевые полосы на расстоянии 5-10 кДа от молекулярной массы целевого белка, поскольку они, вероятно, мешали правильному вычитанию фона, если не были учтены. После того как для вычитания фона была выбрана пограничная область, этот выбор оставался согласованным для всех повторов, анализирующих один и тот же белок.

2.12. Статистический анализ регрессионных подгонок

Регрессионное моделирование выполнялось с использованием GraphPad Prism версии 6. Все регрессионные модели подгонялись с использованием метода наименьших квадратов. Сравнения между соответствием каждого набора данных моделям гиперболической и линейной регрессии были сделаны с использованием F-критерия экстра-суммы квадратов со статистическим порогом F = 0,05 для выбора модели [38].

3. Результаты

3.1. О.Д. Данные могут быть насыщенными при анализе вестерн-блотов при обычно используемых количествах белкового лизата

2-кратные серийные разведения объединенных лизатов ткани миометрия доношенной беременной женщины разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозные или PVDF-мембраны. Их исследовали с помощью антитела против α SMA и обнаружили с помощью хемилюминесценции или инфракрасной флуоресценции (рис. 1). О.Д. данные были проанализированы на насыщение путем сравнения гиперболической модели с линейной моделью [4].

Н.Д. данные со всех мембран лучше соответствовали гиперболическим, а не линейным моделям, что указывало на то, что данные становились насыщенными по мере увеличения количества лизата, загруженного в гели (рис. 1 (a)–1 (e)). Линейная область обнаружения происходила ниже примерно 0,3-1,25  мк г лизата. В линейной области детектирования О.Д. данные напрямую соответствуют содержанию белка только в том случае, если данные соответствуют прямо пропорциональным линейным моделям [2, 5]. Если линейный наружный диаметр вместо этого данные соответствуют непропорциональным линейным моделям, O.D. данные не соответствуют непосредственно содержанию белка, и если это не учитывать, любые оценки различий содержания белка между образцами будут неверными [2, 5]. В этих вестерн-блотах O.D. данные выше примерно 0,3-1,25  мк г лизата были нелинейными и стабилизировались, когда более 5-20  9Было проанализировано 0467 мкл г лизата. Это различалось в зависимости от типа используемой мембраны. На всех мембранах, обнаруженных с помощью хемилюминесценции, присутствовали крючкообразные эффекты высоких доз в области плато. Нелинейную, но не платообразную область обнаружения следует использовать для количественной оценки только в том случае, если O.D. данные по образцам интерполированы относительно O.D. данные стандартной кривой, полученной из калибровочного образца (лизата или очищенного белка), проходят достаточное количество разведений, чтобы определить подходящую модель [2, 4, 5, 21, 25]. Этот метод также можно использовать для оценки различий содержания белка, когда O.D. данные линейны, но непропорциональны [2, 5]. Для контроля мембраноспецифических эффектов важно, чтобы серия разведений калибратора была включена в каждую мембрану, содержащую сравниваемые образцы [2, 4, 5, 21, 25], и О. Д. данные, выходящие за пределы стандартной кривой, анализировать не следует [4, 20]. Только качественные сравнения, показывающие наличие или отсутствие белка/PTM, должны быть сделаны в области обнаружения, где O.D. данные вышли на плато, потому что различия в количестве белка/PTM могут быть не обнаружены [3, 4, 8, 12, 13].

Визуальный анализ вестерн-блотов (рис. 1(а)) показывает, что площадь полосы увеличивается с белковой нагрузкой. Это предполагает, что насыщение O.D. данные могут быть отнесены к измерению интенсивности полосы, и, следовательно, только измерение площади полосы может обеспечить решение проблемы насыщения. Для пятен, обнаруженных с помощью хемилюминесценции, мы отдельно исследовали интенсивность полосы (дополнительный рисунок S1) и площадь полосы (дополнительный рисунок S1). Эти данные лучше всего согласовывались с гиперболическими кривыми, что указывает на то, что ни одна из мер сама по себе не решает проблему O.D. насыщенность данными.

3.2. Артефакты двойных полос мешают точному количественному сравнению

На рис. 1(а) можно увидеть исчезновение полос, известное как «двоение» [12, 21], выше примерно 2,5  мк г лизата в нитроцеллюлозных мембранах и 10   мк г лизата в ПВДФ-мембранах, обнаруженных с помощью хемилюминесценции. Двоение не наблюдалось в мембранах, обнаруженных с помощью инфракрасной флуоресценции. Этот артефакт приводит к тому, что полосы кажутся размытыми [4, 21] и вызывают вышеупомянутые хук-подобные эффекты высоких доз в α SMA Н.Д. значения, представленные на рисунках 1(b) и 1(d). Таким образом, вестерн-блоты, которые показывают теневые полосы, непригодны для количественных сравнений, поскольку денситометрия не обеспечивает надежных показателей содержания белка [4, 21]. Поскольку ореол связан с переизбытком целевого белка, его следует решать путем уменьшения количества лизата, загружаемого в гели SDS-PAGE [4].

3.3. Каждый белок в образце может иметь различную линейность

Мы исследовали, влияет ли насыщение на линейность ОП. данные для других белков миометрия (рис. 2). В рамках этого эксперимента мы также проверили, происходит ли насыщение в других экспериментальных условиях, чем те, которые использовались для образцов, показанных на рисунке 1. Это было достигнуто при анализе образцов, показанных на рисунке 2, с использованием другого лизата ткани миометрия человека, другого Система SDS-PAGE, поставщик нитроцеллюлозной мембраны и системы обнаружения хемилюминесценции.

Каждый проанализированный белок имел различную линейность и/или диапазон обнаружения в серии разведений (40–0,16  мк г лизата) (рис. 2). О.Д. на данные для α ACTININ, α SMA, HSP27 и ERK1/2 повлияло насыщение, поскольку они соответствовали гиперболическим моделям. MYPT1 и MLC-20 O.D. на данные не повлияла насыщенность, поскольку они соответствуют линейным моделям. ROCK1, кофилин и GAPDH O.D. данные, по крайней мере, для одной мембраны на белок соответствовали гиперболическим моделям, и по крайней мере одна мембрана для каждого белка соответствовала линейным моделям, что указывало на то, что регрессионная модель подбора может различаться между мембранами, содержащими повторы эксперимента. Эти различия между экспериментальными повторами могут не контролироваться исследователем и могут быть связаны с различиями в эффективности переноса, которые влияют на количество белков, присутствующих на этих мембранах. Обнаружение с помощью хемилюминесценции или инфракрасной флуоресценции выявило лишь минимальные различия в моделях, которые соответствовали O.D. данные, полученные для одного и того же белка.

3.4. Ваши нормализованные западные данные могут ввести в заблуждение

В другом наборе экспериментов, в которых использовались серии разведений различных лизатов миометрия, каждую мембрану окрашивали Ponceau S для определения общего белка, а затем исследовали на MYPT1, α SMA и RhoA. Пропорциональные линейные модели не подходили для большинства MYPT1, α SMA и RhoA O.D. данные (дополнительный рисунок S7). Таким образом, мы смогли изучить в реальных экспериментальных условиях, нарушается ли нормализация данных, когда O.D. данные отклоняются от пропорциональных линейных моделей (рис. 3).

Когда мы нормализовали один из этих белков по отношению к другому белку (рис. 3(а), 3(b) и 3(с)) или белку по окраске Ponceau S (рис. 3(d), 3(e), и 3(f)), нормализованное отношение не было постоянным, и оно систематически различалось в каждой серии разведений, специфичным для исследуемых белков. Эти данные подтверждают нецелесообразность нормализации O.D. целевого белка. данные, разделив их на O.D. данные о загрузке контрольного белка(ов), если O.D. данные не соответствуют пропорциональным линейным моделям [2, 7, 20, 24].

3.5. О.Д. Нелинейность данных и ошибка нормализации могут возникать при типичных условиях вестерн-блоттинга

Мы добавили в гомогенаты миометрия два очищенных рекомбинантных белка, ENPP1 (~97 кДа) и Fam3a (~23 кДа). Принимая во внимание количество каждого рекомбинантного белка и используя лизат без добавок в качестве разбавителя, мы смогли варьировать концентрации добавленных белков в серии 2-кратных серийных разведений, сохраняя при этом одинаковые общие количества (масса/объем) лизата. . Эти образцы позволили нам оценить O.D. линейность данных и ошибка нормализации в условиях, подобных тому, как выполняются типичные сравнения Вестерн-блоттинга, в которых образцы сравниваются при одном количестве лизата, которое поддерживается постоянным между сравнениями.

Н.Д. данные ENPP1 и Fam3a соответствовали гиперболическим моделям (рис. 4). Был только небольшой диапазон ENPP1 и Fam3a O.D. данные, которые были приблизительно линейными, которые наблюдались ниже примерно 250 нг добавленного белка (<0,63% добавленных белков в общем лизате). В каждой полосе образцов мы нормализовали ENPP1 до Fam3a и отдельно нормализовали ENPP1 и Fam3a до Ponceau S O.D. данные (дополнительный рисунок S9). Когда ENPP1 нормализовали до Fam3a (это соотношение должно быть постоянным между образцами), была обнаружена небольшая ошибка нормализации примерно в 2 раза по всей серии разведений. Понсо S O.D. данные были схожи между дорожками (дополнительная фигура S8), что и ожидалось, поскольку в каждом образце было одинаковое количество лизата, загруженного в гель; следовательно, нормализация ENPP1 и Fam3a к Ponceau S была похожа на деление необработанных ENPP1 и Fam3a O. D. данные константой, а нормализованные данные сохранили гиперболический шаблон необработанных данных. Если бы эти нормализованные данные (ENPP1:Ponceau S или Fam3a:Ponceau S) использовались для сравнения уровней белка ENPP1 или Fam3a между этими образцами, расчетные различия в содержании белка были бы неверными. Все ошибки нормализации, наблюдаемые в этом наборе данных, были схожими по характеру и величине между мембранами, обнаруженными с помощью хемилюминесценции или инфракрасной флуоресценции.

3.6. Более точная оценка различий в содержании белка может быть выполнена после калибровки экспериментов по вестерн-блоттингу

На рис. 5 показан пример того, как количественное определение содержания белка с помощью вестерн-блоттинга O.D. данные могут быть успешно выполнены. Используя данные экспериментов на рисунке 4 в качестве руководства, мы провели эксперимент, в котором мы сравнили в двух экземплярах два образца, которые имели 4-кратную разницу в количестве добавленных рекомбинантных белков ENPP1 и Fam3a. Абсолютные количества проанализированных рекомбинантных белков ENPP1 и Fam3a (12,5 нг в одном образце против 50 нг в другом) были рассчитаны так, чтобы они находились в пределах линейного диапазона обнаружения, и мы включили стандартную кривую, охватывающую диапазон 3,25–100 нг рекомбинантные ENPP1 и Fam3a, добавленные в лизат миометрия. Сравнение общего содержания белка на мембране (используемого в качестве контроля нагрузки) показало, что оно не различалось более чем примерно в 0,1 раза между сравниваемыми образцами (рисунок 5 и дополнительная таблица S2). Это означало, что маловероятно, чтобы смешанные факторы влияли на сравнения. Таким образом, было бы излишним помещать вестерн-блот O.D. данные через процесс нормализации. О.Д. данные для рекомбинантного ENPP1, измеренные в стандартах, соответствовали пропорциональному линейному уравнению (рис. 5) (уравнение y = 702615x, относительный R ² = 0,993). Стандартная кривая полезна здесь в качестве проверки контроля качества, чтобы продемонстрировать, что внешний диаметр данные соответствуют этому уравнению [2, 3, 7]. Однако в этой идеальной ситуации [2–5] стандартная кривая не улучшает оценки различий в содержании белка. Таким образом, между двумя сравниваемыми образцами была обнаружена 3,4-кратная разница в содержании рекомбинантного белка ENPP1, когда сравнения проводились с использованием сырой O.D. данных, а также при сравнении после О.Д. данные были сначала интерполированы по стандартной кривой. Напротив, О.Д. данные для Fam3a, измеренные в стандартах, лучше соответствовали непропорциональному линейному уравнению (рис. 5) (уравнение y = 318398x – 1411334, R ² = 0,996), чем пропорциональное линейное уравнение ( P = 0,0433, по сравнению с F-критерием дополнительной суммы квадратов). Между двумя образцами была обнаружена 5,9-кратная предполагаемая разница в количестве рекомбинантного Fam3a, когда исходная O.D. данные сравнивались. Как описано выше и подчеркивая важность стандартной кривой в этих случаях [2, 5], интерполяция Fam3a O.D. данные по стандартной кривой до того, как были сделаны сравнения, дали более точные 3,9-кратная разница в численности рекомбинантного Fam3a.

4. Обсуждение

Наше исследование подтверждает, что количественная оценка данных вестерн-блоттинга не является простой задачей [2–4, 20]; пользователи не могут произвольно выбирать количество лизата для загрузки в гель и ожидать значимых результатов, даже если загрузка белка остается постоянной на всех дорожках геля.

Воспроизводимость, чувствительность обнаружения, линейность данных и пропорциональность, а также динамический диапазон обнаружения являются важными параметрами для оценки любого метода вестерн-блоттинга [2, 3, 20]. Когда мы сравнили эти параметры между обнаружением с помощью хемилюминесценции или инфракрасной флуоресценции, мы не обнаружили различий, которые были бы настолько большими, чтобы рекомендовать использование одного метода вместо другого. Хотя это противоречит некоторым недавним исследованиям, в которых предполагалось, что обнаружение с использованием инфракрасной флуоресценции дает превосходные количественные данные вестерн-блоттинга [4, 18], наши результаты подтверждают, что полезнее признать, что существуют ограничения в сборе и анализе всех вестерн-блоттинга. данных независимо от метода обнаружения [3]. Таким образом, только при наличии надлежащих стратегий контроля качества можно полагаться на то, что интерпретация количественных данных вестерн-блоттинга будет иметь биологическую значимость [2–5, 7, 11, 20, 21, 25].

Крайне важно учитывать независимую от детектора насыщенность, которая влияет на линейность вестерн-блоттинга OD. данные для обеспечения получения значимых результатов [2–21]. Было предложено несколько объяснений этого типа насыщения, в том числе то, что это может быть связано с: (1) насыщением сайтов связывания мембраны [5, 11, 12], после чего белки будут связываться слоями, которые скрывают обнаружение белков, расположенных под ними. [11]; (2) ограниченная доступность красителей, антител и/или антигенов [4, 12]; (3) концентрация используемых первичных или вторичных антител [6, 25]; (4) ограничение локальной концентрации Субстрат HRP [25]; (5) окисление HRP, присоединенного к вторичным антителам [4, 20]; (6) тушение близости реакций инфракрасной флуоресценции [4].

Независимо от причины насыщения, наша работа и работы других авторов [2–21, 25] показывают, что не следует предполагать, что О.Д. данные обеспечивают прямую меру содержания белка [2, 4, 5, 7]. Линейную пропорциональность не следует предполагать, даже если она основана на аналогичных исследованиях, поскольку различия в методологии, которые кажутся тривиальными, влияют на линейность ОП. данные [4, 25]. Поэтому, чтобы обеспечить правильную интерпретацию данных и повысить уверенность в точности и воспроизводимости результатов, подходящая модель для O.D. данные должны быть установлены и представлены для каждого белка, анализируемого в каждом исследовании [2, 3, 7, 11, 12, 20, 39].]. Эта оценка должна проводиться в условиях, идентичных тем, которые используются для анализа экспериментальных образцов, и также важно, чтобы уровни всех исследуемых белков были одинаковыми между лизатом, используемым для этой оценки, и экспериментальными образцами [3, 7, 11, 12]. , 20]. Этого можно добиться, используя серию разведений объединенного лизата из всех экспериментальных образцов [3, 7, 11, 12, 20, 39]; однако, поскольку этот метод усредняет уровни белка между образцами, необходимо убедиться, что анализ проводится в интервале разведений, достаточном для охвата всех количеств белка, которые могут встретиться в исследовании [11, 39]. ].

Н.Д. данные обычно нелинейны и часто выходят на плато, когда белки с высоким содержанием (часто белки домашнего хозяйства, такие как GAPDH, α -тубулин и β -актин) были обнаружены выше 1-10  мк г лизата [2–21]. Наши результаты, показывающие, что α SMA и HSP27 O.D. данные были нелинейными, когда было проанализировано более чем приблизительно 1,25  мк г лизата ткани миометрия человека, что еще больше ставит под сомнение надежность исследований вестерн-блоттинга, в которых использовались другие белки с высоким содержанием в качестве контроля загрузки. Стоит повторить, что известно, что GAPDH, α -Тубулин и β -Актин часто не являются подходящим контролем нагрузки, поскольку их уровни изменяются в различных биологических и экспериментальных условиях на уровне мРНК и/или белка [7, 18, 40–45]. Эти изменения численности могут быть связаны с биологическими различиями in vivo [18], могут быть вызваны исследуемыми экспериментальными обработками [7, 41] или могут быть связаны с биологией экспериментальных моделей in vitro [43]. . Уровни специфических белков клеточного типа, которые используются в качестве контроля загрузки, также могут изменяться в различных экспериментальных условиях. Например, Кэмпбелл и др. [45] обнаружили, что 9Уровни мРНК 0467 α SMA изменялись в зависимости от плотности клеток в первично культивируемых гладкомышечных клетках аорты кролика. Следовательно, необходимо подтвердить, что уровни нагрузочного контрольного белка (белков) не изменяются между сравниваемыми экспериментальными популяциями, или, если эти данные уже были опубликованы, на них следует ссылаться [2].

Мы подтвердили, что когда O.D. данные отклоняются от пропорциональных линейных моделей, надежность нормализации, выполненной путем деления целевого белка O.D. данные с нагрузкой контрольным белком O.D. данные скомпрометированы [2, 7, 20, 24]. Наши данные и данные других авторов [7, 24] показывают, что нормализация, выполненная в этих условиях, не учитывает несущественных различий в количестве белка/PTM, независимо от того, являются ли они биологически обусловленными или вызваны техническими артефактами. В лучшем случае это добавит дисперсии к оценкам содержания белка/ПТМ [12] и приведет к завышенной или заниженной оценке величины изменений содержания белка/ПТМ [2, 4, 5, 7, 24], а в худшем случае могут давать нормализованные отношения, которые предполагают, что содержание белка/PTM отличается в направлении, противоположном тому, что на самом деле происходит в анализируемых образцах. Поэтому на нормированные данные, полученные в этих условиях, нельзя полагаться и их следует интерпретировать с осторожностью, так как это может привести к неправильным выводам [2, 20]. Трудно количественно установить, когда О.Д. данные достаточно сильно отклоняются от пропорциональных линейных моделей, чтобы сделать эту стратегию нормализации непригодной. Следовательно, мы предлагаем, чтобы всякий раз, когда используется этот метод нормализации (когда данные OD аппроксимируются пропорциональными линейными моделями), исследователь должен продемонстрировать, что ошибка нормализации не может объяснить их результаты, и следует показать данные, использованные для получения этого вывода. В ситуациях, когда непропорциональный Н.Д. обнаруживаются сигналы, и данные от интересующего белка должны быть нормализованы к одному или нескольким контролям загрузки, следует учитывать непропорциональность, которая может быть достигнута с использованием альтернативных стратегий нормализации [24] или путем интерполяции данные против стандартных кривых [2, 4, 5, 21, 25].

Методы мечения общего белка обычно рекомендуются в литературе [2, 3, 7–10, 12, 13, 15, 17, 18, 20, 22, 25, 39]. Эти методы включают технологию без окрашивания, которая маркирует белки в геле, который впоследствии используется для вестерн-переноса [2, 8, 9, 39], и красители, такие как Ponceau S, которые маркируют белки, связанные с вестерн-мембранами [8, 15, 25]. . Мечение общего белка может быть подходящим контролем нагрузки и ОП. данные, полученные при мечении общего белка, часто остаются линейными при нагрузках лизата более 5-10 9 .0467 мк г белка [2, 7–9, 12, 15, 17, 18, 20, 25, 39]. Важно учитывать, мешает ли мечение тотального белка последующей иммунодетекции [9, 17]; однако это редко обнаруживалось [10] и легко проверялось путем сравнения одновременно отображаемых вестерн-блотов, содержащих идентичные образцы, в которых мечение тотального белка выполнялось для одной мембраны, но не для другой [7, 10, 12]. Если не было показано, что мечение общего белка мешает иммунодетекции, существуют две важные причины, по которым каждая мембрана вестерн-блоттинга должна быть помечена для определения общего белка, и эти данные представлены даже тогда, когда контрольный белок (белки) также выявляется с использованием антител: (1) Большинство типы белков, обнаруженные в клеточных и тканевых лизатах, визуализируются методами мечения общего белка, и, следовательно, эти методы позволяют оценить уровни экспрессии многих различных белков [9]., 10, 15, 20]. Напротив, иммунодетекция специфических белков, контролирующих нагрузку, в настоящее время слишком ресурсоемка, чтобы позволить рутинное определение более чем нескольких белков на каждой мембране; таким образом, иммунодетекция имеет больше шансов на ошибку выборки [9, 10, 15, 20]. Представление данных о маркировке общего белка часто может позволить другим исследователям наилучшим образом ответить на вопросы о том, имеют ли разные образцы одинаковые профили разделения белков в SDS-PAGE и, при необходимости, сходно ли количество общего белка, проанализированного для каждого образца [9]. , 10, 15, 20]. (2) Метка общего белка западных мембран лучше всего показывает артефакты, такие как деградированные образцы, размытые полосы из-за осаждения белка в геле и ошибки переноса, такие как пузырьки воздуха [7, 25].

Также важно понимать, что маркировка всех белков в образце не делает различия между источниками белка, когда присутствует более одного биологического источника [3]. Следовательно, даже если в образцах обнаруживается одинаковое количество общего белка, это может быть связано с различиями в типах клеток и/или внеклеточном матриксе, и если эти различия не имеют отношения к решаемому экспериментальному вопросу, это может привести к неверным результатам [3]. ]. Хотя такое же ограничение применимо к повсеместно экспрессируемым белкам контроля нагрузки, обнаруживаемым с помощью антител, это иногда можно обойти при исследовании тканеспецифического белка с помощью белка контроля загрузки, специфически экспрессируемого в той же ткани, что и белок-мишень [3]. Чтобы показать, что различия в составе ткани не влияют на результаты вестерн-блоттинга, когда используются мечение общего белка или повсеместно экспрессируемые белки контроля нагрузки, необходимо также провести гистологический анализ или сослаться на соответствующую литературу [3].

5. Выводы

Мы показали, что при использовании вестерн-блоттинга для сравнения количества белков, обнаруженных в лизатах ткани миометрия, необходимо преодолеть множество технических проблем. Наши данные подтверждают данные литературы и подтверждают, что трудно преобразовать вестерн-блоттинг из качественного метода в количественный [2-4, 7, 11, 20]. Анализируя белки миометрия, включая α SMA, HSP27, α Actinin и GAPDH, мы подтвердили, что загрузка слишком большого количества лизата в гель SDS-PAGE может вызвать такие проблемы, как независимая от детектора оптическая плотность. насыщенность данными, нелинейность О.Д. данные и артефакты ореола в последующих экспериментах Вестерн-блоттинга [2-4, 7, 11, 20]. Эти проблемы усугубляются тем ограничением, что стандартный метод нормализации данных, который используется в полевых условиях, работает только тогда, когда O.D. данные, использованные при нормировочных расчетах, прямо пропорциональны содержанию соответствующих белков в исследуемых образцах [4–6, 24]. Наши данные подтвердили, что, когда это не так, смешанные различия в количестве белка, возникающие из-за технического или биологического происхождения, могут не учитываться в нормализованных данных. В заключение, наши результаты, взятые вместе с данными литературы [2–4, 7, 11, 20], позволяют предположить, что большая часть данных вестерн-блоттинга, регулярно сообщаемых в научном сообществе, вероятно, серьезно скомпрометирована и несправедливо подвергается критике. используется для поддержки заявлений о биологической значимости. Ниже мы дали общие рекомендации, основанные на имеющихся в литературе [2–4, 7, 11, 12, 20, 25, 39].]. Использование этих или подобных рекомендаций научным сообществом приведет к гораздо более высокому стандарту качества публикуемых данных вестерн-блоттинга.

Рекомендации (1) Выполните мечение общего белка и визуализируйте меченые мембраны. Представьте эти изображения вместе со всеми данными Вестерн-блоттинга или в дополнительном материале. (2) Денситометрический анализ не должен выполняться для полос, показывающих ореолы, поскольку он ненадежен и может привести к неправильной интерпретации данных. (3) Ухудшенные образцы, демонстрирующие размытие полос, перегруженные дорожки с штриховые полосы из-за преципитации белка в геле или полосы с волнистой структурой, указывающие на перегретые гели, не должны использоваться для количественных сравнений. пропорционально-линейные, линейные, но непропорциональные или нелинейные модели для всех оцениваемых белков-мишеней/PTM, а также всех контролей нагрузки. Эта критическая оценка должна выполняться в тех же технических условиях и условиях выборки, что и те, которые в конечном итоге будут использоваться в исследовании. В идеале это повторяется как минимум на двух мембранах, чтобы свести к минимуму вероятность того, что мембраноспецифические эффекты помешают этому важному этапу проверки. (5) Загрузите экспериментально обоснованное количество лизата. Это количество должно быть основано на калибровках, выполненных на этапе (4). Количественные сравнения не следует проводить в диапазоне насыщения белковой нагрузкой. Если О.Д. данные соответствуют линейным, но непропорциональным или нелинейным моделям, это следует учитывать при всех количественных сравнениях. (6) Вестерн-блоты на подтвержденных неизменяющихся контрольных загрузках следует проводить в оптимизированных ненасыщенных условиях. Это может потребовать, чтобы образцы, исследующие контроль(и) загрузки, анализировались в разных разведениях на разных дорожках и/или мембранах для целевых белков. (7) Предоставление доказательств того, что этапы нормализации данных функционируют по назначению и не вносят ошибок в анализ. .(8) Используйте соответствующий статистический анализ и стратегии статистической блокировки, учитывающие меж- и внутримембранные различия.

Доступность данных

Все данные денситометрии и репрезентативные изображения вестерн-блотов и мембран, помеченных красителями общего белка, которые использовались для подтверждения результатов этого исследования, включены в дополнительные материалы.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов, который мог повлиять на это исследование.

Благодарности

Это исследование было профинансировано Австралийской стипендией последипломного образования и поддержкой Программы исследовательской подготовки, предоставленной Университетом Ньюкасла, Ньюкасл, Австралия. Авторы хотели бы поблагодарить Энн Райт за набор пациентов, персонал больницы Джона Хантера и матерей, которые великодушно согласились на эти исследования.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы 1 . Дополнительная таблица S1: этот файл содержит подробную информацию об антителах, использованных в этом исследовании, включая информацию о поставщике, каталожный номер и номер партии, разведение каждого использованного антитела, условия блокировки мембраны и условия инкубации антител.

Дополнительный 2 . Дополнительные рисунки S1-S9: этот файл содержит репрезентативные изображения данных вестерн-блоттинга и окрашивания Ponceau S для мембран, для которых была выполнена денситометрия. Он также содержит вспомогательные данные денситометрии и/или нормализованные данные вестерн-блоттинга, которые использовались в основных рисунках.

Дополнительный 3 . Дополнительная таблица S2: этот файл содержит необработанные данные денситометрии и нормализованные данные, которые использовались в этом исследовании.

Ссылки

1. С. Иками, Т. Кобаяши, Ю. Танака и А. Ямагучи, «Разработка ПЗС-устройства формирования изображения нового поколения для исследований в области наук о жизни», Fujifilm Research and Development, 2015, http:// www.fujifilm.com/about/research/report/060/pdf/index/ff_rd060_003_en.pdf.

   Посмотреть по адресу:

   Google Scholar

2. Р. М. Мерфи и Г. Д. Лэмб, «Важные соображения по анализу белка с использованием методов на основе антител: результаты вестерн-блоттинга с уменьшением размера и увеличением размера», The Journal of Physiology , vol. 591, нет. 3, стр. 5823–5831, 2013.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

3. А. А. Макдонаф, Л. К. Вейрас, Дж. Н. Минас и Д. Л. Ральф, «Соображения при количественном анализе содержания белка с помощью иммуноблота. Американский журнал физиологии», Физиология клетки , том. 308, нет. 3, стр. C426–C433, 2015 г.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

4. К. А. Джейнс, «Анализ критических факторов для количественного иммуноблотинга», Science Signaling , vol. 8, нет. 371, стр. rs2–rs2, 2015.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

5. Дж. П. Моллика, Дж. С. Окхилл, Г. Д. Лэмб и Р. М. Мерфи, «Упускают ли из виду подлинные изменения в экспрессии белка? Переоценка вестерн-блоттинга», Аналитическая биохимия , том. 386, нет. 2, стр. 270–275, 2009 г.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

6. A. Degasperi, M. R. Birtwistle, N. Volinsky et al., «Оценка стратегий нормализации биологических повторов данных вестерн-блоттинга», PLoS ONE , vol. 9, ID статьи e87293, 2014 г.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

7. A. Hagner-McWhirter, Y. Laurin, A. Larsson, E.J. Bjerneld и O. Ronn, «Нормализация общего белка Cy5 в вестерн-блот-анализе», Аналитическая биохимия , том. 486, стр. 54–61, 2015 г.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

8. Б. Риверо-Гутьеррес, А. Анзола, О. Мартинес-Августин и Ф. С. де Медина, «Обнаружение без окрашивания как альтернатива контролю загрузки Ponceau и иммунодетекции белков домашнего хозяйства в Вестерн-блоттинге», Analytical Biochemistry , том. 467, стр. 1–3, 2014.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Академия Google

9. J. E. Gilda и AV Gomes, «Окрашивание общего белка без окрашивания является превосходным контролем нагрузки по сравнению с бета-актином для вестерн-блоттинга», Analytical Biochemistry , vol. 440, нет. 2, стр. 186–188, 2013 г.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

10. L. Zeng, J. Guo, H. Xu et al., «Прямое окрашивание синим 71 как альтернативный метод контроля загрузки без обесцвечивания для вестерн-блоттинга», Electrophoresis , vol. 34, нет. 15, стр. 2234–2239., 2013.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

11. С. К. Тейлор, Т. Беркельман, Г. Ядав и М. Хаммонд, «Определенная методология надежного количественного анализа данных вестерн-блоттинга», Molecular Biotechnology , vol. 55, стр. 217–226, 2013.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

12. Г. М. Олдридж, Д. М. Подребарак, В. Т. Гриноу и И. Дж. Вейлер, «Использование окрашивания общего белка в качестве контроля загрузки: альтернатива однобелковому контролю с высоким содержанием в полуколичественном иммуноблотинге», Journal of Neuroscience Methods , vol. 172, нет. 2, стр. 250–254, 2008 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

13. Дж. С. Такер, Д. Х. Йенг, В. Р. Стейнс и Дж. Г. Мильке, «Общий белок или белок с высоким содержанием: что обеспечивает наилучший контроль загрузки для Вестерн-блоттинга?» Аналитическая биохимия , том. 496, стр. 76–78, 2016 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

14. А. Диттмер и Дж. Диттмер, «Бета-актин не является надежным контролем загрузки в вестерн-блоттинге», Электрофорез , том. 27, нет. 14, стр. 2844-2845, 2006.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

15. И. Ромеро-Кальво, Б. Окон, П. Мартинес-Мойя и др., «Обратимое окрашивание Понсо как альтернатива актину для контроля загрузки в вестерн-блоттингах», Analytical Biochemistry , vol. 401, нет. 2, стр. 318–320, 2010.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

16. Дж. Р. Вишневски и М. Манн, «Протеомный подход к проблеме нормализации белков: выбор неизменяющихся белков для протеомики на основе МС и вестерн-блоттинга», Journal of Proteome Research , vol. 15, стр. 2321–2326, 2016.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

17. С. Велиндер и Л. Экблад, «Окрашивание кумасси как контроль загрузки в вестерн-блоттинге», Journal of Proteome Research , vol. 10, нет. 3, стр. 1416–1419, 2011.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

18. S. L. Eaton, S. L. Roche, M. Llavero Hurtado et al., «Анализ общего белка как надежный контроль нагрузки для количественного флуоресцентного вестерн-блоттинга», PLoS ONE , vol. 8, ID статьи e72457, 2013 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

19. J. You, C. Hodge, L. Wen, J. W. McAvoy, M. C. Madigan и G. Sutton, «Использование соевого ингибитора трипсина в качестве внешнего контроля нагрузки для вестерн-блоттинга белков слезы: применение к роговице». болезнь», Experimental Eye Research , vol. 99, нет. 1, стр. 55–62, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Академия Google

20. R. Ghosh, JE Gilda и AV Gomes, «Необходимость и стратегии повышения уверенности в точности вестерн-блоттинга», Expert Review of Proteomics , vol. 11, стр. 549–560, 2014.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

21. О. Судзуки, М. Коура, Ю. Ногучи, К. Утио-Ямада и Дж. Мацуда, «Использование смесей образцов для создания стандартной кривой в количественных вестерн-блоттингах», Journal of Experimental Animal Science , том. 60, нет. 2, стр. 193–196, 2011.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

22. А. Д. Колелла, Н. Чегени, М. Н. Чай, И. Л. Гиббинс, К. А. Уильямс и Т. К. Чатауэй, «Сравнение гелей без красителей с традиционной методологией контроля загрузки иммуноблотов», Analytical Biochemistry , vol. 430, нет. 2, стр. 108–110, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

23. США. Нил, «Не все данные созданы равными», Журнал клинических исследований , том. 119, нет. 3, с. 424, 2009.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

24. A. Pitre, Y. Pan, S. Pruett и O. Skalli, «Об использовании стандартных кривых отношений для точного количественного определения относительных изменений уровней белка с помощью вестерн-блоттинга», Analytical Biochemistry , vol. . 361, нет. 2, стр. 305–307, 2007 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

25. Ф. Хайдебрехт, А. Хайдебрехт, И. Шульц, С.-Э. Беренс и А. Бадер, «Улучшенный метод полуколичественного вестерн-блоттинга с расширенным диапазоном количественного определения», Journal of Immunological Methods , vol. 345, нет. 1–2, стр. 40–48, 2009 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

26. М. Райли, П. Н. Бейкер, Р. М. Трайб и М. Дж. Таггарт, «Экспрессия каркасных, сигнальных белков и белков сократительных нитей в миометрии человека: эффекты беременности и родов», Журнал клеточной и молекулярной медицины , том. 9, нет. 1, стр. 122–134, 2005.

    Посмотреть по адресу:

    Google Scholar

27. D. A. MacIntyre, E. K. Tyson, M. Read et al., «Сокращение человеческого миометрия связано с изменениями в малых белках теплового шока», Endocrinology , vol. 149, нет. 1, стр. 245–252, 2008 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

28. J. Paul, K. Maiti, M. Read et al., «Фазовое фосфорилирование Caldesmon и ERK 1/2 во время сокращений человеческого миометрия», PLoS ONE , vol. 6, нет. 6, номер статьи e21542, 2011 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

29. М. О’Брайен, С. Карбин, Дж. Дж. Моррисон и Т. Дж. Смит, «Уменьшенная экспрессия р160 ROCK-1 в миометрии у женщин с ожирением при доношенной беременности», Репродуктивная биология и эндокринология , том. 11, нет. 1, 2013.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

30. H. N. Aguilar, B. Zielnik, C. N. Tracey и B. F. Mitchell, «Количественная оценка быстрого фосфорилирования регуляторной легкой цепи миозина с использованием высокопроизводительных внутриклеточных вестерн-анализов: сравнение с вестерн-иммуноблотами», PloS One , vol. 5, нет. 4, 2010.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

31. Дж. Ларти, М. Смит, Дж. Паваде, Б. Страчан, Х. Меллор и А. Лопес Берналь, «Повышающая регуляция эффекторных белков RHO миометрия (PKN1 и DIAPh2) и CPI-17 (PPP1R14A) фосфорилирование при беременности человека связано с увеличением GTP-RHOA при спонтанных преждевременных родах», Biology of Reproduction , vol. 76, нет. 6, стр. 971–982, 2007.

    Просмотр:

    Сайт издателя | Google Scholar

32. C. A. Hudson, K. J. Heesom, and A. L. Bernal, «Фазические сокращения изолированного человеческого миометрия связаны с rho-kinase (ROCK)-зависимым фосфорилированием субъединицы, нацеленной на миозинфосфатазу (MYPT1)», Molecular Human Reproduction , том. 18, нет. 5, стр. 265–279, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

33. Ю. Ли, М. Резниченко, Р. М. Трайб и др., «Растяжение активирует человеческий миометрий посредством сигналов ERK, кальдесмона и фокальной адгезии», PLoS ONE , vol. 4, ID статьи e7489, 2009 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

34. М. Бейкер, «Кризис воспроизводимости: во всем виноваты антитела», Nature , vol. 521, стр. 274–276, 2015.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

35. А. Брэдбери и А. Плактан, «Воспроизводимость: стандартизация антител, используемых в исследованиях», Nature , vol. 2015. Т. 518. С. 27–29.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

36. А. Шенбрунн, «От редакции: Антитело может сделать это правильно: решение проблем специфичности и невоспроизводимости антител», Молекулярная эндокринология (Балтимор, штат Мэриленд) , том. 28, нет. 9, стр. 1403–1407, 2014.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

37. К. М. Ямада и А. Холл, «Воспроизводимость и клеточная биология», Журнал клеточной биологии , том. 209, стр. 191–193, 2015.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

38. Х. Дж. Мотульский, «Как работает F-тест для сравнения моделей», Руководство по подбору кривой GraphPad, 2018 г. , https://www.graphpad.com/guides/prism/7/curve-fitting/index. htm?reg_howthefttestworks.htm.

    Посмотреть по адресу:

    Google Scholar

39. С. К. Тейлор и А. Пош, «Дизайн количественного эксперимента по вестерн-блоттингу», BioMed Research International , ID статьи 361590, 2014.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

40. Б. Кнупс и Дж.-Н. Octave, «Уровень мРНК α 1-тубулина повышается во время роста нейритов клеток NG 108-15, но не во время ингибирования роста нейритов миелином ЦНС», NeuroReport , vol. 8, нет. 3, стр. 795–798, 1997.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

41. Л. Ли, Ю. Ян, Х. Сюй, Т. Цюй и Б. Ван, «Выбор эталонных генов для исследований экспрессии генов в облученных ультрафиолетом В фибробластах кожи человека с использованием количественной ПЦР в реальном времени». », BMC Molecular Biology , vol. 12, нет. 8, 2011.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

42. M. Rocha-Martins, B. Njaine и M. S. Silveira, «Избегая ловушек внутреннего контроля: проверка эталонных генов для анализа с помощью qRT-PCR и вестерн-блоттинга на всем протяжении развития сетчатки крыс», PloS One , том. 7, ID статьи e43028, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

43. С. Грир, Р. Ханивелл, М. Гелету, Р. Аруланандам и Л. Раптис, «Домашние гены; уровни экспрессии могут меняться в зависимости от плотности культивируемых клеток», Journal of Immunological Methods , vol. 355, нет. 1–2, стр. 76–79, 2010 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

44. Д. Лануа, Ж. Сен-Пьер, А.-А. Lacasse, M. Viau, J. Lafond и C. Vaillancourt, «Стабильность эталонных белков в плаценте человека: эталоном являются общие белковые пятна», Placenta , vol. 33, нет. 3, стр. 151–156, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

45. Дж. Х. Кэмпбелл, О. Кохер, О. Скалли, Г. Габбиани и Г. Р. Кэмпбелл, «Цитодифференциация и экспрессия мРНК альфа-гладкомышечного актина и белка во время первичной культуры клеток гладких мышц аорты, корреляция с клетками». плотность и пролиферативное состояние» Артериосклероз , vol. 9, нет. 5, стр. 633–643, 1989.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

Copyright

Copyright © 2019 Trent A. J. Butler et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.